IMUNOLOGIE Systémová autoimunitní onemocnění IMUNOFLUORESCENČNÍ SOUPRAVA K DIAGNOSTICE SYSTÉMOVÝCH AUTOIMUNITNÍCH ONEMOCNĚNÍ POJIVA Antinukleární protilátky (ANA) IIF souprava pro stanovení protilátek třídy IgG proti buněčným antigenům v lidském séru nebo plazmě na lidských epiteliálních nádorových buňkách, linie HEp-2.
Úvod Stanovení antinukleárních protilátek má význam pro diagnostiku systémových autoimunitních onemocnění. Jde o skupinu protilátek namířených proti orgánově nespecifickým antigenům, které jsou lokalizovány v buněčném jádře, případně cytoplasmě. Jejich průkaz může znamenat přítomnost systémového imunopatologického procesu. Zejména se jedná o tato onemocnění: systémový lupus erythematodes (SLE), Sjögrenův syndrom (SS), systémová sklerodermie (SSc), smíšené onemocnění pojiva (MCTD), polymyozitida, dermatomyozitida a revmatoidní artritida. Pro diagnostiku SLE je jedním z kritérií přítomnost protilátek proti DNA a Sm antigenu, přičemž protilátky proti Sm antigenu jsou vysoce specifickým makerem. U pacientů se SLE se dále mohou vyskytovat protilátky proti SS-A/Ro a SS-B/La, které jsou specifickým markerem především pro SS. Protilátky proti komplexům RNA s proteiny, tzv. ribonukleoproteiny (RNP) hrají roli při diagnostice MCTD, SLE a SSc. U1-snRNP je vysoce specifickým diagnostickým kritériem pro MCTD (zejména při absenci anti-sm protilátek). V diagnostice myozitid se uplatňuje průkaz protilátek proti antigenům v cytoplasmě buněk (Jo-1, PL-7, PL-12). Protilátky proti antigenu Scl-70 a centroméře jsou významné pro diagnostiku SSc (zvláště jejích progresivních forem). Detekce protilátek proti nukleárním antigenům se provádí na HEp-2 buňkách. V případě pozitivní reakce reagují autoprotilátky s antigeny v buněčném jádře nebo cytoplasmě a vzniká žlutozelená fluorescence různého typu (tzv. fluorescenční vzor), v závislosti na přítomnosti konkrétních protilátek. Fluorescenční vzory se mohou vyskytovat samostatně nebo v různých kombinacích a většinou neurčují jednu konkrétní autoprotilátku. Souprava IIF ANA IgG je určena ke screeningovému vyšetření, následná konfirmace přítomnosti protilátek proti specifickým antigenům se provádí pomocí metody ELISA nebo blot. Fluorescenční vzory Fluorescenční vzor Antigeny Onemocnění* Periferní Homogenní jaderná membrána Lamin A, B, C PBC, AIH, SLE Póry v jaderné membráně gp210 p62 PBC, PM Homogenní dsdna Nukleosomy SLE, SSc Histony Léky indukovaný SLE, SLE, SSc, RA Jemně SS-A/Ro SS-B/La SS (primární, sekundární), subakutní kožní SLE, SLE, SSc, DM, RA Granulární Hrubě U1-snRNP Sm MCTD, SLE, PM/SSc Nukleární matrix hnrnp RA, SLE, MCTD, SSc S jadérky a pozitivní mitotickou buňkou Scl-70 SSc, CREST, RS Různorodý PCNA SLE Ojedinělé jaderné tečky p80 Coilin PBC, SS, AIH Tečkovaný Četné jaderné tečky Sp100 PBC, SS Centroméra CENP A, B, C CREST, PBC Homogenní PM/Scl PM/SSc Nukleolární Chomáčkovitý U3-RNP (fibrillarin) SSc Tečkovaný NOR-90 RNAP I SSc, RS Centriola Pericentrin Ninein Cep250 Cep110 RS, SSc, CREST, SS Mitotický Póly dělicího vřeténka (MSA-1) NuMA SLE, SS, SSc, MCTD, PBC Dělicí tělísko (MSA-2, midbody) nespecifikován SSc, RS, RA, zánětlivá onemocnění Vlákna dělicího vřeténka HsEg5 SLE, onemocnění pojiva Difúzní PL-7 PL-12 Rib-P SRP PM, DM, SLE Jemně granulární Jo-1 PM, DM Mitochondriální M2 PBC, SSc Golgiho aparát Giantin Golgin SLE, SS, RA Cytoplasmatický Lysozom Endozom Peroxizom nespecifikováno Tečkovaný GW182 Ago2 Neurologická onemocnění, PBC, SS Cytoskelet F-aktin AIH, PBC, MCTD Vimentin Infekční nebo zánětlivá onemocnění *AIH autoimunitní hepatitida, CREST limitovaná forma sklerodermie, DM dermatomyozitida, MCTD smíšené onemocnění pojiva, PBC primární biliární cirhóza, PM polymyozitida, RA revmatoidní artritida, RS Raynaudův syndrom, SLE systémový lupus erythematodes, SS - Sjögrenův syndrom, SSc systémová sklerodermie
Fluorescenční vzory Periferní: Homogenní jaderná membrána Póry v jaderné membráně Homogenní: Homogenní Granulární: Jemně granulární Hrubě granulární Nukleární matrix Granulární s jadérky a pozitivní mitotickou buňkou Granulární různorodý
Tečkovaný: Ojedinělé jaderné tečky Četné jaderné tečky Centroméra Nukleolární: Nukleolární homogenní Nukleolární chomáčkovitý Nukleolární tečkovaný Mitotický: Centriola Póly dělicího vřeténka Dělicí tělísko Vlákna dělicího vřeténka
Cytoplasmatický: Cytoplasmatický difúzní Cytoplasmatický jemně granulární (+ cytoplasmatický tečkovaný) Cytoplasmatický mitochondriální Golgiho aparát Cytoplasmatický tečkovaný (+ homogenní) Cytoskelet Vimentin (+ homogenní) Pracovní postup Charakteristiky souprav Krok č. 1 Kroky testu Ředění vzorků screening séra/plazmy 1:80 (5 µl + 395 µl) Diagnostická citlivost Diagnostická specifita IIF ANA IgG 95,16 % 98,82 % 2 Dávkování kontrol (1 kapka) a ředěných vzorků (35 µl) 3 Inkubace 30 min při laboratorní teplotě 4 Opláchnutí a promytí sklíček 2 krát 5 min třepačka 5 Dávkování Konjugátu (1 kapka) 6 Inkubace 30 min při laboratorní teplotě Uživatelský komfort Evansova modř samostatně Dostatečný nadměr všech komponent Reagencie v kapacích lahvičkách pro pohodlné dávkování Odsávací papírky 7 8 Opláchnutí a promytí sklíček 2 krát 5 min třepačka Barvení substrátu v Evansově modři 1 krát 5 min třepačka 9 Přidání Montovacího média a přikrytí krycím sklíčkem 10 Vyhodnocení fluorescenčním mikroskopem
IMUNOLOGIE Objednací údaje Kód Produkt Počet testů ANAF120 IIF ANA IgG (HEp-2) 120 Kontakt TestLine Clinical Diagnostics s.r.o. Křižíkova 68 612 00 Brno, Česká republika Tel.: +420 549 121 205 (237, 238) Fax: +420 541 243 390 E-mail: trade@testlinecd.com LLOYD S REGISTER LRQA LLOYD S REGISTER LRQA www.testlinecd.cz ISO 9001 ISO 13485 TestLine Clinical Diagnostics s.r.o. je držitelem certifikátů ISO 9001:2008 a ISO 13485:2003.