Minulost, současnost a budoucnost práce v embryologické laboratoři RNDr. Kateřina Wagnerová, Mgr. Pavlína Motlová, MUDr. Pavel Texl Sanatorium Helios, Brno
Úvod Obor asistované reprodukce prodělal od svého vzniku velký rozvoj jak v oblasti diagnostických a medicínských postupů, tak v poslední době především v technickém a přístrojovém vybavení laboratoří provádějících IVF a PGT.
Klíčové faktory v embryologické laboratoři ovlivňující výsledek média a roztoky pracovníci konzistence postupů přístrojové vybavení čistota plynů čistota vzduchu dokumentace světlo
Kumulativní stres Drobnými událostmi a odchylkami může být u embryí způsobena různá míra stresu. Jde obvykle o kumulativní efekt, který může výrazně ovlivnit výsledek.
Podmínky kultivace - inkubátory
Podmínky kultivace - inkubátory inkubátory musí pracovat v každé IVF laboratoři spolehlivě za jakýchkoliv podmínek malé změny v koncentraci CO 2 (v inkubátoru) totiž mají velký vliv na změnu ph médií embrya mají omezenou kapacitu regulovat intrac. ph
Kritický parametr - ph médií intracelulární ph embryí ~ 7,1-7,2 v různých stádiích odlišné hodnoty způsobují zastavení embryonálního vývoje ph medií 7,2 dosáhneme kultivací v prostředí s 6% CO 2 a 37 C i malé zvýšení ph negativně ovlivňuje metabolismus a další vývoj embrya ph = -log (c H + ) CO 2 + H 2 O H 2 CO 3 H + + HCO 3- záporná hodnota dekadického logaritmu koncentrace vodíkových iontů M. Lane et al.: To QC or not to QC: the key to a consistent laboratory?o
Velký inkubátor versus miniinkubátor Velký inkubátor pomalé obnovení požadované teploty velký prostor může mít za následek výrazné teplotní rozdíly pomalé obnovení požadované koncentrace CO2 při každém otevření ovlivněna všechna kultivovaná embrya
200 180 160 140 120 100 80 60 40 20 0 Velký inkubátor versus miniinkubátor Čas (min) potřebný k dosažení 90% původní hodnoty (srovnáno s hodnotou před otevřením na 10 s) MINC teplota vlhkost CO2 velký inkubátor Hodnoty v grafech převzaty z Lee et al.: Incorporation of the Cook K-Minc Incubator and Media System into the IVF Lab: The Future of IVF
Velký inkubátor versus miniinkubátor Working Toward IVF Lab Optimization -COOK media Workshop Dubai2015
Velký inkubátor versus miniinkubátor Fujiwara et al. 2007: Effect of micro-environment maintenance on embryo culture after in-vitro fertilization: comparison of top-load mini incubator and conventional front-load incubator
Velký inkubátor versus miniinkubátor Stolní miniinkubátor rychlý návrat teploty a koncentrace CO 2 do požadovaných hodnot lepší kontrola a konzistence kultivačního prostředí méně kultivačních misek v jednom uzavřeném prostoru používání předem smísených plynů, snížení koncentrace kyslíku lepší vývoj embrya
Velký inkubátor versus miniinkubátor
Optimální podmínky pro kultivaci embryí - teplota vědecký konsensus - teplota 36,6-37,0 ⁰C je optimální pro lidská embrya změna teploty mimo toto rozmezí může negativně ovlivnit meiotické vřeténko a metabolismus při poklesu nebo zvýšení teploty mimo rozmezí bylo pozorováno zhoršení vývoje embryí do stádia blastocysty
Optimální podmínky pro kultivaci embryí GERI kontrola koncentrace plynů plyn se vrací co nejrychleji do požadované koncentrace určeno pro směs plynů z předem namíchané TL nebo s externím směšovačem regulátor udržuje stálý tlak snímač CO 2 pro detekci abnormálních podmínek O 2 interní reprodukční prostředí nepřesahuje 8% konc. O 2 bylo prokázáno, že snížení koncentrace kyslíku podporuje vývoj embrya in vitro Alarmy!
Optimální podmínky pro kultivaci embryí GERI - světelná expozice Embrya jsou v IVF laboratoři vystavena světlu mikroskop, laboratorní osvětlení, apod. Krátká vlnová délka (400-500nm) může způsobit neletální stres embryí, což vede ke snížení vývoje blastocyst. GERI používá spektrum světla o vlnové délce 550-650nm.
GERI
GERI
GERI jeden pacient jedna samostatná a nezávislá komůrka
GERI jedna jamka 1 embryo
GERI
Kultivační média
média GEMS Cleavage Medium kultivace od zygoty po rýhující se embrya Blastocyst Medium kultivace od rýhujících se embryí po blastocysty nebo Geri Medium kontinuální kultivace od zygoty do stádia blastocysty
GERI klinické výsledky Helios 60% GERI 488 kultivací, MINC 383 kultivací 50% MINC GERI 40% 30% 20% 10% 0% použité blastocysty
GERI klinické výsledky Helios Utilizace kultivace (procento kvalitních blastocyst vhodných k použití D5+D6 z 2PN) je v GERI inkubátoru o 23% vyšší než utilizace kultivace v MINC. ASP+ u těhotenství embryí kultivovaných v GERI je o 13% vyšší než u embryí kultivovaných v MINC. Kultivace v GERI dává více kvalitních embryí, navíc s lepší prognózou dalšího vývoje.
GAVI v Sanatoriu Helios od roku 2006 používána už 4. metoda vitrifikace
GAVI polo-automatizovaný proces ekvilibrace konzistentní časování, objem, teplota jednodušší zapracování není rozdíl mezi pracovníky standardizovaný proces uzavřený systém
GAVI klinické výsledky Helios 80% 70% 60% 50% 40% 30% 20% 10% čerstvý transfer 1. KET 0% hcg+ ASP+ porod
GAVI klinické výsledky Helios KET GAVI o 14,2% více biochemických těhotenství a o 33,2% více klinických těhotenství s ASP+ ve srovnání s Cryotopem. 2017-2018, 911 KET Cryotop, 108 GAVI
Děkuji za pozornost