Laboratórna diagnostika bakteriálnych infekcií centrálneho nervového systému. Autor: L.Liščáková, spoluautor: Z.Šuláková

Rozměr: px

Začít zobrazení ze stránky:

Download "Laboratórna diagnostika bakteriálnych infekcií centrálneho nervového systému. Autor: L.Liščáková, spoluautor: Z.Šuláková"

Alena Musilová
před 6 lety
Počet zobrazení:

1 Laboratórna diagnostika bakteriálnych infekcií centrálneho nervového systému. Autor: L.Liščáková, spoluautor: Z.Šuláková

2 Mikrobiálne ochorenia CNS patria medzi najťažšie,vzhľadom na to,že môžu priamo súvisieť s ohrozením života človeka. Biologický materiál od pacienta s podozrením na takéto ochorenie, považujeme za jeden z najzávažnejších. Nutnosť dodržať správny odber,transport,rýchlosť spracovania, zabezpečiť širokú škálu priamej laboratórnej diagnostiky s ohľadom na rýchlosť a citlivosť metodiky. Bakteriologické vyšetrenie doplniť ostatnými lab.vyšetreniami/biochémia,hematológia,patológia,serológia/.

3 Infekčné postihnutie centrálneho nerv.systému spôsobujú: -Mikroorganizmy spôsobujúce infekciu priamo v NS. -Infekcie primárne lokalizované v inom mieste, ale krvným obehom sa dostali do NS. Materiál vhodný na bakteriologické vyšetrenie: 1.Likvor 2.Hemokultúry 3.Materiály od tiaľ, kde bola primárna infekcia/výter hrdla,rany,stredného ucha,katéter,plodová voda,a.i./

4 Pri podozrení na meningitídu,encefalitídu /u pacienta pozorujeme prudké bolesti hlavy,vracanie,bradykardia, poruchy vedomia,precitlivelosť na vonkajšie podnety,stuhnutie svalstva atď./lekár odoberá na vyšetrenie vzorku likvoru. Odber mozgovomiechového moku: Lekár, prísne asepticky,zavedie do mozgovomiechového kanála lumbálnou punkciou punkčnú ihlu. Nechá samovolne odkvapkať do sterilnej skúmavky vzorku cca 5 ml/nesmie sa pod tlakom vyťahovať do striekačky/. Vzorka sa musí ihneď doručiť do laboratória, ak to nie je možné-ideálne do 1 hod.a dovtedy ponechať pri izbovej teplote a v tme/nie do chladu!!!/

5 Vyšetrenie likvoru Centrifugácia 10min. - max otáčok sterilne ( ihlou a striekačkou ) zosať supernatant a v sterilnej sklenenej skúmavke varíme 5 min. na AGLUTINÁCIU Sediment- sterilnou novou klučkou (alebo ihlou a striekačkou) očkujeme do označeného poľa na miske: KA CO 2 A CO 2 VL bez ATB Anaerotest Tio Sklíčko ( nové ) zafarbíme podľa Grama Sabourod HF CO 2 Po pomnožení: 1. KA CO 2, 2. A CO 2, 3. Sabourod, 4. HF CO 2 Schéma spracovania likvoru

6 výhody nevýhody mikroskopia kultivácia Rýchla,hodnotí druh leukocytov,morfolog. baktérií G-, G+, môžu byť aj odumreté Pôdy dodajú živiny,atmosféru,teplotu,pomnožujú,typický rast kolónií, Záchyt až u dostatočného počtu baktérií Vyrastú len životaschopné 12,24,48 hod. Latexová aglutinácia -dôkaz antigénu Spracovanie vzorky na OKM Rýchla,naviazanie na protilátku,môže byť aj odumretá baktéria Obmedzený počet antigénov daný výrobcom setu, poisťovňa platí len časť výkonu

7 MIKROSKOPIA -materiál sterilne vykvapkáme na podložné sklíčko, -fixujeme,farbíme podľa Grama, -pomocou imerzného oleja pozeráme pri zväčšení -G+ baktérie-tmavo fialové -G- baktérie ružové Obrázky elektrónovej mikroskopie

8 Farbenie podľa Grama...elektrónový mikroskop

9 Farbenie podľa Grama elektrónová mikroskopia

10 Pozitívny nález v likvore od pac.oaim, február 2014 G+ diplokoky-streptococcus pneumoniae,

11 Kultivácia KA-všetky rastovo nenáročné baktérie A/s rastovým obohacovadlom a CO2/ -rastovo náročné,mikroaerofilné baktérie SAB-kvasinky a plesne VL-anaeróbne baktérie HF-Haemophilus TIO-pomnoženie aeróbnych a anaeróbnych baktérií pri pozitívnom raste nasleduje bioch.dourčenie baktérie a stanovenie ATB.citlivosti

12 Pozitívny nález v likvore od pac.oaim, február 2014 G+ diplokoky-streptococcus pneumoniae

13 Sérotypizácia bakteriálneho kmeňa

na čiastočky latexu je naviazaná protilátka proti

prebehne reakcia ak je vo vzorke prítomný daný

aglutinácia/vyčírenie,zrazeninky/ antigén nie je

14 na čiastočky latexu je naviazaná protilátka proti hľadanej baktérii po pridaní vzorky likvoru prebehne reakcia ak je vo vzorke prítomný daný antigén príde k naviazaniu na protilátku a vzniká aglutinácia/vyčírenie,zrazeninky/ antigén nie je prítomný-neprichádza k naviazaniu/suspenzia ostáva zakalená/ Aglutinácia

15 Najčastejší pôvodcovia hnisavých, purulentných meningitíd: 1.Neisseria meningitidis A,B,C,Y,W135:výrazné meningeálne príznaky,krvácanie do kože-petechie,zvyčajne po rinofaryngitíde,často spolu so septikémiou, sezonnosť na jar,mladí ľudia,epidemický výskyt typ A a B. (G- diplokoky kávové zrna, pôda A,AB,CO2,48 hod.,aglut.pozit.) 2.Haemophilus influenzae b:deti do 5 rokov po och.dýchacích ciest, stred.ucha,následok môže byť hydrocefalus,strata sluchu,poruchy motoriky a intelektu-v súčastnosti očkovanie. (G-drobné tyčky,hf pôda,pozit. aglutinácia ) 3.Streptococcus pneumoniae:najčastejšie u starých ľudí s pneumóniou,stuhnutie šije,horúčka,poruchy mentality a.i (G+diplokoky lancetovité,ka,viridujúce,pozit.aglutinácia)

16 4.Streptococcus agalactiae :kolonizuje respiračný,tráviaci trakt a sliznicu pošvy,perinatálne infekcie,novorodenec počas pôrodu prehltne sekréty od matky,tiež po narodení ako nozokomiálna infekcia(g+koky v retiazkach,ka beta hemolýza,pozit.aglutinácia.) 5.Escherichia coli K1:novorodenecké meningitídy, ako HS B. (G- tyčky,pôdy MC,KA,pozit.aglutinácia) 6.Listéria monocytogenes :novorodenci ale i všetky vekové kategórie s oslabenou imunitou,prenos potravinami mlieko,bryndza,mäso,kontakt s domácimi zvieratami,vonkajšie prostredie (G- tyčky, polymorfonukleáry,pôda KA,aglut.nie je k dispozícii) -Staphylococcus aureus,st.epidermidis:metastatické inf.z ložiska (diabetes m.,umelé náhrady,pooperačné rany,úrazy,) -Pseudomonas aeruginosa,acinetobacter,klebsiella pneumoniae,- metastatická inf.,invázia bakt.do krvi,imunitne oslabení pacienti, OAIM-intubovaní,i nozokomialne inf.

Okrem typických purulentných (hnisavých)- bakteriálnych

Ich klinické príznaky sú často veľmi podobné, ale ich

laboratoriu(kultivačne,mikroskopicky, aglutinačne) takmer

17 Okrem typických purulentných (hnisavých)- bakteriálnych meningitíd môžu byť zápaly CNS tzv.aseptické. Ich klinické príznaky sú často veľmi podobné, ale ich pôvodcov v bakteriologickom laboratoriu(kultivačne,mikroskopicky, aglutinačne) takmer nemožno stanoviť. Pri ich diagnostike je nutná spolupráca daľších laboratórnych zložiek. Pôdy ostali sterilné!? Záver

18 Etiológia asept.meningitíd 1.Vírusy:Coxackie a ECHO, V.parotitídy,HPV1a2,Varicella zoster,ebv,flavivírusy,togavírus bunyavírusy,koronavírusy,adenovírusy,vírus chrípky,hiv 2.Baktérie:Borelia burgdorferi Mycobactérium tuberkulosis, Mykoplazma pneumoniae, Leptospira 3.Huby:Candida,Cryptococcus, Nocardia,Histoplasma 4.Protozoá:Toxoplazmóza,Trichinelóza,amébiáza Intoxikácie,systémové och. Priama diagnostika-pcr /cca 0,5-1ml vzory likvoru/ Herpetické vírusy, Varicella zoster, EBV, CMV, H.simplex Nepriama diagnostikastanovenie protilátok /vzorka likvoru+séra/ Borélia burgdorferi Materiál preposiela na Úrad verejného zdravotníctva alebo do HPL laboratória OKM úsek serológie

19 Ďakujem za pozornosť

Podobné dokumenty

kolónie veľkosť farba tvar hemolýza S. aureus S. epidermidis

kolónie veľkosť farba tvar hemolýza S. aureus S. epidermidis Praktické cvičenie č. 2.: STAFYLOKOKY 1. Pripravte fixovaný preparát z čistej kultúry S.aureus (KA), zafarbite podľa Grama, mikroskopujte. 2. Pripravte fixovaný preparát zo zmiešanej kultúry S.aureus a