Rapid-VIDITEST Influenza A+B

Transkript

1 Rapid-VIDITEST Influenza A+B (Jednokrokový blisterový test pro in vitro diagnostiku viru Influenzy typu A a B z nosních výtěrů, výplachů a aspirátů) Návod k použití soupravy Výrobce: VIDIA spol. s r.o., Nad Safinou II 365, Vestec, Jesenice u Prahy, Tel: , Fax: , objednavky@vidia.cz, Web: POUŽITÍ: Rapid-VIDITEST Influenza A+B je jednokrokový barevný imunochromatografický test pro kvalitativní stanovení antigenů typu A a B viru influenzy. Je určen ke stanovení antigenu z nosních výtěrů, výplachů a aspirátů. ÚVOD: Influenza virus atakuje zejména horní cesty dýchací sliznici nosu, hrtan a průdušky, někdy také plíce. Infekce většinou odezní do jednoho týdne. Hlavními symptomy infekce jsou horečka, bolesti hlavy, myalgia, malátnost, dráždivý kašel, otok hrtanu a rhinitida. Většina lidí se uzdraví za jeden až dva týdny bez podávání léků. U velmi malých dětí, osob ve vysokém věku a osob se závažným onemocněním jako je onemocnění plic, diabetes, nádorové onemocnění nebo onemocnění srdce a ledvin je infekce virem influenzy velmi riziková. U těchto lidí může vést infekce k různým komplikacím výše popsaných chorob, pneumonii a dokonce i k úmrtí. Běžně cirkulující typy viru influenzy, které způsobují onemocnění u lidí, lze rozdělit do dvou skupin: A a B. Influenza A má pro lidi důležité subtypy A(H3N2) a A(H1N1), které jsou spojovány i s některými případy úmrtí. Influenza virus je definován dvěma rozdílnými povrchovými antigeny, které se nazývají hemaglutininy (H) a neuramidázy (N). PRINCIP TESTU: Rapid-VIDITEST Influenza A+B je jednokrokový barevný imunochromatografický test pro kvalitativní stanovení antigenů typu A a B viru influenzy. Na testovacích zónách povrchu blisteru jsou navázány myší monoklonální protilátky proti virovým antigenům. V průběhu testování vzorek reaguje s barevným konjugátem, který byl imobilizovaný na membráně ( anti-type A myší monoklonální protilátky červená mikrosféra a anti-type B myší monoklonální protilátky modrá mikrosféra). Směs pak kapilárním efektem vzlíná vzhůru po membráně blisteru. V případě pozitivního výsledku je barevný konjugát zachycen specifickými protilátkami, což se ve výsledkové zóně projeví jako barevná linka. Směs pak vzlíná dále po membráně k imobilizovaným protilátkám v kontrolní zóně, kde se vždy na konci testu objeví zelená linka. Přítomnost zelené linky ověřuje: 1) že se použil dostatečný objem vzorku, 2) že došlo ke správné vzlínavosti vzorku, 3) interní kontrolu reagencií. 1

2 OBSAH SOUPRAVY: - Testovací blistery - Sterilní odběrové tampóny - Roztok B (ředicí roztok pro vzorky) - Testovací zkumavky - Jednorázové plastové pipety - Návod k použití - Certifikát kontroly balení POTŘEBNÝ MATERIÁL NEDODÁVANÝ SE SOUPRAVOU: - jednorázové rukavice - stopky SBĚR A PŘÍPRAVA VZORKŮ: Vzorky nosních výtěrů: Vzorky odebírejte sterilním vatovým tampónem z jedné nosní dírky. Zasuňte vatový tampón asi 3 cm do nosní dírky a rotačním pohybem tampónu setřete její stěnu. Test by měl být proveden co nejdříve po výtěru. Vzorky nosních výplachů a aspirátů Dospělí pacienti: Do nosu vložte irigátor a celou dutinu důkladně propláchněte fyziologickým roztokem (2,5ml). Irigátorem otáčejte tak, aby se tekutina dostala skutečně do všech míst. Předkloňte hlavu pacienta, aby mohl mukózní roztok z dírky dobře vytékat. Vzorek zachyťte do čisté odběrové nádoby. Totéž opakujte i pro druhou nosní dírku. Děti: Fyziologický roztok vleže nakapejte do nosu, odsajte vzorek výplachu a přeneste do čisté odběrové nádoby. Stejný postup opakujte pro obě nosní dírky. Vzorky by měly být zpracovány co nejdříve po odběru. Před testováním mohou být skladovány v lednici při teplotě 2 až 8 C po dobu 8 hodin. 2

3 PRACOVNÍ POSTUP: Před testováním nechte testovací blister, vzorek a kontroly vytemperovat na laboratorní teplotu (15 až 30 C). Neotvírejte obal, dokud nejste připraveni provést test. Postup A: pro vzorky nosních výtěrů: 1. Do testovací zkumavky aplikujte 15 kapek roztoku B (1). Vložte do ní odběrový tampon. 2. Krouživým pohybem tamponu důkladně roztok promíchejte. Třete tampon o stěnu zkumavky alespoň 10x a nakonec z něj stlačením plastové zkumavky vytlačte co nejvíce tekutiny (2). Kvalita testu závisí na tom, jak dobře bude vzorek z tamponu extrahován. Tampon likvidujte jako infekční odpad. 3. a) Odstřihněte z plata jeden zatavený blister a tahem za nezatavený konec horní hliníkové fólie jej otevřete. Blister ponechte na spodní části hliníkové fólie a položte jej na vodorovnou podložku. Na bílý konec blisteru naneste 4-5 kapek roztoku z testovací zkumavky (3a). nebo b) Odstřihněte z plata jeden zatavený blister a tahem za nezatavený konec horní hliníkové fólie jej otevřete. Vyjměte blister z obalu a ponořte ho vertikálně bílým koncem do testovací zkumavky (3b). Hladina roztoku ve zkumavce nesmí přesáhnout hranici označenou šipkami. 4. Na každý vzorek použijte novou pipetu. 5. Po 10 minutách odečtěte výsledek (objeví se barevné linky). (3a)Přidejte 4-5 kapek (3b) (1)Přidejte 15 kapek roztoku B (2)Vložte tampón a extrahujte z něj maximum tekutiny Vyčkejte 10 minut Postup B: pro vzorky nosních výplachů a aspirátů: 1. Do testovací zkumavky aplikujte 6 kapek nosního výplachu (1) nebo aspirátu. 2. Přidejte do zkumavky 3 kapky roztoku B (2). Opakovaným nasáváním roztoku do pipety směs důkladně promíchejte (3). 3. Dále postupujte podle předchozích instrukcí (postup A: pro vzorky z nosních výtěrů) 3.a. Přidejte 4-5 kapek 3.b. (1) Přidejte 6 kapek nosního aspirátu (2) Přidejte 3 kapky roztoku B (3) Promíchejte směs opakovaným nasáváním do pipety Vyčkejte 10 minut 3

4 INTERPRETACE VÝSLEDKŮ: Vzorky se aplikují na bílý konec blisteru označený šipkami, výsledek se odečítá ve střední bílé části blisteru. Kontrolní zóna Výsledková zóna Zelená Červená Modrá Zelená Červená Modrá Modrá Červená Zóna pro nanesení vzorku Influenza A Influenza B Influenza A+B Negativní Pozitivní Neplatný Negativní: V kontrolní zóně C se objeví pouze jedna zelená linka. Výsledková zóna T zůstane čistá. Pouze Influenza A Pozitivní: Kromě zelené linky v kontrolní zóně C se objeví také červená linka ve výsledkové zóně T. Pouze Influenza B Pozitivní: Kromě zelené linky v kontrolní zóně C se objeví také modrá linka ve výsledkové zóně T. Influenza A+B Pozitivní: Kromě zelené linky v kontrolní zóně C se objeví obě barevné linky tedy červená a modrá zároveň ve výsledkové zóně T. Neplatný: Test je neplatný, pokud se v kontrolní zóně C neobjeví zelená linka bez ohledu na přítomnost červené nebo modré linky ve výsledkové zóně T. Nejčastějšími příčinami selhání testu jsou: nedostatečná koncentrace vzorku, nesprávný pracovní postup nebo poškození reagencií. Zkontrolujte pracovní postup a opakujte test s novou testovací sadou. Pokud potíže přetrvávají, kontaktujte svého dodavatele. Poznámka k interpretaci výsledku: Intenzita červené nebo modré barevné linky v místě označeném T závisí na koncentraci antigenů ve vzorku. Nicméně tímto testem nelze kvantitativně stanovit množství antigenu ani jeho nárůst v průběhu onemocnění. PLATNOST TESTU: Test je platný pouze v případě, když se v kontrolní zóně objeví zelená linka. V testu je použit interní standard. Zelená linka, která se objevuje v kontrolní zóně je vnitřní kontrolou testu. Potvrzuje dostatečný objem vzorku a správný průběh testu. 4

5 OMEZENÍ TESTU: - Test musí proběhnout do 2 hodin od otevření zataveného obalu. - Tento test slouží pouze k pravděpodobné diagnóze infekce virem Influenzy typu A a B. Potvrzení infekce musí být provedeno lékařem poté, co byly vyhodnoceny všechny klinické a laboratorní nálezy. - Rapid-VIDITEST Influenza A+B může být použit pouze pro nosní výtěry, výplachy a aspiráty. Výsledky při použití výtěrů z jiných částí těla nebo při použití jiných vzorků, jako jsou sliny, hlen nebo moč, nemohou být uznány platnými. Kvalita testu záleží na kvalitě odebraného vzorku. Vzorky proto odebírejte s náležitou přesností. - Při použití nekvalitních vzorků, nebo vzorků s příliš nízkou koncentrací antigenu může dojít k falešné negativitě výsledku. ÚČINNOST TESTU: Citlivost: Různá ředění virového extraktu byla testována přímo v ředicím roztoku nebo v negativním vzorku nosního výtěru. Detekce byla provedena podle návodu a výsledky byly porovnány s jiným komerčně dostupným testem. Citlivost detekce Influenza A+B vykazovala >99% shodu výsledků. Detekční limit: Na čtyřech šaržích Rapid-VIDITEST Influenza A+B bylo provedeno stanovení detekčního limitu. K tomuto testu byly použity virové extrakty s obsahem hemaglutininu 15 μg/ml. Nalezený detekční limit za použití referenčního antigenu je 4,7ng/mL HA pro Influenza A a 18,7ng/mL HA pro Influenza B. Specificita: Použití specifické myší monoklonální protilátky v testu zaručuje vysoký stupeň specificity. Specificita detekce Influenza A + B vykazovala >99% shodu výsledků s jinými komerčně dostupnými testy. SKLADOVÁNÍ A STABILITA: Skladujte v originálním obalu při teplotě 2 až 30 C. Test je stabilní do data exspirace uvedeného na obalu. Nezmrazujte. BEZPEČNOSTNÍ OPATŘENÍ: - Pouze pro in vitro diagnostiku - Nepoužívejte po uplynutí exspirační doby - Se vzorky manipulujte jako s potenciálně infekčním materiálem. Na každý vzorek musí být použita nový odběrový tampón - Test nepoužívejte pokud je hliníkový obal porušený - Odpad likvidujte v souladu jako biologický infekční odpad v souladu s příslušnými předpisy. 5

6 REFERENCE: 1. Daniel E. Noyola, et al. Comparison of a New Neuraminidase Detection Assay with an Enzyme Immunoassay, Immunofluorescence, and Culture for Rapid Detection of Influenza A and B Viruses in Nasal Wash Specimens. Journal of Clinical Microbiology, Mar. 2000, p Vol. 38, No Adriana Weinberg and Miranda L. Walker. Evaluation of Three Immunoassay Kits for Rapid Detection of Influenza Virus A and B. Clinical And Diagnostic Laboratory Immunology, Mar. 2005, p Vol. 12, No Andreea C. Cazacu, Gail J. Demmler et al. Comparison of a New Lateral-Flow Chromatographic Membrane Immunoassay to Viral Culture for Rapid Detection and Differentiation of Influenza A and B Viruses in Respiratory Specimens. Journal of Clinical Microbiology, Aug. 2004, p Vol. 42, No Kenneth E. Irmen and James J. Kelleher. Use of Monoclonal Antibodies for Rapid Diagnosis of Respiratory Viruses in a Community Hospital. Clinical and Diagnostic Laboratory Immunology, May 2000, p Vol. 7, No. 3. POUŽITÉ SYMBOLY: Určeno pro diagnostiku in vitro Čtěte návod k použití Uchovejte v suchu Teplotní omezení Datum exspirace Číslo šarže (LOT) Katalogové číslo Obsahuje dostatečné množství surovin pro <n> testů Výrobce Pouze pro ověření Poslední revize tohoto návodu: 04/2013 6