Název: Příprava kultivační půdy pro plísně

Transkript

1 Název: Příprava kultivační půdy pro plísně Autor: RNDr. Lenka Simonianová Název školy: Gymnázium Jana Nerudy, škola hl. města Prahy Předmět, mezipředmětové vztahy: biologie, chemie Ročník: 3. (1. ročník vyššího gymnázia) Tematický celek: Houby Výukové materiály Stručná anotace, časová dotace: Výukový materiál je zaměřen na přípravu tradiční kultivační půdy pro napěstování plísní, 1 vyučovací hodina + 20 minut + domácí úkol Tento výukový materiál byl vytvořen v rámci projektu Přírodní vědy prakticky a v souvislostech inovace výuky přírodovědných předmětů na Gymnáziu Jana Nerudy (číslo projektu CZ.2.17/3.1.00/36047) financovaného z Operačního programu Praha - Adaptabilita.

2 Pomůcky (seznam potřebného materiálu) Viz pracovní list Teorie Viz pracovní list Postup práce U postupu je třeba žáky vést k systematičnosti, přehlednosti a maximální možné čistotě v pracovním prostoru. Vhodná je spolupráce ve dvojici nebo trojici. Protokoly vypracují samostatně. Pozor při vaření půdy, agaru. Půdy je nutné sterilizovat v páře při C 30 minut, a to celkem třikrát = tři dny po sobě v Kochově hrnci nebo v autoklávu bez uzavřeného ventilu. ph půdy je možno snížit přidáním Al 2 (SO 4 ) 3 nebo zvýšit přidáním Na 2 CO 3. Horký agar je NUTNÉ intenzivně míchat, nebo se vytvoří hrudky. Při práci je nutné mít dva pracovní stoly pouze jeden ošetřit dezinfekčním prostředkem (POZOR NA OTEVŘENÝ OHEŇ!) a na tom se zvýšenou opatrností rozlévat půdu do misek poměrně rychle tuhne pak tvoří hrudky. Výsledky Proč jste používali různá dezinfektans před i po očkování? Proti kontaminaci. Diskuze Proč používáme jako základ tohoto kultivačního média půdní extrakt? Adaptace plísní na přírodní půdu obsah nejdůležitějších složek. Proč je složkou tohoto kultivačního média bengálská červeň? Inhibice bakterií. Na čem závisí ph kultivační půdy proč není hned jasné z chemického složení? Závisí na chemickém složení použité lesní/zahradní půdy. Proč musí být půda sterilizována? Projev vzorků. Proč a jak je nutné půdy uskladnit? V chladničce- pomalejší degradace, popis identifikace. Jaký materiál by se dal použít pro kultivaci plísní, kdybychom neměli k dispozici půdy? Chléb, kousky ovoce, zeleniny, tkaniny + vzorek plísně - vše vlhké a v uzavřených nádobách. Jaké chemické nádobí by se dalo na kultivaci plísní použít kromě Petriho misek? Zkumavky Další aplikace, možnosti, rozšíření, zajímavosti, Možnost úpravy množství půdy dle potřeby. Půdu je možné našikmit ve zkumavkách nebo použít jako sklíčkovou kultivační půdu. Zdroje: FASSATIOVÁ, O. Plísně a vláknité houby v technické mikrobiologii. Praha: SNTL, s.

3 Pracovní list pro žáka Příprava kultivační půdy pro plísně Laboratorní práce číslo:. Jméno Pomůcky Třída Datum Dvě pryžové chňapky, Kochův hrnec nebo autokláv, vařič, chladnička, vodní lázeň nebo topné hnízdo, mikrotenové sáčky, Petriho misky (počet dle potřeby) uvedené dávkování je na naplnění cca misek, odměrný válec 1000 ml, odměrný válec 50 ml, analytické váhy, předvážky, chemická lžička, starší kastrol s pokličkou 2000 ml, 4 Erlenmeyerovy baňky 500 ml, kádinka 250 ml, kádinka 100 ml, dlouhá skleněná tyčinka, popisovací tužka nebo fix na sklo, fotoaparát, líh, persteril nebo ajatin, buničitá vata, alobal, filtrační papíry, nálevka, 1 Erlenmeyerova baňka 1 000ml, 500g lesní (zahradní) půdy, 10g glukózy, 1g NaNO 3, 1 g KH 2 PO 4, 15 g agaru, bengálská červeň 0,07 g, ph indikační papírky. Teorie Plísně jsou nenahraditelní rozkladači destruenti v přírodě. Rozmnožovací tělíska plísní spory, úlomky mycelia, konidie se vyskytují naprosto běžně ve vzduchu, půdě i vodě. Všeobecně je známa mykorrhiza soužití s vyššími rostlinami, dále lichenismus (houba + řasa, nebo houba+ sinice), saprofytismus (růst na odumřelém organismu), saproparasitismus (přechodný typ mezi saprofytismem a parasitismem), parasitismus (růst na živém organismu). Mnoho plísní znehodnocuje svými metabolity zemědělské a poté potravinářské produkty a to především aflatoxiny. Plísně jsou původci alergií a nemocí zvířat, lidí i rostlin. Plísně se využívají např. na výrobu sýrů, trvanlivých salámů, fermentaci čajových lístků, tabáku, na výrobu organických kyselin, vitaminů, hormonů a dalších růstových látek, antibiotik a steroidních organických sloučenin. Plísně jsou běžně využívány na čištění odpadních vod, na výrobu řepné, obilné, kukuřičné siláže atd. Jak pro determinaci, tak pro řízenou produkci některých látek plísněmi jsou velmi důležité kultivační půdy, na kterých se izolanty pěstují. Ke kultivaci je možné použít Petriho misek, zkumavek nebo tzv. sklíčkových kultur. Postup práce 1) 500g lesní nebo zahradní půdy vařte v kastrolu v 900 ml vody 30 minut 2) Směs nechte vychladnout v otevřeném kastrolu 3) Pečlivě srovnejte a vyfotografujte všechny ingredience a nádoby potřebné pro přípravu kultivační půdy fotografie přiložíte k protokolu 4) Vychladlou směs přefiltrujte použijte filtrační papír, nálevku a Erlenmeyerovu baňku 1 000ml

4 5) Filtrát=půdní extrakt doplňte vodou na 700ml 6) 1g Na NO 3, 1g KH 2 PO 4 a 0,07 g bengálské červeně - rozpusťte v kádince ve 20ml vody 7) Vzniklý roztok přidejte k filtrátu 8) 15 g agaru rozmíchejte v kádince ve 250ml vody 9) Směs přiveďte k varu a vařte 1 minutu celou dobu pečlivě míchejte skleněnou tyčinkou 10) Vzniklou směs ještě horkou pomalu přidejte k filtrátu a RYCHLE rozmíchávejte dlouhou skleněnou tyčinkou 11) 10 gramů glukózy rozpusťte v kádince ve 30ml vody 12) Vzniklou směs přidejte a dobře promíchejte 13) Je-li třeba, upravte ph tak, aby bylo v rozmezí ) Směs rovnoměrně rozdělte do tří půllitrových Erlenmeyerových baněk 15) Z buničité vaty srolujte pevné zátky a baňky uzavřete 16) Z alobalu vytvořte na zátku a hrdlo baňky kryt a pokryjte 17) Baňky popište datum, typ půdy, jméno Vaše 18) Další postup přenechejte odborníkům půdy je třeba sterilizovat 19) Erlenmeyerovu baňku s půdou postavte do vodní lázně (topného hnízda) a zahřívejte až do změny konzistence v tekutinu 20) DRUHÝ PRACOVNÍ STŮL vydezinfikujte persterilem, ajatinem nebo alespoň lihem 21) Opatrně rozlévejte do P. misek tak, že nadzdvihnete víčko, nalijete cca 20ml půdy do misky a víčko ihned přiklopíte 22) Misky pečlivě popište datum, jméno, typ půdy 23) Po vychladnutí misky srovnejte do sloupce, naskládejte do mikroténového sáčku cca po PĚTI 24) Sáčky opět opatřete popisem a vše uskladněte v chladničce

5 Výsledky Půdní extrakt jsme vyrobili bez problémů s problémem Soli i bengálská červeň se ve vodě rozpouštěly. Při rozváření agaru Rozmíchání horkého agaru ve studené směsi bylo Glukóza se ve vodě rozpouštěla. ph bylo, proto jsme ho Sterilizace půd proběhla v. Rozlévání půdy do Petriho misek se. Diskuze Proč používáme jako základ tohoto kultivačního média půdní extrakt? Proč je složkou tohoto kultivačního média bengálská červeň? Na čem závisí ph kultivační půdy proč není hned jasné z chemického složení? Proč musí být půda sterilizována? Proč a jak je nutné půdy uskladnit? Proč jste používali různá dezinfektans? Jaký materiál by se dal použít pro kultivaci plísní, kdybychom neměli k dispozici půdy? Jaké chemické nádobí by se dalo na kultivaci plísní použít kromě Petriho misek? Váš vlastní dodatek