Stanovení í nízkomolekulárních látek

HTML
DOWNLOAD

Rozměr: px

Začít zobrazení ze stránky:

Download "Stanovení í nízkomolekulárních látek"

Kamila Pešková
před 9 lety
Počet zobrazení:

1 Stanovení í nízkomolekulárních látek Klasické metody chemicky Levné, jednoduché Enzymové metody Specifita,, selektivita Vysoká reakční rychlost (37 o) Mírné reakční podmínky T, p automatické analyzátory Využití enzymů jako analytických činidel End-point (reakce musí být rychlá a citlivá) S Kineticky (většinou metoda konstantního času) E P P Rovnice Michaelis-Mentenové Mentenové: v = [S]<<Km V.[S] Km [S] V.[S] v = Km = konst.[s] V vo V/2 [S] Možnost sledovs ledování enzymové aktivity Substrát či produkt dokážeme specificky detegovat přímo Pokud ne, následuje druhá.. (obvykle opět enzymová) detekční (indikátorová) reakce ejčastější indikátorové reakce 2 2 vzniká při reakcích oxidas (využívají k oxidaci 2 ) X Substrát 2 Produkt 2 2 PD 2 2 chromogen barevný produkt V klinické diagnostice nejčastěji 4-aminoantipyrin 4 subst.. fenol IIMI (červený, 555 nm) 1

[S]<<Km V.[S] Km [S] V.[S] v = Km = konst.[s] V vo V/2 [S] Možnost sledovs ledování enzymové aktivity Substrát či produkt dokážeme specificky detegovat přímo Pokud ne, následuje druhá.

2 Možnost sledovs ledování enzymové aktivity ejčastější indikátorové reakce Warburgův optický test 340 nm 2 AD, ADP P 2 2 P [] - 2 [] 2 substrát red AD oxidoreduktasa (dehydrogenasa) produkt ox AD 2. o-toluidinová metoda hemické metody 1. redukční vlastnosti monosacharidů modrá ( nm) Enzymové metody 3. hexokinasová 2 hexokinasa G6PD glc glc-6-p 6-P-glukonolakton ATP ADP AD(P) AD(P) 4. glukosadehydrogenasová glc GD glukonolakton AD AD 2

3 5. glukosaoxidasová 2 GD glc glukonolakton kys. glukonová amperometrie amperometrie PD chinonimin červený (555 nm) 4-aminoantipyrin subst. fenol Stanovení kyseliny močové hemická metoda 1. xidace kys.fosfowolframovou fosfowolframová modř (720 nm) Enzymová metoda Urátoxidasa (urikasa) 2. Ur 2 2 kys. močová U 2 alantoin A 293 Stanovení močoviny (BU) hemické metody 1. Reakce s diketony a jejich oximy bisacetylmonoxim diazin (žlutý) Dobře automatizovatelná,, ale fotosenzitibilní,, nestálá barva 3

fenol Stanovení kyseliny močové hemická metoda 1. xidace kys.

4 Stanovení močoviny (BU) Enzymové metody 2. ureasa urea ureasa a) Berthelot 4 l nitroprusid - indofenol (modrý) b) GD glutamátdehydrogenasa 4 α-ketoglutarát AD Glu AD c) ISE Stanovení bilirubinu 1. becná metoda: kopulace s diazotovanou kys. sulfanilovou R S 3 2 l R S 3 3S azopigment A azopigment B acidobazický indikátor - fialový (~ 560 nm) Malloy-Evelyn neutrální - červený - - modrý (~ 600 nm) Jendrassik-Gröf Stanovení bilirubinu 2. přímá spektrofotometrie bilirubinometr 454 nm ( 540 nm odečet et b2) neonatáln lní diagnostika 3. enzymaticky bilirubinoxidasa (oxidace na biliverdin nm) konjugovaný bilirubin přímý,, konjugovaný s kyselinou glukuronovou nekonjugovaný bilirubin nepřímý,, adsorbovaný na Alb, nutno solubilizovat: : kofein-benzo benzoát sodný (Jendrassik( Jendrassik- Gröf), DMS, močovina, ovina, Met kvantitativní stanovení celkového a konjugovaného bilirubinu -bilirubin kovalentně vázaný na Alb 4

becná metoda: kopulace s diazotovanou kys.

5 1. Jaffé Stanovení kreatininu červený nespecifická (interference askorbát, pyruvát, aceton, glc, kys. močová, proteiny, teplota, doba stanovení) separace kreatininu (Lloydovo činidlo, floridin, PL) kinetické stanovení 2. Enzymové metody kreatininamidohydrolasa kreatin kreatininiminohydrolasa -methylhydantoin 3 Stanovení cholesterolu hemické metody modifikace Liebermann-Burchardovy metody několikanásobná oxidace cholesterolu v prostřed edí Ac,, 2S4, Ac-anhydridu tvorba nenasycených vazeb cholestahexaen-sulfonov sulfonová kyselina zelenomodré zbarvení Enzymové metody (celkový, volný, esterifikovaný,, DL) cholesterolesterasa: he hol FFA cholesteroloxidasa: holesterol 2 holest-4-en-3-on 2 2 DL-cholesterol: srážení LDL a VLDL - heparin Mg 2 - kys. fosfowolframová Mg 2 5

Enzymové metody kreatininamidohydrolasa kreatin kreatininiminohydrolasa -methylhydantoin 3 Stanovení cholesterolu hemické metody modifikace Liebermann-Burchardovy metody několikanásobná oxidace

Podobné dokumenty

Analyzátor pro 400 vzorků/h

Analyzátor pro 400 vzorků/h Vydání = Leden 2016 83 400 Automatický analyzátor BA 400 včetně ISE (Na, K, Cl, Li) 862 400 1 043 504 Další specifikace na vyžádání 83 400 Automatický analyzátor BA 400 bez