Návod a protokol k praktickému cvičení z toxikologie

Transkript

1 Datum:. Jméno a kroužek: Návod a protokol k praktickému cvičení z toxikologie Úloa 1 CR-screening tečkovacími reakcemi Reagencie: 1) Marquisovo činidlo (ke 4 ml formaldeydu se přidá 96 ml koncentrované kyseliny sírové p.a.) (žíravina) 2) p-dimetylaminobenzaldeyd v HCl, p-dmab (1 g p-dimetylaminobenzaldeydu v 5 ml koncentrované kyseliny clorovodíkové p.a. a přidá se 95 ml 96 % etanolu) (žíravina) 3) síran ceričitý Ce(S 4 ) 2, (1 g ve 100 ml kyseliny sírová c=1 mol/l) 4) konc. kyselina dusičná ředěná 1:1 (žíravina) 5) clorid železitý (5 g cloridu železitéo se rozpustí v 95 ml destilované vody) 6) etanolový roztok u u kyseliny salicylové u tioridazinu u u u Pracovní postup a) Desku Silufolu rozdělíme tužkou na 9 pruů a 6 sloupců, které očíslujeme. Do středu každéo políčka vyznačíme kroužek o průměru asi 0,5 cm. Do vyznačenýc kroužků na desce naneseme v 2. pruu do sloupce 5µl pipetou roztok u, ve 3. pruu roztok u, ve 4. pruu roztok kys. salicylové, v 5. pruu roztok u, v 6.pruu tioridazinu, v 7. pruu u, v 8. pruu u a v 9. pruu u (viz scéma). Poté, co jsou skvrny zcela sucé, přikapáváme na skvrny pomocí automatické pipety v uvedeném pořadí 5 10 µl činidel: k tečkám v 1. sloupci se přidá kyselina sírová k tečkám ve 2. sloupci se přidá Marquisovo činidlo k tečkám ve 3. sloupci se přidá p-dimetylaminobenzaldeyd v HCl (p-dmab) k tečkám ve 4. sloupci se přidá síran ceričitý k tečkám v 5. sloupci se přidá kyselina dusičná k tečkám v 6. sloupci se přidá clorid železitý Do prvnío pruu nanášíme pouze příslušné činidlo. 1

2 1. sloupec 2. sloupec 3. sloupec 4. sloupec 5. sloupec 6. sloupec 1.pru 2.pru 3.pru 4.pru 5.pru 6.pru 7.pru 8.pru 9.pru tioridazin tioridazin tioridazin tioridazin tioridazin tioridazin H 2 S 4 Marquisovo síran clorid p-dmab HN činidlo ceričitý 3 železitý b) Vznik barevnýc skvrn se pozoruje v dopadajícím světle, zabarvení na tečce se porovnává se zabarvením samotnéo činidla nakápnutéo v prvním pruu (některá činidla jsou sama o sobě barevná). Další odnocení provádíme pod UV lampou při 254 nm. Barevné reakce zaznamenejte do tabulky a porovnejte s očekávanými zbarveními uvedenými v tabulce, která bude k dispozici. Plegomazin Nikotin Kys. salicylová Prokain Tioridazin Kodein xazepam Nitrazepam H 2S 4 Marquis p-dmab Ce(S 4) 2 HN 3 FeCl 3 UV fluorescence Za pomoci obr. 3 zařaďte testovaná léčiva do třídy barevnýc reakcí. 2

3 Úloa 2 Tenkovrstevná cromatografie vybranýc látek TLC cromatografii látek budeme demonstrovat na některýc léčivec ze skupiny psycofarmak (např. deriváty fenotiazinů, benzodiazepinů aj.), které se používají při léčbě některýc závažnýc psyciatrickýc onemocnění. Plegomazin a tioridazin patří mezi neuroleptika, tj. léky, které ovlivňují řady přenašečů v CNS a používají se k léčbě psycotickc stavů a neklidů. Prokain je zástupcem anestetik. Do podobné skupiny patří i další látky, odvozené od alkaloidů koky. Kodein je antitusikum a analgetikum, příbuzné opiovým alkaloidům. xazepam a patří mezi sedativa benzodiazepinovéo typu. Zolpidem je ypnotikum drué generace. Reagencie: 1) etanolové extrakty tioridazinu u zolpidemu u u u 2) etylacetát 3) amoniak koncentrovaný 250 g/kg 4) etanol 5) benzen 6) Marquisovo činidlo (ke 4 ml formaldeydu se přidá 96 ml koncentrované kyseliny sírové) (žíravina) 7) etanolový roztok extraktu neznáméo vzorku 8) p-dimetylaminobenzaldeyd v HCl, p-dmab (1 g p-dimetylaminobenzaldeydu v 5 ml koncentrované kyseliny clorovodíkové p.a. a přidá se 95 ml 96 % etanolu) (žíravina) Pracovní postup: a) Do 2 cromatografickýc komor připravíme následující směsi o složení: A: 36 ml etylacetátu, 2 ml etanolu a 2 ml amoniaku. B: 37 ml benzenu a 3 ml etylacetátu. Cromatografické komory přiklopíme a směsi promícáme, necáme asi 15 minut sytit. b) Na 2 desky SILUFLU si označíme 7 bodů pro nanášku vzorků. Měly by být vzdálené asi 1,5 cm od dolnío okraje desky. Do prvníc tří bodů nanášíme automatickou pipetou 5 10 µl standardníc roztoků (tioridazin, a zolpidem), do čtvrtéo bodu etanolový roztok extraktu neznáméo vzorku, do zbývajícíc bodů standardní roztoky u, u a u. Starty osušíme fénem. c) Jednu desku vložíme do cromatografické komory s připravenou mobilní fází A, přiklopíme a necáme vyvíjet, druou desku vložíme do cromatografické komory s připravenou mobilní fází B, přiklopíme a necáme vyvíjet. 3

4 d) Když mobilní fáze dospějí v obou komorác asi 1,5 cm od ornío okraje, desky vyjmeme z komor a označíme čela cromatogramů. Prolédneme je pod UV lampou. Pokud uvidíme fluoreskující skvrny, označíme je. K barevné detekci skvrn se ještě lece zavllé desky rovnoměrně postříkají Marquisovým činidlem. Při postřiku dbejte zvýšené opatrnosti, neboť obsauje koncentrovanou kyselinu sírovou. Po osušení fénem se cromatogramy vyodnotí. bě desky se ještě na závěr postříkají p-dimetylaminobenzaldeydovým činidlem a osuší. Vyodnotí se ještě další vzniklé barevné skvrny Zakreslete scéma cromatogramu a po změření vzdáleností start-čelo rozpouštědla a startstřed skvrny pro jednotlivé skvrny vypočtěte odnoty R f. Zodnoťte nález v neznámém vzorku. Úloa 3 Průkaz etanolu reakcí s dicromanem draselným Reagencie: 1) dicroman draselný 0,3 g/l 2) koncentrovaná kyselina sírová (Pozor žíravina!) 3) etanol Pracovní postup: Asi k 0,5 ml roztoku K 2 Cr 2 7 přidáme stejný objem etanolu a pak opatrně přikápneme 5 6 kapek kyseliny sírové (ocrana očí štítem). Roztok po 1 2 minutác zezelená. Reakční směs po vyodnocení reakce vylévejte do nádob určenýc pro sběr nebezpečnéo odpadu. Popište změnu zbarvení a výsledek vysvětlete. 4

5 Úloa 4 Stanovení koncentrace etanolu v krvi plynovou cromatografií vyodnocení záznamu analýzy.. Pracovní postup: V grafickém záznamu, který obdržíte od asistenta, změřte výšky vrcolů etanolu a vnitřnío standardu (isopropanolu) jak v neznámém vzorku, tak ve standardním roztoku. Ukázka záznamu: ste stvs vze vzvs c vz c e výška vrcolu etanolu ve standardním roztoku výška vrcolu vnitřnío standardu ve standardním roztoku výška vrcolu etanolu v neznámém vzorku výška vrcolu vnitřnío standardu v nezná mém vzorku koncentrace etanolu v neznámém vzorku koncentrace etanolu ve standardním roztoku v g/kg 5

6 Koncentraci etanolu v neznámém vzorku vypočtěte podle vzorce, do kteréo se dosazuje vzájemný poměr výšek vrcolů vnitřnío standardu a etanolu v analyzovaném vzorku i ve standardu. c vz ( g kg) = vze vzvs stvs c k ste st k koeficient pro plnou krev, moč k = 1,0 pro emolytické sérum k = 1,1 pro sérum k = 1,2 Vyodnocení: 6

7 Úloa 5 Demonstrace decovéo testeru alkoolu ALCSCENT DA-8000 Poznámka k bodu 1.,baterie jsou již vloženy, nasadí se pouze náustek. Výsledek testu: 7