ÚVOD DO TRANSPLANTAČNÍ IMUNOLOGIE

Transkript

1 ÚVOD DO TRANSPLANTAČNÍ IMUNOLOGIE

2 Základní funkce imunitního systému Chrání integritu organizmu proti škodlivinám zevního a vnitřního původu: chrání organizmus proti patogenním mikroorganizmům a jejich toxickým produktům udržuje toleranci vůči vlastním antigenům odstraňuje staré, poškozené a změněné buňky

3 Složky přirozené a adaptivní imunity Složky přirozené imunity: Fagocytující buňky, NK buňky Humorální složku komplementový systém, interferony, lektiny atd. Složky adaptivní imunity: Humorální (založené na protilátkách) Buněčné (T, B lymfocyty)

4 Molekuly štěpu, které jsou rozpoznány imunitním systémem HLA antigeny (Major histocompatibility antigens, MHC) Non-HLA antigeny endoteliální (MICA,MICB, vimentin), tkáňově specifické antigeny Minor histocompatibility antigens peptidy prezentovány v kontextu HLA, mohou způsobit těžkou GvHD

5 Lidský Major Histocompatibility Complex (MHC) Major Histocompatibility Complex (MHC) Human Leukocyte Antigenes (HLA) u člověka - více než 200 genů - kódují polymorfní glykoproteiny, které patří do imunoglobulinové skupiny - antigeny hrají důležitou roli při regulaci imunitní odpovědi organismu

6 HLA geny, molekuly a metodiky detekce centromera DP DQ DR B C A telomera chromosom 6 DNA HLA II. třída TNF, geny komplementu HLA I. třída DNA Buněčná membrána sérologie neshody sérologie

7 Výskyt HLA antigenů HLA antigeny I. třídy -A,B,C -na všech nukleárních buňkách HLA antigeny II. třídy - DR, DQ, DP - na antigen-prezentujících buňkách dendritické buňky, monocyty, makrofágy, B buňky, T aktivované lymfocyty Exprese na různých tkáních se výrazně liší (lymfocyty, svalové buňky)

8 Struktura HLA antigenů I. třída α řetězec 45 kda, β2 mikroglobulin II. třída α a β řetězce, 30 kda

9 Funkce HLA antigenů I. třída prezentace peptidů pocházejících z virových antigenů nebo intracelulárních proteinů

10 Funkce HLA antigenů II. třída prezentace peptidů pocházejících většinou z mikrobiálních antigenů

11 Asociace s některými chorobami Nemoc Asociovaný antigen RR Ankylozující spondylartritida (m. Bechtěrev) B Reaktivní artropatie B Revmatoidní artritida Systémový lupus erythematodes Insulin-dependentní diabetes mellitus DR4 DR3 DR4 DQ Roztroušená skleróza DR2 4.1

12 Ankylozující spondylitis (AS) Více než 95% pacientů s AS prakticky všech etnických skupin má HLA-B27 Nejčastější alela, která je asociovaná s AS je B*2705 (v české populaci se vyskytují pouze alely B*2705 a B*2702 a obě jsou stejně asociované s AS) Alely B*2706 a B*2709 nejsou spojeny s AS a mají protektivní vliv

13 Nomenklatura HLA systému HLA-A Význam A označuje lokus (znamená HLA gen) HLA-A2 Sérologický antigen A2 HLA-A*02 Skupina alel (subtypů) antigenu A2

14 Frekvence některých HLA antigenů I. třídy v české populaci A*02 (49.1%), A*03 (11.9%), A*01 (36.4%), A*24 (12.1%) B*07 (31.5%), B*44 (35.7%) B*08 (29.8%) Cw*07 (44%), Cw *0602 (26%), Cw*03 a Cw*12 (obojí 20%)

15 Proč se provádí HLA typizace? Shoda v HLA systému mezi dárcem a příjemcem má význam: pro dlouhodobé přežití (dobrou funkci) transplantovaných orgánů (ledviny, srdce, pankreas) pro snížení rizika GvHD po transplantaci kmenových buněk

16 HLA ANTIGENY Velmi rozdílné (polymorfní) - (přes 720 HLA-B alel (varianta genu), více než 500 alel HLA-DR) Pro transplantace orgánů typizujeme HLA antigeny A, B, (první třídy) a DR (druhé třídy) Pro transplantace kmenových buněk A, B, Cw, DR, DQ

17 HLA typizace Sérologie postupně ztrácí na významu, používá se pro typizaci antigenů I. třídy pro orgánové transplantace Molekulárně biologické metody pro typizaci antigenů I. a II. třídy pro orgánové transplantace a transplantace kmenových buněk

18 Limitace sérologie Aloantiséra a monoklonální protilátky nepokrývají všechny HLA specificity Potřeba živých buněk s výraznou povrchovou expresí HLA antigenů Sérologická zkřížená-reaktivita (A2 a A28, B7 a B27, B5 a B53, )

19 Molekulárně genetické metody při HLA typizaci PCR-SSP (polymerázová řetězová reakce se sekvenčně specifickými primery) PCR-SSO (polymerázová řetězová reakce se sekvenčně specifickými oligonukleotidy) Sekvenování HLA genů

20 Screening alloreaktivních protilátek (PRA) U čekatelů na transplantaci orgánů (waiting list) 4 x ročně vyšetření proti buněčnému panelu PRA 80%-100% - vysoký stupeň sensibilizace Možnost posouzení HLA specificity protilátek - proti kterému HLA antigenu jsou namířeny

21 MHC class I chain related (MIC) molekuly Glykoproteiny s molekulární váhou 63kDa MIC mají shodnou strukturu s klasickými HLA molekulami (neváží β2 mikroglobulin, neváží peptidy) Jsou exprimovány na žaludečních epiteliálních buňkách, endoteliálních buňkách,keratinocytech, monocytech a fibroblastech Váží receptory NKG2D na NK buňkách, γδ Τ buňkách

22 MHC class I chain related (MIC) molekuly V průběhu akutní a chronické rejekce buňky transplantované ledviny nebo pankreatu exprimují MIC proteiny (marker buněčného stresu) U některých nádorů jsou MIC molekuly odštěpeny a solubilní formy MIC mohou inaktivovat NK buňky