SeroCT TM IgA (RT) ELISA (Enzyme-Linked Immunosorbent Assay) pro stanovení protilátek IgA proti Ch. trachomatis v lidském séru.

Transkript

1 SeroCT TM IgA (RT) ELISA (Enzyme-Linked Immunosorbent Assay) pro stanove protilátek IgA proti Ch. trachomatis v lidském séru. Návod k použití Testovací souprava pro 96 stanove. (Katalogové č ) Skladujte při 2 8C. Nezmrazujte. Pouze pro profesionál použití Pouze pro in vitro stanove. Dováží: GALI spol. s r.o. Ke Stadionu 179, Semily Tel Fax info@gali.cz Vyrábí: Savyon Diagnostics Ltd. 3 Habosem St. Ashdod ISRAEL Tel Fax support@savyondiagnostics.com Použití SeroCT TM RT IgA souprava se používá pro stanove specifických IgA protilátek proti Ch.trachomatis ve vzorku lidského séra metodou ELISA. Jedná se o kvalitativ ELISA test nové generace, který využívá specifické, syntetické peptidy ch. trachomatis. Používá se jako diagnostická pomůcka při stanove infekce ch. trachomatis, společně s kitem Savyon SeroCT TM RT IgG. Pro In Vitro diagnostické účely. Úvod Chlamydie jsou gram-negativ, obligát intracelulár parazitující bakterie, které u savců způsobují akut a chronická onemocně. Vyskytují se čtyři druhy: Ch. trachomatis, Ch. pneumoniae, Ch. psittaci a Ch pecorum (1-4). Ch. trachomatis je rozdělena do 15 sérovarů(5-8). Sérovary A, B, Ba a C se pojí s trachomem (9). Sérovary L1 - L3 jsou odpovědny za infekč venerickou chorobu postihující lymfatickou tkáň. Sérovary D až K se pojí se sexuálně přenosnými infekčmi onemocněmi: cervicitida, endometritida, salpingitida (10) u žen a zánět močovodu (11) u žen i u mužů. Endometritida/salpingitida může vést k tubál okluzi s vysokým rizikem mimoděložho těhotenství a infertility. Genitál infekce může být příčinou akut nebo přetrvávající infekce, někdy bez jakýchkoli klinických příznaků. Pokud se onemocně diagnostikuje, je léčitelné. Bez léčby toto onemocně postupuje a může být příčinou chronických zánětů vedoucích k infertilitě, mimoděložmu těhotenství, umělým potratům, předčasným porodům. Mimoto, novorozenec nakažené matky může být infikován během porodu, což může být příčinou zánětu oč spojivky nebo pneumonie (12-14). Sérologické stanove protilátek proti Ch. trachomatis je důležitější u chronických infekcí než u infekcí akutch. Ch. pneumoniae je důležitý respirač patogen, bývá nalezena asi u 10 % starších dospělých s community acquired pneumonií. Ch. pneumoniae je asociována s infekcemi horch a dolch cest dýchacích, pneumonií, astmatem, bronchitidou, faryngitidou, výskytem srpkovitých erytrocytů, koronárm srdečm onemocněm a Guillain- Barre syndromem (15-17). Ch. psittaci jsou primármi patogeny různých druhů živočichů. Měkkýši, ptáci, savci, mohou být důvodem některých případů pneumonií. U savců, C. psittaci a C. pecorum, jsou původci onemocně a symptomů jako jsou pneumonie, enteritis, polyserositis, encefalitis a konjunctivitis. Sérologické testová, které se dnes provádí po celém světě, poskytuje přesné a relevant informace při diagnostice infekcí C. trachomatis.. Při podezře na akut infekci odběr vzorku séra snižuje potřebu provádě invazivch metod, které jsou potřebné pro přímou detekci antigenu. V případě infekce dol části urogenitálho traktu jsou při odběru séra eliminovány problémy s neefektivm odběrem vzorku z uretry atd., manipulací se vzorkem a jeho transportem. Je důležité si uvědomovat, že většina chlamydiových infekcí je asymptomatická. Infekce může v těle pacienta přetrvávat dlouhou dobu, může se dostávat do vyšších částí genitálho traktu a způsobovat hlubokou a chronickou infekci. Tento jev může vést k vyššímu výskytu falešně negativch výsledků při přímé detekci antigenu. Serologické testy na ch.trachomatis, umožňující detekci specifických protilátek, jsou v současné době akceptovatelnou, efektiv metodou (10, 11, 18, 19). Díky markerům IgG, IgM a IgA můžeme určit přítomnost a stav infekce. Protilátky ve třídě IgM vypovídají o akut infekci, jejich absence nevylučuje přítomnost začínající infekce, zvláště jedná-li se o opakující nebo chronickou infekci. Specifické IgA protilátky jsou důležitým markerem aktiv chlamydiové infekce, díky své krátké době výskytu. Přetrvávají po dobu antigen stimulace. IgG je markerem probíhající, chronické nebo prodělané infekce. Mezi třemi různými druhy chlamydií se vyskytuje zkřížená reaktivita. Ve většině diagnostických souprav pro detekci chlamydií se jako antigeny používají jak purifikované elementár tělíska: mikroimunofluorescence (MIF) a ELISA, tak lipopolisacharidy (LPS), nebo purifikované membránové proteiny (MOMP). Všechny uvedené antigeny obsahují rodově specifické epitopy, což má za následek zkou druhovou specificitu. Veliké procento populace prodělává ch.pneumonii (bez klinických příznaků), prevalence antichlamydiových protilátek je vysoká. Z tohoto důvodu, se rozliše mezi specifickými protilátkami ch. pneumoniae a ch. trachomatis, konvenčmi serologickými testy (MIF, ELISA, EIA,..) jeví jako nedostatečné. M CZ

2 Savyon Diagnostics v testu na ch. trachomatis používá specifické epitopy, derivované z různých serotypů. Je tak zabráněno druhově-zkřížené reaktivitě epitopů, čož má za následek vyšší přesnost a specificitu stanove protilátek proti ch. trachomatis ve třídě IgG a IgA. Princip testu. SeroCT TM RT destička je pokryta specifickými peptidy ch. trachomatis. Naředěné testované sérum se inkubuje v Sero CT TM RT jamkách mikrotitrač destičky 30 min. při pokojové teplotě (RT). Specifická protilátka přítomná v séru pacienta se naváže na antigen navázaný na mikrodestičce. Nespecifické protilátky jsou odstraněny promytím. Dále se přidává křenová peroxidáza (HRP) konjugovaná s anti-lidskou IgA, inkubace 30 min. při pokojové teplotě. Jestliže v prvm kroku vznikl komplex antigen-protilátka, HRP značená protilátka se naváže na protilátku a vytvoří komplex. Nenavázaný konjugát je odstraněn promytím. V dalším kroku je do jamek přidáván chromogen substrát, který při pozitiv enzymatické reakci vytvoří modré zbarve. Enzymatická reakce je ukončena stop činidlem (1M H2SO4). Modré zabarve se změ na žluté. Absorbance se měří při 450/620 nm. Hodnota absorbance je proporcionálně úměrná hladině specifických protilátek navázaných na kautované antigeny. Přehled kroků: Manuálně/Automatizovaně* Jamky mikrotitrač destičky jsou kautovány specifickými antigeny ch. trachomatis Přidejte 2x100µl Cut Off kontroly přidejte 1x100µl negativ kontroly, 1x100µl positiv kontroly, a všech naředěných vzorků destičku přikryjte a inkubujte 30 min. při pokojové teplotě 5x promyjte promývacím pufrem přidejte 100µl HRP konjugátu připraveného k použití destičku přikryjte a inkubujte 30 min. při pokojové teplotě 5x promyjte promývacím pufrem přidejte 100µl TMB-Substrátu Destičku přikryjte a inkubujte 30min. při pokojové teplotě Přidejte 100µl Stop roztoku Absorbanci odečítejte při 450/620 nm Vypočítejte a interpretujte výsledky *Automatizovaná procedura 20-ti minutová inkubace vzorků 5 promývacích cyklů Součásti kitu: pro Manuál/Automatizované použití Souprava na 96 stanove Kat.č. A M / A D 1. Mikrotitrač destička kautovaná specifickými peptidy ch. trachomatis: 96 odlamovatelných jamek (8x12), zabalené v hlikové fólii se sušidlem. 1 destička / 1 destička 2. Koncentrovaný promývací pufr (20X): PBS - Tween pufr. 1 lahvička, 100 ml / 1 lahvička, 100 ml 3. Roztok na ředě sér-rt (modrý): v pracov koncentraci. S obsahem méně než 0.05% proclinu jako konzervačho prostředku. 1 lahvička, 30 ml / 1 lahvička, 60 ml 4. HRP-konjugát připraven k použití (zelený): Křenovou peroxidázou (HRP) značený anti-lidský IgA (alpha řetězec specifický). S obsahem méně než 0.05% proclinu jako konzervačho prostředku. 1 lahvičky, 14ml 5. Cut Off Kontrola: C. trachomatis IgA sérum připravené k použití pro cut off determinaci. S obsahem méně než 0.05% proclinu a méně než 0,1% azidu sodného jako konzervačho prostředku. 1 lahvička, 2,5 ml / 1 lahvička, 2,5 ml 6. Negativ kontrola: V pracov koncentraci. Lidské sérum negativ na IgA. S obsahem méně než 0.05% proclinu a méně než 0,1% azidu sodného jako konzervačho prostředku.. 1 lahvička, 2 ml / 1 lahvička, 2 ml 7. Positiv kontrola: V pracov koncentraci. Lidské sérum positiv na IgA. S obsahem méně než 0.05% proclinu a méně než 0,1% azidu sodného jako konzervačho prostředku. 1 lahvička, 2 ml / 1 lahvička, 2 ml 8. TMB substrát: v pracov koncentraci, obsahuje 3,3,5,5 - tetramethylbenzidin jako chromogen a peroxid jako substrát 1 lahvička,14 ml / 1 lahvička, 16 ml 9. Stop roztok: V pracov koncentraci.. Obsahující 1M H2SO4. 1 lahvička, 15 ml / 1 lahvička, 16 ml 10. Fólie na přikrytí destiček: 1 / ne 11. Návod k použití: 1 / 1 Potřebný materiál, nedodávaný v soupravě 1. naprosto čisté zkumavky pro ředě séra pacienta 2. vhodné mikropipety nebo multi-kanálové pipety (5-50, a l) a špičky 3. jednolitrová volumetrická láhev ml volumetrický válec 5. promývač ELISA destiček nebo promývací nádoba 6. filtrač papír 7. vortexové míchadlo 8. reader s filtrem 450/620 nm pro měře mikrodestiček 9. destilovaná nebo dvakrát deionizovaná voda pro ředě promývacího pufru (Wash Buffer) M CZ

3 Upozorně Pouze pro in-vitro diagnostické použití Tato souprava obsahuje lidská séra, která byla testována technikami podle FDA. Séra jsou negativ na HBsAg a protilátky proti HCV a HIV 1 & 2, nicméně, jelikož žádná známá metoda nemůže zaručit s úplnou jistotou, že výrobky derivované z lidské krve nepřenášejí infekci, se všemi komponenty z lidské krve, obsaženými v této soupravě se musí zacházet jako s potencionálně infekčm sérem nebo krví, způsobem identickým (nebo podobným) s doporučem publikovaným v CDC/NIH manuálu Biobezpečnost mikrobiologických a lékařských laboratořích, Roztok chromogenho substrátu působí dráždivě na pokožku a mukóz membrány. Vyvarujte se přímého kontaktu. Všechny součásti kitu jsou kalibrovány na danou šarži. Kombinová součástí kitů různých šarží může ovlivnit výsledek stanove. Kyselina sírová 1M, je pro oči a pokožku dráždivá. V případě kontaktu s oč sliznicí, vyplachujte oko proudem vody. Uchovává a trvanlivost reagencií 1. Všechen dodávaný materiál je nutno skladovat při teplotě 2 až 8 C. Reagencie, uchovávané při teplotě 2 až 8 C, jsou stabil do data expirace, vyznačeného na obalu soupravy. Expozice složek soupravy obyčejné teplotě po dobu několika hodin nezpůsobí zniče reagencií. Reagencie nezmrazujte. 2. Životnost kitu po otevře je 90 d. 3. Nepoužité stripy se musí skladovat v hlikové fólii společně se sušidlem. 4. V koncentrovaném promývacím pufru 20x se mohou během skladová tvořit krystalky. Toto je běžné. Krystalky rozpusťte zahřátím pufru na 37 C ještě před jeho ředěm. Naředěný pufr skladujte při 2-8 C a to po dobu maximálně 21 d. Odběr vzorků Vzorky sér se odebírají asepticky standardmi technikami. Tepelně inaktivovaná séra nemohou být použita. Nedoporučuje se použití lipemických, zakalených a kontaminovaných sér. Drobné částice a sraženiny v séru mohou způsobovat chybné výsledky. Tyto vzorky by měly být před stanovem vyčeřeny centrifugací nebo filtrací. Skladová vzorků Vzorky by se měly skladovat při teplotě 2-8 C pokud jsou testovány během 7 d (doporučuje se přídavek 0,1% azidu sodného). Pro delší uchová je nutno alikvoty séra uchovávat při teplotě 20 C. Vyhněte se opakovanému mraze a rozmražová séra. A. Příprava reagencií. 1. Všechny testovací reagencie a vzorky před použitím vytemperujte na laborator teplotu. Před použitím dobře promíchejte Cut Off kontrolu, negativ kontrolu, pozitiv kontrolu a testované vzorky sér. 2. Určete celkové množství jamek potřebných na testová. Kromě vzorků pacienta musí být v každém měře zahrnuty dvě jamky pro Cut Off kontrolu, jedna jamka pro negativ kontrolu a jedna jamka pro pozitiv kontrolu. 3. Vyjměte mikrodestičku z hlikové folie rozstřižem jednoho konce blízko sváru. Odeberte potřebné množství stripů (odpovídající množství testovaných vzorků) z 96 jamkového rámečku. 4. Zřeďte 1/20 koncentrovaný promývací pufr deionizovanou nebo destilovanou vodou. Pro příklad: pro přípravu 1L promývacího pufru přidejte k 50ml koncentrovaného roztoku promývacího pufru 950ml dvakrát deionizované nebo destilované vody. B. Inkubace vzorků sér a kontrol. 5. Nařeďte každý vzorek pacienta roztokem na ředě sér RT v poměru 1/11 následovně: Přidejte 25l séra pacienta k 250l roztoku na ředě sér-rt. 6. Pipetujte Cut Off kontrolu v duplikátu: 100µl do každé jamky. Pipetujte 100l negativ kontroly, 100l pozitiv kontroly a 100l sér naředěných v poměru 1/11 do příslušných jamek na stripu. 7. Přikryjte strip víčkem a inkubujte 30 min. při laborator teplotě (22 28C). 8. Odstraňte přebytečné tekutiny z jamek. 9. Promývací krok: naplňte každou jamku promývacím pufrem ( µl) po okraj a poté tekutinu odstraňte. Postup opakujte 4x. 10. Osušte stripy a rámeček jemným poklepám na absorpčm papíru. C. Inkubace s konjugátem. 11. Pipetujte 100µl HRP konjugátu připraveného k použití do každé jamky. 12. Přikryjte strip víčkem a inkubujte 30 min. při laborator teplotě (22 28C). 13. Odstraňte přebytečné tekutiny z jamek a proveďte promývací krok, jak je uvedeno v bodě D. Inkubová s TMB-substrátem. 14. Pipetujte 100l roztoku TMB-Substrátu do každé z jamek, přikryjte víčkem a inkubujte při laborator teplotě (22 28C) po dobu 30 min. 15. Reakci ukončete přidám 100 l Stop roztoku (1M H2SO4) do každé z jamek. E. Odečte výsledků. 16. Proměřte absorbanci při 450/620 nm a výsledek zapište. Odečte může být provedeno do 30 min od zastave chromogen reakce. Pozn.: Před odečtem nesmí jamka obsahovat žádné bublinky. Dno destičky musí být opatrně otřeno. Pracov postup pro Manuál použití Tento pracov postup je pro manuál použití, pro automatizované použití viz pracov postup že. M CZ

4 Pracov postup pro Automatizované použití Objemy lahviček a reagencií byly uzpůsobeny pro automatizované použití. A. Příprava reagencií. 1. Všechny testovací reagencie a vzorky před použitím vytemperujte na laborator teplotu. Před použitím dobře promíchejte Cut Off kontrolu, negativ kontrolu, pozitiv kontrolu a testované vzorky sér. 2. Určete celkové množství jamek potřebných na testová. Kromě vzorků pacienta musí být v každém měře zahrnuty dvě jamky pro Cut Off kontrolu, jedna jamka pro negativ kontrolu a jedna jamka pro pozitiv kontrolu. 3. Vyjměte mikrodestičku z hlikové folie rozstřižem jednoho konce blízko sváru. Odeberte potřebné množství stripů (odpovídající množství testovaných vzorků) z 96 jamkového rámečku. 4. Zřeďte 1/20 koncentrovaný promývací pufr deionizovanou nebo destilovanou vodou. Pro příklad: pro přípravu 1L promývacího pufru přidejte k 50ml koncentrovaného roztoku promývacího pufru 950ml dvakrát deionizované nebo destilované vody. B. Inkubace vzorků sér a kontrol. 5. Nařeďte každé sérum pacienta v poměru 1/11 následovně: Odpipetujte 250µl roztoku na ředě sér- RT do každé zkumavky na vzorky. Přidejte 25µl séra pacienta do každé zkumavky. 6. Pipetujte 100µl negativ kontroly, 100µl pozitiv kontroly, 2 x 100µl (v duplikátu) Cut Off kontroly a 100l sér naředěných v poměru 1/11 do příslušných jamek na stripu. 7. Inkubujte 20 min. při laborator teplotě (22 28C). 8. Eliminujte assay drift, který může být způsoben předchozími kroky. 9. Promývací krok: Proveďte 5 promývacích cyklů za využití 500µl promývacího pufru. 10. Proveďte 2 aspirač cykly pro vysuše. C. Inkubace s konjugátem. 11. Pipetujte 100µl HRP konjugátu připraveného k použití do každé jamky. 12. Inkubujte 30 min. při laborator teplotě (22 28C). 13. Proveďte promývací krok tak, jak je uvedeno v bodě D. Inkubová s TMB-substrátem. 14. Odpipetujte 100l roztoku TMB-Substrátu do každé z jamek a inkubujte ve tmě při laborator teplotě (22-28C) po dobu 30 min. 15. Reakci ukončete přidám 100 l roztoku Stop roztoku (1M H2SO4) do každé z jamek. E. Odečte výsledků. 16. Proměřte absorbanci při 450/620 nm a výsledek zapište. Odečte může být provedeno do 30 min od zastave chromogen reakce. Vezměte prosím na vědomí, že každý automatický přístroj má své specifické technické požadavky. Prosím aplikujte automatizovaný pracov postup pro tuto soupravu do operačho protokolu Vašeho automatického přístroje. Validita testu Aby byl test považován za valid, musí být splněny následující podmínky. Pokud nejsou splněny tyto podmínky, ne test valid a musí být zopakován. 1. O.D. Pozitiv kontrola 0,8 2. Poměr O.D. Pozitiv kontrola / O.D. Cut Off kontrola > 2 3. O.D. Negativ kontrola < 0,3 Výpočet výsledků testu 1. Vypočítejte průměrnou hodnotu absorbance Cut Off kontrol, které byly analyzovány v duplikátu. 2. Aby byly výsledky získané z různých testů normalizované, vypočítává se hodnota COI (cut off index) podle následujícího vztahu: Interpretace výsledků Tabulka 1: Tabulka2: Interpretace výsledků založených na detekci IgA a IgG protilátek. IgG IgA Interpretace výsledků Negativ Negati Negativ (nebo pod citlivostí v testu) COI Výslede k <1.0 Negativn í Tabulka2: Interpretace výsledků založených na detekci IgA a IgG protilátek. Positiv Negati v nebo hranič Vypovídá o minulé nebo současné infekci Hranič Positiv Negativ Hranič Positiv Positiv Interpretace výsledků Nedetekovatelné IgA protilátky proti Ch. trach Hranič Přítomnost či nepřítomnost detekovatelných (hraničch) hladin IgA protilátek, která ne přesně stanovena. Po 2-3 týdnech by se měl odebrat a testovat druhý vzorek séra. (Pokud je i druhý vzorek hranič, měl by se výsledek považovat za negativ) >1.1 Positiv Významná hladina IgA protilátek proti Ch. trach. Po 2-3 týdnech by se měl odebrat a testovat druhý vzorek séra. (Pokud je i druhý vzorek hranič, měl by se výsledek považovat za negativ) Vypovídá o akut nebo chronické infekci. Vypovídá o akut nebo chronické infekci. M CZ

5 Chová testu Tabulka 3: Sensitivita a Specificita Senzitivita a Specificita testu SeroCT RT IgA byla vypočítána za využití sér negativch či pozitivch na protilátky proti Ch. trachomatis. Séra byla předem analyzována pomocí imunofluorescenč soupravy Chlamydia IgA SeroFIA TM (Savyon Diagnostics LTD.). Studie byla provedena na 98 vzorcích séra. SeroCT TM RT-IgA SeroFIA TM Positiv Negativ Positiv Negativ Celkem Sensitivita: 26/26 x 100 = 100% Specificita: 72/72 x 100 = 100% Celková shoda: 98/98 x 100 = 100% Přesnost Tabulka 4: Intra-assay (uvnitř běhu), že je uvedena přesnost testu SeroCT TM RT IgA: Vzorek Počet Střed CV% opaková hodnota Positiv Negativ Tabulka 5: Inter-assay (mezi běhy), že je uvedena přesnost testu SeroCT TM RT IgA: Vzorek Počet Střed CV% opaková hodnota Positiv Negativ Omeze testu 1. Jednotlivé sérologické testy nemohou být používány jako jediné kriterium pro stanove diagnózy. Musí se brát v úvahu všechny klinické a laborator výsledky. 2. Vzorky, které byly odebrány příliš brzo během primár infekce nemusí obsahovat detekovatelné množství protilátek. Pokud je podezře na chlamydiovou infekci, měl by se během 2-3 týdnů odebrat další vzorek na analýzu. Ten by se měl testovat paralelně s prvm vzorkem. Literatura 1. Sarov, I.B., Shemer, A.Y., Manor, E., Zvilich, M., Lunenfeld, E., Piura, B., Chaim, W and Hagay, Z.(1989). Current topics in Chlamydia trachomatis Research. In: Serio, M.(Ed). Perspectives in Andrology; Raven Press, New York, 53: Grayston, J.T., Kuo, C.C., Wang, S.P. and Altman J. (1986). The new Chlamydia psitacci strain, TWAR, solated in acute respiratory tract infections. New Eng. J. Med. 315: Grayston, J. T., Kuo, C.C., Campbell, L.A. and Wang, S.P. (1989). Chlamydia pneumoniae sp. nov. for Chlamydia sp. strain TWAR. Int. J. Syst. Bacteriol. 39: Fukushi, H., and Hirai, K. (1992). Proposal of Chlamydia pecorum sp. nov. for Chlamydia strains derived from ruminants. Int. J. Syst. Bacteriol. 42: Stephens, R. S., Tam, M. R., Kuo, C. C. and Nowinski, R.C. (1982). Monoclonal antibodies to Chlamydia trachomatis: antibody specificities and antigen characterization. J. Immunol. 128: Stephens, R. S., Sanchez-Pescador, R., Wagar, E. A., Inouye, C. and Urdea, M.S. (1987). Diversity of Chlamydia trachomatis major outer membrane protein genes. J. Bacteriol. 169: Yuan, Y., Zhang, Y. X., Watkins, N. G. and Caldwell, H.D. (1989). Nucleotide and Deduced Amino Acid Sequences for the Four Variable Domains of the Major Outer Membrane Proteins of the 15 Chlamydia trachomatis Serovars. Infection and Immunity. 57: Copyright 1989, American Society for Microbiology. 8. Wang S.P., Kuo, C. C., Barnes, R.C., Stephens, R.S. and Grayston, J.T. (1985). Immunotyping of Chlamydia trachomatis with monoclonal antibodies. J. Infect Dis. 152: Treharne J. D. (1985). The community epidemiology of trachoma. Rev Infect Dis. 7: Piura, B., Sarov, I., Sarov, B., Kleinman, D., Chaim, W. and Insler, V. (1985). Serum IgG and IgA antibodies specific for Chlamydia trachomatis in salpingitis patients as determined by the immunoperoxidase assay. Eur. J. Epidemiol 1: Wang, S.P., Grayston, J.T., Kuo, C.C., Alexander, E.R., and Holmes, K.K. (1977). SeroDiagnosis of Chlamydia trachomatis infection with the microimmunofluorescence test. In: Nongonoccolcal urethritis and related infection, D. Hobson and K.K. Holmes (Eds), P. American Society for Microbiology, Washington DC. p Richard, L. S., Schachter, J. and Landers, D.V. z(1983). Chlamydial Infections in Obstetrics and Gynecology. Clinical Obstetrics and Gynecology 26: Thompson III S. E., and Dretler R. H. (1982). Epidemiology and Treatment of Chlamydial Infections in Pregnant Women and Infants. Review of Infectious Diseases 4:S Mardh A., Ripa, T., Svensson, L. and Westrom, S.(1977). Chlamydia Trachomatis Infection in Patients with Acute Salpingitis. Chlamydia Trachomatis and Acute Salpingitis. N. Engl. J. Med. No : Grayston J. T., Campbell, L.A., Kuo, C.C., Mordhorst, C.H., Saikku, P., Thom, D.H. and Wang, S.P. (1990). A new respiratory tract pathogen. Chlamydia pneumoniae strain TWAR. J. Infect. Dis. 161: M CZ

6 16. Hahn D. L., Dodge, R. W. and Golubjatnikow, R. (1991). Association of Chlamydia pneumoniae (strain TWAR) infection with wheezing, asthmatic bronchitis, and adult-onset asthma. JAMA 266: Saikku P., Mattila, K., Nieminen, M.S., Huttunen, J.K., Leinonen, M., Ekman, M.R., Makela, P.H., and Valtonen, V. (1988). Serological evidence of an association of a novel Chlamydia, TWAR, with chronic coronary heart disease and acute myocardial infection. Lancet II: Tsunekawa, T. and Kumamoto, Y. (1989) A study of IgA and IgG titers of C. trachomatis in serum and prostatic secretion in chronic prostatitis. J.J.A. Inf. Dis. 63(2): Kaneti, J., et al., (1988). IgG and IgA antibodies specific for Chlamydia trachomatis in acute epididymitis. Europ. Urol. 14: Sarov, I., Kleinman, D., Cevenini, R., Holcberg, G., Potashnik, G., Sarov, B. and Insler, V. (1986). Specific IgG and IgA antibodies to Chlamydia trachomatis in infertile women. Int. J. Fertil. 31 (3): European Authorized Representative: Obelis s.a. Boulevard Général Wahis 53, B-1030 Brussels Tel: Fax: mail@obelis.net M CZ