PASTOREX TM MENINGITIS 25 testů

Transkript

1 PASTOREX TM MENINGITIS 25 testů DETEKCE SOLUBILNÍCH ANTIGENŮ A IDENTIFIKACE NEISSERIA MENINGITIDIS A,C,Y/W135, B/E.COLI K1, HAEMOPHILUS INFLUENZAE b, STREPTOCOCCUS PNEUMONIAE, STREPTOCOCCUS B

2 1- KLINICKÝ VÝZNAM Bakteriální meningitida je infekce mozkových plen, hlavními původci jsou: Neisseria meningitidis, Streptococcus pneumoniae, Haemophilus influenzae typu b a Streptococcus skupiny B. Meningitida je závažný stav, proto je důležité infekci rychle diagnostikovat, aby mohla být zahájena odpovídající léčba. Klasická technika identifikace pomocí kultivace, ačkoli nezbytné pro antibiogram a potvrzení diagnózy, je pomalá a může poskytovat falešně negativní výsledky, jestliže jsou vzorky transportovány a skladovány v nevyhovujících podmínkách nebo pokud byla před odebráním vzorku zahájena terapie antibiotiky. Imunologické techniky pro detekci rozpustných antigenů, uvolňovaných patogenními organismy do tělesných tekutin jako je mozkomíšní mok, moč nebo sérum během infekce, umožňují rychlejší diagnózu. Rozpustné antigeny, které mohou být detekovány touto soupravou, jsou polysacharidy specifické pro určité skupiny nebo sérotypy: Streptococcus pneumoniae (83 typů); Haemophilus influenzae typu b, Neisseria meningitidis skupiny A, skupiny B/E.coli K1, skupiny C, skupiny Y/W135 a Streptococcus skupiny B. Polysacharidový antigen specifický pro Meningococcus séroskupiny B je pouze velmi slabě antigenní a proto je vždy velmi obtížné získat kvalitní králičí protilátky proti tomuto antigenu. Použití techniky monoklonálních protilátek k přípravě specifických bakteriálních polysacharidových antigenů umožňuje produkci myších monoklonálních protilátek, schopných specificky a reprodukovatelně rozpoznávat polysacharidový antigen Meningococcus séroskupiny B. Tento polysacharidový antigen specifický pro Meningococcus séroskupiny B je identický s polysacharidovým antigenem, nalezeným u E.coli K1. Tato antigenní homologie mezi Meningococcus B a E.coli K1 umožňuje diagnózu meningitidy zapříčiněné E.coli u novorozenců, u nichž se z 80 % jedná o kmen K1. Je třeba zmínit, že E.coli a Streptococcus B jsou hlavní bakterie odpovědné za meningitidu novorozenců a nedonošených dětí, přičemž meningokoková infekce je v této věkové skupině velmi vzácná.

3 2- PRINCIP Antigen obsažený v testovaném vzorku je identifikován pomocí latexových částic obalených specifickými homologními protilátkami. V přítomnosti homologního antigenu latexové částice aglutinují. Za nepřítomnosti antigenu zůstávají v homogenní suspenzi. 3- SLOŽENÍ 1. PASTOREX TM MENINGITIS, set pro 25 testů, kód obsahuje: Reagencie 1 (R1): N. meningitidis B/E.coli K1 1 lahvička s 0,40 ml červeného latexu, specifického pro Neisseria meningitidis skupiny B/E.coli K1. Tento latex je senzibilizován myší monoklonální protilátkou specifickou pro N. meningitidis skupiny B/E.coli K1. Reagencie 2 (R2): N. meningitidis B/E.coli K1 negativní kontrola 1 lahvička s 0,40 ml červeného latexu senzibilizovaného myší monoklonální protilátkou specifickou pro tetanový toxoid. Reagencie 3 (R3): H. influenzae b 1 lahvička s 0,40 ml bílého latexu senzibilizovaného králičími protilátkami specifickými pro H. influenzae typu b. Reagencie 4 (R4): S. pneumoniae 1 lahvička s 0,40 ml zeleného senzibilizovaného králičími protilátkami specifickými pro S. pneumoniae. Reagencie 5 (R5): Streptococcus B 1 lahvička s 0,40 ml žlutého latexu senzibilizovaného králičími protilátkami specifickými pro Streptococcus B. Reagencie 6 (R6): N. meningitidis A 1 lahvička s 0,40 ml modrého latexu senzibilizovaného králičími protilátkami specifickými pro N. meningitidis skupiny A. Reagencie 7 (R7): N. meningitidis C 1 lahvička s 0,40 ml červeného latexu senzibilizovaného králičími protilátkami specifickými pro N. meningitidis skupiny C. Reagencie 8 (R8): N. meningitidis Y/W lahvička s 0,40 ml růžového latexu senzibilizovaného králičími protilátkami specifickými pro N.meningitidis Y/W 135. Reagencie 9 (R9): Negativní polyvalentní kontrola 1 lahvička s 0,40 ml švestkově modrého latexu senzibilizovaného imunoglobulíny IgG z neimunizovaných králíků.

4 Reagencie 10 (R10): Pozitivní polyvalentní kontrola Pozitivní kontrola: lyofilizovaný antigenní extrakt k rozpuštění v 1 ml sterilní vody. Obsahuje polysacharidové antigeny N. meningitidis A, C, B, Y/W 135, H. influenzae b, Streptococcus B a S. pneumoniae. Objem dostatečný pro 20 reakcí. Všechny reagencie obsahují 0,02% thimerosal. Reagencie R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8, R9 obsahují méně než 0,1% azid sodný. Aglutinační kartičky na jedno použití Míchací tyčinky na jedno použití. 2. PASTOREX TM MENINGITIS jednotlivé latexové testy (25 testů každý): Jedlotlivé latexy (bez kontrol) - N. meningitidis A(R6) kód N. meningitidis C (R7) kód N. meningitidis B/E. coli K1 (R1) kód Streptococcus B (R5) kód Streptococcus pneumoniae (R4) kód Haemophilus influenzae typu b (R3) kód PASTOREX TM MENIGITIS kontrola Sada kontrolních reagencií pro jednotlivé latexové testy (pro 2 x 25 testů) kód kapací lahvičky s 0,40 ml polyvalentní negativní kontroly (R9) - 2 lahvičky s lyofilizovanou polyvalentní pozitivní kontrolou (R10) určenou k rozpuštění v 1 ml sterilní vody. - 2 kapací lahvičky s 0,40 ml negativní kontroly pro N.m.B/E. coli K1 (R2) - kartičky na jedno použití. - míchací tyčinky na jedno použití. 3. PASTOREX TM MENINGITIS ředící roztok 1 lahvička se 40 ml ředícího roztoku pro zpracování séra kód 61717

5 4- UCHOVÁVÁNÍ Všechny reagencie jsou stabilní až do dat exspirací uvedených na štítku, pokud jsou uchovávány při +2-8 C v nepřítomnosti mikrobiální kontaminace (dokonce i po otevření). Rozpuštěná polyvalentní pozitivní kontrola (R10) je stabilní po dobu 1 měsíce při +2-8 C (v nepřítomnosti mikrobiální kontaminace) nebo déle, pokud je rozdělena do alikvotů a zamražena okamžitě na -20 C. Lahvičku s latexovou reagencií uchovávejte vertikální poloze. LATEXOVÁ REAGENCIE NESMÍ BÝT ZAMRAŽENA. 5- POTŘEBNÝ MATERIÁL, KTERÝ NENÍ SOUČÁSTÍ DODÁVKY Pipety pro aplikaci 1 kapky (40-50 μl) vzorku Hemolyzační zkumavky nebo zkumavky typu Eppendorf Suchý Inkubátor nebo vodní lázeň 100 C Centrifuga pro hemolyzační zkumavky nebo pro zkumavky typu Eppendorf Dezinfekční lázeň Sterilní destilovaná voda, sterilní fyziologický nebo ředící roztok (kód 61717) 6- UPOZORNĚNÍ Hodnověrnost výsledků závisí na důsledném dodržování správné laboratorní praxe. Všechny reagencie a vzorky je třeba používat při laboratorní teplotě 18 až 25 C. Nedotýkejte se reakčního povrchu aglutinačních kartiček. Pro každý testovaný vzorek použijte novou pipetu nebo pipetovací špičku. Před použitím protřepejte obsah lahviček s latexem. Otřete špičku kapací lahvičky, aby bylo možné získat dobře kalibrované kapky. Aby jste nanesli kapky, držte lahvičku s reagencií ve svislé poloze. Pro každou reakci použijte novou tyčinku.

6 Vyhoďte všechny použité jednorázové materiály do autoklávovatelné nádoby na odpad nebo do nádoby s dezinfekčním roztokem. Polyvalentní pozitivní kontrolu je nutné rozpustit ve sterilní destilované vodě, aby se zabránilo kontaminaci. OCHRANA ZDRAVÍ A BEZPEČNOSTNÍ POKYNY Dodržujte vždy aktuálně platné techniky a pokyny týkající se ochrany proti mikrobiologickým rizikům. Všechny odebírané vzorky musí být považovány za potenciálně infekční. 7- POSTUP: CSF, sérum, moč Vzorky Vzorky je nutné zpracovat co nejdříve po odběru. Pokud není okamžité zpracování možné, mohou být vzorky uchovávány po dobu několika hodin při teplotě +2 až 8 C nebo delší dobu při teplotě -20 C (v tomto případě uchovávejte pouze supernatant po centrifugaci). Vyhněte se opakovanému zmrazování/rozmrazování. Bakteriologická vyšetření (kultivace) je třeba provádět přednostně, aby se zamezilo kontaminaci vzorků. Minimální objem vzorku pro testování latexovou soupravou činí 0,5 ml. A- Příprava klinických vzorků POZOR: V případě použití vodní lázně používejte výhradně zkumavky s vodotěsným uzávěrem, který zabrání průniku vody do zkumavky. Pokud to bude možné, používejte suchý inkubátor. a) CSF (MOZKOMÍŠNÍ MOK) Jestliže je CSF zakalený nebo obsahuje červené krvinky, centrifugujte jej po dobu 5 minut při 350 g (2000 otáček/min) a použijte supernatant. Zahřívejte vzorek 3 minuty při 100 C (inkubátor nebo vodní lázeň), poté centrifugujte po dobu 5 minut při 3000 g nebo přefiltrujte přes filtr o porezitě 0,45 µm.

7 b) SÉRUM Přidejte 3 objemy ředícího roztoku (1,5 ml) (kód 61717) na jeden objem séra (0,5 ml). Zahřívejte po dobu 3 minut při 100 C ve vodní lázni nebo v suchém inkubátoru. Centrifugujte 5 minut při 3000 g. POZOR: Nepoužívejte vzorky plazmy. Interference vzniklé nadbytkem albuminu, lipidů, hemoglobinu a bilirubinu nebyly testovány. Nejlepších výsledků je dosahováno při použití čerstvého séra. c) MOČ Aby se zvýšila koncentrace antigenů, vzorek je možné před testováním zahustit až 25 krát na membráně typu Amicon B15 (Amicon, Francie). Zahřívejte moč 3 minuty při 100 C (suchý inkubátor nebo vodní lázeň). Centrifugujte 5 minut při 3000 g nebo přefiltrujte filtrem o porositě 0,45 µm. B- Postup testu. Umístěte kapku (40 až 50 µl) připraveného vzorku supernatantu do každého z kroužků na aglutinační kartě Jemně protřepte nádobky s latexovým činidlem. Držte nádobku směrem vzhůru, umístěte jednu kapku každého z latexových činidel na kartu na jedno použití podle distribučního vzorce: R9, R6, R7, R1 a R2 do bílých kroužků a R8, R3, R4 a R5 o černých kroužků. Promíchejte latexová činidla a vzorek pomocí tyčinky, vyměňte tyčinku pro každé z latexových činidel. Otáčejte jemně kartou (~120 ot./min) po dobu 10 minut a sledujte jakékoliv příznaky aglutinace viditelné pouhým okem během 10 minut (lze použít orbitální typ třepačky při rychlosti ~120 ot./min). 8- POSTUP: KULTIVACE KRVE Pro předběžnou kontrolu sledujte morfologii a Gramovo zbarvení Vezměte 1 až 2 ml pozitivní krevní kultury. Vložte do odstředivky na 5 minut při 2000g

8 Umístěte jednu kapku (40 až 50 µl) supernatantu do každého z kroužků na kartě na jedno použití, podle použitých latexových činidel a Gramova zbarvení. Jemně protřepte nádobky s latexovým činidlem vybraným pro test. Držte nádobku směrem vzhůru, umístěte jednu kapku každého z vybraných latexových činidel na okraj kapek supernatantu. Promíchejte latexová činidla a vzorek pomocí tyčinky, vyměňte tyčinku pro každé z latexových činidel. Otáčejte kartou ~120 ot./min po dobu 5 minut. Během 5-minutového období sledujte příznaky aglutinace. Některé média krevních kultur mohou vyvolávat nespecifické reakce nebo způsobovat potíže s rozpoznatelností. Jako negativní kontrolu použijte krevní kulturu naočkovanou sterilní krví nebo jinými organismy, které nejsou detekovány testem PASTOREX TM Meningitis. 9- INTERPRETACE VÝSLEDKŮ POZITIVNÍ REAKCE Pozitivní reakce je indikována jemnou aglutinací viditelnou prostým okem ve srovnání s negativními kontrolními testy. Intenzita aglutinace a rychlost jejího vzniku závisí na koncentraci antigenu v testovaném vzorku. Nesoulad mezi pozitivním testem na antigen a negativní kulturou může být vysvětlen nepřítomností životaschopných bakterií v kultivovaném vzorku (léčení antibiotiky zahájené před odebráním vzorku nebo podmínky při převozu nevhodné pro subtilní bakterie). Ve většině případů pozitivní reakce s latexem anti-n. meningitidis B/E.coli K1 u novorozence nebo v prenatálním stadiu indikuje infekci E.coli K1. U starších jedinců je pravděpodobnější Meningococcus B. Diagnózu je třeba potvrdit kultivací vzorku. NEGATIVNÍ REAKCE Homogenní suspenze, bez shluků. NEINTERPRETOVATELNÉ VÝSLEDKY Reakce není interpretovatelná, pokud dochází k aglutinaci s latexovými negativními kontrolami (R2 nebo R9) nebo s více než jedním latexovým činidlem v sadě. V takovém případě je doporučeno opakovat test s jiným vzorkem a vyčkat na výsledky kultivace. (Velmi vzácně může být infekce způsobena dvěma druhy bakterií).

9 10- POSTUP: SESKUPENÍ RODŮ BAKTERIÍ NA AGARU (Kolonie z čerstvé a čisté kultury) Latex Y/W135 nelze použít pro seskupování rodů bakterií. Pro stanovení těchto skupin je doporučeno používat konvenční protilátky (sada Y,W135, 29E : obj. č , 3 x 1mL) Pro předběžnou orientační zkoušku před provedením testu: Zkontrolujte morfologii a Gramovo zbarvení. Pro gramnegativní bakterie proveďte zkoušku na oxydázu (pozitivní pro N. meningitidis, negativní pro E.coli K1). Pro grampozitivní koky proveďte zkoušku na katalázu. (Netestujte rody pozitivní na katalázu). Neuzavřené rody S.pneumonia a Haemophilus influenzae nelze tímto postupem identifikovat. a) Seskupování: N. meningitides(pouze A, B, C), H. influenzae, E. coli, S. pneumoniae Umístěte kapku 30 µl sterilního solného roztoku na kartu na jedno použití. Vzorek: Pro Neisseria meningitidis, Haemophilus influenzea a Escherichia coli je ekvivalentem smyčka 1 µl s maximálně 2 až 3 koloniemi. Pro Streptococcus pneumoniae je ekvivalentem smyčka 5 µl s minimálně 10 až 12 koloniemi. Opatrně promíchejte vzorky kolonií tak, abyste získali homogenní suspenzi. Jemně protřepte nádobku s latexovým činidlem zvoleným pro identifikaci; podržte nádobku směrem vzhůru, umístěte jednu kapku tohoto latexu na okraj kapky bakteriální suspenze. Promíchejte latex a suspenzi pomocí tyčinky. Otáčejte kartou (~120 ot./min). Zaznamenejte jasné příznaky aglutinace, pokud nastanou do 2 minut, Potvrďte identifikaci druhu pomocí konvenčních biochemických testů. b) Seskupování: Steptococcus B (ß-hemolytické kolonie) Rozpusťte 5 kolonií v 2 ml Todd Hewittova bujónu. Inkubujte ve vodní lázni 37 C po dobu 2 až 3 hodin. Vložte do odstředivky na 5 minut při 3000g.

10 Umístěte jednu kapku (40 až 50 µl) supernatantu do kroužku na kartě na jedno použití. Jemně protřepte nádobku s latexovým činidlem; držte nádobku směrem vzhůru, umístěte jednu kapku tohoto latexu na okraj kapky supernatantu. Promíchejte latex a suspenzi pomocí tyčinky. Otáčejte kartou (~120 ot./min). Zaznamenejte jasné příznaky aglutinace, pokud nastanou do 1 minuty. Potvrďte identifikaci druhu pomocí konvenčních biochemických testů. Pro přímou extrakci z izolovaných kolonií použijte sadu PASTOREX TM STREP (Kód 61721) 11- KONTROLA KVALITY TESTU Latexová činidla musí být po protřepání zcela homogenní. Pozitivní polyvalentní kontrola R10 je použita pro ověření imunoreaktivity každého z latexů. Pro provedení testu kontroly kvality umístěte jednu kapku (40 µl) pozitivní kontroly (R10) do každého z kroužků na kartě na jedno použití. Jemně protřepte nádobky s latexovým činidlem. Držte nádobku směrem vzhůru, umístěte jednu kapku každého z latexových činidel na kartu na jedno použití podle distribučního vzorce: R9, R6, R7, R1 a R2 do bílých kroužků a R8, R3, R4 a R5 o černých kroužků. Promíchejte latexová činidla a vzorek pomocí tyčinky, vyměňte tyčinku pro každé z latexových činidel. Otáčejte jemně kartou (~120 ot./min) po dobu 10 minut. Během těchto 10 minut sledujte jakékoliv příznaky aglutinace viditelné pouhým okem (porovnejte reakce zkušebních latexových činidel s negativními vzorky). Intenzita aglutinace a četnost výskytu závisí na aviditě antigenu/protilátky. Výsledkem jsou rozdílné reakce pozorovatelné v každém z latexů. Výsledky pro latex NmB/Coli K1 jsou jemnější než u ostatních. Solný roztok nebo ředidlo (kód 61717) řídí nepřítomnost nespecifické aglutinace pro každý z latexů.

11 Pro tento test kontroly kvality je použit fyziologický solný roztok nebo ředidlo R11 (kód 61717) v souladu s protokolem pro polyvalentní pozitivní kontrolu (viz předchozí postup). Nepoužívejte latexová činidla, pokud nedochází k aglutinaci s polyvalentní pozitivní kontrolou (R10) nebo pokud dochází k nespecifické aglutinaci se solným roztokem nebo ředidlem (kód 61717) (to může být způsobeno nesprávnými podmínkami skladování sady nebo kontaminací latexového činidla) 12- KONTROLA KVALITY PROVÁDĚNÁ VÝROBCEM Všechny vyráběné a komercionalizované reagencie jsou kontrolovány kompletním systémem kontroly kvality začínajícím od přijetí surovin až po komercionalizaci produktu. Každá šarže je podrobena kontrole kvality a je uvolněna na trh pouze tehdy, jestliže odpovídá stanoveným akceptačním kriteriím. Dokumentace týkající se výroby a kontroly každé jednotlivé šarže je uchovávána u výrobce. 13- ÚČINNOST TESTU CITLIVOST Citlivost každé reagencie soupravy byla stanovena analýzou: purifikovaných antigenů naředěných ve fyziologickém roztoku. klinických vzorků mozkomíšního moku dokumentovanou tradičními analytickými metodami (kultivace, mikroskopické vyšetření) kmenů izolovaných z kultur na agarovém médiu Mueller Hinton, Chocolate + PVS nebo Columbia + 5% ovčí krev.

12 Antigen nebo bakterie zjištěná ve vzorku Ředěný antigen (NaCl, 9 ) zjištěná limitní koncentrace CSF analyzovaných vzorků pozitivních latexových testů Kmeny analyzovaných vzorků pozitivních latexových testů N. meningitidis A 2,5 ng/ml N. meningitidis B ,5 ng/ml ND E. coli K1 1 1 N. meningitidis C 2,5 ng/ml N. meningitidis Y 5 ng/ml ND - - N. meningitidis W 2,5 µg/ml ND - - S.pneumoniae 95 ng/ml Streptococcus B 20 ng/ml H. influenzae typu b 0,1 ng/ml SPECIFICITA Specificita každé reagencie byla stanovena analýzou: Sterilního CSF (a) nebo CSF kontaminovaného bakteriemi způsobujícími meningitidu a lišícími se od bakterií detekovaných latexovým testem (b). Kmeny náležejícími do rodů Neisseria, Branhamella, Moraxella, Acinetobacter, Kingella, Streptococcus, Haemophilus a testovanými heterologním latexem. Latex test Sterilní CSF (a) Kontaminovaný CSF (b) Kmeny (c) analyzovaných negativních analyzovaných negativních analyzovaných negativních vzorků latexových testů vzorků latexových testů vzorků latexových testů N. meningitidis A N. m. B / E. coli K ND 41 40* N. meningitidis C S. pneumoniae Streptococcus B H. influenzae typu b Neselektované CSF analyzovaných vzorků negativních latexových testů N. meningitidis Y/W *1 kmen Klebsiella pneumoniae dal nespecifickou reakci

13 KREVNÍ KULTURY Účinnost testu PASTOREX TM MENINGITIS byla testována na krevních kulturách. Výsledky tohoto hodnocení jsou: Citlivost: 100 % ( 4/4 včetně 2 kmenů S. pneumoniae a 2 kmenů Streptococcus B). Specificita: 100 % (3737). Pro reagencie R3, R4, R5, R6, R7 a R8. Specificita: 98,2 % (54*/55). Pro reagencii R1. *Mezi 19 testovanými kmeny koaguláza negativních stafylokoků, vykázal 1 kmen nespecifickou reakci, tento výsledek nebyl potvrzen na testovaném kmeni z agarové subkultury následující po skupinovém odlišení. 14- OMEZENÍ TESTU Imunologická latexová metoda umožňuje v mnoha případech předpokládanou diagnózu organismu. Avšak koncentrace antigenu ve vzorku může být pod spodním limitem detekce latexu a vytvářet tak negativní výsledek V takovém případě může být vhodné odběr vzorku opakovat později. Tato metoda nemůže nahradit bakteriální kultivaci, která jako jediná umožňuje stanovení výsledků antimikrobiální citlivosti. Vzhledem k velké rozmanitosti médií pro krevní kultivaci nemůže být účinnost garantována pro všechna média. (viz VII-D). Klinické a bibliografické údaje týkající se detekce antigenů v séru a moči pomocí latexových reagencií jsou v současnosti omezené. Bylo popsáno několik případů nesouvisejících bakterií, majících podobné antigeny. Vždy by měla být brána v úvahu možnost křížové reakce (1, 4, 5). Konečná diagnóza, stejně jako v případě všech laboratorních diagnóz, nemůže být založena na výsledcích jednoho testu, ale na souhrnu všech klinických dat a biochemických, cytologických a imunologických výsledků. Detekce rozpustného antigenu v hemokultuře, rovněž tak skupinové odlišení kmenů izolovaných na agaru, se musí zkompletovat identifikací druhů bakteriálního kmene

14 15- LITERATURA 1. BRADSHAW M.W., CHNEERSON R., PARKE J.C. Jr., ROBBINS J.B. Bacterial antigens cross-reactive with the capsular polysaccharide of Haemophilus influenzae, type b. Lancet, 1971, i (May 29), DENIS F. et MOUNIER M. Le diagnostic rapide des méningites cérébrospinales: techniques, résultats, limites et perspectives. Méd. Mal. Infect.,1984, 14, DENIS F., SAULNIER M. et CHIRON J.P. Diagnostic étiologique rapide des méningites purulentes par agglutination passive indirecte de particules de latex et par contre- immunoéléctrophorèse : expérience et perspectives. Bull. O.M.S., 1981, 59, KASPER D.L., WINKELHAKE J.L., ZOLLINGER W.D., BRANDT B.L., and ARTENSTEIN M.S. Immunochemical similarity between polysaccharide antigens of Escherichia coli 07:K1 (L) : NM and group B Neisseria meningitidis. J. Immunol., 1973, 110, LEE P.C. and WETHERALL B.L. Cross-reaction between Streptococcus pneumoniae and group C streptococcal latex reagent. J. Clin. Microbiol., 1987, 25, LEINONEN M. and HERVA E. The latex agglutination test for the diagnosis of meningococcal and Haemophilus influenzae meningitis. Scand. J. Infect.,1977, 9, LUND E. and HENRICHSEN J. Laboratory diagnosis, serology and epidemiology of Streptococcus pneumoniae. In Methods in Microbiology, T. Bergan and J.R. Norris edit., 1978, 12, chap. XI, (Academic press, London, New-York, San Francisco) 8. TESSIER F. Dépistage et identification des streptocoques du groupe B. Intérêt en périnatologie. Extrait de LABORAMA n 14, oct. 1982, Institut Pasteur Production edit. 9. NEWMAN R.B., STEVENS R.W. and GAAFAR H.A. Latex agglutination test for the diagnosis of Haemophilus influenzae meningitis. J. Lab. Clin. Med., 1970, 76, ROBBINS J.B., Mc CRACKEN G.H. Jr., GOTSCHLICH G.C., ORSKOV F., ORSKOV I., HANSON L.A. Escherichia coli K1 capsular polysaccharide associated with neonatal meningitis. New Engl. J. Med. 1974, 290,

15 11. P. GESLIN et coll., Centre National de Référence des Pneumocoques: Rapport d'activité ASUNCIÓN FENOLL, ISABEL JADO, DOLORES VICIOSO, AMALIA PÉREZ, and JULIO CASAL. Evolution of Streptococcus pneumoniae Serotypes and Antibiotic Resistance in Spain : Update (1990 to 1996). J. Clin. Microbiol.,1998, 36, Bio-Rad 3, boulevard Raymond Poincaré Marnes-la-Coquette France Tel. : +33 (0) /2008 Fax : +33 (0)