Hodnocení morfologie a imunofenotypizace leukocytů jako reflexní testy automatizovaného krevního obrazu: koncept, možnosti a kazuistiky



Podobné dokumenty
Nemocnice Na Bulovce Laboratorní příručka

Automatizovaný hematologický systém. sysmex XE 5000 TM

Laboratoř rutinního provozu

Obsah. Příloha č.2 Seznam hematologických vyšetření

Hematologické abnormality. v mikroskopu a průtokovém cytometru

Nemocnice Na Bulovce Budínova 2, Praha 8 Čísla metod v LIS

Závěrečná zpráva k vyhodnocení cyklu EHK určená pro účastníky cyklu. SEKK Divize EHK Cyklus: NKDF2/15 - Nátěr kostní dřeně - fotografie

Vyšetřované parametry na hematologických analyzátorech a mikroskopicky. Bourková L., OKH FN Brno

Verze 07 Příloha č. 1

Nemocnice Na Bulovce Budínova 2, Praha 8 Čísla metod v LIS

Zajímavé kazuistiky z laboratoře

F-03 Referenční rozmezí SLH

Referenční rozmezí hematologických hodnot

Experimentáln navozený radia ní syndrom u pokusného zví ete 2

Informace OKLT č. 4 / 2015

Využití flowcytometrie v diagnostice lymfoproliferativních onemocnění kazuistiky

CentroLab s.r.o. Sokolovská 810/304, Praha 9

REFERENČNÍ ROZMEZÍ HEMATOLOGICKÝCH VYŠETŘENÍ. Parametry krevního obrazu pro dospělé nad 15 let

Referenční meze krevního obrazu (KO), retikulocytů (RET), normoblastů (NRBC) a diferenciálního rozpočtu leukocytů (DIF) u dětí

SEKK Divize EHK Cyklus: DIF2/15 - Hodnocení nátěru periferní krve. Závěrečná zpráva k vyhodnocení cyklu EHK určená pro účastníky cyklu

5. Seznam laboratorních vyšetření a fyziologických hodnot

Tělní tekutiny jsou roztoky anorganických a organických látek. Jejich základní složkou je voda. Tělní tekutiny zajišťují homeostázu a dělí se:

Podrobný seznam vyšetření - hematologie

Česká laboratorní s.r.o. Laboratoř OmniLab Jeseniova 780/101, Praha 3

Virus Epsteina a Barrové

Referenční rozmezí. Oddělení klinické hematologie, Pardubická nemocnice. Název dokumentu. Abstrakt

Imunitní odpověd - morfologie a funkce, nespecifická odpověd, zánět. Veřejné zdravotnictví

Myeloproliferativní neoplazie. L. Bourková, OKH FN Brno

EUC Klinika Zlín a.s. Oddělení klinické biochemie a hematologie LP_02 Příloha č.1 Kritické meze a podmínky pro nátěr KO

Hematologické laboratorní metody. Krevní obraz Koagulace Imunohematologie Podání krevní transfuze

F_THO_030 Přílohy laboratorní příručky

KREV. Krev, krevní elementy Zhotovení, barvení a hodnocení krevního nátěru Leukogram, jeho diagnostický význam. Ústav histologie a embryologie

Laboratorní příručka OKH, FN Brno

Abnormality bílých krvinek. MUDr.Kissová Jarmila Oddělení klinické hematologie FN Brno

Otázka: Cévní soustava, krev. Předmět: Biologie. Přidal(a): Petra. Krev. funkce - vede dýchací pliny. - rozvádí živiny, odvádí zplodiny

Diferenciální diagnostika lymfadenomegalie a splenomegalie. Vít Procházka

EUC Laboratoře s.r.o. EUC Laboratoře Praha Palackého 720/5, Nové Město, Praha 1

Anémie. Bourková L., OKH FN Brno

Interpretace výsledků měření základních lymfocytárních subpopulací očima (průtokového J ) cytometristy a klinického imunologa

IMUNITNÍ SYSTÉM NAŠE TĚLESNÁ STRÁŽ

1. Laboratoř klinické biochemie a hematologie Zahradníkova 494/2, Brno 2. Odběrové místo Jugoslávská 13, Brno. Identifikace postupu vyšetření

SEZNAM LABORATORNÍCH VYŠETŘENÍ PHEM Centrální laboratoře, LKCHI Pracoviště hematologie

(základní morfologické abnormality) L. Bourková, OKH FN Brno

MUDr.Kissová Jarmila Oddělení klinické hematologie FN Brno

SEZNAM LABORATORNÍCH VYŠETŘENÍ

Změny proti minulé verzi jsou označeny takto. Poslední aktualizace:

Krev, složení krve, formované krevní elementy

PRINCIPY HODNOCENÍ KREVNÍHO OBRAZU. Jana Šálková I. hematoonkologická klinika 1. LF UK a VFN

Myelodysplastický syndrom. MUDr.Kissová Jarmila Oddělení klinické hematologie FN Brno

Seznam laboratorních vyšetření Hematologicko-transfúzního oddělení

Aplikace průtokové cytometrie v klinické imunologii a hematologii

KREVNÍ ELEMENTY, PLAZMA. Tento výukový materiál vznikl za přispění Evropské unie, státního rozpočtu ČR a Středočeského kraje

EUC Laboratoře s.r.o. EUC Laboratoře Praha Palackého 720/5, Praha 1

Anémie. Bourková L., OKH FN Brno

Laboratoře Budějovická Vydání/Platnost: 2 / Oddělení klinické biochemie, imunologie a hematologie REFERENČNÍ MEZE

Laboratoře Budějovická Vydání/Platnost: 2 / Oddělení klinické biochemie, imunologie a hematologie Aktualizace: REFERENČNÍ MEZE

FAKULTNÍ NEMOCNICE BRNO. Jihlavská 20, Brno tel:

Laboratoře Budějovická Vydání/Platnost: 2 / Oddělení klinické biochemie, imunologie a hematologie Aktualizace: REFERENČNÍ MEZE

Stanovení autoprotilátek Seminář 7: diagnostika

SEZNAM LABORATORNÍCH VYŠETŘENÍ PHEM Centrální laboratoře, LKCHI Pracoviště hematologie

SEZNAM LABORATORNÍCH VYŠETŘENÍ PHEM Centrální laboratoře, LKCHI Pracoviště hematologie

REFERENČNÍ MEZE LABORATOŘ OTH ON JIČÍN A.S.

1. Sekce imunologie a infekční sérologie Jankovcova 2, Praha 7 2. Sekce biochemie a hematologie Jankovcova 2, Praha 7

SEKK s.r.o., Divize EHK Verze platná pro rok 2015, platí od: DIF - Hodnocení nátěru periferní krve Pokyny pro zápis výsledků

Příloha č. 1 Laboratorní příručky Oddělení klinické biochemie EUC KLINIKY ÚSTÍ NAD LABEM Platné od , verze 04

MUDr.Kissová Jarmila Oddělení klinické hematologie FN Brno

REFERENČNÍ MEZE LABORATOŘ OTH ON JIČÍN A.S.

Příloha č. 1 Podrobný seznam vyšetření SM_02_Laboratorní příručka

Verze 06 ABECEDNÍ SEZNAM VYŠETŘENÍ S REFERENČNÍMI HODNOTAMI

Seznam vyšetření prováděných na Oddělení klinických laboratoří nemocnice v Semilech

Název školy: Střední odborná škola stavební Karlovy Vary Sabinovo náměstí 16, Karlovy Vary Autor: Hana Turoňová Název materiálu:

Mnohobarevná cytometrie v klinické diagnostice

Chronická myeloproliferativní onemocnění. L. Bourková, OKH FN Brno

SKANÁ imunita. VROZENÁ imunita. kladní znalosti z biochemie, stavby membrán n a fyziologie krve. Prezentace navazuje na základnz

imunitní reakcí antigeny protilátky Imunitní reakce specifická vazba mezi antigenem a protilátkou a je podstatou imunitní reakce

AUTOIMUNITA Vnitřní nepřítel

Příloha č.2 Seznam hematologických vyšetření

Základní hematologická. Ústav patologické fyziologie 1.LF UK

REFERENČNÍ MEZE LABORATOŘ OTH ON JIČÍN A.S.

Průtoková cytometrie Flow Cytometry

INSTRUKCE OLM B-II-05

Vyšetření imunoglobulinů

Funkce imunitního systému

Biologie krve, krevní elementy a krevní srážení

METODY VYŠETŘOVÁNÍ BUNĚČNÉ IMUNITY. Veřejné zdravotnictví

Rozšířené parametry KO v intenzivní medicíně

synlab czech s.r.o. Laboratoř České Budějovice, Vrbenská 197/23 Vrbenská 197/23, České Budějovice

Jana Zuchnická Klinika hematoonkologie FN Ostrava. Lymfoproliferace. zajímavé klinické a morfologické nálezy

Biologický materiál je tvořen vzorky tělních tekutin, tělesných sekretů, exkretů a tkání.

Sérum Analyt/složka (zkratka) Jednotka Věkové omezení Referenční meze Zdroj údajů

Doporučení ČHS ČLS JEP

Substráty, elektrolyty - sérum

Seznam vyšetření - hematologická laboratoř

Oblastní nemocnice Kolín, a.s., nemocnice Středočeského kraje Centrální laboratoře (CL) Žižkova 146, Kolín

Cystectomy-CZ (Q) CyRUS: REGISTR NÁDORŮ MOČOVÉHO MĚCHÝŘE LÉČENÝCH CYSTEKTOMIÍ A DALŠÍ NÁSLEDNOU LÉČBOU

Přístroje v hematologické laboratoři

Jaké máme leukémie? Akutní myeloidní leukémie (AML) Akutní lymfoblastická leukémie (ALL) Chronické leukémie, myelodysplastický syndrom,

PŘEHLED SOP A INSTRUKCÍ PRO AKREDITOVANÉ METODY

Příloha je nedílnou součástí osvědčení o akreditaci č.: 744/2017 ze dne:

Transkript:

Hodnocení morfologie a imunofenotypizace leukocytů jako reflexní testy automatizovaného krevního obrazu: koncept, možnosti a kazuistiky Kateřina Pilátová, Lenka Zdražilová Dubská Oddělení laboratorní medicíny Masarykův onkologický ústav

Úvod Mikroskopie nátěru na sklo Morfologie (např. tvar erytrocytů, přítomnost buněčných inkluzí, struktura jádra aj.) Přítomnost parazitů, artefaktů aj. Automatický KO + diff. Subpopulace lymfocytů (T- a B- lymfocyty, NK buňky ) Imunofenotyp patologických lymfocytů Přítomnost CD34+ buněk

Automatický analyzátor KO + diff. Leukocyty Mono B-ly IDENTIFIKACE 6ti populační dif. rozpočet leukocytů Morfologie buňky SFL (fluorescence) obsah DNA/RNA Velikost buňky (přímý rozptyl) T-ly Laserový paprsek Sysmex XE-5000 RELATIVNÍ/ABSOLUTNÍ KVANTIFIKACE Morfologie buňky FSC (boční rozptyl) vnitřní struktura / granularita buňky

Automatický analyzátor KO + diff. Erytrocyty Trombocyty Sysmex XE-5000 IDENTIFIKACE Erytrocyty a trombocyty impedanční metoda (opticky) Hemoglobin absorpční spektrometrie NRBC, retikulocyty: speciální kanály, ABSOLUTNÍ KVANTIFIKACE

Digitální mikroskopie Leukocyty Velikost buňky Mikroskopie software (neuronová síť), oko IDENTIFIKACE včetně nezralých forem a patologií Morfologie buňky Mikroskopie software (neuronová síť), oko, speciální barvení vlastnosti cytoplazmy (granulace, cytoplazmatické inkluze) vlastnosti jádra (velikost, přítomnost jadérek, struktura chromatinu, segmentace jader) Přítomnost parazitů, artefaktů aj. Mikroskopie oko CellaVision DM1200 RELATIVNÍ KVANTIFIKACE

Digitální mikroskopie Erytrocyty Trombocyty Velikost Mikroskopie software (neuronová síť), oko Ery: mikrocytóza, makrocytóza, anizocytóza Trombo: makrotrombocyty, mikrotrombocyty, anizocytóza CellaVision DM1200 IDENTIFIKACE Morfologie Mikroskopie software (neuronová sít), oko, speciální barvení Ery: např. abnormální tvar, chromie, inkluze, penízkovatění aj. Trombo: hypochromie trombocytů, shlukování trombocytů NRBC Retikulocyty ORIENTAČNĚ KVANTIFIKACE trombocyty, schistocyty

Leukocyty Anti-CD14 Anti-CD19 IDENTIFIKACE včetně subpopulací lymfocytů, identifikace lymfomových buněk, CD34+ buněk aj... Imunofenotyp Fluorescence Velikost buňky (přímý rozptyl) Mono T-ly B-ly Anti-CD3 Laserový paprsek Navios, Beckman Coulter RELATIVNÍ KVANTIFIKACE ABSOLUTNÍ KVANTIFIKACE Fluorescenční kuličky (např. cirkulující endoteliální buňky, CD34+ buňky) Morfologie buňky FSC (boční rozptyl) vnitřní struktura / granularita buňky

Erytrocyty Trombocyty Pouze speciální aplikace: Ery: paroxysmální noční hemoglobinurie, fetomaternální hemoragie aj. Navios, Beckman Coulter Trombo: diagnostika vrozených poruch funkce destiček, imunitních a megakaryocytárních trombocytopenií, polymorfie systému lidských trombocytárnich antigenů (HPA) ve vztahu k aloimunizaci aj.

Úvod Mikroskopie nátěru na sklo Morfologie (např. tvar erytrocytů, přítomnost buněčných inkluzí, struktura jádra aj.) Přítomnost parazitů, artefaktů aj. Automatický KO + diff. Subpopulace lymfocytů (T- a B- lymfocyty, NK buňky ) Imunofenotyp patologických lymfocytů Přítomnost CD34+ buněk

Kritéria pro nátěr a flowcytometrické vyšetření PK Kvantitativní Onkologické diagnózy C Neonkologické diagnózy Z Parametr Hodnota menší než Hodnota větší než Jednotka Parametr Hodnota menší než Hodnota větší než Jednotka Leukocyty 1,0 30,0* 10 9 /l Hemoglobin 60** ženy: 180 muži: 195 g/l Trombocyty 50 1000 10 9 /l Neutrofily - 20,0* 10 9 /l Eozinofily - 4,0 10 9 /l Monocyty - 3,0 10 9 /l Lymfocyty - 4,5 10 9 /l Nezralé granulocyty - 0,3* 10 9 /l NRBC počet - 0,1*** 10 9 /l * Nejsou-li podávány růstové faktory granulocytů. ** Je-li anémie doprovázena trombocytopenií (trombocyty 100x10 9 /l). *** Nejsou-li podávány růstové faktory erytropoézy (erytropoetin). Leukocyty 4,0 30,0 10 9 /l Hemoglobin 70* ženy: 180 muži: 195 g/l Trombocyty 100* 1000 10 9 /l MCV 75 105 fl RDW - 22 % Neutrofily 1,0 20,0 10 9 /l Eozinofily - 2,0 10 9 /l Bazofily - 0,5 10 9 /l Monocyty - 1,5 10 9 /l Lymfocyty - 4,0 10 9 /l Nezralé granulocyty 0,1 10 9 /l NRBC počet - 0,0 10 9 /l Retikulocyty počet - 0,15 10 12 /l * Flowcytometrické vyšetření se provádí pouze, je-li současně anémie a trombocytopenie.

Kritéria pro nátěr a flowcytometrické vyšetření PK Kvalitativní Flag WBC Akce Flag RBC Akce Flag PLT Akce Abn Lympho / L_Blasts? Atypical Lympho? Blasts? Immature Gran? Left Shift? RBC Lyse Resistance? Nátěr C + Z Flow C + Z Nátěr Z Flow Z Nátěr C + Z Flow C + Z Nátěr C + Z Flow C + Z Nátěr Z Flow Z Nátěr C + Z Flow C + Z Fragments? HGB Defect? Iron Deficiency? RBC Agglutination? Dimorphic Population RBC Abn Distribution Nátěr C + Z Nátěr C + Z Nátěr C + Z Nátěr C + Z Nátěr Z Nátěr Z PLT Clumps? PLT Abn Distrib. PLT Abn Scattergram Nátěr C + Z Nátěr Z Nátěr Z NRBC Abn Scattergram Nátěr C + Z RET Abn Scattergram Nátěr Z WBC Abn Scattergram Nátěr C + Z

Kazuistika 1 Muž 79 let, C61 (ca prostaty) CT zvětšené a zmnožené uzliny v malé pánvi a RP 14. 4. 2016 patologický KO + diff. Automatizovaný KO + diff. Digitální mikroskopie CD45-KrO lymfo 79 % HLA-Dr-PC5 B-lymfo 74 % CD19-FITC lambda 1 % CD5-APC750 CD20-PC7 lambda-pe kappa 98 % CD19-PC5 kappa-fitc CD79b-PE CD38-PB CD23-APC FMC7-FITC CD10-PC5 Hodnocení: abnormální B-lymfocyty s imunofenotypem CD19+ CD20+ HLA-DR+ CD45+ sig(kappa)+ FMC7+ CD79b+ CD5+ CD23- CD38+ CD10+ CD200- CD117- CD11c+/- odpovídající monoklonální B-lymfoproliferaci z nezralých buněk. Res: B lymfoproliferace z nezralých buněk

Kazuistika 1 Muž 79 let, C61 (ca prostaty) CT zvětšené a zmnožené uzliny v malé pánvi a RP 14. 4. 2016 patologický KO + diff. Imunohistochemie cyklind1 Hodnocení: abnormální B-lymfocyty s imunofenotypem CD19+ CD20+ HLA-DR+ CD45+ sig(kappa)+ FMC7+ CD79b+ CD5+ CD23- CD38+ CD10+ CD200- CD117- CD11c+/- odpovídající monoklonální B-lymfoproliferaci z nezralých buněk. Res: B lymfoproliferace z nezralých buněk. B-PLL?

Kazuistika 1 27.4. 2016 - zahájena léčba obinutuzumabem (anti-cd20) a leukeranem 3. 5. 2016 kontrola KO + diff Automatizovaný KO + diff. Lymfo 23 % B-lymfo 0,6 % CD45-KrO HLA-Dr-PC5 CD19-FITC T-lymfo 92 % CD3-APC750 CD34-PC7 Hodnocení: leukopenie, trombocytopenie, v biochemii LDH = 16,51 kat/l (14. 4. 2016: LDH = 4,81 kat/l)

Kazuistika 2 Muž 19 let, zarudlý krk s bílými čepy, únava, afebrilní Automatizovaný KO + diff. Digitální mikroskopie Lymfo 65 % CD45-KrO HLA-Dr-PC5 B-lymfo 2,5 % T-lymfo 89 % CD19-FITC CD3-APC750 CD4-PB Th-lymfo 12 % CD3-APC750 CD8-APC Tc-lymfo 71 % CD3-APC750 HLA-Dr-PC5 CD4-PB SEROLOGIE Cytomegalovirus (CMV) CMV IgG negativní CMV IgM pozitivní Epstein-Baarové virus (EBV) EBV VCA IgG pozitivní EBV VCA IgM pozitivní EBV EBNA IgG negativní Hodnocení: expanze cytotox. CD8+ T-lymfocytů s reaktivním imunofenotypem. Res: infekční mononukleóza

Kazuistika 3 Žena 67 let, C181 (tu appendixu, dlouhodobá remise) Lymfocytóza v KO + diff. došetřeno flowcytometricky Automatizovaný KO + diff. CD45-KrO Lymfo 62 % HLA-Dr-PC5 B-lymfo 4 % T-lymfo 89 % CD19-FITC CD3-APC750 Th-lymfo 16 % Tc-lymfo 12 % CD4-PB CD8-APC CD3-APC750 CD3-APC750

Kazuistika 3 Žena 67 let, C181 (tu appendixu) Lymfocytóza v KO + diff. došetřeno flowcytometricky Digitální mikroskopie CD314-APC gammadelta CD314+ 59 % TCR gammadelta 59 % TCRdelta9-PB 99 % TCRgd-FITC TCRgamma9-PC5 Hodnocení: Atypický nález v oblasti T-lymfocytů; cca 60% lymfocytů periferní krve představují gamma delta T- lymfocyty; jež jsou z 99% TCRgamma9/delta2 CD4- CD8low+ CD56low+ CD16low+ NKG2D+ CD69- HLA-Dr-. Res: gammadelta T-lymfocyty s expresí znaků NK buněk.

Kazuistika 4 Žena 79 let, DM II.typu na inzulinoterapii V rámci pravidelné diabetologické kontroly zjištěna v KO leukocyotóza s lymfocytózou První hematologické vyšetření B-CLL??? Automatizovaný KO + diff. Digitální mikroskopie CD45-KrO lymfo 71 % HLA-Dr-PC5 B-lymfo 4,5 % T-lymfo 3,1 % CD19-FITC CD3-APC750 CD4-PB 88 % CD3-APC750 Hodnocení: aberantní T-lymfocyty: CD3- CD8- CD4+ CD34- CD14- CD19- CD5+ CD25- CD103- CD27+ CD45RO- CD38- CD16- CD56- dělící se dle exprese CD45 do dvou populací. Res: T-lymfoproliferace

Kazuistika 5 Žena 85 let, vyšetření pro pancytopenii PK + KD Automatizovaný KO + diff. Digitální mikroskopie CD45-KrO CD14-PE CD34-PC7 Hodnocení: leu: neutropenie, monocytopenie, hypersegmentované granulocyty; ery: makrocytóza, anizocytóza (dimorfní populace), makroovalocyty, knizocyty, stomatocyty; trombocytopenie.

Kazuistika 5 Žena 85 let, vyšetření pro pancytopenii PK + KD Automatizovaný KO + diff. CD45-KrO CD14-PE CD34-PC7 Hodnocení: Středně buněčný aspirát KD, hyperplastická erytrocytopoéza. Res: megaloblastová anémie.

Kazuistika 6 Muž 68 let, C229 (hepatocelulární karcinom) 8.1.2016 přichází na MOÚ pro susp. tu jater 15.1.2016 v rámci předoperačního vyšetření patologický KO + diff. Automatizovaný KO + diff. Digitální mikroskopie CD45-KrO Lymfo 32 % CD34+ buňky 7 % CD34-PC7 Hodnocení: flowcytomericky v periferní krvi zachyceno 7% CD34+ buněk/blastů; jedná se o buňky CD45low+ CD34+ CD14- HLA-Dr+ CD19- CD3- CD4-. Morfologicky bez aureových tyčí vzhledu negranulovaných nediferencovaných blastů. Res: hemoblastóza v PK.

Kazuistika 7 Žena 67 let, C502 (ca mammae) 16.2. chemoterapie 25.2. KO + diff., pro neutropenii podány G-CSF (filgrastim, Zarzio) 29.2. Ko + diff. kontrola Automatizovaný KO + diff. Digitální mikroskopie CD45-KrO Lymfo 32 % Granulo cca 40 % Neutrofily = 20,8 % Lymfocyty = 39,4 % Monocyty = 18,1 % Eozinofily = 2,7 % Bazofily = 2,1 % Metamyelocyty = 4,8 % Myelocyty = 5,3 % Promyelocyty = 6,4 % IG = 16,5 % Mono 19 % CD14-PE