Geneticky modifikované zvířecí modely pro charakterizaci funkce genů Radislav Sedláček
Obsah Komplexita tvorby GMO hlodavčích modelů Nové technologie Servis a mezinárodní prostředí
Czech Centre for Phenogenomics International activities
Phenogenomics: Systematic phenotyping analysis of animal models for annotation of gene function genes to knock-out (informative mutation) comprehensive & large-scale phenotyping Phenotype: deciphering functions of individual genes lung embryology reproduction immunity Aging cancer metabolism Neurobehavioral cardiovascular gene A gene B gene C gene D gene E gene F Blood cholesterol Blood triglyceride body weight Red blood cell count Blood preassure sterility vision potential relevance to human diseases more then 400 standardized parameters Encyclopaedic database on gene function
Czech Centre for Phenogenomics IMPC: global cooperation http://www.mousephenotype.org/
Transgenic and Archiving Services production Transgenic core Mouse model generation ES cells injections, ES cell culture, karyotyping Pronuclear Injections (PNI) Programmable nucleases (TALENs, CRISPR/Cas9) complete design, generation Cryopreservation and archiving (mouse sperm and embryos) Rederivation/cleaning/reanimation IVF Import/export of live mice and frozen material Breeding on demand Genotyping Expansion planned (2015/2016): Rat transgenesis and archiving Ovary transplantation, ICSI Cryo-archiving unit
Tvorba GMO laboratorních myší a potkanů a nakládání Servis: tvorba/generation pro uživatele instituce pro externí uživatele z ČR pro zahraniční uživatele zamražování/cryo-archiving Embrya nebo spermie rederivace Embrya nebo spermie k ozdravení linie/kmene Import/export/distribuce Embrya nebo spermie Myši/potkani
Tvorba GMO laboratorních myší a potkanů a nakládání Servis: tvorba/generation pro uživatele instituce pro externí uživatele z ČR pro zahraniční uživatele pro uživatele instituce > vlastník hlásí GMO pro externí uživatele z ČR > centrum/vlastník hlásí GMO > centrum/vlastník hlásí převod GMO pro zahraniční uživatele > centrum hlásí GMO > centrum hlásí a org. převod/export GMO
Tvorba GMO laboratorních myší a potkanů a nakládání Servis: zamražování/cryo-archiving Embrya nebo spermie Znovu-vytvoření Re-animation Není jasně definováno rederivace Embrya nebo spermie k ozdravení linie/kmene Import/export/distribuce Embrya nebo spermie Myši/potkani Znovu-vytvoření Re-animation
Current major processes used for mouse model generation Conventional transgenesis Genome editing nucleases Time 0 ES cell generation Cloning of donor DNA Design and cloning of nucleases Time 0 10 weeks ES cell electroporation and selection 22 weeks ES injection into blastocysts Pronuclear injection 3 weeks 33 weeks Chimeric mice 44 weeks Knock in / knock out Knock in / knock out 6 weeks
production pipeline request analysis & design construction & validation model generation Genotyping selection, F1 Archiving Export archiving request form žádost s definicí GMO
possibilities using programmable nucleases Generation of indel mutations Excision of DNA fragment Site-specific integration Exon 2 Exon 1 Exon 2 Exon 3 Exon 1 Exon 2 Exon 3 Exon 1 Exon 2 Exon 3 Exon 1 Exon 2 Exon 3 Exon 1 Exon 3 Exon 1 Exon Exon 3 2
problematika tvorby modelů etablovaní linie production pipeline ES cell generation programmable nucleases Chimeric mice chiméry GLT (transmise do zarodečné linie) Founder (heterozygot) Mutant (monoalelický, bialelický) Founder/founders kondicionální model (několikanásobný mutant)
problematika tvorby modelů etablovaní linie kondicionální model (příklad) několikanásobný mutant IMPC: most comprehensive mouse model resource
problematika tvorby modelů etablovaní linie International allele nomenclature kondicionální model (příklad) několikanásobný mutant
You are welcome...