Zpráva ze zahraniční odborné stáže

Transkript

1 Zpráva ze zahraniční odborné stáže Zahraniční odborná stáž byla realizována v rámci projektu ROZVOJ A POSÍLENÍ SPOLUPRÁCE MEZI AKADEMICKÝMI A SOUKROMÝMI SUBJEKTY SE ZAMĚŘENÍM NA CHEMICKÝ A FARMACEUTICKÝ VÝZKUM (CZ.1.07/2.4.00/ ). Účel cesty: Účastník: Doba trvání cesty: Místo: Vědecká stáž na University of Alabama at Birmingham Vojtěch Franc ; 178 nocí v Birminghamu Birmingham (USA) Jméno zahraničního profesora: Prof. Jan Novak, Ph. D. Výsledky spolupráce: Ve dnech jsem v rámci projektu ChemPharmNet (CZ.1.07/2.4.00/ ) vycestoval na zahraniční stáž do Birminghamu, USA, na pracoviště Department of Microbiology at University of Alabama at Birmingham (Katedra Mikrobiologie Univerzity v Alabamě v Birminghamu). Účelem pobytu byla vědecká stáž, během které jsem pokračoval v experimentální práci týkající se tématu mé doktorské práce. Během stáže jsem se věnoval vývoji metody pro analýzu glykosylace imunoglobulinu A a G (IgA a IgG). Imunoglobuliny jsou glykoproteiny, které jsou součástí imunitního systému. Abnormální glykosylace IgA a IgG je spojována s patogenezí různých nemocí jako je IgA nefropatie, revmatoidní artritida nebo rakovina. Studium změn glykosylačních profilů imunoglobulinů izolovaných z rozdílných buněčných linií může proto poskytnout velmi důležité informace o fyziologii těchto molekul a hlubší porozumění některých chorob na molekulární úrovni. Jednou z nejpoužívanějších metod pro analýzu proteinů je hmotnostní spektrometrie, která by ovšem sama o sobě nebyla natolik efektivní a úspěšná, pokud by se nekombinovala se separačními a frakcionačními metodami jako jsou elektroforéza a kapalinová chromatografie. Vzorek glykoproteinu se zpravidla vyznačuje tzv. heterogenitou, což znamená, že je populací molekul čítající i desítky různých isoforem, které se navzájem liší pozicí glykanu, jeho strukturou nebo obojím. To dělá z analýzy glykoproteinů pomocí

2 hmotnostní spektrometrie velmi složitý a náročný úkol a to nejen z pohledu získání dat, ale i jejich následné interpretace. Experimentální práce zahrnovala optimalizaci přípravy vzorků IgA a IgG pro jejich hmotnostně spektrometrickou analýzu. Po štěpení IgA a IgG trypsinem byly připravené peptidové směsi separovány kapalinovou chromatografií a analyzovány pomocí tandemové hmotnostní spektrometrie. Následná interpretace hmotnostních spekter poskytla hodnotné informace o struktuře studovaných glykopeptidů a heterogenitě vzorku IgA a IgG izolovaných z různých buněčných linií. Stáž byla ukončena diskuzí s odbornými pracovníky institutu. Získaná data byla publikována v odborném časopise a prezentována na dvou vědeckých konferencích. Zároveň budou použita k plánování dalších experimentů a vytváření hypotéz, které v budoucnu povedou k nalezení nových biomarkerů, vývoji diagnostických metod a cílené léčbě některých nemocí. Výstupem stáže je odborný článek v impaktovaném časopise. Citace: Franc V, Řehulka P, Raus M., Stulík J, Novak J., Renfrow MB, Šebela M (2013) Elucidating heterogeneity of IgA1 hinge-region O-glycosylation by use of MALDI-TOF/TOF mass spectrometry: Role of cysteine alkylation during sample processing. J. Proteomics ; doi: /j.jprot Dále dva příspěvky na vědeckých konferencích ve formě posteru: 1) Protocol optimization for analysis of changes in N-glycosylation profiles of immunoglobulins from different sources by using separation techniques and mass spectrometry. 22nd Annual Microbiology Research Retreat October 18-20, 2013, University at Birmingham, The Alabama 4-Center, Columbiana, USA; poster by V. Franc. 2) Analysis of changes in N-glycosylation profiles of monomeric and polymeric immunoglobulin A1 by using separation techniques and mass spectrometry. Glycoimmunobiology 2013, November 22, 2013, University at Birmingham, The Edge of Chaos, Lister Hill Library, Birmingham, USA; poster by V. Franc. Příloha: fotodokumentace

3

4

5

6

7

8 V Olomouci dne Vojtěch Franc

9 Příloha č. 1