Méně časté otázky týkající se přípravy a kontroly SPECT radiofarmak

Transkript

1 Méně časté otázky týkající se přípravy a kontroly SPECT radiofarmak Jiří Štěpán KNM FN Brno a LF MU Inovační kurz Radiofarmaka, Praha, IPVZ

2 Úvod Terminologie Techneciová radiofarmaka vliv kvality eluátu Možnost ředění připravených radiofarmak Použití a validace alternativní analytické metody stanovení radiochemické čistoty radiofarmaka Správné měření aktivity radionuklidů vyzařujících nízkoenergetické rentgenové záření Závěr Úvod 2

3 Nejčastěji používanými SPECT radiofarmaky jsou techneciová radiofarmaka, která se běžně připravují smícháním složek kitu s injekčním roztokem radionuklidu Při jejich přípravě a kontrole se občas vyskytnou méně běžné situace, které je potřeba správně řešit pro zajištění kvality připravených radiofarmak Úvod 3

4 Radiofarmakum (RF, radiofarmaceutický přípravek): jakýkoliv léčivý přípravek obsahující jeden nebo více radionuklidů (RN, radioaktivních izotopů) včleněných za účelem dosažení léčivého účinku Kit pro přípravu RF: jakýkoliv přípravek určený k rekonstituci a/nebo spojení s RNy za účelem přípravy RF (obvykle před jeho podáním) SPECT: angl. zkr. jednofotonová emisní počítačová tomografie single photon emission CT, diagnostická zobrazovací metoda nukleární medicíny SPECT radiofarmakum: radiofarmakum obsahující zářič gama, využívá se k jednofotonovému planárnímu a SPECT zobrazení Terminologie 4

5 PET: angl. zkr. pozitronová emisní tomografie positron emission tomography, diagnostická zobrazovací metoda nukleární medicíny PET radiofarmakum: radiofarmakum obsahující pozitronový zářič, využívá se k dvoufotonovému koincidenčnímu PET zobrazení Terminologie 5

6 Může typ generátoru ovlivnit kvalitu eluátu? Jsou 2 typy 99 Mo- Tc generátorů generátory s mokrou kolonou a generátory se suchou kolonou dodávané různými výrobci U generátorů se suchou kolonou (DRYTEC) se zbytek fyziologického roztoku z kolony odsaje evakuovanou lahvičkou bez přidávání dalšího fyziologického roztoku nebo vakuum v evakuované lahvičce stačí na odstranění veškerého fyziologického roztoku z kolony Techneciová radiofarmaka vliv kvality eluátu 6

7 Návrh proč používat generátor se suchou kolonou vyplývá z faktu, že záření může způsobit radiolýzu vody v mokrém generátoru (UltraTechneKow FM, ELUMATIC III, TEKCIS), což má za následek vznik peroxidu vodíku (H 2 O 2 ) a hydroperoxidového radikálu (HOO. ), což jsou oxidanty a pokud jsou přítomny v Tc-eluátu, mohou narušovat chemii technecia (které je potřeba z oxidačního stavu VII redukovat do nižšího, aby bylo schopné vazby v chelátech) Techneciová radiofarmaka vliv kvality eluátu 7

8 Radiolýza vody bude pravděpodobně větší v generátorech o vysoké aktivitě. V generátorech s mokrou kolonou může za extrémně chladného počasí eventuálně zamrznout i fyziologický roztok v hadičkách, což zabraňuje eluci až do rozmrazení Techneciová radiofarmaka vliv kvality eluátu 8

9 Jak ovlivňuje doba od předchozí eluce kvalitu eluátu? Jak 99 Mo (13 %) tak Tc se přeměňuje na 99 Tc, proto jsou v Tc-eluátu přítomny Tc i 99 Tc V průběhu času od předchozí eluce stoupá zastoupení 99 Tc, které konkuruje Tc a může snižovat účinnosti značení radiofarmaceutických kitů a tím dosaženou radiochemickou čistotu Obsah Tc v eluátu je dán molárním zlomkem (F) Tc dle vztahu: F Techneciová radiofarmaka vliv kvality eluátu N N Tc Tc N 99Tc 9

10 Dny po eluci Obsah Tc v Tc-eluátu Hodiny po eluci ,7346 0,6254 0,5366 0,4641 0,4044 0,3550 0, ,2791 0,2498 0,2249 0,2035 0,1851 0,1691 0,1551 0, ,1319 0,1222 0,1136 0,1059 0,0990 0,0927 0,0869 0, ,0770 0,0726 0,0686 0,0649 0,0614 0,0583 0,0553 0, ,0500 0,0476 0,0454 0,0432 0,0413 0,0394 0,0377 0,0360 Je vidět, že už 24 h po eluci je v eluátu z celkového počtu atomů Tc pouze 27,9 % Tc a zbylých 72,1 % je 99 Tc Techneciová radiofarmaka vliv kvality eluátu 10

11 Tato situace se stává kritickou pro značení některých kitů pro přípravu radiofarmaka, když jsou generátory nechány bez eluce přes víkend a potom poprvé eluovány v pondělí nebo v úterý U některých radiofarmaceutických přípravků jsou limity na obsah Tc v eluátu nepřímo specifikovány v tom, že jenom v určitých časech eluované Tc se může použít Konkrétně: u RF Tc-HMPAO pro zobrazení mozku, nesmí být eluát starší než 4 h (Ceretec, Neuroscan) nebo 2 h (Brain-spect) a také musí být získán z generátoru, který byl eluován nejméně 1 za posledních 24 h Techneciová radiofarmaka vliv kvality eluátu 11

12 Je možno ke značení kitů použít eluát z generátoru DRYTEC neeluovaného 7 dní? Ve studii uveřejněné v Nucl Med Commun 2011, 32: zjistili, že tento eluát nelze použít pro přípravu Tcmakrosalbu, bezpečně lze připravovat: Tc-nanokoloid albuminu, Tc-MDP, Tc-MAG 3, Tc-DTPA, Tc- MIBI, Tc-DMSA, Tc-tetrofosmin Na našem pracovišti ověřeno ještě pro Tc-HIBIDA V RF kitech je oproti Tc velký nadbytek ostatních reaktantů (chelátoru a chloridu cínatého) Techneciová radiofarmaka vliv kvality eluátu 12

13 N Teoretický základ jak je to např. v kitu TechneScan DTPA? Reaktanty: max. 11,1 GBq Na[ Tc]O 4, M r = 185,99 20,5 mg DTPA, M r = 393,35 0,21 mg SnCl 2, M r = 189,61 F = 0,01799 (pro týden neeluovaný generátor) Tc celkový 1, aktivita (Bq) Tc 0, F 16 molekul technecistanu jak s 9 11,1.10 0, ,01799 Tc, tak s 99 Tc Techneciová radiofarmaka vliv kvality eluátu 13

14 N Teoretický základ jak je to např. v kitu TechneScan DTPA? m. N 20, A 19 DTPA 3, Mr.(g/mol) 393,35 Stechiometrie tvorby chelátu N(DTPA) = N(Na[ Tc]O 4 ).6, násobný nadbytek chelátoru DTPA oproti [ Tc]technecistanu, tvorba chelátu zajištěna Techneciová radiofarmaka vliv kvality eluátu 14

15 N Teoretický základ jak je to např. v kitu TechneScan DTPA? 0, , , SnCl2 6, Stechiometrie redukce Tc(VII) na Tc (IV) 2 N(SnCl 2 ) = 3 N(Na[ Tc]O 4 ) 6, molekul SnCl 2 ~ 4, molekul Na[ Tc]O 4 23násobný nadbytek SnCl 2 oproti [ Tc]technecistanu, redukce [ Tc]technecistanu zajištěna Techneciová radiofarmaka vliv kvality eluátu 15

16 N Jak je to s použitím eluátu z 2 dny neeluovaného generátoru DRYTEC při značení kitu Stabilised Ceretec? Reaktanty: max. 1,11 GBq Na[ Tc]O 4, M r = 185,99 0,5 mg HMPAO, M r = 272,39 7,6 µg SnCl 2. 2H 2 O, M r = 225,63 F = 0,1319 (pro 2 dny neeluovaný generátor) Tc celkový 2, aktivita (Bq) Tc 0, F 14 molekul technecistanu jak s 9 1, , ,1319 Tc, tak s 99 Tc Techneciová radiofarmaka vliv kvality eluátu 16

17 N Jak je to s použitím eluátu z 2 dny neeluovaného generátoru DRYTEC při značení kitu Stabilised Ceretec? 0, , , HMPAO 1, Stechiometrie tvorby chelátu N(DTPA) = N(Na[ Tc]O 4 ) 4214násobný nadbytek chelátoru HMPAO oproti [ Tc]technecistanu, tvorba chelátu zajištěna Techneciová radiofarmaka vliv kvality eluátu 17

18 N Jak je to s použitím eluátu z 2 dny neeluovaného generátoru DRYTEC při značení kitu Stabilised Ceretec? 7, , , SnCl2 2, Stechiometrie redukce Tc(VII) na Tc (V) N(SnCl 2 ) = N(Na[ Tc]O 4 ) 77násobný nadbytek SnCl 2 oproti [ Tc]technecistanu, redukce [ Tc]technecistanu zajištěna Na našem pracovišti ověřena bezpečná příprava (radiochemická čistota 93,61 %, volný technecistan 1,42 %), nicméně je nutno dodržovat pokyny v SPC Techneciová radiofarmaka vliv kvality eluátu 18

19 Je možno připravená, popřípadě HVLP radiofarmaka dodatečně ředit? Někdy je z důvodu proveditelnosti aplikace nutno naředit radiofarmakum na větší objem, ale data v SPC, o která je možno se opřít bývají vzácná Pokud se nepostupuje přesně podle instrukcí výrobce, leží odpovědnost za účinnost produktu na připravující laboratoři a radiochemická čistota nového zředěného produktu by měla být stanovena Techneciová radiofarmaka připravená z kitů mají většinou pevně stanovený objem v rozmezí 1 10 ml, kde byl produkt důkladně testován na stabilitu Možnost ředění připravených radiofarmak 19

20 Je možno připravená, popřípadě HVLP radiofarmaka dodatečně ředit? Všechny kity jsou připravovány s 0,9% NaCl. Dle Radiopharmacy Handbook je běžná praxe ředění 0,9% NaCl na objem nejméně dvojnásobný než je maximální popsaný objem v SPC Možnost ředění připravených radiofarmak 20

21 Tabulka ředění radiofarmak dle SPC (dle 6.2. Inkompatibility, 12. Návod pro přípravu radiofarmak) Radiofarmakum Ředidlo Výsledný maximální Poznámka objem Tc-BRAIN-SPECT KIT - - uvedena možnost ředění inj. Na[ Tc]O 4 0,9% NaCl Tc-CERETEC 0,9% NaCl (použit neuvedeno uvedena možnost ředění inj. Tc-STABILISED CERETEC pro přípravu) Na[ Tc]O 4 0,9% NaCl Tc-NEUROSCAN 0,9% NaCl (použit 8 ml (dle materiálu uvedena možnost ředění inj. pro přípravu) výrobce) Na[ Tc]O 4 0,9% NaCl Tc-NEUROLITE - - nepodávat v 1 inj. s dalšími injectabilis Možnost ředění připravených radiofarmak 21

22 Tabulka ředění radiofarmak dle SPC (dle 6.2. Inkompatibility, 12. Návod pro přípravu radiofarmak) Radiofarmakum Ředidlo Výsledný maximální Poznámka objem Tc-TECHNESCAN HDP 0,9% NaCl neuvedeno - (přednostně) Tc-6-MDP KIT Tc-8-MDP KIT - - uvedena možnost ředění inj. Na[ Tc]O 4 0,9% NaCl Tc-DTPA KIT - - uvedena možnost ředění inj. Na[ Tc]O 4 0,9% NaCl Tc-TECHNESCAN DTPA Možnost ředění připravených radiofarmak 22

23 Tabulka ředění radiofarmak dle SPC (dle 6.2. Inkompatibility, 12. Návod pro přípravu radiofarmak) Radiofarmakum Ředidlo Výsledný maximální Poznámka objem Tc-TECHNESCAN DMSA - - nesmí být mísen s jinými léčivými přípravky s výjimkou uvedených (žádné nejsou) Tc-MAG3 KIT - - nedoporučuje se ředění přípravku, možnost ředění inj. Na[ Tc]O 4 0,9% NaCl Tc-TECHNESCAN MAG3 0,9% NaCl neuvedeno nemá být aplikován spolu s jinými léčivy, možnost ředění inj. Na[ Tc]O 4 0,9% NaCl Možnost ředění připravených radiofarmak 23

24 Tabulka ředění radiofarmak dle SPC (dle 6.2. Inkompatibility, 12. Návod pro přípravu radiofarmak) Radiofarmakum Ředidlo Výsledný maximální Poznámka objem Tc-TRIMETYL-HIDA KIT - - uvedena možnost ředění inj. Na[ Tc]O 4 0,9% NaCl Tc-ROTOP-EHIDA 20 MG 0,9% NaCl 6 ml - KIT PRO RADIOFARMAKUM Tc-HIBIDA KIT - - uvedena možnost ředění inj. Na[ Tc]O 4 0,9% NaCl Možnost ředění připravených radiofarmak 24

25 Tabulka ředění radiofarmak dle SPC (dle 6.2. Inkompatibility, 12. Návod pro přípravu radiofarmak) Radiofarmakum Ředidlo Výsledný maximální Poznámka objem Tc-NANO-ALBUMON KIT Tc-NANOCOLL - - nesmí být mísen s jinými léčivými přípravky s výjimkou uvedených (žádné nejsou) Tc-SENTI-SCINT KIT Tc-TECHNESCAN DTPA/AEROSOL Možnost ředění připravených radiofarmak 25

26 Tabulka ředění radiofarmak dle SPC (dle 6.2. Inkompatibility, 12. Návod pro přípravu radiofarmak) Radiofarmakum Ředidlo Výsledný maximální objem Poznámka Tc-MACRO-ALBUMON KIT - - nesmí být smíchán nebo zředěn s jinými látkami než doporučenými výrobcem (žádné nejsou) Tc-MACROTEC - - nesmí být smíchán s jinými léčivými přípravky s výjimkou uvedených (žádné nejsou) Tc-TECHNESCAN LYOMAA Možnost ředění připravených radiofarmak 26

27 Tabulka ředění radiofarmak dle SPC (dle 6.2. Inkompatibility, 12. Návod pro přípravu radiofarmak) Radiofarmakum Ředidlo Výsledný maximální Poznámka objem Tc-CARDIO-SPECT KIT 0,9% NaCl 8 ml - Tc-STAMICIS - - nesmí být mísen s jinými léčivými přípravky s výjimkou uvedených (žádné nejsou) Tc-TECHNESCAN SESTAMIBI 0,9% NaCl neuvedeno nesmí být mísen s jinými léčivými přípravky s výjimkou uvedených (0,9% NaCl) Možnost ředění připravených radiofarmak 27

28 Tabulka ředění radiofarmak dle SPC (dle 6.2. Inkompatibility, 12. Návod pro přípravu radiofarmak) Radiofarmakum Ředidlo Výsledný maximální Poznámka objem Tc-MYOVIEW - - nesmí být smíchán s jinými léčivými přípravky s výjimkou uvedených (žádné nejsou), možnost ředění inj. Na[ Tc]O 4 0,9% NaCl Tc-TECHNESCAN PYP 0,9% NaCl 6 ml (jediný objem) objem pro přípravu neradioaktivního roztoku difosforečnanu, při značení Tc není třeba ředit, objem 1-10 ml Možnost ředění připravených radiofarmak 28

29 Tabulka ředění radiofarmak dle SPC (dle 6.2. Inkompatibility, 12. Návod pro přípravu radiofarmak) Radiofarmakum Ředidlo Výsledný maximální Poznámka objem Tc-ULTRATAG RBC - - inkompatibility se neuplatňují, suspenze značených erytrocytů se ředí 0,9% NaCl pouze při stanovení účinnosti značení Možnost ředění připravených radiofarmak 29

30 Tabulka ředění radiofarmak dle SPC (dle 6.2. Inkompatibility, 12. Návod pro přípravu radiofarmak) Radiofarmakum Ředidlo Výsledný maximální Poznámka objem Tc-LEUCO-SCINT KIT plazma daného 5 ml - pacienta bez buněk Tc-SCINTIMUN 1 MG KIT PRO PŘÍPRAVU RADIOFARMAKA Možnost ředění připravených radiofarmak 0,9% NaCl neuvedeno nesmí být mísen s jinými léčivými přípravky s výjimkou uvedených (0,9% NaCl) Tc-LEUKOSCAN 0,9% NaCl neuvedeno nesmí být mísen s jinými léčivými přípravky s výjimkou uvedených (0,9% NaCl) 30

31 Tabulka ředění radiofarmak dle SPC (dle 6.2. Inkompatibility, 12. Návod pro přípravu radiofarmak) Radiofarmakum Ředidlo Výsledný maximální Poznámka objem DATSCAN 74MBQ/ML - - inkompatibility se neuplatňují INDIUM (111 IN) DTPA - - nedoporučuje se ředit jen v zájmu zabezpečení sterility a apyrogenity VIZAMYL 400 MBQ/ML - - nesmí být mísen s jinými léčivými přípravky AMYVID 1900 MBQ/ML - - nesmí být mísen s jinými léčivými přípravky Možnost ředění připravených radiofarmak 31

32 Tabulka ředění radiofarmak dle SPC (dle 6.2. Inkompatibility, 12. Návod pro přípravu radiofarmak) Radiofarmakum Ředidlo Výsledný maximální Poznámka objem NEURACEQ 300 MBQ/ML - - nesmí být mísen s jinými léčivými přípravky [18F]FLUORID SODNÝ 0,9% NaCl nebo Aq. pro inj. neuvedeno - HIPPURAN(I123)INJECTION - - nesmí být mísen nebo aplikován s jinými léčivými přípravky nebo sloučeninami SODIUM CHROMATE(51CR) SOLUTION - - inkompatibility nejsou známy Možnost ředění připravených radiofarmak 32

33 Tabulka ředění radiofarmak dle SPC (dle 6.2. Inkompatibility, 12. Návod pro přípravu radiofarmak) Radiofarmakum Ředidlo Výsledný maximální Poznámka objem KRYPTOSCAN - - inkompatibility se neuplatňují RAIONUKLIDOVÝ - - inkompatibility nejsou známy GENERÁTOR 81RB/81MKR [123I] JODID SODNÝ RADIOMEDIC - - žádné inkompatibility nejsou známy SODIUM IODIDE(I-123)INJ. - - inkompatibility se neuplatňují Možnost ředění připravených radiofarmak 33

34 Tabulka ředění radiofarmak dle SPC (dle 6.2. Inkompatibility, 12. Návod pro přípravu radiofarmak) Radiofarmakum Ředidlo Výsledný maximální Poznámka objem NATRIUMJODID (131I) - - inkompatibility nejsou známy DIAGNOSTIKKAPSELN THALLOUS (TL-201) - - inkompatibility nejsou známy CHLORIDE INJECTION INDIUM(111IN)CHLORIDE INDIUM(IN111) OXINATE GALLIUM(GA67)CITRATE INJECTION - - inkompatibility nejsou známy Možnost ředění připravených radiofarmak 34

35 Tabulka ředění radiofarmak dle SPC (dle 6.2. Inkompatibility, 12. Návod pro přípravu radiofarmak) Radiofarmakum Ředidlo Výsledný maximální Poznámka objem OCTREOSCAN 0,9% NaCl 4,1 ml inkompatibility nejsou známy MIBG(I123)INJECTION Aq. pro inj. nebo 5% Glc neuvedeno inkompatibilita s roztoky NaCl (18F)FDG-FR 0,9% NaCl neuvedeno nesmí být smíchán s jinými léčivými přípravky s výjimkou uvedených (0,9% NaCl) 2-[18F]-FDG Možnost ředění připravených radiofarmak 0,9% NaCl nebo Aq. pro inj. neuvedeno nesmí být smíchán s žádnými dalšími léčivými přípravky s výjimkou uvedených (0,9% NaCl, Aq. pro inj.) 35

36 Tabulka ředění radiofarmak dle SPC (dle 6.2. Inkompatibility, 12. Návod pro přípravu radiofarmak) Radiofarmakum Ředidlo Výsledný maximální Poznámka objem EFDEGE 1 GBQ/ML, INJEKČNÍ ROZTOK 0,9% NaCl neuvedeno nesmí být míchán s jinými léčivými přípravky s výjimkou uvedených (0,9% NaCl) FLUDEOXYGLUCOSE (18F) BIONT MBQ/ML INJEKČNÍ ROZTOK Možnost ředění připravených radiofarmak 0,9% NaCl neuvedeno nesmí být míchán s jinými léčivými přípravky s výjimkou uvedených (0,9% NaCl) FLUDEOXYGLUKOSA INJ. 0,9% NaCl neuvedeno nesmí být mísen s jinými léčivými přípravky s výjimkou 0,9% NaCl 36

37 Tabulka ředění radiofarmak dle SPC (dle 6.2. Inkompatibility, 12. Návod pro přípravu radiofarmak) Radiofarmakum Ředidlo Výsledný maximální Poznámka objem GLUCOROS 0,9% NaCl neuvedeno nesmí být mísen s jinými léčivými přípravky s výjimkou uvedených (0,9% NaCl) STERIPET 250 MBQ/ML 0,9% NaCl neuvedeno nesmí být mísen s jinými léčivými přípravky s výjimkou uvedených (0,9% NaCl) IASOCHOLINE 1 GBQ/ML Aq. pro inj. nebo 0,9% NaCl 1:1 1:40 nesmí být mísen s jinými léčivými přípravky s výjimkou uvedených (Aq. Pro inj., 0,9% NaCl) Možnost ředění připravených radiofarmak 37

38 Tabulka ředění radiofarmak dle SPC (dle 6.2. Inkompatibility, 12. Návod pro přípravu radiofarmak) Radiofarmakum Ředidlo Výsledný maximální Poznámka objem YTTRIUM (90Y) COLLOID SUSPENSION FOR LOCAL INJECTION - - nesmí být míchán s jinými léčivými přípravky s výjimkou uvedených (žádné nejsou) ERMM nesmí být míchán s jinými léčivými přípravky s výjimkou uvedených (žádné nejsou) RE-186-MM nesmí být míchán s jinými léčivými přípravky s výjimkou uvedených (žádné nejsou) Možnost ředění připravených radiofarmak 38

39 Tabulka ředění radiofarmak dle SPC (dle 6.2. Inkompatibility, 12. Návod pro přípravu radiofarmak) Radiofarmakum Ředidlo Výsledný maximální Poznámka objem METASTRON - - nesmí být mísen s jinými léčivými přípravky 153SM-EDTMP INJ. - - nesmí být ředěn QUADRAMET - - nesmí být mísen s žádnými dalšími léčivými přípravky CUPRYMINA 925 MBQ/ML RADIONUKLIDOVÝ PREKURZOR Možnost ředění připravených radiofarmak 39

40 Tabulka ředění radiofarmak dle SPC (dle 6.2. Inkompatibility, 12. Návod pro přípravu radiofarmak) Radiofarmakum Ředidlo Výsledný maximální Poznámka objem YTRACIS YTTRIGA 0,1-300 GBQ PREKURZOR RADIOFARMAKA CAPISTON - - inkompatibility se neuplatňují SODIUM IODIDE (131I) INJECTION nesmí být mísen s žádnými dalšími léčivými přípravky Možnost ředění připravených radiofarmak 40

41 Tabulka ředění radiofarmak dle SPC (dle 6.2. Inkompatibility, 12. Návod pro přípravu radiofarmak) Radiofarmakum Ředidlo Výsledný maximální Poznámka objem SODIUM IODIDE (I 131) INJECTION - - inkompatibility nejsou známy SODIUM IODIDE(I131)CAPS. - - inkompatibility nejsou známy T THERACAP nesmí být míchán s jinými léčivými přípravky M-IODBENZYLGUANIDIN (131I) ZUR THERAPIE nesmí být mísen s dalšími léčivými přípravky Možnost ředění připravených radiofarmak 41

42 Tabulka ředění radiofarmak dle SPC (dle 6.2. Inkompatibility, 12. Návod pro přípravu radiofarmak) Radiofarmakum Ředidlo Výsledný maximální Poznámka objem ZEVALIN 1,6 MG/ML - - nesmí být mísen s jinými léčivými přípravky s výjimkou uvedených (všechno složky kitu, připravuje vždy 10 ml) XOFIGO - - nesmí být mísen s jinými léčivými přípravky Možnost ředění připravených radiofarmak 42

43 Je možno použít neoficiální metodu stanovení radiochemické čistoty připravovaných radiofarmak? Dle vyjádření SÚKLu ano, ale metodu je třeba validovat (ověřit její platnost) SÚKL požaduje validaci přesnosti metody vyjádřenou jako relativní směrodatná odchylka stanovená minimálně ze 6 nezávislých analýz vzorků, provedených kompletním postupem, počínaje přípravou vzorků Oficiální metody stanovení radiochemické čistoty jsou uvedeny v SPC, v ČL a v Přehledu kontrolních metod pro kity dodávané firmou KC SOLID, spol. s r. o. včetně alternativních provedení Použití a validace alternativní analytické metody stanovení radiochemické čistoty radiofarmaka 43

44 Kde je možno najít postup validace? Dále uvedený postup testuje nejen přesnost, ale také správnost a opakovatelnost Požadavky na validaci analytických postupů vycházejí ze směrnice Eudralex Volume 3 Validation of Analytical Procedures: Text and Methodology (ICH Q2) CPMP/ICH/381/95 - ICH Q2 (R1), dostupné na internetu: < Validační program pro statistické zpracování analytických dat je dostupný na internetu: < Použití a validace alternativní analytické metody stanovení radiochemické čistoty radiofarmaka 44

45 Kolik stanovení je nutno provést? Dle směrnice ICH Q2 se pro stanovení správnosti provede minimálně 9 nezávislých stanovení na minimálně 3 koncentračních úrovních pokrývajících vymezený rozsah (např. 3 koncentrace, každá ve 3 replikátech provedených celkovým analytickým postupem, tj.3 koncentrace (ze 3 příprav radiofarmaka) analyzované v triplikátech) Pro stanovení opakovatelnosti stačí případně minimálně 6 stanovení na 100% testované koncentraci Použití a validace alternativní analytické metody stanovení radiochemické čistoty radiofarmaka 45

46 Validační parametry Přesnost metody je definována jako údaj o míře těsnosti shody mezi vzájemně nezávislými výsledky zkoušek za předem specifikovaných podmínek Přesnost závisí pouze na rozdělení náhodných chyb a nemá vztah k pravé hodnotě Vyjadřuje se jako výběrová směrodatná odchylka výsledků analýz. Je-li směrodatná odchylka závislá na obsahu, uvádí se relativní směrodatná odchylka (dříve variační koeficient) v % nebo jako desetinné číslo Použití a validace alternativní analytické metody stanovení radiochemické čistoty radiofarmaka 46

47 Validační parametry Správnost metody je definována jako těsnost shody hodnoty získané nově zaváděnou metodou s hodnotou skutečnou (referenční) získanou oficiální metodou. Jedná se tedy o statisticky významnou rozdílnost mezi získanou a skutečnou hodnotou Hodnocením správnosti metody je tedy určit přítomnost či nepřítomnost soustavné složky chyby otestováním velikosti rozdílu mezi hodnotou "nalezeno" a "dáno". Přesnost metody je stanovena určením výtěžnosti metody (recovery) a provedením jednovýběrového t-testu Použití a validace alternativní analytické metody stanovení radiochemické čistoty radiofarmaka 47

48 Validační parametry Opakovatelnost metody je definována jako těsnost shody mezi navzájem nezávislými výsledky zkoušek získanými za podmínek opakovatelnosti (podmínky, kdy navzájem nezávislé výsledky zkoušek se získají opakovaným použitím téže zkušební metody na identickém materiálu, v téže laboratoři, týmž pracovníkem za použití týchž přístrojů a zařízení, během krátkého časového rozmezí) Ukazatel opakovatelnosti r je hodnota, pod níž bude s pravděpodobností 95 % ležet absolutní hodnota rozdílu dvou výsledků zkoušek provedených za podmínek opakovatelnosti Použití a validace alternativní analytické metody stanovení radiochemické čistoty radiofarmaka 48

49 Použití a validace alternativní analytické metody stanovení radiochemické čistoty radiofarmaka Potřebné vztahy - přesnost 49 N i x i N 1 1 x aritmetický průměr, N počet paralelních stanovení, výsledek jednoho stanovení, s výběrová směrodatná odchylka x x i N i N i i i N i i N i i x N x N Nx x N x x N s x s s r r r s s % 100 s r relativní směrodatná odchylka, (s r ) % relativní směrodatná odchylka v procentech

50 Potřebné vztahy - správnost R e x X R e Re % 100 x průměrná hodnota získaná nově zaváděnou metodou, X přijatá referenční hodnota (stanovená oficiální metodou), R e výtěžnost, (R e ) % výtěžnost v procentech X x t s f N 1 N t testovací kritérium t jednovýběrového t-testu, N počet paralelních stanovení, s výběrová směrodatná odchylka, f počet stupňů volnosti t rozdělení Použití a validace alternativní analytické metody stanovení radiochemické čistoty radiofarmaka 50

51 Potřebné vztahy - správnost Vypočtená hodnota t se porovná s kritickou hodnotou t rozdělení (Studentova rozdělení) pro předem stanovenou hladinu významnosti α. Jestliže t t(α;f), pak rozdíl je statisticky významný a je prokázána soustavná chyba, jeli t t(α;f), pak se liší průměr pouze o náhodnou chybu Pro hladinu významnosti α = 0,05 a počet stupňů volnosti f = 2 (tři paralelní stanovení) t(α=0,05;f=2) = 4,30 Podmínkou provedení testu je s r 3 % pro každou koncentrační úroveň, průměrná výtěžnost R e musí být 95 % až 105 % pro každou koncentrační úroveň Použití a validace alternativní analytické metody stanovení radiochemické čistoty radiofarmaka 51

52 Potřebné vztahy opakovatelnost (ukazatel opakovatelnosti r) R max q s R max dovolená diference n paralelních stanovení (maximální rozpětí výsledků vysvětlitelné přítomností náhodných chyb), q tabelovaná hodnota Studentizovaného rozpětí, pro hladinu významnosti α = 0,05 a počet paralelních stanovení n = 2 je q = 2,8, s výběrová směrodatná odchylka Použití a validace alternativní analytické metody stanovení radiochemické čistoty radiofarmaka 52

53 Příklad použití Nahrazení pomalé TLC radiochromatografie [ Tc]- sestamibi na vrstvě Al 2 O 3 vyvíjené v ethanolu > 95% nebo extrakce vytřepáváním do chloroformu papírovou chromatografií v ethylacetátu J Nucl Med Technol 2000; 28: Použití a validace alternativní analytické metody stanovení radiochemické čistoty radiofarmaka 53

54 O které radionuklidy se jedná? Jedná se o radionuklidy přeměňované elektronovým záchytem, které se po pohlcení elektronu nejčastěji z K- slupky (nejbližší k jádru) zbavují nadbytečné energie vyzářením fotonového záření γ. Současně však dochází k zaplňování díry po elektronu přechodem elektronu z vyšší slupky, např. L a vyzáření energie přechodu ve formě charakteristického rentgenového záření Vzniklé nízkoenergetické rentgenové záření je výrazně různě zeslabováno v různých materiálech sklo (inj. lahvička), plast (inj. stříkačka) a působí potíže při správném měření aktivity v ionizační komoře Správné měření aktivity radionuklidů vyzařujících nízkoenergetické rentgenové záření 54

55 O které radionuklidy se jedná? Jedná se o cyklotronové radionuklidy s nadbytkem protonů v jádře oproti stabilnímu stavu, např. 67 Ga, 111 In, 123 I, 201 Tl, 81 Rb (mateřský radionuklid v generátoru 81m Kr) Obdobně se musí řešit měření aktivity radionuklidů emitujících vysokoenergetické záření beta (ionizační komora detekuje vzniklé brzdné záření) Správné měření aktivity radionuklidů vyzařujících nízkoenergetické rentgenové záření 55

56 Jak to v měřičích aplikované aktivity s ionizační komorou funguje? kalibrač ní koef. RN proud v komoře (pa) aktivita RN (MBq) (ČMI) kalibrač ní konst. RN 5,0 kalibr.koef.co - 60 kalibr. koef. RN (AtomLab 500) Pro jeden radionuklid je třeba na přístroji nastavit více kalibračních konstant v závislosti na obalu (lahvička, stříkačka), ve kterém je radionuklid měřen Správné měření aktivity radionuklidů vyzařujících nízkoenergetické rentgenové záření 56

57 Příklad: měření aktivity indium-111. Chyby jsou způsobené absorpcí nízkoenergetických fotonů Velice záleží na materiálu obalu a tloušťce jeho stěny Nejvíce zastoupené fotonové záření γ 171 kev (90,2 %), 245 kev (94,0 %) rtg kev (82,3 %) Správné měření aktivity radionuklidů vyzařujících nízkoenergetické rentgenové záření 57

58 Kalibrace přístroje AtomLab 500 kalibračním zdrojem 111 In. Použit kalibrační zdroj 120,0 MBq k 18: (dle protokolu měření) Měření v 12: (originální lahvička A ([ 111 In]Cl 3 ) Octreoscanu ) Vypočtená aktivita: 206,88 MBq Nastavená kalibrační konstanta: 15,4 (aby měř. aktivita Měřená aktivita: 207 MBq odpovídala vypočtené) Správné měření aktivity radionuklidů vyzařujících nízkoenergetické rentgenové záření 58

59 Kalibrace přístroje AtomLab 500 kalibračním zdrojem 111 In. Měření v 12: (zbytek v originální lahvičce A po odtažení roztoku do 3 ml stříkačky B Braun) Nastavená kalibrační konstanta: 15,4 Měřená aktivita: 7,22 MBq Měření v 12: (odtažený roztok z lahvičky do 3 ml stříkačky B Braun) Nastavená kalibrační konstanta: 15,4 Měřená aktivita: 305,0 MBq Správné měření aktivity radionuklidů vyzařujících nízkoenergetické rentgenové záření 59

60 Kalibrace přístroje AtomLab 500 kalibračním zdrojem 111 In. Všechny naměřené hodnoty byly přepočteny k 12:46 a byl proveden výpočet kalibrační konstanty injekční stříkačky A. lahv. - Azbytek v lahv. 206,59-7,22 CDV DV 15,4 10,0610,1 Astřík. 305,10 DV = Dial Value (kalibrační konstanta - lahvičky) CDV = Container Dial Value (kalibrační konstanta obalu - stříkačky) Volba radionuklidu na přístroji In111(v) - měření v originální lahvičce (DV = 15,4) In111(s) - měření v 3 ml stříkačce B Braun (CDV = 10,1) Správné měření aktivity radionuklidů vyzařujících nízkoenergetické rentgenové záření 60

61 Byly probrány méně časté otázky týkající se přípravy a kontroly SPECT radiofarmak Probíraných témat by se nabízelo více, ale byla vybrána témata, se kterými se pracovník připravující radiofarmaka může setkat v každodenní praxi a nejsou v učebnicích až tak systematicky shrnuta Osoba odpovědná za přípravu radiofarmak (atestovaný VŠ farmaceut nebo VŠ NLZP) by měla být schopna na uvedené otázky kvalifikovaně odpovědět Závěr 61