Principy vývoje HPLC metod
|
|
|
- Iva Mária Mašková
- před 6 lety
- Počet zobrazení:
Transkript
1 VÝVOJ HPLC METODY
2 Principy vývoje HPLC metod 1. Definice problému 2. Experiment s hlavními proměnnými 3. Vyhodnocení 4. Optimalizace 5. Řešení problémů 6. Validace metody HPLC vývoj metody 2 2
3 Definice problému Jaký je účel? Jaký je cíl metody? Analytický Preparativní Kvantitativní x kvalitativní analýza? Jaké jsou vlastnosti analytu a vzorku? Očekávaná koncentrace ve vzorku? Jsou k dispozici standardy? Je nutné rozdělit všechny složky vzorku? Molekulová hmotnost Náboj pozitivní / negativní Hydrofobicita Affinita - zámek a klíč vazebná místa Rozpustnost & stabilita ph, iontová síla, organická rozpouštědla HPLC vývoj metody 3 3
4 Analytická x preparativní Analytical Requirements Linearity Precision Accuracy Sensitivity Assay reproducibility Robustness Preparative Requirements Recovery Product purity Capacity Costs Scale up Process throughput Speed HPLC vývoj metody 4 4
5 Vývoj metody Výběr způsobu separace mapa ph Optimalizace gradientové eluce Spád gradientu Koncentrace mobilní fáze Předmět sledování Zahlcení: šířka a tvar píku HPLC vývoj metody 5 5
6 Běžné způsoby Reverzní fáze Stacionární fáze hydrofobní, mobilní hydrofilní Kolony: silikagel, polystyrene kovalentně modifikovaný alkylovými řezězci 3-18 C Př. octadecylsilane (ODS) - C18 Mobilní fáze: pufrovaná voda + organická rozpouštědla(propanol CH3CN, CH3OH) gradientová eluce Ion-Exchange (IEC) Ion exchange interakce mezi kationty nebo anioty analytu a stacionární fáze s opačným nábojem Stacionární fáze: polystyren, silikagel modifikovaný funkčními skupinami, např. kvartérní aminy Mobilní fáze: pufry obsahující vzrůstající koncentrace solí (NaCl, MgCl 2, K 3 PO 4, NH 4 SO 4 ) Gradientová eluce HPLC vývoj metody 6 6
7 Vyhodnocení Rozlišení Stupeň separace mezi analyty a dalšími látkami přítomnými ve směsi Výtěžnost Hmotnostní výtěžnost Aktivitní výtěžnost Kapacita HPLC vývoj metody 7 7
8 Strategie vývoje metody pro izokratickou a gradientovou eluci při RP HPLC HPLC vývoj metody 8 8
9 A METHOD-DEVELOPMENT STRATEGY THAT MAXIMIZES COLUMN LIFE: REVERSED-PHASE HPLC OF IONIZABLE COMPOUNDS [START] Basic com poun ds havin g low-p H instability SAMPLE Initia l separ ation [STEP 1] [STEP 1a] Add 2 0 mm TEA o r TEA acet ate Re- adjust p H Ta ilin g pe aks Zorbax SB-C18 or SB-C8 ph 2 (1-3), mm b uffer T= 30 C (am bient to 80 C, SB-C18 to 90 C) Adjust % ACN for 0.5 < k < 20 Poorly retained basic compounds OR ZORBAX StableBond [STEP 2a] Vary column temp., up to 80 C; Band spacing up to 90 C for Zo rbax SB-C18 p roble ms Band spacing p roble ms Increase or decrease % of organic modifier by 5% (v/v) Band spacing p roble ms Chan ge o rgan ic modifie r (M eoh or THF) Adjust % organic for 0.5 < k < 20 Resta rt at STEP [2] Band spacing p roble ms [STEP 2] [STEP 3] Band spacing p roble ms [STEP 1d] BASIC COMPOUNDS ( Ion Pai ring) Use M eoh or ganic m odifier, mm he xane sulfonic a cid, 10 mm p H ³ 3 bu ffer Adjust % Me OH for 0.5 < k < 20 Band spacing pr oblem s [STEP 1c] [STEP 1b] Low ph ph ³3 [STEP 4] Change bonded-phase functionality to Zorbax SB-CN, SB-Pheny l, or SB-C3 Resta rt at STEP [1] Increase or decrease % of or ganic m odifier by 5 %( v/v) Band spacing p roble ms Vary te mpe ratur e within re comm ende d ran ge for bonded phase Band spa cin g pr oblem s [STEP 1e] Přehled vývoje metod: Začni při nízkém ph, postupuj směrem k vyššímu ph ZORBAX Eclipse XDB/Bonus RP OR [STEP 6a] Vary te mpe ratur e within re comm ende d ran ge fo r bonded phase Band spacing p roble ms Band spacing pr oblem s Chan ge o rgan ic modifie r (ACN or THF) Adjust for 0.5 < k < 20 Resta rt at STEP [6] [STEP 5] Zorbax Eclipse XDB-C8 or XDB-C18 ph 7 (6-9), mm b uffer T= 30 C (am bient to 40 C) Adjust % Me OH for 0.5 < k < 20 Band spacing pr oblem s Increase or decrease % of organic modifier by 5% (v/v) Band spacing pr oblem s Band spacing pr oblem s [STEP 6] [STEP 7] [STEP 8] Chan ge b onde d-ph ase fu nctiona lity to Zorbax Eclipse XDB-Phenyl or Bonus RP Resta rt at STEP [5] Poorly retained acidic co mpo unds [STEP 5d] Increase or decrease % of or ganic m odifier by 5 %( v/v) Poor retention or ba nd spa cing pr oblem s Band spacing p roble ms Chan ge o rgan ic modifie r ( ACN or THF ) Adjust for 0.5 < k < 20 Band spacing pr oblem s [STEP 5c] [STEP 5b] ACIDIC COMPOUNDS (Ion Pairi ng) Use M eoh or ganic m odifier, mm te trabu tylamm onium ph ospha te, 10 mm p H ³ 7 bu ffer Adjust % Me OH for 0.5 < k < 20 Vary te mpe ratur e within re comm ende d ran ge for bonded phase Band spa cin g pr oblem s Chan ge o rgan ic modifie r ( ACN or THF ) [STEP 5e] Mid ph ph 7 Band spacing pr oblem s Adjust for 0.5 < k < 20 [STEP 9] ZORBAX Extend-C18 [STEP 10a] Vary te mpe ratur e within re comm ende d ran ge fo r bonded phase Band spacing p roble ms Zorbax Extend-C18 ph (9-12 ); 5 m M am mon ia, or TEA, or mm organic buffer, or borate buffer T= 25 C (am bient to 40 C) Adjust % MeOH for 0.5 < k < 20 Band spacing pr oblem s Chan ge o rgan ic modifie r (ACN or THF) Adjust for 0.5 < k < 20 [STEP 10] Band spacing pr oblem s High ph ph ³9 Band spacing pr oblem s Try different HPLC mode. Call Agilent Technologies Technical Support (800) Adapted and updated by R.D. Ricker, B.A. Bidlingmeyer and J.J. Kirklan d, from J.J. Kirkland, LC/GC, 14 (1996) 486. ph- Rang e fo r O ptimal Co lumn lif e ABBREVIATIO NS Recommended Column ACN = acetonitrile HPLC vývoj metody ZO RBAX 9 Stab le Bon d MeOH = methanol ZO RBAX 9 Eclip se XDB TEA = triethylamine ZO RBAX Bon us RP Unique Selectivity TFA = trifluoroacetic acid ZO RBAX Exte nd - C18 Zorbax is a registered trademark of Agilent Technologies. THF = tetrahydrofuran
10 Základní rozlišení Resolution R 1.5 R = V N 4 Efficiency Avg. = Best = Length Particle size ( a-1) a Separation a > 1.2 Stationary Mobile phase k' k'+1 Retention 2 < K < 10 % H2O Rovnice pro izokratickou eluci HPLC vývoj metody 10 10
11 Doporučené cíle vývoje metody Odpovídající rozlišení pro všechny píky, Rs 1.7 Retence prvního píku by měla být minimálně k=1 Doba analýzy kratší než 30 minut, raději 20 minut Robustnost a spolehlivost method Použití pufrované mobilní fáze nejdříve zkusit nízké ph HPLC vývoj metody 11 11
12 Kvalita separace Kritické rozlišení rozlišení mezi nejhůře separovaným párem píků analyzovaných látek na chromatogramu HPLC vývoj metody 12 12
13 HPLC vývoj metody 13 13
14 HPLC vývoj metody 14 14
15 HPLC vývoj metody 15 15
16 HPLC vývoj metody 16 16
17 HPLC vývoj metody 17 17
18 HPLC vývoj metody 18 18
19 HPLC vývoj metody 19 19
20 HPLC vývoj metody 20 20
21 HPLC vývoj metody 21 21
22 HPLC vývoj metody 22 22
23 HPLC vývoj metody 23 23
24 HPLC vývoj metody 24 24
25 HPLC vývoj metody 25 25
26 HPLC vývoj metody 26 26
27 HPLC vývoj metody 27 27
28 HPLC vývoj metody 28 28
29 HPLC vývoj metody 29 29
30 HPLC vývoj metody 30 30
31 HPLC vývoj metody 31 31
32 HPLC vývoj metody 32 32
33 HPLC vývoj metody 33 33
34 HPLC vývoj metody 34 34
35 HPLC vývoj metody 35 35
36 HPLC vývoj metody 36 36
37 HPLC vývoj metody 37 37
38 HPLC vývoj metody 38 38
39 HPLC vývoj metody 39 39
40 HPLC vývoj metody 40 40
41 ph významný parametr pří vývoji metody HPLC vývoj metody 41 41
42 ph důležitý parametr při vývoji metody Retence ionizovatelných sloučenin je výrazně ovlivněna ph Ionizovatené sloučeniny (kyseliny a báze) mohou být analyty nebo součásti matrice Přesná kontrola ph zlepšuje reprodukovatelnost metody Rozsah ph 1 12 zajišťuje maximální flexibilitu při vývoji metody HPLC vývoj metody 42 42
43 Základem vývoje metody je změna retence ionizovatelných sloučenin změnou ph Nenabité analyty mají lepší retenci (kyseliny při nízkém ph a báze při vysokém ph) Silanolové skupiny na silikagelu ionizují při středním ph, se vzrůstající retencí bazických analytů (např. možné ion-exchange interakce) Výběr mobilní fáze a typu kolony pro optimalizaci retence a selektivity při vývoji metody HPLC vývoj metody 43 43
44 Vývoj metody pro základní sloučeniny ve vztahu k ph Region A Logical method development starts at low ph, where the underlying silica silanols on a RP-HPLC column are protonated. This means that basic compounds (of great interest in the pharmaceutical and other industries) do not tail on the underlying silica support because there is no negatively charged silanols. Also at low ph, retention times are short since most basic compounds are charged. Acidic compounds may be in their protonated form and have increased retention. Retention times are usually stable with small changes in ph, producing a robust method Volatile mobile phases, such as formic acid or TFA, are often used at low ph with LC/MS. HPLC vývoj metody 44 44
45 Vývoj metody pro základní sloučeniny ve vztahu k ph Region B At neutral ph, care must be taken not to develop methods around the pka of the analyte, as this can lead to large changes in retention with small changes in ph The underlying silica surface becomes charged (approximately ph 4-6); thus, these silanols can cause basic compounds to tail These silanols must be covered up by endcapping the column, using additives such as TEA (less desirable) or using polar bonded phases As ph increases, silica dissolution must be prevented by heavily encapping the column This ph region (for the compound s pka) will change with each analyte HPLC vývoj metody 45 45
46 Vývoj metody pro základní sloučeniny ve vztahu k ph Region C In this region, basic compounds are in their free base form, giving them more retention and different selectivity; thus, complex mixtures of basic compounds may be easier to separate at high ph Retention changes little in this region - thus robust methods can be developed; retention is longer, but this may be the only region where some basic compounds will separate At high ph silica breakdown must be prevented by innovative bonding chemistry and use of the proper silica HPLC vývoj metody 46 46
47 Proč vyvíjet metodu při nízkém ph? Kyseliny jsou protonované maximální retence Silanolové skupiny jsou protonizované, čímž jsou minimalizovány ion-exchange interakce s bazickými sloučeninami Dobrý tvar píku Reprodukovatelnost v dlouhém období Výborný výběr mobilní fáze HPLC vývoj metody 47 47
48 ph je hlavním parametrem při výběru stacionární fáze At low ph bonded phase breaks down by hydrolysis of the siloxane bond breakdown is faster at higher temperature breakdown is faster for shorter-chain phases (C3, CN, Phenyl) HPLC vývoj metody 48 48
49 With Dimethyl-Substituted Phases, Unprotected Siloxane Bonds Are Hydrolyzed at Low ph Shorter chain phases hydrolyze more easily than longer chain phases. For example, R = C18 is more stable than R = C3. HPLC vývoj metody 49 49
50 Short-Chain, Dimethyl Bonded Phases Are Especially Unstable at Low ph (e.g., ph 2.0) 100 % k' REMAINING Si-(Me) 2Me COLUMN VOLUMES Si-(Me) 2PrCN Si-(Me) 2nBu Si-(Me) 2iPr Kirkland, J.J., J.L. Glajch, and R.D. Farlee, Analytical Chemistry (1989), 61, 2. HPLC vývoj metody 50 50
51 Sterically Protected, Monofunctional Silane Bonding HYDROLYTICALLY UNSTABLE CONVENTIONAL HYDROLYTICALLY STABLE STERICALLY PROTECTED HPLC vývoj metody 51 51
52 ZORBAX Products Have Unique Chemistry for Extended Column Lifetime at Different ph Ranges Low ph Range StableBond (5 phases: C18, C8, C3, CN, Phenyl) designed for low ph sterically protected silanes non-endcapped highly temperature stable short-chain phases very stable Extremely low LC/MS bleed HPLC vývoj metody 52 52
53 Method Development Scheme Start at Low ph Add 20 mm TEA STEP 1a Tailing peaks ZORBAX SB-C18 or SB-C8 ph 2 (1-3) mm buffer, T = 30 C (ambient 80 C) Adjust %ACN for 0.5 <k < 20 STEP 1 Poorly retained basic compounds STEP 1b STEP 2a Change Temperature Band spacing problems Band spacing problems Change % organic Band spacing problems STEP 2 STEP 3 Ion-Pairing of Basic Compounds Change organic modifier (MeOH or THF) Adjust % organic for 0.5 < k <20 Restart at STEP 2 Band spacing problems STEP 4 Try ZORBAX SB-CN, SB-C3 or SB-Phenyl Restart at STEP 1 HPLC vývoj metody 53 53
54 Recommended Starting Conditions for RP- HPLC Method Development Approach Separation Variable Column Stationary Phase Dimensions Preferred Initial Choice SB-C18 or SB-C8 4.6 x 75 mm or 4.6 x 150 mm Particle Size 3.5 µm 5 µm Pore Size 80Å: M.W. 4000, 300Å: M.W Mobile Phase Solvents A-B % B solvent Variable Water-acetonitrile Buffer 25 mm NaH 2 PO 4, ph 3 Additives i.e. amines and ion-pair reagents Flow Rate or 0.1% TFA or Formic acid TEA, Hexane sulfonate as needed 1-2 ml/min Temperature C HPLC vývoj metody 54 54
55 Choose StableBond at Low ph Superior column lifetime due to patented sterically protecting bonding technology Fully-hydroxylated ultra-pure silica improves peak shape Five different 80Å bonded-phases SB-C18, SB-C8, SB-CN, SB- Phenyl, SB-C3 provide optimum selectivity with exceptional lifetime Four different 300Å bonded-phases for selectivity options with protein and peptide separations HPLC vývoj metody 55 55
56 Method Development SB-C18 at Low ph Separation of Steroids Column: Mobile Phase: Flow Rate: Temperature: Detection: Sample: Time (min) 4 ZORBAX Rapid Resolution SB-C18, 4.6 x 75 mm, 3.5 µm 50% ACN 50% 20 mm NaH 2 PO 4, ph ml/min RT UV 254 nm 1. Estradiol 2. Ethynylestradiol 3. Dienestrol 4. Norethindrone Method development scheme recommends starting with SB-C18 at low ph, which provides an excellent separation of these steroids and impurities. HPLC vývoj metody 56 56
57 Method Development SB-C18 at Low ph Separation of Plant Extract Flavones, Flavanones, and Phenolic Esters Column: ZORBAX Rapid Resolution SB-C x 75 mm, 3.5 µm Mobile Phase: 22% ACN 78% NaH 2 PO 4, ph 2.5 Flow Rate: 1.0 ml / min Temperature: RT Detection: UV 254 nm Sample: 1. Caffeic acid 2. Impurity 3. Luteolin 5 4. Naringenin 5. Apigenin Time (min) To obtain k=1 for caffeic acid requires 22 minute analysis time HPLC vývoj metody 57 57
58 Method Development Change Organic Modifier : Separation of Plant Extract Flavones, Flavanones, and Phenolic Esters Column: ZORBAX Rapid Resolution SB-C x 75 mm, 3.5 µm Mobile Phase: 40% MeOH 60% NaH 2 PO 4, ph 2.5 Flow Rate: 1.0 ml/min Temperature: RT Detection: Sample: UV 254 nm 1. Caffeic acid 2. Impurity 3. Naringenin 4. Luteolin 5. Apigenin Time (min) 35 Methanol as the organic modifier changes selectivity and increases the analysis time. HPLC vývoj metody 58 58
59 Method Development Change Bonded-Phase Separation of Plant Extract on SB-CN Flavones, Flavanones, Phenolic Esters Column: ZORBAX Rapid Resolution SB-CN, 4.6 x 75 mm, 3.5 µm Mobile Phase: ACN: NaH 2 PO 4, ph 2.5 Flow Rate: 1.0 ml/min Temperature: RT Detection: UV 254 nm Sample: 1. Caffeic acid 2. Impurity 3. Luteolin 4. Naringenin 5. Apigenin 22% ACN: 78% Buffer 25% ACN: 75% Buffer Time (min) Time (min) SB-CN with stronger mobile phase reduces analysis time by 50% and maintains retention of k=1 on 1 st peak. HPLC vývoj metody 59 59
60 SB-CN Optimizes Retention and Resolution Phytoestrogens and Isoflavones Columns: 4.6 x 75 mm, 3.5 µm Mobile Phase: 30% ACN: 70% NaH 2 PO 4, ph 2.5 Flow Rate: 1.0 ml/min Temperature: 35 C Sample: 1. Estriol 2. Daidzen 3. Quercetin 4. Genistein 5. Diethylstilbestrol 1 2 SB-C18 SB-CN Time (min) Time (min) SB-CN reduces analysis time by 50% and increases retention of early eluting peaks. Method development procedure followed to get to this point. HPLC vývoj metody 60 60
61 Why Develop RP-HPLC Methods at Mid-pH? Compounds of interest are unstable at low ph Improved solubility of analytes at mid ph Increase retention of basic compounds May have better selectivity in the ph range 3 8 HPLC vývoj metody 61 61
62 ph is a Major Consideration in Bonded Phase Selection At intermediate and high ph bonded phase breaks down by hydrolysis of silica HPLC vývoj metody 62 62
63 Method Development Scheme Mid ph Range Add 20 mm TEA STEP 5a Tailing peaks ZORBAX Eclipse XDB-C18 or C8 ph 7 (6-9) mm buffer, T = 30 C (ambient 60 C) Adjust %ACN for 0.5 <k < 20 STEP 5 Poorly retained acidic compounds STEP 5b STEP 6a Change Temperature Band spacing problems Band spacing problems Change % organic Band spacing problems STEP 6 STEP 7 Ion-Pairing of Acidic Compounds Change organic modifier (MeOH or THF) Adjust % organic for 0.5 < k <20 Restart at STEP 6 Band spacing problems STEP 8 Try ZORBAX Eclipse XDB-Phenyl or Bonus-RP Restart at STEP 5 HPLC vývoj metody 63 63
64 Recommended Conditions for Mid-pH Method Development Separation Variable Column Preferred Initial Choice Stationary Phase Eclipse XDB-C18 Dimensions 4.6 x 75 mm or 4.6 x 150 mm Particle Size 3.5 µm 5 µm Mobile Phase Solvents A-B Water-acetonitrile % B solvent Variable Buffer 25 mm Na 2 HPO 4, ph =7 Acetate/acetic acid Additives i.e. amines and ion-pair reagents TEA, tetrabutylammonium as needed Flow Rate 1-2 ml/min Temperature C HPLC vývoj metody 64 64
65 Choose Eclipse XDB for Mid-pH Long lifetime at mid-ph with dense bonding and double endcapping Strong silica for long lifetime Double endcapping provides excellent peak shape Three different bonded-phases (C18, C8, Phenyl) for selectivity optimization HPLC vývoj metody 65 65
66 Good Resolution with Eclipse XDB-C18 at Mid-pH SB-C18, 4.6 x 75 mm, 3.5 µm Eclipse XDB-C18, 4.6 x 75 mm, 3.5 µm ph 3 ph 7 10 mm TEA Time (min) Time (min) Mobile Phase: 20% Methanol: 80% 20 mm phosphate buffer Flow Rate: 1.0 ml/min Temperature: RT Detection: UV 254 nm Sample: 1. Nizatidine 2. Famotidine 3. Cimetidine 4. Pirenzipine Better selectivity and improved retention occur at ph 7. HPLC vývoj metody 66 66
67 Eclipse XDB Selectivity Options Maximize Retention at ph 7 Columns: 4.6 x 150 mm, 5 µm Mobile Phase: 10% ACN: 90% Na 2 HPO 4, ph 7 Flow Rate: 1.5 ml/min Temperature: 35 C Detection: UV 254 nm Sample: 1. Procainamide 2. n-acetylprocainamide 3. n-propionylprocainamide Eclipse XDB-C18 Eclipse XDB-C8 Eclipse XDB-Phenyl Time (min) Time (min) Time (min) Eclipse XDB-Phenyl provides improved retention of these procainamides. HPLC vývoj metody 67 67
68 Bonus-RP Provides Alternate Selectivity at Mid-pH Polar alkyl-amide bonded-phase for unique selectivity Improves peak shape of basic compounds Triple-endcapped for good lifetime at mid-ph Enhanced low-ph stability (sterically protecting bonding) for alternate selectivity at low ph Compatible with 100% aqueous mobile phases Silica-based Column Packing with Alkyl/amide Stationary Phase O Si NH O Zorbax Rx-SIL Silica Support Surface HPLC vývoj metody 68 68
69 Why Develop RP-HPLC Methods at High ph? Compounds of interest not soluble at lower ph Compounds of interest not stable at lower ph Increase retention of basic compounds by analyzing them in noncharged form Improve selectivity HPLC vývoj metody 69 69
70 Silica Based HPLC Columns are Now a High ph Choice New technologies to protect silica from dissolution provide good lifetimes at high ph Superior efficiency of silica-based columns provides high resolution Robust methods can be established using the same parameters as used at low ph HPLC vývoj metody 70 70
71 Choose Extend-C18 for High ph Patented bidentate C18-C18 bonding for superior high ph stability up to ph 11.5 Improved performance over polymeric columns Excellent peak shape with double endcapping LC/MS at high ph (ammonium hydroxide) with high efficiency C18 C18 Extend-C18 Si Si Bidentate Structure O O Silica support HPLC vývoj metody 71 71
72 Method Development at High ph STEP 9 ZORBAX Extend-C18 ph 10.5 (9-12) 5 mm ammonia, or TEA, or mm organic or borate buffers T = 25 C (ambient 40 C) Adjust MeOH for 0.5 <k < 20 STEP 10a Vary temperature within recommended range for bonded phase Band spacing problems Band spacing problems STEP 10 Change organic modifier (ACN or THF) Adjust for 0.5 < k<20 Band spacing problems Try different HPLC mode HPLC vývoj metody 72 72
73 Recommended Conditions for High ph Method Development Separation Variable Column Preferred Initial Choice Stationary Phase Extend-C18 Dimensions 4.6 x 75 mm or 4.6 x 150 mm Particle Size 3.5 µm 5 µm Pore Size 80Å: M.W. 4000, 300Å: M.W Mobile Phase Solvents A-B Water-methanol % B solvent Variable Buffer 20 mm TEA ph =11 ammonium hydroxide, ph 10 Flow Rate 1-2 ml/min Temperature RT - 30 C HPLC vývoj metody 73 73
74 Separate Basic Compounds in Their Free Base Form at High ph A Separation of ß-Blocker Drugs with Zorbax Extend-C18 at ph 11.5 C:\DIRECT\DATA1\ R 0.0 to 30.0 min. Low Y= Span= Pindolol 2. Metoprolol 3. Oxyprenolol 4. Toluene 5. Propranolol Separation of Antidepressants Using Zorbax Extend- C18 at ph 11.5 B Nortriptyline 2 4 N = 14,060 A s = 1.03 N = 11,500 A s = 0.99 Doxepin I Imipramine Amitriptyline Trimipramine min. Column: Flow Rate: Mobile Phase: Flow Rate: Temperature: 40 C Detectoion: UV at 215 nm ZORBAX Extend-C x 150 mm 0.5mL/min. Panel A: 55% Methanol / 45% 50 mm Pyrrolidine Buffer, ph 11.5 Panel B: 75% Methanol / 25% 50 mm Pyrrolidine Buffer, ph 11.5 Panel A: 1.5 ml / min.; Panel B: 1.0 ml/min. HPLC vývoj metody 74 74
75 Mobile Phase Considerations for LC/ESI-MS of Proteins/Peptides TFA forms ion pair and suppresses signal Several solutions to for a better signal dilute with a different acid post column (the TFA fix ) lower TFA concentration use a different acid as mobile phase use a different ph range and column HPLC vývoj metody 75 75
76 High ph Increases Retention of Antihistamines Column: ZORBAX Extend-C18, 4.6 x 150 mm, 5 µm Mobile Phase: See Below Flow Rate: 1.0 ml/min Temperature: RT Detection: UV 254 nm Sample: 1. Maleate 2. Scopolamine 3. Pseudoephedrine 4. Doxylamine 5. Chlorpheniramine 6. Triprolidine 7. Diphenhydramine ph 7 30% 20 mm Na 2 HPO 4 70% MeOH ph 11 30% 20 mm TEA 70% MeOH 1 2, t R = 8.5 t R = Time (min) Time (min) The retention of this sample of basic compounds increases at high ph. HPLC vývoj metody 76 76
77 Extend-C18 Provides High Efficiency and Good Peak Shape Mobile Phase: 65% 20 mm TEA, ph 11: 35% MeOH Temperature: RT Detection: UV 254 nm Sample: 1. Pyridoxine 2. Pyridine 3. n-methylbenzylamine 4. Procainamide 5. n-acetylprocainamide Polymeric-Based Column 4.0 x 250 mm, 5 µm Flow Rate: 0.5 ml/min 1 Extend-C x 250 mm, 5 µm Flow Rate: 1.0 ml/min Time (min) Time (min) In comparison to polymeric columns, the Extend-C18 has superior efficiency and peak shape HPLC vývoj metody 77 77
78 Summary of Phase Selection 1. Choose reversed-phase stationary phase based on separation requirements of your analytes and optimum column lifetime. - Low ph, 1-4 (ZORBAX StableBond) - Intermediate ph, 3-8 (ZORBAX Eclipse XDB) - High ph, 7-12 (ZORBAX Extend C18) - Basic compounds, ph 3-8 (ZORBAX Bonus) 2. If possible, always use low ph values since best chromatography for ionizable compounds; if not, use intermediate ph and doubly end capped packing; if insufficient retention, then choose high ph with bidentate packing 3. Choose smallest particle size consistent with efficiency needs; use Type B sol-gel silica 4. Optimize solvent selection and composition, buffer type, buffer concentration, and temperature; add competing base, if needed HPLC vývoj metody 78 78
79 Recommended Buffer Choices for High ph Buffer pka Effective ph range Pyrrolidine Triethylamine (TEA) methyl-piperidine glycine TRIS Borate Ammonia Diethylamine HPLC vývoj metody 79 79
80 Selektivita kolon HPLC vývoj metody 80 80
81 Selektivita kolon HPLC vývoj metody 81 81
82 Selektivita kolon HPLC vývoj metody 82 82
83 Selektivita kolon HPLC vývoj metody 83 83
84 Selektivita kolon HPLC vývoj metody 84 84
85 HPLC vývoj metody 85 85
86 PROBLÉMY PŘENOSU HPLC METOD A JEJICH VHODNÉ KOREKCE HPLC vývoj metody 86 86
87 Při přenosu publikované HPLC metody na jiné pracoviště nastávají mnohdy problémy s interpretací separace sledovaných analytů a nastává problém vůbec reprodukovat publikovanou metodu. A původní laboratoř, B další laboratoř HPLC vývoj metody 87 87
88 Chromatogram A znázorňuje původní publikovanou metodu Chromatogram B - po přenosu metody do jiné laboratoře Je zřejmé, že nedochází k separaci analytů 5,6 - rozlišení RS < 1,5 Existuje několik příčin proč nedochází k dokonalé separaci: a) chromatografický systém není dostatečně ekvilibrovaný b) došlo ke změně chromatografické kolony c) změna chromatografického (HPLC) systému d) změna v chromatografickém postupu Nedostatečnou ekvilibraci chromatografické kolony jako hrubou chybu vyloučíme a dále budeme rozebírat pouze poslední tři možné příčiny HPLC vývoj metody 88 88
89 1. Změna chromatografické kolony Změnou kolony (jiný výrobce, jiná šarže) zpravidla dojde ke změně: a) účinnosti kolony (počet teoretických pater, n) b) selektivity (retenční poměr, r 12 ) Proto je vhodné při validaci metody určit chromatografické parametry kolony, které vyhovují pro danou chromatografickou separaci: a) účinnost kolony b) selektivitu c) silanolovou aktivitu Testy chromatografických charakteristik stacionární fáze: - kapacita kolony (účinnost) k pentylbenzenu, n pentylbenzenu - hydrofobicita - silanolová aktivita Validace metody na zvolené chromatografické koloně Určení vhodné alternativní chromatografické varianty. Metoda maximální chromatografické variability, která zahrnuje: 1. optimalizaci chromatografických podmínek 2. předvídání použití různých chromatografických kolon 3. výběr podobných kolon HPLC vývoj metody 89 89
90 1.1 Optimalizace chromatografických podmínek Sledování vlivu teploty a složení mobilní fáze (% organické fáze nebo strmost gradientu) na RS nebo r12 (vícenásobnou regresí se získá RS mapa akceptovatelných rozlišení při daných chromatografických podmínkách) Při změně rozlišení RS - určení chromatografické podmínky, které budou vyhovovat požadovanému rozlišení. Optimalizace chromatografických podmínek a aplikace na dvě stejné kolony různé šarže HPLC vývoj metody 90 90
91 1.2 Variabilita chromatografických kolon Variabilita chromatografických kolon a určení RS map Obdobně jako u optimalizace chromatografických podmínek se optimalizují chromatografické kolony Pro alternativní kolony a pak dostáváme nejen chromatografické podmínky pro používanou kolonu, ale i pro alternativní chromatografickou kolonu. Určením tzv. RS map a jejich překryvem pro dvě různé kolony získáme ihned přehled, jak bude vypadat separace na alternativní koloně. HPLC vývoj metody 91 91
92 1.3 Výběr podobných kolon K celkové selektivitě stacionární fáze přispívají: kapacitní faktor k a dále hydrofobicita (H), stérická selektivita (shape selektivity; S), silanolová aktivita (non-ionized silanol acidity nebo také silanol group capacity, A), kolonová basicita (column basicity; B) a iontově-výměnná kapacita (cation-exchange capacity; C). Pro logaritmus kapacitního faktoru pak platí: Kde κ, α, β,δ, jsou příspěvky solutu a H, S, A, B a C jsou příspěvky stacionární fáze a kde je kapacitní faktor daný distribuční konstantou a fázovým poměrem. Příspěvek hydrofobicity H souvisí s nespecifickými interakcemi solutu se stacionární fází (methylenová selektivita α CH2 ), příspěvky silanolové aktivity A a kolonové basicity B souvisí s možností tvorby vodíkových vazeb mezi solutem a zbytkovými silanolovými skupinami silikagelu. Určením selektivity různých chromatografických kolon (Tanakovy a Engelhardtovy testy) tak můžeme získat přehled o podobných kolonách, které je možné použít pak jako alternativní kolony ke koloně používané (validované). HPLC vývoj metody 92 92
93 2. Změna HPLC systému nebo HPLC procedury Změna HPLC systému vede ve většině případech ke změnám: 1. mrtvého objemu systému (při gradientu mobilní fáze) 2. změna mimokolonových příspěvků k rozšíření chromatografické zóny 2.1 Mrtvý objem systému Změna mrtvého objemu systému (konstrukce pumpy, změna vnitřního průměru kapilár) vede ke změně mrtvého objemu systému, která může mít vliv na strmost gradientu (zpoždění gradientu, které má vliv na separaci kritických analytů). Na separaci má vliv i tvorba gradientu změna tvorby gradientu z nízkotlakého gradientu na vysokotlaký vede ke zpoždění gradientu a to má pak vliv na separaci kritických analytů. 2.2 Mimokolonové příspěvky Mimokolonové příspěvky k rozšíření chromatografické zóny mají vliv na účinnost systému a změna objemu nástřiku, objemu cely detektoru, vnitřního průměru kapilár nebo jejich délky, může mít vliv na účinnost kolony a to vede ke snížení rozlišení kritických analytů. HPLC vývoj metody 93 93
94 3. Změna v chromatografickém postupu Ke změně v chromatografickém postupu (metody) může dojít: a) ve změně složení mobilní fáze (změna objemové frakce organického rozpouštědla, ph, koncentrace aditiv [pufry, iontové páry]) b) změnou teploty na chromatografické koloně c) změnou gradientu (použití jiného tvorby gradientu, přechod z vysokotlakého gradientu na nízkotlaký a naopak) HPLC vývoj metody 94 94
Principy vývoje HPLC metod
VÝVOJ HPLC METODY Principy vývoje HPLC metod 1. Definování cíle metody 2. Informace o vzorku 3. Výběr vhodného detektoru 4. Výběr LC metody 5. Prvotní experimenty se standardy 6. Experiment s hlavními
Principy vývoje HPLC metod
VÝVOJ HPLC METODY Principy vývoje HPLC metod 1. Definování cíle metody 2. Informace o vzorku 3. Výběr vhodného detektoru 4. Výběr LC metody 5. Prvotní experimenty se standardy 6. Experiment s hlavními
Principy vývoje HPLC metod
Principy vývoje HPLC metod 1. Definice problému 2. Experiment s hlavními proměnnými 3. Vyhodnocení 4. Optimalizace 5. Řešení problémů HPLC vývoj metody 1 Definice problému Jaký je účel? Analytický Preparativní
Mobilní fáze. HPLC mobilní fáze 1
Mobilní fáze 1 VLIV CHROMATOGRAFICKÝCH PODMÍNEK NA ELUČNÍ CHARAKTERISTIKY SEPAROVANÝCH LÁTEK - SLOŽENÍ MOBILNÍ FÁZE Složení mobilní fáze má vliv na eluční charakteristiky : účinnost kolony; kapacitní poměr;
Vysokoúčinná kapalinová chromatografie. Petr Kozlík Katedra analytické chemie
Vysokoúčinná kapalinová chromatografie Petr Kozlík Katedra analytické chemie e-mail: kozlik@natur.cuni.cz http://web.natur.cuni.cz/~kozlik/ 1 Vysokoúčinná kapalinová chromatografie Teorie HPLC Praktické
Vysokoúčinná kapalinová chromatografie
Vysokoúčinná kapalinová chromatografie HPLC High Performance Liquid Chromatography Vysokoúčinná...X... Vysoceúčinná kapalinová chromatografie RRLC Rapid Resolution Liquid Chromatography Rychle rozlišovací
Vysokoúčinná kapalinová chromatografie. Petr Kozlík Katedra analytické chemie
Vysokoúčinná kapalinová chromatografie Petr Kozlík Katedra analytické chemie e-mail: kozlik@natur.cuni.cz 1 Aplikace HPLC Analýza složek životního prostředí Toxikologie Potravinářská analýza Farmaceutická
Vysokoúčinná kapalinová chromatografie. Petr Kozlík Katedra analytické chemie
Vysokoúčinná kapalinová chromatografie Petr Kozlík Katedra analytické chemie e-mail: kozlik@natur.cuni.cz 1 Sylabus přednášky: Praxe v HPLC Mobilní fáze Chromatografická kolona Spoje v HPLC Vývoj chromatografické
Kapalinová chromatografie: KOLONY - Nové trendy
Kapalinová chromatografie: KOLONY - Nové trendy Spoje v HPLC Color-code PEEK Tubing Nevhodné spojení: rozšiřování elučních zón netěsnost systému velký tlakový spád zvýšení šumu baseline 1 kapilára, 2 tlakový
Chromatofokusace. separace proteinů na základě jejich pi vysoké rozlišení. není potřeba připravovat ph gradient zaostřovací efekt jednoduchost
Chromatofokusace separace proteinů na základě jejich pi vysoké rozlišení není potřeba připravovat ph gradient zaostřovací efekt jednoduchost Polypufry - amfolyty Stacionární fáze Polybuffer 96 - ph 9-6
Kapalinová chromatografie: KOLONY - Nové trendy
Kapalinová chromatografie: KOLONY - Nové trendy Reversed Phase Chromatography Common solvents in RP-HPLC Methanol acids Acetonitrile bases Tetrahydrofuran strong dipole Water polarity adjustment Miscible
Repetitorium chemie IX (2016) (teorie a praxe chromatografie)
Repetitorium chemie IX (2016) (teorie a praxe chromatografie) Chromatografie Podstatou je rozdělování složek směsi dávkovaného vzorku mezi dvěma fázemi Stacionární fáze je nepohyblivá (silikagel, celulóza,
Litosil - application
Litosil - application The series of Litosil is primarily determined for cut polished floors. The cut polished floors are supplied by some specialized firms which are fitted with the appropriate technical
Biogenníaminy. pro HPLC. Dny kontroly kvality a speciálních metod HPLC Bio-Rad Lednice 8.-9. Listopadu, 2012
Bio-Rad Laboratories Munich Manufacturing Biogenníaminy pro HPLC Dny kontroly kvality a speciálních metod HPLC Bio-Rad Lednice 8.-9. Listopadu, 2012 Bio-Rad Laboratories München, Germany Biogenníaminy
EXACT DS OFFICE. The best lens for office work
EXACT DS The best lens for office work EXACT DS When Your Glasses Are Not Enough Lenses with only a reading area provide clear vision of objects located close up, while progressive lenses only provide
VLIV CHROMATOGRAFICKÝCH PODMÍNEK NA ELUČNÍ CHARAKTERISTIKY SEPAROVANÝCH LÁTEK - SLOŽENÍ MOBILNÍ FÁZE
Mobilní fáze VLIV CHROMATOGRAFICKÝCH PODMÍNEK NA ELUČNÍ CHARAKTERISTIKY SEPAROVANÝCH LÁTEK - SLOŽENÍ MOBILNÍ FÁZE Složení mobilní fáze má vliv na eluční charakteristiky : účinnost kolony; kapacitní poměr;
Gymnázium, Brno, Slovanské nám. 7 WORKBOOK. Mathematics. Teacher: Student:
WORKBOOK Subject: Teacher: Student: Mathematics.... School year:../ Conic section The conic sections are the nondegenerate curves generated by the intersections of a plane with one or two nappes of a cone.
Selektrivní distribuce anlytu mezi rozpouštědlo a adsorpční povrch stacionární fáze. Konkurence na povrchu sorbentu: analyt versus solvent
Vysokoúčinná kapalinová chromatografie - Techniky/mody HPLC - I Příprava předmětu byla podpořena projektem PPA č. CZ.2.17/3.1.00/33253 2.3.1. Techniky HPLC - Mody HPLC 2.3.1.1. Adsorpční chromatografie
Configuration vs. Conformation. Configuration: Covalent bonds must be broken. Two kinds of isomers to consider
Stereochemistry onfiguration vs. onformation onfiguration: ovalent bonds must be broken onformation: hanges do NT require breaking of covalent bonds onfiguration Two kinds of isomers to consider is/trans:
VYSOKOÚČINNÁ KAPALINOVÁ CHROMATOGRAFIE ZADÁNÍ ÚLOHY
VYSOKOÚČINNÁ KAPALINOVÁ CHOMATOGAFIE ZADÁNÍ ÚLOHY Metodou vysokoúčinné kapalinové chromatografie separujte směs s-triazinových herbicidů, sledujte vliv složení mobilní fáze na separaci. Proveďte kvalitativní
Vysokoúčinná kapalinová chromatografie. Petr Kozlík Katedra analytické chemie
Vysokoúčinná kapalinová chromatografie Petr Kozlík Katedra analytické chemie e-mail: kozlik@natur.cuni.cz 1 Sylabus přednášky: Validace chromatografické metody: Správnost Přesnost Linearita Mez detekce
Hydrofobní chromatografie
Hydrofobní chromatografie Hydrofobicita proteinu insulin malwmrllpl lallalwgpd paaafvnqhl cgshlvealy lvcgergffy tpktrreaed lqvgqvelgg gpgagslqpl alegslqkrg iveqcctsic slyqlenycn vliv soli na protein Stacionární
Název: Vypracovala: Datum: 7. 2. 2014. Zuzana Lacková
Název: Vypracovala: Zuzana Lacková Datum: 7. 2. 2014 Reg.č.projektu: CZ.1.07/2.4.00/31.0023 Název projektu: Partnerská síť centra excelentního bionanotechnologického výzkumu MĚLI BYCHOM ZNÁT: informace,
Gelová permeační chromatografie
Gelová permeační chromatografie (Gel Permeation Chromatography - GPC) - separační a čisticí metoda - umožňuje separaci skupin sloučenin s podobnou molekulovou hmotností (frakcionace) - analyty jsou po
GUIDELINES FOR CONNECTION TO FTP SERVER TO TRANSFER PRINTING DATA
GUIDELINES FOR CONNECTION TO FTP SERVER TO TRANSFER PRINTING DATA What is an FTP client and how to use it? FTP (File transport protocol) - A protocol used to transfer your printing data files to the MAFRAPRINT
UNIVERZITA PARDUBICE FAKULTA CHEMICKO-TECHNOLOGICKÁ DISERTAČNÍ PRÁCE
UNIVERZITA PARDUBICE FAKULTA CHEMICKO-TECHNOLOGICKÁ DISERTAČNÍ PRÁCE 2009 Ing. David Kahoun UNIVERZITA PARDUBICE FAKULTA CHEMICKO-TECHNOLOGICKÁ ANALÝZA BIOLOGICKY AKTIVNÍCH LÁTEK V MEDOVINÁCH METODOU HPLC
PLYNOVÁ CHROMATOGRAFIE (GC)
PLYNOVÁ CHROMATOGRAFIE (GC) Dělení látek mezi stacionární a mobilní fázi na základě rozdílů v těkavosti a struktuře (separované látky vykazují rozdílnou chromatografickou afinitu) Metoda vhodná pro látky:
Separační metody v analytické chemii. Kapalinová chromatografie (LC) - princip
Kapalinová chromatografie (LC) - princip Kapalinová chromatografie (Liquid chromatography, zkratka LC) je typ separační metody, založené na rozdílné distribuci dělených látek ve směsi mezi dvě různé nemísitelné
Trendy v moderní HPLC
Trendy v moderní HPLC Josef Cvačka, 5.1.2011 CHROMATOGRAFIE NA ČIPECH Miniaturizace separačních systémů Mikrofluidní čipy Mikrofabrikace Chromatografické mikrofluidní čipy s MS detekcí Praktické využití
Příprava materiálu byla podpořena projektem OPPA č. CZ.2.17/3.1.00/33253
Příprava materiálu byla podpořena projektem OPPA č. CZ.2.17/3.1.00/33253 Část 9 Adsorpční chromatografie: Chromatografie v normálním módu Tento chromatografický mód je vysvětlen na silikagelu jako nejdůležitějším
Compression of a Dictionary
Compression of a Dictionary Jan Lánský, Michal Žemlička zizelevak@matfyz.cz michal.zemlicka@mff.cuni.cz Dept. of Software Engineering Faculty of Mathematics and Physics Charles University Synopsis Introduction
Transportation Problem
Transportation Problem ١ C H A P T E R 7 Transportation Problem The transportation problem seeks to minimize the total shipping costs of transporting goods from m origins (each with a supply s i ) to n
Analýza kofeinu v kávě pomocí kapalinové chromatografie
Analýza kofeinu v kávě pomocí kapalinové chromatografie Kofein (obr.1) se jako přírodní alkaloid vyskytuje v mnoha rostlinách (např. fazolích, kakaových bobech, černém čaji apod.) avšak nejvíce je spojován
P. Martinková, D. Pospíchalová, R. Jobánek, M. Jokešová. Stanovení perfluorovaných organických látek v elektroodpadech
P. Martinková, D. Pospíchalová, R. Jobánek, M. Jokešová Stanovení perfluorovaných organických látek v elektroodpadech Perfluorované a polyfluorované uhlovodíky (PFC,PFAS) Perfluorované - všechny vodíky
Principy chromatografie v analýze potravin
Principy chromatografie v analýze potravin živočišného původu p Ivana Borkovcová Ústav hygieny a technologie mléka FVHE VFU Brno, borkovcovai@vfu.cz Úvod, základní pojmy chromatografické systémy dělení
DATA SHEET. BC516 PNP Darlington transistor. technický list DISCRETE SEMICONDUCTORS Apr 23. Product specification Supersedes data of 1997 Apr 16
zákaznická linka: 840 50 60 70 DISCRETE SEMICONDUCTORS DATA SHEET book, halfpage M3D186 Supersedes data of 1997 Apr 16 1999 Apr 23 str 1 Dodavatel: GM electronic, spol. s r.o., Křižíkova 77, 186 00 Praha
Příprava materiálu byla podpořena projektem OPPA č. CZ.2.17/3.1.00/33253
Příprava materiálu byla podpořena projektem OPPA č. CZ.2.17/3.1.00/33253 Část 23 Preparativní chromatografie je používána pro separaci látek, které jsou určeny pro další zpracování. Množství získávané
HPLC systémy. Věra Schulzová
HPLC systémy Věra Schulzová Systémy HPLC I. Systémy s normálními fázemi - polární stacionární fáze, lepší selektivita pro separaci polohových isomerů než systémy s obrácenými fázemi, méně vhodné k dělení
PC/104, PC/104-Plus. 196 ept GmbH I Tel. +49 (0) / I Fax +49 (0) / I I
E L E C T R O N I C C O N N E C T O R S 196 ept GmbH I Tel. +49 (0) 88 61 / 25 01 0 I Fax +49 (0) 88 61 / 55 07 I E-Mail sales@ept.de I www.ept.de Contents Introduction 198 Overview 199 The Standard 200
SPE je metoda vhodná pro rychlou přípravu vzorků, která užívá
Extrakce na pevné fázi (SPE) Příprava předmětu byla podpořena projektem OPPA č. CZ.2.17/3.1.00/33253 Extrakce na pevné fázi (SPE) (Solid Phase Extraction) SPE je metoda vhodná pro rychlou přípravu vzorků,
Problémy v kapalinové chromatografii. Troubleshooting
Problémy v kapalinové chromatografii Troubleshooting Problémy v HPLC Většinu problémů, které se vyskytují při separaci látek na chromatografické koloně můžeme vyčíst již z pouhého průběhu základní linie,
CHROMATOGRAFIE ÚVOD Společný rys působením nemísících fází: jedna fáze je nepohyblivá (stacionární), druhá pohyblivá (mobilní).
CHROMATOGRAFIE ÚOD Existují různé chromatografické metody, viz rozdělení metod níže. Společný rys chromatografických dělení: vzorek jako směs látek - složek se dělí na jednotlivé složky působením dvou
Vysokoúčinná kapalinová chromatografie High-Performance Liquid Chromatography (HPLC) Příprava předmětu byla podpořena projektem OPPA č. CZ.2.17/3.1.00/33253 Kapalinová chromatografie (LC) 1.1. Teorie kapalinové
Tento materiál byl vytvořen v rámci projektu Operačního programu Vzdělávání pro konkurenceschopnost.
Tento materiál byl vytvořen v rámci projektu Operačního programu Vzdělávání pro konkurenceschopnost. Projekt MŠMT ČR Číslo projektu Název projektu školy Klíčová aktivita III/2 EU PENÍZE ŠKOLÁM CZ.1.07/1.4.00/21.2146
Zubní pasty v pozměněném složení a novém designu
Energy news4 Energy News 04/2010 Inovace 1 Zubní pasty v pozměněném složení a novém designu Od října tohoto roku se začnete setkávat s našimi zubními pastami v pozměněném složení a ve zcela novém designu.
ÚSTAV CHEMIE A ANALÝZY POTRAVIN
VYSOKÁ ŠKOLA CHEMICKO-TECHNOLOGICKÁ V PRAZE ÚSTAV CHEMIE A ANALÝZY POTRAVIN Technická 5, 166 28 Praha 6 tel./fax.: + 420 220 443 185; jana.hajslova@vscht.cz LABORATOŘ Z ANALÝZY POTRAVIN A PŘÍRODNÍCH PRODUKTŮ
Jednotné pracovní postupy zkoušení krmiv STANOVENÍ OBSAHU VITAMÍNU D METODOU HPLC
Národní referenční laboratoř Strana 1 STANOVENÍ OBSAHU VITAMÍNU D METODOU HPLC 1 Rozsah a účel Tato metoda specifikuje podmínky pro stanovení vitamínu D v premixech pro výrobu krmných směsí metodou HPLC.
Název společnosti: VPK, s.r.o. Vypracováno kým: Ing. Michal Troščak Telefon: Datum:
Pozice Počet Popis 1 SCALA2 3-45 A Datum: 2.7.217 Výrobní č.: 98562862 Grundfos SCALA2 is a fully integrated, self-priming, compact waterworks for pressure boosting in domestic applications. SCALA2 incorporates
ULTRA PERFORMANCE LIQUID CHROMATOGRAPHY (UPLC) ULTRA-HIGH PERFORMANCE LIQUID CHROMATOGRAPHY (UHPC)
ULTRA PERFORMANCE LIQUID CHROMATOGRAPHY (UPLC) ULTRA-HIGH PERFORMANCE LIQUID CHROMATOGRAPHY (UHPC) Pokroky v moderních separačních metodách, 2012 Eva Háková CHARAKTERISTIKA UPLC Nová, velmi účinná separační
ANALÝZA LÁTEK V OVZDUŠÍ METODOU GC/MS SE SORPČNÍMI TRUBIČKAMI TENAX ANALYSIS OF SUBSTANCES IN AIR BY USING GC/MS METHOD WITH SORPTION TUBES TENAX
PŘÍSPĚVKY THE SCIENCE FOR POPULATION PROTECTION 0/2008 ANALÝZA LÁTEK V OVZDUŠÍ METODOU GC/MS SE SORPČNÍMI TRUBIČKAMI TENAX ANALYSIS OF SUBSTANCES IN AIR BY USING GC/MS METHOD WITH SORPTION TUBES TENAX
Metodika 3: uvedení systému Jasco LC 2000 do provozu
Metodika 3: uvedení systému Jasco LC 2000 do provozu (HPLC High Performance Liquid Chromatography) 7 8 4 9 10 1 2 5 11 3 6 12 Popis sestavy: 1) Refraktometrický detektor RI 2000, 2) detektor diodového
Jednotné pracovní postupy zkoušení krmiv STANOVENÍ OBSAHU NEPOVOLENÝCH DOPLŇKOVÝCH LÁTEK METODOU LC-MS
Národní referenční laboratoř Strana 1 STANOVENÍ OBSAHU NEPOVOLENÝCH DOPLŇKOVÝCH LÁTEK METODOU LC-MS 1 Účel a rozsah Tato metoda specifikuje podmínky pro stanovení nepovolených doplňkových látek Zn-bacitracinu,
WORKSHEET 1: LINEAR EQUATION 1
WORKSHEET 1: LINEAR EQUATION 1 1. Write down the arithmetical problem according the dictation: 2. Translate the English words, you can use a dictionary: equations to solve solve inverse operation variable
SPECIFICATION FOR ALDER LED
SPECIFICATION FOR ALDER LED MODEL:AS-D75xxyy-C2LZ-H1-E 1 / 13 Absolute Maximum Ratings (Ta = 25 C) Parameter Symbol Absolute maximum Rating Unit Peak Forward Current I FP 500 ma Forward Current(DC) IF
Název společnosti: VPK, s.r.o. Vypracováno kým: Ing. Michal Troščak Telefon: Datum:
Počet 1 SCALA2 3-45 A Datum: 2.7.217 Výrobní č.: 98562862 Grundfos SCALA2 is a fully integrated, self-priming, compact waterworks for pressure boosting in domestic applications. SCALA2 incorporates integrated
Electrochemistry of Selected Phosphorus Oxoacids on a Bulk Pt Electrode. Tomas Bystron Martin Prokop Karel Bouzek
Electrochemistry of Selected Phosphorus Oxoacids on a Bulk Pt Electrode Tomas Bystron Martin Prokop Karel Bouzek High Temperature PEM Fuel Cell (HT PEM FC) Operation temperature 130-200 C Enhanced rate
Elektroinstalační lišty a tvarovky. Elektroinstalační lišty / Cable trunkings
Elektroinstalační lišty a tvarovky Elektroinstalační lišty / Cable trunkings Z důvodu jednodušší instalace jsou lišty na spodní straně opatřeny montážními otvory. Délka 2m. Na přání lze vyrobit v různých
TechoLED H A N D B O O K
TechoLED HANDBOOK Světelné panely TechoLED Úvod TechoLED LED světelné zdroje jsou moderním a perspektivním zdrojem světla se širokými možnostmi použití. Umožňují plnohodnotnou náhradu žárovek, zářivkových
Nabídka Sigma-Aldrich pro rychlou a multidimenzionální HPLC. RNDr. Dana Procházková
Nabídka Sigma-Aldrich pro rychlou a multidimenzionální HPLC RNDr. Dana Procházková Sigma-Aldrich Laboratorní chemikálie Organická rozpouštědla, pufry, kyseliny, báze, soli, etc.. Katalogy The Reporter
Vysokoúčinná kapalinová chromatografie
Příprava materiálu byla podpořena projektem OPPA č. CZ.2.17/3.1.00/33253 Vysokoúčinná kapalinová chromatografie Autorský kolektiv ústavu 402 VŠCHT Praha Část 1, Úvod Vysokoúčinná kapalinová chromatografie
Jednotné pracovní postupy zkoušení krmiv STANOVENÍ OBSAHU MELAMINU A KYSELINY KYANUROVÉ METODOU LC-MS
Národní referenční laboratoř Strana 1 STANOVENÍ OBSAHU MELAMINU A KYSELINY KYANUROVÉ METODOU LC-MS 1 Rozsah a účel Postup je určen pro stanovení obsahu melaminu a kyseliny kyanurové v krmivech. 2 Princip
Mohamed YOUSEF *, Jiří VIDLÁŘ ** STUDIE CHEMICKÉHO SRÁŽENÍ ORTHOFOSFOREČNANŮ NA ÚČOV OSTRAVA
Sborník vědeckých prací Vysoké školy báňské Technické univerzity Ostrava Řada hornicko-geologická Volume XLVIII (2002), No.2, p. 49-56, ISSN 0474-8476 Mohamed YOUSEF *, Jiří VIDLÁŘ ** STUDIE CHEMICKÉHO
Střední průmyslová škola strojnická Olomouc, tř.17. listopadu 49
Střední průmyslová škola strojnická Olomouc, tř.17. listopadu 49 Výukový materiál zpracovaný v rámci projektu Výuka moderně Registrační číslo projektu: CZ.1.07/1.5.00/34.0205 Šablona: III/2 Anglický jazyk
Repetitorium chemie VIII. (2014)
Repetitorium chemie VIII. (2014) Moderní metody analýzy organických látek se zastávkou u Lambert-Beerova zákona a odhalení tajemství Bradforda/Bradfordové Odhalení tajemství: Protein Concentration Determination
Laboratoř na čipu. Lab-on-a-chip. Pavel Matějka
Laboratoř na čipu Lab-on-a-chip Pavel Matějka Typy analytických čipů 1. Chemické čipy 1. Princip chemického čipu 2. Příklady chemických čipů 3. Příklady analytického použití 2. Biočipy 1. Princip biočipu
Melting the ash from biomass
Ing. Karla Kryštofová Rožnov pod Radhoštěm 2015 Introduction The research was conducted on the ashes of bark mulch, as representatives of biomass. Determining the influence of changes in the chemical composition
Úvod do vysokoúčinné kapalinové chromatografie
Úvod do vysokoúčinné kapalinové chromatografie Josef Cvačka, 1. 10. 2018 Chromatografické techniky převzato z M.Klusáčková: Chromatografie Královna analýz Vysokoúčinná kapalinová chromatografie Vysokoúčinná
Theme 6. Money Grammar: word order; questions
Theme 6 Money Grammar: word order; questions Čas potřebný k prostudování učiva lekce: 8 vyučujících hodin Čas potřebný k ověření učiva lekce: 45 minut KLÍNSKÝ P., MÜNCH O., CHROMÁ D., Ekonomika, EDUKO
Studijní materiál HMF_1 1. Hydroxymethylfurfural a jeho stanovení v potravinách 2. Kapalinová chromatografie (HPLC, UPLC)
Studijní materiál HMF_1 1. Hydroxymethylfurfural a jeho stanovení v potravinách 2. Kapalinová chromatografie (HPLC, UPLC) V Brně dne 20. 11. 2011 Vypracoval: RNDr. Ivana Borkovcová, Ph.D. 1. Hydroxymethylfurfural
VYUŽITÍ BEZKONTAKTNÍ VODIVOSTNÍ DETEKCE PRO HPLC SEPARACI POLYKARBOXYLÁTOVÝCH DERIVÁTŮ CYKLENU. Anna Hamplová
VYUŽITÍ BEZKOTAKTÍ VODIVOSTÍ DETEKCE PRO HPLC SEPARACI POLYKARBOXYLÁTOVÝCH DERIVÁTŮ CYKLEU Anna Hamplová Univerzita Karlova v Praze, Přírodovědecká fakulta, Katedra analytické chemie Albertov 6, 128 43
Metodický postup pro stanovení PAU v půdách volných hracích ploch metodou HPLC a GC
Strana : 1 1. Úvod 1.1.Předmět a vymezení působnosti Stanovení polycyklických aromatických uhlovodíků. Tyto analyty se běžně stanovují: A: HPLC metodou s fluorescenčním a DA detektorem / HPLC-FLU+DAD/
Stanovení vitaminu C metodou HPLC s rozdílnou možností detekce. Bc. Kamila Šimánková
Stanovení vitaminu C metodou HPLC s rozdílnou možností detekce Bc. Kamila Šimánková Diplomová práce 2006 ABSTRAKT Cílem této práce bylo vypracování vhodného extrakčního postupu k izolaci vitaminu C a
Příprava materiálu byla podpořena projektem OPPA č. CZ.2.17/3.1.00/33253
Příprava materiálu byla podpořena projektem OPPA č. CZ.2.17/3.1.00/33253 Část 10 Chromatografie v reverzním/obráceném módu (Reveresed-Phase chromatography, RP) Princip separace Termín chromatografie v
Repetitorium chemie IV (2014)
Repetitorium chemie IV (2014) Chromatografie Podstatou je rozdělování složek směsi dávkovaného vzorku mezi dvěma fázemi Stacionární fáze je nepohyblivá (silikagel, celulóza, polymerní částice) Mobilní
Caroline Glendinning Jenni Brooks Kate Gridley. Social Policy Research Unit University of York
Caroline Glendinning Jenni Brooks Kate Gridley Social Policy Research Unit University of York Growing numbers of people with complex and severe disabilities Henwood and Hudson (2009) for CSCI: are the
Problémy u kapalinové chromatografie
Problémy u kapalinové chromatografie Troubleshooting 1 Problémy v HPLC Většinu problémů, které se vyskytují při separaci látek na chromatografické koloně můžeme vyčíst již zpouhého průběhu základní linie,
P. Martinková, R. Jobánek, D. Pospíchalová. Stanovení vybraných léčiv v čistírenském kalu
P. Martinková, R. Jobánek, D. Pospíchalová Stanovení vybraných léčiv v čistírenském kalu PPCP Pharmaceutical and Personal Care Products (farmaka a produkty osobní potřeby) Do životního prostředí se dostávají
LOGOMANUÁL / LOGOMANUAL
LOGOMANUÁL / LOGOMANUAL OBSAH / CONTENTS 1 LOGOTYP 1.1 základní provedení logotypu s claimem 1.2 základní provedení logotypu bez claimu 1.3 zjednodušené provedení logotypu 1.4 jednobarevné a inverzní provedení
HPLC v analýze potravin a přírodních produktů Přístroj, kolony. Věra Schulzová
HPLC v analýze potravin a přírodních produktů Přístroj, kolony Věra Schulzová Kolona VYSOKOÚČINNÁ KAPALINOVÁ CHROMATOGRAFIE Stříkačka Směšovací komora Pumpa Nástřik Předkolona Těsnění Záznamové zařízení
STUDIUM KINETIKY SORPCE TĚKAVÝCH ORGANICKÝCH LÁTEK NA VLÁKNA SPME PŘI ANALÝZE METODOU GC/MS
PŘÍSPĚVKY THE SCIENCE FOR POPULATION PROTECTION 1/2009 STUDIUM KINETIKY SORPCE TĚKAVÝCH ORGANICKÝCH LÁTEK NA VLÁKNA SPME PŘI ANALÝZE METODOU GC/MS STUDY OF KINETICS OF SORPTION OF VOLATILE ORGANIC COMPOUNDS
Metody separace. přírodních látek
Metody separace přírodních látek (5) Chromatografie; základní definice a klasifikace ruzných metod; kapalinová chromatografie, plynová chromatografie, přístrojová technika. Chromatografie «F(+)d» 1897
Jednotné pracovní postupy zkoušení krmiv STANOVENÍ OBSAHU MYKOTOXINŮ METODOU HPLC - ZEARALENON
Národní referenční laboratoř Strana 1 STANOVENÍ OBSAHU MYKOTOXINŮ METODOU HPLC - ZEARALENON 1 Rozsah a účel Metoda specifikuje podmínky pro stanovení zearalenonu v krmivech. 1 Zearalenon (ZON) je charakterizován
Příprava materiálu byla podpořena projektem OPPA č. CZ.2.17/3.1.00/33253
Příprava materiálu byla podpořena projektem OPPA č. CZ.2.17/3.1.00/33253 Část 16 Iontová chromatografie Iontová chromatografie je speciální technika vyvinutá pro separaci anorganických iontů a organických
Střední průmyslová škola strojnická Olomouc, tř.17. listopadu 49
Střední průmyslová škola strojnická Olomouc, tř.17. listopadu 49 Výukový materiál zpracovaný v rámci projektu Výuka moderně Registrační číslo projektu: CZ.1.07/1.5.00/34.0205 Šablona: III/2 Anglický jazyk
Komunikační bezdrátové technologie LPWAN/LPN pro senzory a aktuátory nejen pro průmyslový IoT
Komunikační bezdrátové technologie LPWAN/LPN pro senzory a aktuátory nejen pro průmyslový IoT Ing. Bc. Lukáš Vojtěch, Ph.D. lukas.vojtech@fel.cvut.cz březen 2016 ČVUT v Praze - FEL 1 Produkce inteligentních
DC circuits with a single source
Název projektu: utomatizace výrobních procesů ve strojírenství a řemeslech egistrační číslo: Z..07/..0/0.008 Příjemce: SPŠ strojnická a SOŠ profesora Švejcara Plzeň, Klatovská 09 Tento projekt je spolufinancován
Problematika ozvučování zohledňuje tyto disciplíny:
Ozvučování Problematika ozvučování zohledňuje tyto disciplíny: - šíření vlny ve volném poli, odrazy vln od stěn - šíření vlny v uzavřeném prostoru - teorie akustických vysílačů (směrové charakteristiky,
Chromatografie polymerů III.: IC+LC CC+LC LC. FFF-Field flow fractionation (Frakcionace tokem v silovém poli)
Přednáška 3 Chromatografie polymerů III.: IC+LC CC+LC LC FFF-Field flow fractionation (Frakcionace tokem v silovém poli) Studijní opora pro studenty registrované v akademickém roce 2013/2014 na předmět:
Chromatografické testování a porovnání reverzních HPLC kolon
U N I V E R Z I T A K A R L O V A V P R A Z E P ř í r o d o v ě d e c k á f a k u l t a K a t e d r a an alytické ch e mi e Chromatografické testování a porovnání reverzních HPLC kolon B a k a l á ř s
RYBÁŘSKÉ ŘETĚZY FISHING CHAINS
Řetězárna a.s Polská 48 790 81 Česká Ves Czech Republic + 420 584 488 111 + 420 584 428 194 export@retezarna.cz www.retezarna.cz RYBÁŘSKÉ ŘETĚZY FISHING CHAINS RYBÁŘSKÉ ŘEŤEZY Chains exported worldwide...
LED STANDARD 12V GU4, GU5.3, G53
LED catalog/katalog OBSAH / CONTENT 3 LED STANDARD 12V GU4, GU5.3, G53 5 HIGH POWER LED 230V GU10 7 HIGH POWER LED 230V E14, E27 9 HIGH POWER LED 230V E27 11. HIGH POWER LED 230V GU10, E27 13. LED STANDARD
TYPY KOLON A STACIONÁRNÍCH FÁZÍ V PLYNOVÉ CHROMATOGRAFII
TYPY KOLON A STACIONÁRNÍCH FÁZÍ V PLYNOVÉ CHROMATOGRAFII Náplňové kolony - historicky první kolony skleněné, metalické, s metalickým povrchem snažší výroba, vysoká robustnost nižší účinnost nevhodné pro
:= = := :=.. := := := := ρ := := α := π α = α = := = :=
:= = := :=.. := := := := ρ := := α := π α = α = := = := := α := α := = := α := := α = = ρ ρ := := := = := = := := := + + := + + := + := := := := + + := + + := + = = = :=.. := η := η := := π = :=.. :=,
USING VIDEO IN PRE-SET AND IN-SET TEACHER TRAINING
USING VIDEO IN PRE-SET AND IN-SET TEACHER TRAINING Eva Minaříková Institute for Research in School Education, Faculty of Education, Masaryk University Structure of the presentation What can we as teachers
LABORATORNÍ PŘÍSTROJE A POSTUPY
LABORATORNÍ PŘÍSTROJE A POSTUPY HPLC STANOVENÍ NORADRENALINU V INFUZNÍCH ROZTOCÍCH IVANA BRABCOVÁ, DALIBOR ŠATÍNSKÝ a PETR SOLICH Katedra analytické chemie, Univerzita Karlova v Praze, Farmaceutická fakulta
Acta fytotechnica et zootechnica Mimoriadne číslo Nitra, Slovaca Universitas Agriculturae Nitriae, 2009, s. 64-68
Acta fytotechnica et zootechnica Mimoriadne číslo Nitra, Slovaca Universitas Agriculturae Nitriae, 2009, s. 64-68 MOŽNOST STANOVENÍ CHOLESTEROLU, STIGMASTEROLU A SITOSTEROLU V ROSTLINNÝCH A ŽIVOČIŠNÝCH
stany A B C D tents VÝBAVA stanů Husky 2005/Husky 2005 tents ACCESSORIES
VÝBAVA stanů Husky 2005/Husky 2005 ACCESSORIES A B C D E F Voděodolnost Husky Dostatečné vodní sloupce v hodnotě až 6000 mm/cm 2 tropiko a 10000 mm/cm 2 podlážka (dle typu stanu), PU zátěry a podlepené
Kapalinová chromatografie s tandemovou hmotnostní detekcí Teoretický úvod
Kapalinová chromatografie s tandemovou hmotnostní detekcí Teoretický úvod Vysokoúčinná kapalinová chromatografie s tandemovou hmotnostní detekcí se řadí mezi nejcitlivější separační metody určené ke kvantitativní
Radiova meteoricka detekc nı stanice RMDS01A
Radiova meteoricka detekc nı stanice RMDS01A Jakub Ka kona, kaklik@mlab.cz 15. u nora 2014 Abstrakt Konstrukce za kladnı ho softwarove definovane ho pr ijı macı ho syste mu pro detekci meteoru. 1 Obsah