AIA-PACK B12 POTŘEBNÉ MATERIÁLY, KTERÉ NEJSOU SOUČÁSTÍ DODÁVKY ÚČEL POUŽITÍ SOUHRN A VYSVĚTLENÍ PRINCIP STANOVENÍ DODÁVANÝ MATERIÁL

Transkript

1 EU rev. B Upozornění: Tento návod k použití je v souladu se směrnicí IVD 98/79/ES a je určen pro zákazníky z členských států Evropské unie. ÚČEL POUŽITÍ AIA-PACK B12 AIA-PACK B12 je určen pro diagnostické použití in vitro pouze ke kvantitativnímu měření vitamínu B12 (B12) v lidském séru na analyzátorech systému Tosoh AIA. SOUHRN A VYSVĚTLENÍ Vitamin B12 (cyanokobalamin), syntetizovaný výhradně mikroorganismy, se nachází téměř ve všech zvířecích tkáních a je nezbytný pro metabolismus mastných kyselin, intermediární metabolismus kyseliny listové a biosyntézu DNA a RNA. Po požití a úvodním natrávení proteinu vytváří vitamín B12 komplexy s žaludečními glykoproteinovými nosiči, intrinsickým faktorem (IF) a R faktory. Při trávení je komplex B12-IF navázán na receptory ve sliznici terminálního ilea. Komplex je disociován při vstupu vitamínu B12 do kapilár v portální cirkulaci a je uchováván v játrech. Po navázání na transportní protein transkobalamin II je při zvýšení fyziologické potřeby vitamín B12 hepatocyty uvolňován. Deficit vitamínu B12 může vznikat v důsledku různých faktorů, které zahrnují neadekvátní příjem v potravě a malabsorbci. Malabsorbce, nejčastější příčina deficitu B12, je spojena s autoimunními poruchami (perniciózní anémie), poruchami žaludku a poškozením nebo absencí terminálního ilea. Zvýšené hladiny vitamínu B12 jsou nejčastěji způsobeny požitím vitamínových doplňků. Zvýšené hladiny vitamínu B12, které přetrvávají po zastavení podávání vitamínových doplňků, mohou znamenat poškození jater nebo myeloproliferativní poruchy. Deficit vitamínu B12 může způsobovat závažné progresivní a bez léčby často ireverzibilní neurologické poruchy a makrocytární nebo megaloblastickou anémii. Vzhledem k tomu, že megaloblastické anémie způsobené deficitem vitamínu B12 nebo kyseliny listové mohou být morfologicky nerozlišitelné, je důležité stanovit sérové hladiny obou těchto látek, aby bylo možné správně diagnostikovat příčinu a léčit anémii efektivně (1-6). PRINCIP STANOVENÍ AIA-PACK B12 je kompetitivní enzymatická imunoanalýza prováděná po předúpravě vzorku zcela v testovacích kelímcích AIA-PACK. Činidla pro předúpravu vzorku (obsahující kyanid draselný, hydroxid sodný a dithiotreitol) uvolňují vitamín B12 z vazebných sérových proteinů ve vzorku a konvertují kyanokobalamin na stabilní, měřitelnou formu vitamínu B12. Vitamín B12 přítomný v testovaném vzorku soutěží s vitamínem B12 značeným enzymem o omezený počet vazebných míst na fluoresceinem značeném vepřovém intrinsickém faktoru, který se pak váže na protilátku anti-fitc (fluorescein isothiokyanát) imobilizovanou na magnetická zrna. Magnetická zrna jsou promytím zbavena veškerého nenavázaného, enzymem značeného vitamínu B12 a jsou pak inkubována s fluorogenním substrátem, 4-methylumbeliferylfosfátem (4MUP). Množství enzymem značeného vitamínu B12, který se váže na zrna, je nepřímo úměrné koncentraci vitamínu B12 v testovaném vzorku. Je vynesena standardní křivka a neznámé koncentrace vitamínu B12 jsou vypočítány pomocí této křivky. DODÁVANÝ MATERIÁL Katalogové č Plastové testovací kelímky obsahující dvanáct lyofilizovaných magnetických zrn potažených myší monoklonální protilátkou anti-fitc a fluoresceinem značený 1-12 vepřový intrinsický faktor a 50 µl vitamínu B12 konjugovaného s hovězí alkalickou fosfatázou s azidem sodným jako konzervační látkou. POTŘEBNÉ MATERIÁLY, KTERÉ NEJSOU SOUČÁSTÍ DODÁVKY Následující materiály jsou vyžadovány k provedení analýzy vitamínu B12 pomocí AIA-PACK B12 (Kat. č ) na analyzátorech systému Tosoh AIA. Následující materiály společnost Tosoh dodává samostatně. Materiály Kat. č. AIA AIA-1200DX AIA-1200XL AIA AIA Nex IA nebo AIA AIA Nex IA nebo AIA-21 LA AIA-1800 ST AIA-1800 LA AIA-2000 ST AIA-2000 LA AIA-600 II AIA-600 II BCR AIA-PACK SUBSTRATE SET (pouze pro řady AIA-1200 nebo AIA-600) AIA-PACK SUBSTRATE REAGENT/AIA-PACK SUBSTRATE RECONSTITUENT AIA-PACK SUBSTRATE SET II (pro analyzátory systému Tosoh AIA s výjimkou AIA-1200 a AIA-600) AIA-PACK SUBSTRATE REAGENT II/AIA-PACK SUBSTRATE RECONSTITUENT II AIA-PACK B12 CALIBRATOR SET AIA-PACK B12 CALIBRATOR (1) 0 pg/ml AIA-PACK B12 CALIBRATOR (2) 90 pg/ml (přibližně) AIA-PACK B12 CALIBRATOR (3) 250 pg/ml (přibližně) AIA-PACK B12 CALIBRATOR (4) 500 pg/ml (přibližně) AIA-PACK B12 CALIBRATOR (5) pg/ml (přibližně) AIA-PACK B12 CALIBRATOR (6) pg/ml (přibližně) AIA-PACK B12 SAMPLE DILUTING SOLUTION AIA-PACK B12 PRETREATMENT SET AIA-PACK B12 PRETREATMENT-1 AIA-PACK B12 PRETREATMENT-2 AIA-PACK B12 PRETREATMENT-3 AIA-PACK WASH CONCENTRATE AIA-PACK DILUENT CONCENTRATE AIA-PACK DETECTOR STANDARDIZATION TEST CUP Další požadavky pouze pro série AIA-1200: AIA-1200 PIPETTE TIPS AIA-PACK AIA-1200 DETECTOR STANDARDIZATION SOLUTION Další požadavky pro řady AIA-1200 a AIA-600: KELÍMKY NA VZORKY Další požadavky pro AIA Nex IA / AIA-21, AIA-600 II, AIA-1800 a AIA-2000: KELÍMKY NA VZORKY AIA-PACK SAMPLE TREATMENT CUP

2 Další požadavky pouze pro AIA Nex IA /AIA-21: PIPETOVACÍ ŠPIČKY PŘEDEM VLOŽENÉ PIPETOVACÍ ŠPIČKY Další požadavky pouze pro AIA-600 II, AIA-1800 a AIA-2000: PIPETOVACÍ ŠPIČKY STOJAN PRO PIPETOVACÍ ŠPIČKY PŘEDEM VLOŽENÉ PIPETOVACÍ ŠPIČKY Používejte pouze materiály dodané společností Tosoh. Nepoužívejte náhradní materiály získané z jiných zdrojů, protože výkonnost testu je charakterizována přísně na základě materiálů společnosti Tosoh. VAROVÁNÍ A BEZPEČNOSTNÍ OPATŘENÍ 1. AIA-PACK B12 je určen pouze pro diagnostické použití in vitro. 2. V rámci jednoho zásobníku nemíchejte testovací kelímky různých šarží nebo různých testů. 3. AIA-PACK B12 obsahuje azid sodný, který může reagovat s olověným nebo měděným potrubím za vzniku potenciálně výbušných azidů kovu. Při likvidaci těchto činidel do kanalizace je vždy spláchněte velkým množstvím vody, aby nedocházelo k hromadění azidu. 4. Při přípravě tohoto výrobku není používáno lidské sérum. Protože však pro přípravu vzorků budou používány lidské vzorky a další výrobky pro kontrolu kvality v laboratoři mohou být deriváty lidského séra, dodržujte prosím při manipulaci se všemi vzorky a kontrolními vzorky standardní laboratorní bezpečnostní opatření. 5. Nepoužívejte po uplynutí data exspirace. 6. AIA-PACK B12 PRETREATMENT SET používaný spolu s testem AIA-PACK B12 obsahuje kyanid draselný a hydroxid sodný. Zabraňte styku s očima, kůží nebo oděvem. Po manipulaci důkladně opláchněte. 7. Pro bezpečnou likvidaci odpadu se doporučuje, aby každá laboratoř dodržovala zavedené laboratorní postupy a místní, národní či federální nařízení. Informace o likvidaci materiálu v sadě k předošetření získáte od místního odborníka. 8. Před použitím zkontrolujte obal a vnější povrch hliníkového obalu, zda nejsou poškozeny. Pokud jsou patrná jakákoli poškození, kontaktujte vašeho místního obchodního zástupce společnosti Tosoh. SKLADOVÁNÍ A STABILITA Veškeré neotevřené materiály jsou stabilní do data exspirace uvedeného na štítku, jsou-li uchovávány při specifikované teplotě. Materiály Kat. č. 2 8 C: AIA-PACK B AIA-PACK B12 CALIBRATOR SET AIA-PACK B12 SAMPLE DILUTING SOLUTION AIA-PACK B12 PRETREATMENT SET AIA-PACK SUBSTRATE SET AIA-PACK SUBSTRATE SET II AIA-PACK WASH CONCENTRATE AIA-PACK DILUENT CONCENTRATE AIA-PACK AIA-1200 DETECTOR STANDARDIZATION SOLUTION C: AIA-PACK DETECTOR STANDARDIZATION TEST CUP AIA-PACK SAMPLE TREATMENT CUP Testovací kelímky AIA-PACK B12 mohou být skladovány až 1 den při teplotě C. - Je-li uchovávaný neotevřený a zchlazený na teplotu 2-8, bude AIA-PACK B12 CALIBRATOR SET stabilní do data exspirace uvedeného na štítku. Po otevření nebo rekonstituci použijte kalibrační roztoky do 1 dne. - Je-li uchovávaný neotevřený a zchlazený na teplotu 2-8, bude AIA-PACK B12 PRETREATMENT SET stabilní do data exspirace uvedeného na štítku. Rekonstituovaný AIA-PACK B12 PRETREATMENT-1 by se měl spotřebovat do 1 dne. - Je-li AIA-PACK B12 SAMPLE DILUTING SOLUTION uchováván neotevřený a zchlazený při teplotě 2 8 C, je stabilní do data exspirace uvedeného na štítku. Po otevření bude AIA-PACK B12 SAMPLE DILUTING SOLUTION stabilní po dobu až 7 dnů, pokud je zchlazený na teplotu 2 8 C. - Rekonstituovaný roztok substrátu je stabilní 3 dny při teplotě C nebo 7 dnů při teplotě 2 8 C. - Pracovní ředidlo a promývací roztoky budou stabilní po dobu 30 dnů při teplotě C. - Činidla nesmí být užívána, když se jeví zakalená či zabarvená. ODBĚR VZORKŮ A MANIPULACE S NIMI Pro tento test je vyžadováno sérum. NESMÍ SE POUŽÍVAT EDTA, citrátová nebo heparinizovaná plazma. Není nutná žádná zvláštní příprava pacienta. Vzorek žilní krve je odebrán asepticky bez přísad. Uchovávejte při teplotě než se vytvoří sraženina (obvykle minut), pak odstředěním získejte vzorek séra pro test. Před provedením analýzy mohou být vzorky uloženy při teplotě 2 8 C po dobu maximálně 24 hodin. Nelze-li analýzu provést do 24 hodin, musí být vzorek uchováván zmražený při teplotě -20 nebo nižší po dobu maximálně 60 dnů. Zabraňte opakovanému zmrazování a rozmrazování vzorků. Zakalené vzorky séra nebo vzorky, které obsahují částice hmoty, musí být před analýzou odstředěny. Před analýzou nechte vzorky pomalu dosáhnout teploty C a jemně je promíchejte. Všechny vzorky vyžadují předošetření. Předupravené vzorky je třeba analyzovat do 1 hodiny po dokončení postupu předošetření. Objem vzorku potřebný pro předošetření je 200 µl. Pro test se používá 100 µl předupraveného vzorku. POSTUP Podrobnosti si prosím přečtěte v uživatelské příručce systému TOSOH AIA. I. Příprava činidla A. Substrátový roztok Před přípravou pracovního činidla ponechte všechna činidla, aby dosáhla teploty C. Pro AIA-1200 a AIA-600 přidejte celý obsah AIA-PACK SUBSTRATE RECONSTITUENT (100 ml) do lyofilizovaného AIA-PACK SUBSTRATE REAGENT a důkladně promíchejte, aby se pevný materiál rozpustil. U AIA Nex IA/AIA-21, AIA-600 II, AIA-1800 a AIA-2000 přidejte celý obsah AIA-PACK SUBSTRATE RECONSTITUENT II (100 ml) k AIA-PACK SUBSTRATE REAGENT II (lyofilizovanému), důkladně promíchejte, aby se pevný materiál rozpustil. B. Promývací roztok Přidejte celý obsah AIA-PACK WASH CONCENTRATE (100 ml) k přibližně 2,0 l vody reagenční čistoty třídy I CAP nebo typu I NCCLS, dobře promíchejte a upravte konečný objem na 2,5 l. 4-12

3 C. Ředicí roztok Přidejte celý obsah AIA-PACK DILUENT CONCENTRATE (100 ml) k přibližně 4,0 l vody reagenční čistoty třídy I CAP nebo typu I NCCLS, dobře promíchejte a upravte konečný objem na 5,0 l. D. Činidlo pro předúpravu Uveďte všechna činidla na teplotu C. Pomocí volumetrické pipety rekonstituujte lyofilizovaný AIA-PACK B12 PRETREATMENT-1 přesně na objem 5 ml s AIA-PACK B12 PRETREATMENT-2. Nechejte lyofilizovaný materiál, aby se zcela rozpustil. AIA-PACK B12 PRETREATMENT-3 je dodáván připravený k použití. II. Postup předúpravy Všechny vzorky (lidské sérum, kontrolní vzorky a kalibrační roztoky) musí před analýzou v analyzátorech systému Tosoh AIA předupraveny. Na AIA Nex IA / AIA-21, AIA-600 II, AIA-1800 a AIA-2000 se předúprava provádí automaticky pomocí parametrů definovaných v testovém souboru. Na AIA-1200 a AIA-600 proveďte následující manuální postup. Pokud je vyžadována manuální předúprava na AIA Nex IA / AIA-21, AIA-600 II, AIA-1800 a AIA-2000, dodržujte pokyny pro postup manuální předúpravy. Předupravené vzorky je třeba analyzovat do 1 hodiny po dokončení postupu. III. Postup kalibrace A. Kalibrační křivka Kalibrační roztoky pro použití s AIA-PACK B12 byly porovnány s WHO IS 03/178. Průměrná výtěžnost tohoto IS 03/178 v rozsahu testu je 104%. Kalibrační křivka pro AIA-PACK B12 bude stabilní po dobu 90 dnů. Stabilita kalibrace je sledována prováděním kontroly kvality a závisí na správné manipulaci s činidlem a na řádné údržbě systému Tosoh AIA podle pokynů výrobce. Opětovná kalibrace může být nutná častěji, když jsou kontroly mimo nastavené rozmezí pro tento test nebo když jsou prováděny určité servisní postupy (např. nastavení teploty, změny mechanismu odběru vzorků, údržba promývací sondy nebo nastavení či výměna žárovky detektoru). Pokud se změnilo číslo šarže AIA-PACK B12 PRETREATMENT SET, je třeba provést novou kalibraci. Další informace o provozu přístroje naleznete v uživatelském manuálu systému Tosoh AIA. Kalibrační křivka vzorku z AIA-1800 sleduje a znázorňuje algoritmus použitý při výpočtu výsledků. Postup automatické předúpravy 1. Nechejte všechna činidla a vzorky dosáhnout teplotu 18 až 25 C. 2. Pomocí volumetrické pipety rekonstituujte lyofilizovaný AIA-PACK B12 PRETREATMENT-1 přesně na objem 5 ml s AIA-PACK B12 PRETREATMENT-2. Nechejte lyofilizovaný materiál, aby se zcela rozpustil. 3. Umístěte rekonstituovaný AIA-PACK B12 PRETREATMENT-1 a AIA-PACK B12 PRETREATMENT-3 do určené polohy na reagenční kazetě, jak je definováno v REGISTRACI ČINIDLA. 4. Do přístroje umístěte příslušný počet kelímků na vzorky / primárních zkumavek AIA-PACK SAMPLE TREATMENT CUP a testovacích kelímků AIA-PACK B12. Postup manuální předúpravy 1. Nastavte všechny parametry pro manuální předúpravu (pro AIA-600 II nastavte všechny parametry SMPL, VOL1, VOL2 a CODE na nulu. Pro AIA Nex IA / AIA-21, AIA-1800 a AIA-2000 nastavte parametry na nulu). 2. Nechejte všechna činidla a vzorky dosáhnout teplotu 18 až 25 C. 3. Pomocí volumetrické pipety rekonstituujte lyofilizovaný AIA-PACK B12 PRETREATMENT-1 přesně na objem 5 ml s AIA-PACK B12 PRETREATMENT-2. Nechejte lyofilizovaný materiál, aby se zcela rozpustil. 4. Pipetou přeneste 200 µl vzorku (sérum, kontrolní vzorek, kalibrační roztok) do skleněné nebo polypropylenové zkumavky. 5. Přidejte 100 µl rekonstituovaného AIA-PACK B12 PRETREATMENT-1 do každé zkumavky a důkladně promíchejte pomocí mixéru. 6. Inkubujte ošetřený vzorek po dobu 15 minut při teplotě C. 7. Přidejte 100 µl AIA-PACK B12 PRETREATMENT-3 do každého vzorku. Dobře promíchejte pomocí mixéru. 8. Vzorky je třeba analyzovat do 1 hodiny po přidání AIA-PACK B12 PRETREATMENT B. Postup kalibrace 1. Pokyny k postupu viz příslušný uživatelský manuál systému Tosoh AIA. 2. Ověřte, že kalibrační šarže a čísla koncentrací byly správně zadány do softwaru. 3. AIA-PACK B12 CALIBRATOR SET je lyofilizovaný. Všechny hodnoty by měly být rekonstituovány s 1,0 ml vody reagenční čistoty třídy I CAP nebo typu I NCCLS. Společnost TOSOH doporučuje, aby všechny kalibrační roztoky byly spuštěny trojmo. 4. Ověřte, že rekonstituovaný AIA-PACK B12 PRETREATMENT-1 a AIA-PACK B12 PRETREATMENT-3 byly umístěny do kazety na činidla tak, jak bylo definováno v REGISTRACI ČINIDLA. Další pokyny o postupu REGISTRACE ČINIDLA naleznete v uživatelském manuálu systému Tosoh AIA. C. Kritéria přijatelnosti kalibrace 1. Vzhledem k tomu, že existuje nepřímý vztah mezi koncentrací a rychlostí, musí rychlost klesat s narůstající koncentrací. 2. Opakující se hodnoty musí být v rozmezí 10%. 6-12

4 D. Kontrola kalibrace a přijetí 1. Pečlivě zkontrolujte křivku kalibrace a použijte výše uvedená kritéria. 2. Je-li to nutné, editujte kalibraci a potom kalibraci akceptujte. Podrobné informace o kalibraci naleznete v uživatelském manuálu systému Tosoh AIA. IV. Postup kontroly kvality A. Komerčně dostupné kontroly Komerčně dostupné kontroly by měly být spuštěny nejméně jednou denně. Doporučuje se, aby byly použity nejméně dva stupně kontrol, normální a abnormální. Metoda laboratoře pro tento určitý test specifikuje následující: Kontrolní materiál: Frekvenci: Číslo šarže kontrolního materiálu, přijatelné limity a nápravná opatření v případě, že kontroly nesplní laboratorní kritéria, můžete nalézt ve zvláštním dokumentu o kontrole kvality, který je v laboratoři. B. Postup kontroly kvality 1. Proveďte analýzu vzorků kontroly kvality dle pokynů specifického uživatelského manuálu pro váš analyzátor. Podrobné pokyny o definici a editaci souborů naleznete v uživatelském manuálu systému Tosoh AIA. 2. Materiál kontroly kvality, který má projít tímto testem, je specifikovaný individuální metodou laboratoře. V. Zpracování vzorků A. Příprava Podle specifických pokynů v uživatelském manuálu analyzátoru příslušným způsobem umístěte vzorky do přístroje. Primární zkumavky a také kelímky na vzorky jsou kódovány čárovým kódem a mohou být použité v AIA-1800 a AIA B. Postup analýzy 1. Poskytněte dostatečné množství testovacích kelímků AIA-PACK B12 pro počet vzorků, které mají být analyzovány. 2. Vložte vzorky pacienta podle pokynů v uživatelském manuálu a pokračujte v analýze. Poznámka: AIA-PACK SAMPLE TREATMENT CUP bude vyžadován AIA Nex IA/AIA-21, AIA-600 II, AIA-1800 a AIA POZNÁMKY K POSTUPU 1. Lyofilizovaný substrát musí být zcela rozpuštěn. 2. Ligandové analýzy prováděné analyzátory systému Tosoh AIA vyžadují, aby laboratoř používala vodu označenou Společností amerických patologů třídou I nebo podle NCCLS typem I. Voda musí být testována nejméně jednou měsíčně a neměla by osahovat částicovou hmotu včetně bakterií. ph vody by mělo být také pravidelně testováno. Další informace naleznete v dokumentu NCCLS Příprava a testování reagenční vody v klinické laboratoři, dokument NCCLS C3-A3, svazek 11, č. 13, původně odsouhlaseném jako směrnice NCCLS v říjnu Vyskytne-li se vzorek obsahující koncentraci vitamínu B12 vyšší, než je horní hranice rozsahu testu, tedy pg/ml, musíte tento vzorek naředit AIA-PACK B12 SAMPLE DILUTING SOLUTION a opět provést analýzu podle postupu analýzy. Doporučené ředění pro vzorky obsahující koncentraci vyšší než pg/ml je 1:10. Je však žádoucí takové ředění vzorků, aby byl odečet naředěného vzorku mezi 250 a 1500 pg/ml. Faktor ředění je nutné zadat do softwaru. Další informace o ředění vzorků naleznete v uživatelském manuálu systému Tosoh AIA V analyzátorech systémů TOSOH AIA mohou být současně uloženy dvě různé kalibrační křivky pro každý analyt. Tak mohou být v rámci téhož cyklu použity dvě různé šarže testovacích kelímků AIA-PACK B Pokud nejsou specifikace analýzy pro tento test připraveny na softwaru systému, musí být tyto specifikace zadány pod kódem testu 18 pro AIA-1200 a AIA-600; kódem testu 018 pro AIA Nex IA/AIA-21, AIA-600 II, AIA-1800 a AIA VÝPOČET VÝSLEDKŮ Analyzátory systémů Tosoh AIA provádějí všechny operace manipulací se vzorky a činidly automaticky. Analyzátory systému Tosoh AIA odečítají míru fluorescence generovanou reakcí a automaticky ji převádějí na koncentraci vitamínu B12 v pg/ml. U vzorků vyžadujících ředění provedou systémy AIA Nex IA/AIA-21, AIA-600 II, AIA-1800 a AIA-2000 automaticky ředění a vypočtou výsledky, pokud byly faktory ředění zadány do softwaru. Faktory ředění faktory mohou být zadány do testového souboru nebo mohou být při zpracování vzorku zvoleny předem definované faktory ředění. AIA-1200 vypočte konečné výsledky, pokud se faktory ředění zadají do software před provedením testu zředěných vzorků. Pro AIA-600 musí být konečné výsledky vypočteny ručně vynásobením výsledků hlášených přístrojem faktorem ředění. Například: Získaný výsledek: 300 pg/ml Provedené ředění: x 10 (1 část séra plus 9 částí AIA-PACK B12 SAMPLE DILUTING SOLUTION) Vypočtený konečný výsledek = 300 x 10 = pg/ml VYHODNOCENÍ VÝSLEDKŮ Kontrola kvality Za účelem sledování a vyhodnocení přesnosti analytické výkonnosti se doporučuje v souladu s místními nařízeními analyzovat komerčně dostupné kontrolní vzorky. Minimální doporučená frekvence zpracování interního kontrolního materiálu je: Po kalibraci je spuštěna třístupňová analýza interních kontrolních vzorků, aby byla akceptována kalibrační křivka. Tři stupně kontrol jsou opakovány, když jsou provedeny určité servisní postupy (např. nastavení teploty, změna mechanismu pro odběr vzorků, údržba promývací sondy nebo nastavení či výměna žárovky detektoru). K ověření celkového výkonu analyzátorů systému Tosoh AIA by měly být po denní údržbě provedeny nejméně dva stupně kontroly. Je-li jedna nebo více hodnot kontrolního vzorku(ů) mimo přípustné rozmezí, bude před ohlášením výsledků pacientů nutné prošetřit validitu kalibrační křivky. Je nutno dodržovat standardní laboratorní postupy podle přísného zákonného orgánu, který na provoz laboratoře dohlíží. OMEZENÍ Pro diagnostické účely je nutné využívat výsledky tohoto testu společně s dalšími údaji (např. symptomy, výsledky dalších testů, klinickými dojmy, léčbou atd.). 8-12

5 Při používání soupravy AIA-PACK B12 je nejvyšší měřitelná koncentrace vitamínu B12 bez ředění pg/ml a nejnižší měřitelná koncentrace ve vzorku je 50 pg/ml (citlivost testu). Přestože přibližná hodnota koncentrace nejvyššího kalibračního roztoku je pg/ml, přesná koncentrace se může poněkud lišit. Specifikaci testu ASSAY RANGE HIGH (VYSOKÝ ROZSAH TESTU) je nutno definovat jako horní hranici rozsahu testu, pg/ml. Přestože hemolýza nemá významný vliv na test, mohou hemolyzované vzorky poukazovat na špatné zacházení se vzorkem před analýzou a výsledky je nutno interpretovat opatrně. Lipémie má na test nevýznamný vliv, kromě případu silné lipémie, kdy může dojít k prostorové interferenci. Vzorky pacientů, kteří užívají léky a/nebo u kterých probíhá léčba, mohou vykazovat chybné výsledky. Vzorky od pacientů, kteří dostali injekci fluoresceinu, který se používá ve fluresceinové angiografii fundu, mohou způsobit falešně zvýšené výsledky. Pokud existuje silné klinické podezření na subakutní kombinovanou degeneraci míchy nebo perniciózní anémii, je třeba provést test protilátek proti intrinsickém faktoru a opakovat analýzu vitamínu B12 na alternativním systému (7). Pro úplnější pochopení omezení tohoto postupu, si laskavě přečtěte kapitoly ODBĚR VZORKŮ A MANIPULACE S NIMI, VAROVÁNÍ A BEZPEČNOSTNÍ OPATŘENÍ, SKLADOVÁNÍ A STABILITA a POZNÁMKY K POSTUPU v této příbalové informaci. PŘEDPOKLÁDANÉ HODNOTY Každá laboratoř by měla stanovit referenční interval, který odpovídá charakteristikám testované populace. Podobně jako u všech diagnostických postupů musí být klinické výsledky interpretovány s ohledem na léky, které jsou současně podávány pacientovi (8). I. Referenční rozmezí Zde uvedený interval byl stanoven ve vzorcích séra od 106 zjevně zdravých jedinců v Evropě. Referenční rozmezí = pg/ml ( pmol/l) II. Konverzní faktory Koncentrace vitamínu B12 v této aplikaci jsou vyjádřeny v jednotkách pg/ml. Konverze na jednotky SI soustavy pmol/l může být provedena s použitím následující rovnice: pmol B12/l = pg B12/ml x 0,738 VÝKONNOSTNÍ CHARAKTERISTIKY PŘESNOST a. Výtěžnost: Tři sdružené vzorky séra byly nastříknuty třemi rozdílnými hladinami vitamínu B12 a testovány před a po nastříknutí. Sérum C , , ,3 b. Ředění: Tři vzorky séra obsahující vysoké koncentrace vitamínu B12 byly sériově naředěny pomocí AIA-PACK B12 SAMPLE DILUTING SOLUTION a analyzovány. Vzorek Faktor Předpokládaná Naměřená Procento ředění hodnota hodnota výtěžnosti (pg/ml) (pg/ml) (%) Sérum A žádný / ,3 5,0/ ,2 2,5/ ,5 Sérum B žádný 955 7,5/ ,1 5,0/ ,9 2,5/ ,3 Sérum C žádný ,5/ ,5 5,0/ ,6 2,5/ ,6 c. Srovnávací analýza (sérum): 97 vzorků od pacientů bylo analyzováno pomocí testu AIA-PACK B12 a další komerčně dostupného testu vitamínu B12. Statistika uvedená níže ukazuje dobrou korelaci mezi těmito dvěma metodami. PŘESNOST Směrnice 1,08 Průsečík s osou y 37,4 Korelační koeficient 0,934 Rozmezí vzorků Počet vzorků 97 a. Přesnost v rámci jednoho cyklu byla stanovena pomocí tří kontrolních vzorků v celkem 20 cyklech. V rámci jednoho cyklu byla provedena analýza jedné sady dvou paralelních vzorků na jeden kontrolní vzorek. Průměrná hodnota každých dvou paralelních vzorků byla použita k získání sdružené směrodatné odchylky (SO), která pak byla použita k výpočtu variačního koeficientu (CV). Vzorek Původní B12 Předpokládaná Naměřená Procento hodnota přidaný hodnota hodnota výtěžnosti (pg/ml) (pg/ml) (pg/ml) (pg/ml) (%) Sérum A , , ,0 Sérum B , , , Vzorek Průměr Sdružená směrodatná Variační (pg/ml) odchylka (pg/ml) koeficient (%) Sérum A ,3 2,5 Sérum B ,1 2,3 Sérum C ,4 1,

6 b. Celková přesnost byla stanovena paralelním stanovením tří kontrolních vzorků ve 20 samostatných cyklech. Průměrné hodnoty každého cyklu byly použity k výpočtu sdružené směrodatné odchylky (SD) a variačního koeficientu (CV). Vzorek Průměr Sdružená směrodatná Variační (pg/ml) odchylka (pg/ml) koeficient (%) Sérum A ,1 4,9 Sérum B ,0 3,5 Sérum C ,1 3,3 SPECIFICITA Zkřížená reaktivita byla testována u následujících látek. Zkřížená reaktivita (%) je procento látky, které bude identifikováno jako vitamín B12. Jsou-li ve vzorku přítomny tyto látky ve stejné koncentraci jako vitamín B12, bude konečný výsledek zvýšen o tato procenta. Látka Koncentrace Zkřížená reaktivita (%) Cobinamid 200 ng/ml < 1.0 SENZITIVITA Minimální detekovatelná koncentrace (MDC) vitamínu B12 byla stanovena jako 50 pg/ml. Minimální detekovatelná koncentrace (MDC) je definována jako taková koncentrace vitamínu B12, která odpovídá míře fluorescence, jež je dvě směrodatné odchylky od průměrné míry fluorescence dvaceti opakovaných stanovení pomocí AIA-PACK B12 CALIBRATOR (1). TOSOH CORPORATION 3-8-2, Shiba, Minato-ku TOKYO (JAPONSKO) Tel.: +81 (0) Fax: +81 (0) TOSOH EUROPE N.V. Transportstraat 4 B-3980 TESSENDERLO BELGIE Tel.: +32 (0) Fax: +32 (0) TOSOH BIOSCIENCE, INC Shoreline Court, Suite 101 South San Francisco, CA 94080, USA Telefon: Objem netto (po rekonstituci pro lyofilizovaný materiál) INTERFERENCE Interference je v rámci této studie definována jako výtěžnost přesahující 10 % známé koncentrace vzorku po přidání následujících látek k lidským vzorkům. Hemoglobin (až do 440 mg/dl), konjugovaný bilirubin (do 14 mg/dl) a volný bilirubin (do 16 mg/dl) neinterferují s testem. Lipémie, jak ukazuje přidaný triglycerid (do mg/dl), neinterferuje s testem. Protein indikovaný přidaným albuminem (do 2,5 g/dl) neinterferuje s testem. Kyselina askorbová (do 20 mg/dl) neinterferuje s testem. REFERENCE 1) Burtis, C. A. and Ashwood, E. R., eds., Tietz Textbook of Clinical Chemistry 2nd Ed, W. B. Saunders, p (1994). 2) Grasbeck, R., Biochemistry and Clinical Chemistry of Vitamin B12 Transport and the Related Diseases, Clin. Biochem. 17:2, p (1984). 3) Scott, J. and Weir, D., Folate/vitamin B12 inter-relationships. Essays Biochem, 28, p (1994). 4) Thompson, W. G., et al, Evaluation of Current Criteria Used to Measure Vitamin B12 levels. Am. J. Med. 82:2, p (1987). 5) Davidsohn, I. and Henry, J. B., eds., Todd-Sanford, Clinical Diagnosis By Laboratory Methods 15th Edition, W. B. Saunders, p (1974). 6) Goodman, K. I., and Salt, W. B. II, Vitamin B12 Deficiency. Important New Concepts in Recognition. Postgrad. Med., 88:3, pp , (1990). 7) Hamilton, M. S., Blackmore, S. and Lee, A., Possible cause of false normal B-12 assays. BMJ, 333, p (2006). 8) Young, D., Effects of Drugs on Clinical Laboratory Tests. 3rd Edition, Washington, DC, American Association for Clinical Chemistry Press (1990)