Prevence přenosu prvoků Babesia canis klíšťaty Dermacentor reticulatus na psy, kterým byl orálně podán fluralaner ve formě žvýkací tablety (Bravecto )

Transkript

1 Zpravodaj společnosti MSD Animal Health Prevence přenosu prvoků Babesia canis klíšťaty Dermacentor reticulatus na psy, kterým byl orálně podán fluralaner ve formě žvýkací tablety (Bravecto ) Janina Taenzler 1*, Julian Liebenberg 2, Rainer K.A. Roepke 1, Anja R. Heckeroth 1 Abstrakt Základní údaje: Hodnocení preventivního účinku žvýkacích tablet obsahujících fluralaner (Bravecto ) proti přenosu prvoků Babesia canis klíšťaty Dermacentor reticulatus. Metody: Šestnáct psů s negativním výsledkem testů PCR a IFAT na B. canis bylo rozděleno do dvou skupin. Ke dni 0 dostali psi z experimentální skupiny (n = 8) orálně tabletu ke žvýkání s obsahem fluralaneru dle pokynů v příbalové informaci přípravku. Psi z kontrolní skupiny (n = 8) nebyli léčeni žádným způsobem. Ke dnům 2, 28, 56, 70 a 84 byli psi vystaveni infestaci 50 (±4) klíšťat D. reticulatus infikovaných prvoky B. canis. Po 48 ± 4 hodinách po infestaci byla klíšťata na psech ručně spočítána. Před každou infestací bylo pomocí PCR analýzy potvrzeno, že klíšťata D. reticulatus hostí prvoky B. canis. Ke dni 90 byla klíšťata spočítána a odstraněna ze všech psů. Pro každý časový bod hodnocení byla vypočítána účinnost přípravku proti klíšťatům. Po léčbě byli všichni psi podrobeni klinickému vyšetření. Každých 7 dnů jim byl odebírán vzorek krve pro účely analýzy PCR, každých 14 dnů pro účely testu IFAT. Třikrát týdně byla psům měřena teplota v rektu. Psům, kteří jevili příznaky babeziózy nebo byli PCR pozitivní, byl odebrán krevní nátěr. Pokud byl výsledek pozitivní, psovi byla nasazena záchranná léčba a jeho místo v kontrolní skupině zaujal náhradní pes. Preventivní účinek byl vyhodnocen na základě srovnání infikovaných jedinců ve skupině léčených psů s infikovanými kontrolními psy, kteří žádný lék nedostali. Výsledky: Podle výsledků PCR a IFAT byli infikováni prvokem B. canis všichni psi z kontrolní skupiny. Z osmi psů z experimentální skupiny nebyl prvokem B. canis nakažen ani jeden výsledky IFAT a PCR byly negativní po celou dobu trvání studie až do dne 112. Žvýkací tablety obsahující fluralaner vykazovaly 100% účinnost proti klíšťatům ke dnům 4, 30, 58 a 90; jejich účinnost 72 a 86 dnů po podání byla 99,6% a 99,2 % v tomto pořadí. Během 12 týdnů trvání studie byl prokázán 100% preventivní účinek proti přenosu B. canis. Závěr: Jediná orální dávka tablet obsahujících fluralaner po dobu 12 týdnů účinně zabraňovala přenosu prvoků B. canis z infikovaných klíšťat D. reticulatus na psy. Klíčová slova Bravecto, Babesia canis, babezióza, žvýkací tablety, fluralaner, Dermacentor reticulatus, psi, účinnost, preventivní účinek, klíšťata, onemocnění přenášená klíšťaty, blokování přenosu onemocnění Jedná se o článek s otevřeným přístupem distribuovaný podle podmínek licence Creative Commons Attribution License ( která umožňuje jeho neomezené používání, distribuci a reprodukci v jakékoliv formě, ovšem za předpokladu, že je odpovídajícím způsobem uvedeno původní dílo. Pokud není uvedeno jinak, platí pro údaje zpřístupněné v tomto článku podmínky stanovené v dokumentu Creative Commons Public Domain Dedication ( * Kontakty: janina.taenzler@msd.de 1 MSD Animal Health Innovation GmbH, Zur Propstei, Schwabenheim, Německo 2 ClinVet International, Uitsigweg, Bainsvlei, 9338 Bloemfontein, Free State, Jihoafrická republika

2 Základní údaje Babezióza psů vyvolaná prvoky rodu Babesia po kousnutí infikovaného přenašeče (klíštěte) je klinicky významným onemocněním přenášeným klíšťaty. V Evropě byly doposud zjištěny čtyři druhy rodu Babesia, které způsobují onemocnění u psů: Babesia canis, Babesia vogeli, Babesia gibsoni a Babesia vulpes sp. nov., který se dříve označoval jako Babesia microti-like [1 3]. Z těchto druhů je v Evropě nejrozšířenější B. canis, která se vyskytuje ve stejných oblastech jako její vektor Dermacentor reticulatus, klíště piják lužní. B. vogeli se nejčastěji vyskytuje kolem středomořské pánve, kde je převládajícím druhem klíštěte Rhipicephalus sanguineus. Druhy Babesia vulpes sp. nov. se podle všeho soustřeďují v severozápadní části Španělska, kde je sporadicky popsán také výskyt B. gibsoni [2, 4]. Babesia spp. jsou nitrobuněční prvoci obývající červené krvinky hostitele. Klinické příznaky babeziózy u psů se liší od mírného přechodného onemocnění až po těžkou akutní chorobu v důsledku závažné hemolýzy, která rychle způsobuje úhyn zvířete. Mezi klinické příznaky patří bledé sliznice, zvýšená teplota, anorexie, ikterus, pyrexie a zvětšení sleziny a jater [2]. Závažnost onemocnění nicméně závisí na různých faktorech, např. na patogenním druhu babézie, věku a imunitním stavu psa a přítomnosti dalších infekčních chorob [4]. V celosvětovém měřítku je babezióza jednou z nejvýznamnějších chorob přenášených klíšťaty [5]. V důsledku neustále se zvyšujícího počtu společenských zvířat, častějšímu cestování majitelů se svými zvířaty a schopnosti členovců přenášejících patogeny osídlovat nové lokality [6] se klíšťata a jimi přenášené choroby rozšiřují po celém světě a neomezují se pouze na některé oblasti. Po přisátí klíštěte k hostiteli je riziko přenosu patogenu vyšší, pokud klíště saje krev delší dobu. U většiny infekcí přenášených klíšťaty musí klíště sát krev nejméně 24 až 48 hodin po přisátí, aby mohlo dojít k přenosu prvoků [7]. Pro zabránění přenosu infekce je tudíž nutné zahubit infikované klíště před uplynutím této doby. S cílem kvantifikovat dynamiku přenosu patogenů prostřednictvím klíšťat byly vytvořeny modely blokování přenosu infekce. Takový model zahrnuje dostatečný počet léčených psů, aby bylo možné testovat dobu trvání preventivního účinku, a také kontrolní skupinu neléčených psů, z nichž většina se nakazí patogenem přenášeným klíšťaty. V rámci této studie dostali psi jednorázovou dávku ve formě žvýkacích tablet obsahujících fluralaner (Bravecto ). Fluralaner je nové ektoparazitikum z nové třídy izoxalinových sloučenin. Jeho primární účinek je podmíněn sáním klíštěte a trvá více než 12 týdnů. Klíšťata i blechy jsou okamžitě a trvale zahubeny [8]. Fluralaner je ektoparazitikum, které působí systémově. Aby mohl účinkovat, musí se klíště přisát k hostiteli a začít sát krev, v níž je obsažena účinná látka, kterou klíště v krvi přijímá. Tato studie vzhledem k rychlému hubícímu účinku v intervalu 12 hodin po přisátí klíštěte [9] hodnotí potenciál orálně podaného fluralaneru v oblasti prevence přenosu infekce B. canis. Metody Návrh studie Studie byla provedena v souladu se správnou klinickou praxí (VICH guideline GL9, Good Clinical Practice, EMA, 2000), národní normou Jihoafrické republiky SANS 10386:2008: The care and use of animals for scientific purposes (péče o zvířata a jejich využití pro vědecké účely) a certifikátem, který byl před zahájením studie vydán etickým výborem ClinVet Animal Ethics Committee (CAEC). Jednalo se o randomizovanou, částečně zaslepenou studii účinnosti s negativní kontrolou. Do studie bylo zařazeno 16 psů smíšených plemen (8 psů a 8 fen). Testy PCR a IFAT provedené před zahájením léčby prokázaly, že tito jsou negativní na DNA babézií i protilátky proti B. canis. Psi byli ve věku 1 8 let a vážili od 13,2 do 26,9 kg. Zdravotní stav všech psů byl dobrý, zvířata nebyla v období uplynulých 3 měsíců až do zahájení sedmidenní aklimatizace léčena žádným přípravkem proti parazitům, neměla před léčbou žádná klíšťata a byla jednoznačně označena číslem mikročipu. Před randomizací byli psi klinicky vyšetřeni a zváženi. Poté byli seřazeni podle pohlaví, sestupně podle tělesné hmotnosti a s použitím počítačově generovaného randomizačního seznamu rozděleni do dvou skupin (experimentální skupina a kontrolní skupina) po osmi jedincích. Psi byli po celou dobu studie umístěni ve vnitřním prostředí v kotcích po jednom. Teplota v kotcích se pohybovala mezi 15,1 C a 27,9 C a relativní vlhkost vzduchu mezi 21,9 % a 66,4 %. Všichni psi dostávali jednou denně standardní komerčně dostupné suché krmivo a měli volný přístup k pitné vodě. Léčba Ke dni 0 (tj. v den podání léku) dostali psi z experimentální skupiny v souladu s pokyny v příbalové informaci přípravku jednorázově dávku fluralaneru ve formě žvýkací tablety (Bravecto ). Každý pes dostal polovinu denního krmného přídělu přibližně 20 minut před podáním léku a zbytek přídělu ihned po podání. Tableta byla psům vložena do zadní části ústní dutiny ke kořeni jazyka s cílem vyvolat polknutí. Každý pes byl 1 hodinu po podání léku nepřetržitě sledován, aby bylo ověřeno, že tabletu (tablety) nevyzvracel nebo nevyplivl, k čemuž ani v jednom případě nedošlo. Psi z kontrolní skupiny nebyli léčeni žádným způsobem. Ke dni 0 byla u všech psů (léčených i neléčených) každou hodinu prováděna specifická pozorování zdravotního stavu, a to v období 4 hodin po podání léku. Infestace a hodnocení klíšťat Pro jednotlivé infestace byla použita klíšťata D. reticulatus evropského původu chovaná v laboratoři. Infestaci byli podrobeni všichni psi ke dnům 2, 28 (4 týdny), 56 (8 týdnů), 70 (10 týdnů) a 84 (12 týdnů). Z každé várky klíšťat D. reticulatus použitých k infestaci byl odebrán vzorek přibližně 50 jedinců s cílem zjistit procento klíšťat infikovaných prvokem B. canis (metodou PCR). V jednotlivých časových bodech infestace byl každý pes vystaven působení 50 (± 4) životaschopných vyhladovělých klíšťat D. reticulatus (50 % samic, 50 % samců). Psi nedostávali při infestaci sedativa, pokaždé však byli umístěni do restrikční klece o rozměrech cm (délka x šířka x výška), kde jim byla klíšťata ručně vpravena do srsti. Poté byl psům na 10 minut zamezen pohyb. Klíšťata, která během tohoto intervalu ze zvířat odpadla, byla do srsti navrácena. Po 10 minutách byla klec uzavřena na 4 hodiny (± 10 min), po jejichž uplynutí bylo zvíře vráceno do svého kotce. U jednotlivých psů byl 48 ± 4 hodin po každé infestaci zjištěn počet klíšťat (tj. ke dnům 4, 30, 58, 72 a 86), klíšťata však nebyla odstraňována. Ke dni 90 byla odstraněna a spočítána všechna zbývající klíšťata. Ošetřovatelé zajišťující infestace, počítání klíšťat a jejich odstraňování ke dni 90 nevěděli, zda pracují s léčenými nebo neléčenými zvířaty. Zdravotní stav zvířat Za účelem pečlivého monitorování klinických příznaků babeziózy byl každý pes podroben klinickému vyšetření, které každých 7 dnů po celou dobu studie prováděl veterinář (tj. ke dnům 7, 14, 21, 28, 35, 42, 49, 56, 63, 70, 77, 84, 91, 98, 105 a 112). Počínaje dnem 8 po léčbě byla každému psu třikrát týdně měřena tělesná teplota v rektu. Po celou dobu studie byl denně (tj. počínaje 7. dnem před podáním léku až po 112. den po podání léku) sledován celkový zdravotní stav psů a zaznamenán normální nebo abnormální nález. Pokud byl stav psa považován

3 za abnormální nebo mu byla v rektu naměřena teplota 39,4 C nebo více, psa podrobněji prohlédl veterinář. Pokud byl během tohoto vyšetření zjištěn nejméně jeden abnormální parametr, byl odebrán vzorek krve pro přípravu krevního nátěru. Nátěr byl vysušen na vzduchu a před vyšetřením barven pomocí sady Diff-quick Stain. Vzorky krve pro účely sérologického vyšetření (IFAT) a PCR analýzy Krevní vzorky pro zjišťování protilátek proti B. canis v séru byly odebírány každých 14 dnů, počínaje dnem 14 po podání léku. Testy IFAT byly provedeny s použitím komerční sady MegaScreen FLUOBABES IA canis. Všechny vzorky séra byly naředěny v poměru 1:80. Pokud byla pozorována specifická fluorescence, byly označeny jako pozitivní, pokud fluorescence pozorována nebyla, byly považovány za negativní. Krevní vzorky pro zjišťování DNA B. canis pomocí metody PCR byly každých 7 dnů odebírány od každého psa do zkumavek s EDTA. Celková genomová DNA byla izolována ze vzorků plné krve pomocí komerční sady pro izolaci geonomové DNA (purifikační sada GeneJet Genomic DNA, Thermo Scientific). Při PCR byly použity primery Babesia2F (5 - GGAAGGAGAAGT- CGTAACAAGGTTTCC -3 ) a Bcanis2R (5 - CAGTGGTC ACAGA- CCGGTC G-3 ) s kombinovanou specificitou k ITS1 regionu DNA B. canis účelem byla amplifikace cílového regionu 302 bp [10]. Až 400 ng izolované DNA sloužilo jako templát pro amplifikaci PCR cílového regionu. Produkty PCR byly analyzovány pomocí elektroforézy v agarózovém gelu. Produkt PCR (přibližně 300 bp) poukazoval na přítomnost cílového regionu ve vzorku. Pro ověření úspěšnosti PCR v jednotlivých zkumavkách byly při kaž dé várce zahrnuty kontrolní parametry pozitivity, negativity, nepřítomnosti templátu a interní amplifikace. Záchranná léčba Od každého psa, který měl teplotu v rektu 39,4 C a vyšší, pozitivní výsledek DNA babézií na PCR nebo klinické příznaky babeziózy zjištěné při klinickém vyšetření, byl odebrán krevní vzorek za účelem přípravy krevního nátěru. Psi, u nichž vyšetření nátěru potvrdilo infekci prvoky B. canis, byli podrobeni záchranné terapii: první den dostali diminazen (Berenil; MSD Animal Health) v dávce 1 ml/20 kg tělesné hmotnosti a následujícího dne jim byl podán imidokarb (Forray 65; MSD Animal Health) v dávce 1,2 ml/20 kg tělesné hmotnosti. Psi podrobení záchranné léčbě byli nadále monitorováni (tj. celkový zdravotní stav, teplota v rektu, klinická vyšetření), neúčastnili se však již dalších infestací. Tito psi byli přesunuti z kotců vyčleněných pro studii do venkovního výběhu, kde byli vystaveni podmínkám okolního prostředí a kde pobývali ve skupině až do konečného vyřazení ze studie. Před přesunutím do výběhu jim byla odstraněna všechna klíšťata. Těmto psům byly odebrány krevní vzorky pro PCR a IFAT a pokud obě metody potvrdily babeziózu, byli s konečnou platností vyřazeni ze studie. Náhradní psi Vzhledem k několika plánovaným infestacím klíšťaty během celé studie (tj. infestace ke dnům 2, 28, 56, 70 a 84) byl kromě 8 psů zařazených do kontrolní skupiny zajištěn také dostatečný počet náhradních psů, kteří měli nahradit kontrolní psy podrobené záchranné léčbě babeziózy. Před zařazením do studie byl náhradní pes aklimatizován po dobu 7 dnů před svou první infestací. Během tohoto období byl testován, zda je negativní na B. canis v testu PCR a IFAT, a byl také klinicky vyšetřen veterinářem. Náhradní psi nebyli randomizováni, ale pokud to bylo možné, byli stejného pohlaví jako nahrazený kontrolní pes. Hodnocení účinnosti Statistická analýza byla provedena s využitím softwarového balíčku SAS (SAS Institute Inc., Cary, NC, USA, vydání 9.3). Experimentálními jednotkami ve všech statistických výpočtech byli jednotliví psi. Údaje o počtech klíšťat zjištěných ručně na jednotlivých psech v jednotlivých časových bodech byly zpracovávány odděleně. Procento účinnosti proti klíšťatům bylo vypočítáno pro experimentální skupinu a každý časový bod hodnocení podle Abbottovy rovnice: Účinnost (%) = 100 x (MC MT)/MC, kde MC je geometrický průměr všech živých klíšťat nalezených na kontrolních psech a MT je geometrický průměr všech živých klíšťat nalezených na jedincích ze skupiny léčených psů. V případě nulového počtu byl geometrický průměr klíšťat vypočítán následovně: Byly porovnávány významné rozdíly mezi zaznamenanými počty živých přisátých klíšťat v experimentální skupině v každém časovém bodě hodnocení a zaznamenanými počty v kontrolní neléčené skupině. Skupiny byly porovnávány pomocí lineárního smíšeného modelu zahrnujícího experimentální skupinu jako fixní efekt a blok jako náhodný efekt. Dvoustranná hladina významnosti byla deklarována, když P 0,05. Procento preventivního účinku proti přenosu B. canis v experimentální skupině bylo vypočítáno následovně: preventivní účinek (%) = 100 (TC TT )/TC, kde TC je celkový počet infikovaných psů v neléčené skupině a TT je celkový počet infikovaných psů z léčené (tj. experimentální) skupiny. Pes byl považován za infikovaného prvoky B. canis, pokud test prokázal, že je sérologicky pozitivní na protilátky proti B. canis (IFAT) a pozitivní na DNA B. canis (test PCR-RLB). Výsledky Ani u jednoho z 8 psů léčených orálně fluralanerem nebyly během 12 týdnů po podání přípravku pozorovány žádné nežádoucí reakce související s léčbou. Během studie bylo do studie zařazeno celkem 19 náhradních psů (10 psů, 9 fen). Díky tomu bylo v každém časovém bodě infestace v kontrolní skupině 8 psů tuto podmínku se nepodařilo splnit pouze při infestaci ke dni 86, kdy bylo v kontrolní skupině k dispozici pouze 6 zvířat. U dvou z nich byl navíc ke dni 85 pomocí PCR zjištěn v krevním nátěru pozitivní nález, takže se museli podrobit záchranné léčbě. Kontrolní skupina tak při ručním počítání klíšťat ke dni 86 sestávala pouze ze 4 psů. Výpočty účinnosti ke dnům 86 a 90 byly proto provedeny pouze se 4 kontrolními psy. Průměrné počty klíšťat a podrobné údaje o účinnosti jsou znázorněny v Tabulce 1. Po podání jediné orální dávky fluralaneru bylo v každém časovém bodě hodnocení dosaženo účinnosti proti klíšťatům 99,2 % až 100 %.

4 Tabulka 1: Průměrné počty klíšťat a účinnost proti klíšťatům po jednorázovém orálním podání fluralaneru psům ve formě žvýkacích tablet Průměrné počty klíšťat a (kontrolní/experiment.) [n] Účinnost [%] Den 4 18,6 / 0,0 100 b Den 30 18,8 / 0,0 100 b Den 58 12,7 / 0,0 100 b Den 72 22,2 / 0,1 99,6 b Den 86 23,0 / 0,2 99,2 b Den 90 22,3 / 0,0 100 b a Geometrický průměrný počet živých přisátých klíšťat b Zaznamenané počty živých klíšťat z experimentální skupiny se významně lišily (p < 0,0001) od zaznamenaných počtů v neléčené kontrolní skupině U žádného psa léčeného tabletami Bravecto nebyly pozorovány žádné klinické příznaky související s babeziózou. U kontrolních psů byly pozorovány klinické příznaky související s babeziózou: bledé sliznice, teplota v rektu 39,4 C a více, obecná deprese a netečnost, zvětšené lymfatické uzliny a zvětšená slezina. Třikrát týdně byla všem psům měřena tělesná teplota v rektu. U 19 z 27 kontrolních psů byla rektální teplota 39,4 C zjištěna nejméně při jednom měření během studie. Ve skupině léčených zvířat měl jeden pes rektální teplotu >39,4 C, která byla naměřena jednorázově 17 dnů po podání léku. Nebylo potvrzeno, že by tato zvýšená teplota souvisela s infekcí B. canis, neboť výsledky analýzy krve (krevní nátěr, PCR a IFAT) tohoto zvířete byly negativní na B. canis v průběhu celé studie (viz Tabulka 2). Tabulka 2: Počet psů se zvýšenou tělesnou teplotou v rektu (RBT) a počet psů pozitivních na B. canis (krevní nátěr, PCR a IFAT) Skupina Neléčená kontrolní [n] Experimentální léčená a [n] RBT 39,4 C Krevní nátěr PCR IFAT 19/27 27/27 27/27 27/27 1 b /8 0/8 0/8 0/8 a Orální léčba ve formě žvýkacích tablet obsahujících fluralaner b Jeden pes měl jednorázově 17 dnů po léčbě RBT 39,8 C V každém časovém bodě infestace bylo pomocí PCR zjištěno, že % klíšťat bylo infikováno prvoky B. canis. Infekční model byl považován za platný, neboť všichni psi z neléčené kontrolní skupiny byli infikováni B. canis, což při první infestaci nebo následných infestacích potvrdila přítomnost B. canis v krevním nátěru, DNA babézií při PCR a protilátek proti B. canis při testu IFAT. Ani jeden pes ze skupiny léčených zvířat nebyl v celém průběhu studie infikován B. canis, což potvrdila nepřítomnost protilátek proti B. canis při testu IFAT a negativní výsledek detekce DNA babézií při analýze PCR během všech plánovaných krevních analýz až do období 4 týdnů po poslední infestaci klíšťaty (viz Tabulka 2). Jednorázové orální podání fluralaneru zajistilo 100% preventivní účinek proti přenosu prvoků B. canis z infikovaných klíšťat D. reticulatus (viz Tabulka 3). Tabulka 3: Preventivní účinek proti přenosu B. canis prostřednictvím klíšťat D. reticulatus Neléčená kontrolní skupina Léčená skupina a Infikováno [n] 27/27 0/8 Neinfikováno [n] 0/27 8/8 Infikováno [%] Prevence [%] p-hodnota - 0,0002 a Orální léčba ve formě tablet ke žvýkání obsahujících fluralaner Diskuse V rámci hodnocení vlastností sloučenin proti klíšťatům zdůrazňovali majitelé zvířat i veterináři požadavek blokování přenosu patogenu (preventivní účinek) na psy po kousnutí nakaženým klíštětem. Babezióza psů je jedním z klinicky nejvýznamnějších onemocnění přenášených klíšťaty [5]. Z toho důvodu byla vybrána jako modelové onemocnění, které mělo v rámci této studie pomoci zjistit schopnost fluralaneru bránit přenosu prvoků B. canis z infikovaných klíšťat D. reticulatus na hostitele. Prvoci B. canis infikují červené krvinky a vyvolávají mírnou až těžkou chorobu s různou závažností a různými klinickými příznaky. Pokud není tato infekce léčena, může vést až k úhynu zvířete. Právě proto byli neléčení psi z kontrolní skupiny okamžitě po potvrzení infekce z krevních nátěrů podrobeni záchranné léčbě. Tito psi byli v rámci studie nahrazeni náhradními psi s cílem zachovat pro účely statistické analýzy minimální počet 6 psů v kontrolní skupině, jak to požaduje pokyn pro hodnocení účinnosti látek ničících parazity při léčbě, prevenci a regulaci infestací blech a klíšťat u psů a koček [11]. Fluralaner je první orálně podávanou sloučeninou, jejíž systémová aktivita proti klíšťatům a blechám je účinná po dobu 12 týdnů [8, 12]. Do roku 2014 byly sloučeniny proti klíšťatům pro psy k dispozici ve formě spot-on přípravků, sprejů či obojků, jejichž hubící účinek byl založen na tom, že klíště saje krev, a/nebo na kontaktu klíštěte s danou látkou nebo repelentním účinku. [13]. Studie rychlosti hubícího účinku autorů Wengenmayerové a kol. [9] prokázala, že orálně podaný fluralaner začíná hubit klíšťata přisátá na psech již po 4 hodinách (89,6 %), přičemž 12 hodin po podání zajišťuje téměř kompletní eliminaci klíšťat, a to po celou dobu účinnosti, což je 12 týdnů. Tyto výsledky potvrdila i naše studie, jak dokládají vynikající parametry účinnosti proti klíšťatům (viz Tabulka 1). Jelikož pro zajištění hlavního účinku fluralaneru je nutné, aby klíště sálo krev hostitele, jeho ochranný účinek je méně zjevný. Účinnost fluralaneru je podmíněna přisátím klíštěte na kůži hostitele a sáním krve, v níž přijímá účinnou látku, která parazita následně zahubí [8]. Heile a kol. [14] udávají, že doba nutná pro přenos prvoka B. canis z infikovaného klíštěte D. reticulatus je hodin po přisátí klíštěte. V okamžiku přisátí klíštěte ke kůži hostitele začíná proces dozrávání sporozoitů nacházejících ve slinných žlázách klíštěte. Několik dnů po přisátí klíštěte dochází k přenosu patogenu ve slinách klíštěte a k infekci hostitele [15]. Vzhledem k tomu, že fluralaner hubí klíšťata velmi rychle, účinně zabraňuje přenosu B. canis z infikovaných klíšťat D. reticulatus na psy (Tabulka 3). Žvýkací tablety obsahující fluralaner vykazovaly po celých 12 týdnů trvání studie účinnost proti klíšťatům v rozmezí 99,2 % až 100 %.

5 Vzhledem k tomu, že fluralaner je aktivní látkou, která umožňuje méně častou aplikaci přípravku, snižuje se riziko selhání léčby v důsledku toho, že majitel nepodává svému zvířeti ektoparazitikum každý měsíc, tak jak to vyžaduje léčebný režim. Dodržování léčebného režimu ze strany majitele je významným faktorem úspěšné regulace a prevence infestací v době aktivity klíšťat. Tato studie prokázala, že žvýkací tablety obsahující fluralaner jsou účinné nejen proti klíšťatům, ale že také zabraňují přenosu patogenu na psa. Po podání přitom účinkují celých 12 týdnů. Kromě toho, že je fluralaner účinný proti klíšťatům D. reticulatus, vykazuje stejně dlouhou účinnost také proti dalším druhům klíšťat a blech, které mohou psy souběžně napadat [12, 16]. Závěr Jednorázové orální podání žvýkacích tablet obsahujících fluralaner (Bravecto ) psům mělo po dobu 12 týdnů stoprocentní preventivní účinek proti přenosu prvoků B. canis z infikovaných klíšťat D. reticulatus na hostitele. Účinnost proti samotným klíšťatům po dobu 12 týdnů trvání celé studie se pohybovala mezi 99,2 % a 100 %. Dlouhý interval mezi jednotlivými dávkami tablet obsahujících fluralaner zaručuje v porovnání s přípravky, které je nutné podávat každý měsíc, větší pohodlí pro majitele zvířat a potenciálně také důslednější dodržování léčebného režimu. Konkurenční zájmy JL pracuje ve společnosti ClinVet, všichni ostatní autoři tohoto článku jsou zaměstnanci společnosti MSD Animal Health. Tato studie byla provedena v rámci výzkumného programu, který zkoumá možnosti inhibice přenosu patogenů na hostitele z přisátého klíštěte po orálním podání fluralaneru. Příspěvek jednotlivých autorů Návrh studie, protokol a zprávu připravili JT, JL, AH a RR. JL a jeho tým ve společnosti ClinVet odpovídali za práci se zvířaty, sběr dat a statistické výpočty. Konečnou verzi ověřili a schválili všichni autoři. Poděkování Autoři děkují všem zaměstnancům společnosti ClinVet za podporu a přínos při realizaci této studie. Odkazy 1. Matijatko V, Torti M, Schetters TP. Canine babesiosis in Europe: how many diseases? Trends Parasitol. 2012;28: Solano-Gallego L, Baneth G. Babesiosis in dogs and cats expanding parasitological and clinical spectra. VetParasitol. 2011;181: Baneth G, Florin-Christensen M, Cardoso L, Schnittger L. Reclassification of Theileria annae as Babesia vulpes sp. nov. Parasit Vectors. 2015;8: Invin PJ. Canine babesiosis: from molecular taxonomy to control. Parasit Vectors. 2009;2 Suppl 1:S4. 5. Jongejan F, Uilenberg G. The global importance of ticks. Parasitology. 2004;129(Suppl): Irwin PJ. It shouldn t happen to a dog... or a veterinarian: clinical paradigms for canine vector-borne diseases. Trends Parasitol. 2014;30: Little SE. Changing paradigms in understanding transmission of canine tick-borne diseases: the role of interrupted feeding and intrastadial transmission. Mazara del Vallo, Sicily, Italy: 2nd Canine Vector-Born Disease (CVBD) Symposium 2007, p Bravecto EPAR summary for the public. European Medicines f. Agency. [ linrary/epar_-_summary_for_the_public/veterinary/002526/ WC pdf]. 9. Wengenmayer C, Williams H, Zschiesche E, Moritz A, Langenstein J, Roepke R, et al. The speed of kill of fluralaner (Bravecto) against Ixodes ricinus ticks on dogs. Parasit Vectors. 2014;7: Beugnet F, Halos L, Larsen D, Labuschagne M, Erasmus H, Fourie J. The ability of an oral formulation of afoxolaner to block the transmission of Babesia canis by Dermacentor reticulatus ticks to dogs. Parasit Vectors. 2014;7: Marchiando AA, Holdsworth PA, Green P, Blagburn BL, Jacobs DE. World Association for the Advancement of Veterinary Parasitology (W.A.A.V.P.) guideline for evaluating the efficacy of parasiticed for the treatment, prevention and control of flea and tick infestations on dogs and cats. Vet Parasito. 2007;145: Rohdich N, Roepke RK, Zschiesche E. A randomized, blinded, controlled and multicentered field study comparing the efficacy and safety of Bravecto (fluralaner) against Frontline (fipronil) in flea- and tick-infested dogs. Parasit Vectors. 2014;7: Blagburn BL, Dryden MW. Biology, treatment, and control of flea and tick infestations. Vet Clin North Am Small Anim Pract. 2009;39: Heile C, Heydorn AO, Schein E. Dermacentor reticulatus (Fabricius, 1794) distribution, biology and vector for Babesia canis in Germany. Berl Munch Tierarztl Wochenschr. 2006;119: Uilenberg G. Babesia a historical overview. Vet Parasitol. 2006;138: Williams H, Young DR, Qureshi T, Zoller H, Heckeroth AR. Fluralaner, a novel isoxazoline, prevents flea (Ctenocephalides felis) reproduction in vitro and in a simulated home environment. Parasit Vectors. 2014;7:275.