METODIKA ODBĚRU A ZPRACOVÁNÍ VZORKŮ FYTOBENTOSU STOJATÝCH VOD

Podobné dokumenty
METODIKA ODBĚRU A ZPRACOVÁNÍ VZORKŮ FYTOBENTOSU TEKOUCÍCH VOD

Výběr substrátu při odběru fytobentosu

Problematika vzorkování povrchových vod ke koupání

Malý test znalostí odběrových skupin - fotografie

Malý test znalostí odběrových skupin - fotografie a živé vzorky

Odběr vzorků podzemních vod. ČSN EN ISO (757051) Jakost vod odběr vzorků část 17: Návod pro odběr. vzorků podzemních vod

NORMY PRO BIOLOGICKÉ METODY

Vysoká škola báňská Technická univerzita Ostrava Hornicko-geologická fakulta Institut environmentálního inţenýrství. Ing.

č. 98/2011 Sb. VYHLÁŠKA ze dne 30. března 2011 o způsobu hodnocení stavu útvarů povrchových vod, způsobu hodnocení ekologického potenciálu silně

PROBLEMATIKA VZORKOVÁNÍ PŘÍRODNÍCH KOUPACÍCH VOD

Stanovení mikroskopického obrazu ve vodě Petr Pumann

Vyhláška č. 154/2016 Sb.

METODIKA ODBĚRU A ZPRACOVÁNÍ VZORKŮ FYTOPLANKTONU TEKOUCÍCH VOD

Revize normy ČSN Kvalita vod Stanovení planktonních sinic

Malý test na znalosti odběrových skupin ODPOVĚDI. PT#V/6/2010 Odběry vzorků koupaliště ve volné přírodě

1 Popis vzorku. 2 Detekční limit vyšetření. 3 Časová náročnost. 4 Zpracování vzorku. 4.1 Množství vzorku. 4.2 Odběr vzorků

4 ROKY HYDROBIOLOGA NA MOSTECKÉM JEZEŘE

PRACOVNÍ LIST EVVO - VODA

Jevy a organismy pozorovatelné pouhým okem

Kvantitativní stanovení abiosestonu

Implementace Water Framework Directive v České republice Směrnice 2000/60 ES, kterou se stanoví rámec Společenství pro oblast vodní politiky

Barbora Chattová. Fylogeneze a diverzita řas a hub: 5. přednáška Charophyta

Konference Vodárenská biologie 2019, února 2019, Interhotel Olympik, Praha

REVITALIZACE RYBNÍKŮ ŽELEZNÁ STUDNIČKA BIOLOGICKOU CESTOU 2016

HODNOCENÍ EKOLOGICKÉHO STAVU A POTENCIÁLU TEKOUCÍCH VOD V ČESKÉ REPUBLICE APLIKACE AKTUÁLNÍCH METOD HODNOCENÍ

STŘEDNÍ ODBORNÁ ŠKOLA a STŘEDNÍ ODBORNÉ UČILIŠTĚ, Česká Lípa, 28. října 2707, příspěvková organizace

L01KA Fytocenologický výzkum

Monitoring stavu vody ve vodní nádrži v parku Pod Plachtami

Tlumení rozvoje sinic a řas pomocí mikrobiálněenzymatického

1 Popis vzorku. 2 Detekční limit vyšetření. 3 Časová náročnost. 4 Zpracování vzorku. 4.1 Množství vzorku. 4.2 Odběr vzorků

Sdružení Flos Aquae SLEDOVÁNÍ ZMĚN V MNOŽSTVÍ A SLOŽENÍ FYTOPLANKTONNÍCH SPOLEČENSTEV V BRNĚNSKÉ ÚDOLNÍ NÁDRŽI V OBDOBÍ KVĚTEN ŘÍJEN 2010

obchodní oddělení Nitranská 418, Liberec , /fax ,

Malý test znalostí odběrových skupin - fotografie

Řasy. Zvyšování kvality výuky v přírodních a technických oblastech CZ.1.07/1.128/ (laboratorní práce) Označení: EU-Inovace-Př-6-04

Stanovení abiosestonu

N Laboratoř hydrobiologie a mikrobiologie

METODIKA ODBĚRU A ZPRACOVÁNÍ VZORKŮ MAKROFYT STOJATÝCH VOD

Metody kvantifikace fytoplanktonu a revidovaná ČSN

Botanika bezcévných rostlin 1. praktické cvičení

N Laboratoř hydrobiologie a mikrobiologie

Tok ř.km záznam č. č. úseku/profilu: Dne : hod Délka úseku (m): Provedl

Projekt Pospolu. Stanovení jílovitých podílů podle ČSN EN A1 Zkouška s methylenovou modří

Několik metodických poznámek ke stanovení chlorofylu-a pomocí ČSN ISO 10260

13/sv. 8 (85/503/EHS) Tato směrnice je určena členským státům.

Popis úseku vodního toku z mapy. Vyšetřit polohu úseku vodního toku, zakreslit úsek do mapy a označit jej příslušným číslem. do (horní hranice)

) se ve vodě ihned rozpouští za tvorby amonných solí (iontová, disociovaná forma NH 4+ ). Vzájemný poměr obou forem závisí na ph a teplotě.

ODBĚR, PŘÍPRAVA, PŘEPRAVA A UCHOVÁVÁNÍ VZORKŮ

Botanika bezcévných rostlin pro učitele 1. praktické cvičení

Stanovení mikroskopického obrazu ve vodě

NOVÉ NORMY PRO BIOLOGICKÉ METODY

kyslík ve vodě CO 2 (vápenato-)uhličitanová rovnováha alkalita

kyslík ve vodě CO 2 (vápenato-)uhličitanová rovnováha alkalita

Praktické cvičení č. 1.

Sada Životní prostředí UW400 Kat. číslo Stanovení obsahu kyslíku, nasycení kyslíkem a hodnoty BSK5

Biologické metody v technických normách. Ing. Lenka Fremrová HYDROPROJEKT CZ a.s.

LIKVIDACE SPLAŠKOVÝCH ODPADNÍCH VOD

Rozbor sedimentu z koupaliště Lhotka a návrh na další nakládání s vytěženou hmotou

sbírkové předměty: inv. č. XII 6131/1 2, dva motáky pplk. Mašína z konce června 1942

REVIZE ČSN KVALITA VOD BIOLOGICKÝ ROZBOR STANOVENÍ BIOSESTONU

Případové studie využití hydrobiologického auditu v plánech pro zajištění kvality pitné vody

NORMY PRO BIOLOGICKÝ ROZBOR VOD

Biologické metody v technických normách. Ing. Lenka Fremrová

VLHKOST A NASÁKAVOST STAVEBNÍCH MATERIÁLŮ. Stavební hmoty I Cvičení 7

Zvyšování kvality výuky v přírodních a technických oblastech CZ.1.07/1.1.28/ Analýza vody pomocí kufříkové sady AQUANAL EKOTEST

Rychlé screeningové metody hodnocení kvality vody a povrchů ve vodárenských provozech

NÁVOD PRO STANOVENÍ ŽIVOTASCHOPNÝCH MIKROORGANISMŮ V BIOAEROSOLECH MONITORING VNITŘNÍHO PROSTŘEDÍ V MATEŘSKÝCH ŠKOLKÁCH 2016

Problematika hodnocení výskytu sinic a fytoplanktonu

METALOGRAFIE I. 1. Úvod

AQUATEST a.s. Zkušební laboratoře. Co znamenají naměřené hodnoty v pitné vodě?

Katalog odběrových zařízení a vzorkovačů OCTOPUS Verze 11.1.

2) Připravte si 3 sady po šesti zkumavkách. Do všech zkumavek pipetujte 0.2 ml roztoku BAPNA o různé koncentraci podle tabulky.

Laboratorní pomůcky, chemické nádobí

Revidovaná norma ČSN Kvalita vod Biologický rozbor Stanovení abiosestonu

Katalog odběrových zařízení a vzorkovačů

Zdravotní ústav se sídlem v Pardubicích LAGUNA U BOHDALOVA

téma: Úvodní praktikum autor: Mgr. Michal Novák cíl praktika: Seznámit žáky s náplní praktika doba trvání: 2 místo: odborná učebna biologie

Vzorkování kapalin 1

SDS-PAGE elektroforéza

Můžeme věřit údajům o výskytu sinic v našich koupacích vodách?

Jednotné pracovní postupy zkoušení krmiv STANOVENÍ OBSAHU MĚDI, ŽELEZA, MANGANU A ZINKU METODOU FAAS

Tvorba trvalých mikroskopických preparátů

PŘIPRAVOVANÉ NORMY PRO BIOLOGICKÝ ROZBOR VOD

STANOVENÍ VODNÍHO POTENCIÁLU REFRAKTOMETRICKY

Protokol PT#V/5/2012 Stanovení mikroskopického obrazu v přírodních koupalištích, stanovení sinic a stanovení chlorofylu-a


ZHORŠENÍ JAKOSTI VODY V NÁDRŽI NOVÁ ŘÍŠE VODÁRENSKÁ BIOLOGIE 2017 RODAN GERIŠ, DUŠAN KOSOUR POVODÍ MORAVY, S.P.

Ing.Václav Šťastný. VZORKOVÁNÍ ODPADNÍCH VOD seminář Brno

METODIKA ODBĚRU A ZPRACOVÁNÍ VZORKŮ MAKROZOOBENTOSU Z NEBRODITELNÝCH TEKOUCÍCH VOD

Zpráva z algologického průzkumu PP Luží u Lovětína ( ), PP Králek (2007)

ROSTLINNÍ PREDÁTOŘI. Vliv eutrofizace na vodní svět. Co se vám bude hodit vědět


Spektrofotometrické stanovení fosforečnanů ve vodách

I N V E S T I C E D O R O Z V O J E V Z D Ě L Á V Á N Í LABORATORNÍ PRÁCE Č. 6 PRÁCE S PLYNY

TRVALÝ PREPARÁT. Zhotovení roztěru

Stanovení kvality vody pomocí kompaktní laboratoře Aquamerck

Rozvoj vzdělávání žáků karvinských základních škol v oblasti cizích jazyků Registrační číslo projektu: CZ.1.07/1.1.07/

VY_32_INOVACE_ / Prvoci Prvoci jednobuněční živočichové

Koprologické metody. Mgr. Radka Pecková MVDr. Ivona Foitová, Ph.D. MU, PřF, Oddělení botaniky a zoologie

Vysoká eutrofizační účinnost fosforu původem z odpadních vod v nádrži Lipno

S postupným nárůstem frekvence lokalit se zjevnou nadprodukcí (tzv. hypertrofie) přechází definice v devadesátých letech do podoby

Transkript:

METODIKA ODBĚRU A ZPRACOVÁNÍ VZORKŮ FYTOBENTOSU STOJATÝCH VOD P. Marvan, M. Kozáková Říjen 2006

1. ÚVOD 1.1 Princip metody V útvaru stojaté povrchové vody se provede výběr odběrových úseků, které charakterizují daný vodní útvar, a z vhodného podkladu (preference kameny) se odebere řasový nárost (epiliton). Odebírá se rovněž vzorek mikrofyt spontánně uvolněných (nebo odtržených) od podložky a volně plovoucích při hladině (pleuston). Vzorky se umístí do vzorkovnic a v chladu a temnu se transportují do laboratoře. Poté se provede mikroskopický rozbor, tj. determinace a kvantifikace stanovením kvantitativního zastoupení jednotlivých druhů řas pomocí odhadní stupnice, která druhy zařazuje do určitých intervalů na základě odhadu jejich abundance v mikroskopickém preparátu analyzovaného vzorku (Sládečková & Marvan 1978). Rozsivky se dodatečně determinují na základě zhotovení trvalých preparátů. Vzorky se konzervují roztokem formaldehydu do konečné 2-4% koncentrace (pokud tak nebylo učiněno hned po odběru) a archivují. 1.2 Terminologie 1.2.1 Terminologická poznámka V souladu s WFD se termín fytobentos používá pro označení souboru fototrofních mikrofyt osidlujících dno. V tomto pojetí se do pojmu nezahrnují vyšší vodní rostliny (makrofyta), které se podle některých jiných koncepcí rovněž pokládají za součást fytobentosu. Sporné postavení mezi oběma fototrofními složkami bentosu mají mechorosty a parožnatky. V této národní metodice se řadí k makrofytům. Naproti tomu se zde k mikrofytům počítají i velké (makroskopické) řasy (jako např. Cladophora, Spirogyra, Enteromorpha nebo Vaucheria ), které někteří jiní autoři řadí k makrofytům. Bentického původu jsou i při hladině se volně vznášející sinice a řasy, původně přirostlé k pevnému substrátu (v podobě epilitonu nebo epifytonu) nebo tvořící povlak na povrchu sedimentu (epipelon). Ve starší literatuře se pokládají za součást pleustonu (z řeckého πλεω = plout, πλευστικος = schopný plout). V novější literatuře se pro ně používá termín metafyton, který však není korektní. (Podle etymologie by mělo jít o soubor organismů žijících mezi (vyššími) rostlinami.) 1.2.2 Další odborné termíny: Epiliton: nárost na kamenech; vedle fototrofních organismů (sinic a řas) obsahuje i heterotrofní složku (např. bezbarvé bičíkovce, nálevníky, baktérie atd.). Není to tedy společenstvo ve fytocenologickém slova smyslu, ale biocenóza. Epifyton: nárost na jiném rostlinném organismu. V dalším textu se pod tímto termínem bude rozumět jen soubor organismů na vodních makrofytech, a to rostoucích buď submerzně nebo emerzně. Epipelon: nerost na povrchu jemných sedimentů Epipsamon: nerost na povrchu písčitých sedimentů Pleuston: viz výše Neuston: soubor organismů osidlujících povrchovou blanku vody. U větších vodních těles vystavených vlivu větru se vyskytuje velmi vzácně, naproti tomu v malých mělkých vodách za bezvětří může být neuston vytvořen jako okem patrná barevná blanka na hladině vody. V monitoringu ekologického stavu vody není zatím využití neustonu uvažováno. 2

2. ZÁKLADNÍ POMŮCKY 2.1 Terénní pomůcky o fotoaparát, o GPS přístroj, o gumové rukavice, nejlépe veterinární nebo chemické, které chrání ruku po loket a do kterých je možno použít textilní či kožené rukavice k ochraně proti chladu, o vodostálé fixy, grafitová tužka, propiska, psací podložka, o odběrové protokoly, o Hloubková měřící sonda pro měření teploty vody a kyslíku o Secchiho deska se značenými hloubkami, o rybářské holinky, o zubní kartáček, nůž, zabroušená lžíce nebo skalpel, pinzeta k odběru vzorků různých typů řasových nárostů, o mělká síťka (případně cedník) upevněná na tyči k odběru vzorků pleustonu, o plastová miska, o plastová lahvička (optimálně 100 ml) se šroubovacím uzávěrem, o hloubkoměr, o terénní přístroje pro analýzu vody (ph, O 2, teplota, vodivost), o chladicí box, o přepravky na vybavení. 2.2 Laboratorní pomůcky o mikroskop se zvětšením až 50-1000x, o pasteurova pipeta, o konzervační činidlo: formaldehyd, o oxidační činidlo (např. peroxid vodíku 30%), o mikroskopická podložní a krycí sklíčka, o zalévací médium např. Pleurax nebo Naphrax, o laboratorní kahan nebo elektrický vařič, o široké zkumavky, o determinační literatura. 3. VZORKOVÁNÍ 3.1 Vzorkovací období termíny odběrů Vzhledem k poměrně vysoké sezónní proměnlivosti se odběr vzorků provádí čtvrtletně, bez zimního odběru. Odběry vzorků se provádějí: v jarním období (duben polovina května) v letním období (červenec polovina srpna) v podzimním období (říjen polovina listopadu) 3.2 Postup při výběru odběrových úseků a podkladů k odběru vzorků Vzorky fytobentosu se odebírají jednak z pevného substrátu (nárost) a jednak jako vzorky plovoucích řasových a sinicových společenstev (pleustonu ve výše zmíněném slova smyslu). Vzorky jsou odebírány v rámci odběrových úseků. Je na zkušenosti odebírajícího, aby v rámci daného vodního útvaru stojaté povrchové vody vybral vhodný odběrový úsek či úseky. Tyto úseky se volí v blízkosti hráze a tak aby byly chráněny proti vlnobití. Vzorky se 3

neodebírají v blízkosti přítoku. Při výběru odběrových úseků je vhodné brát ohled rovněž na výskyt vhodného substrátu pro odběr vzorků. Odběrové úseky se jasně definují tak aby mohly být snadno nalezeny při dalších odběrech vzorků. Úseky je třeba řádně označit a jejich polohu zaměřit pomocí GPS. Poloha se vyznačí do mapy a popis odběrových úseků se zaznamená do odběrového protokolu. Pořizuje se fotodokumentace. Odběrová místa jsou konkrétní podklady, ze kterých jsou odebírány vzorky fytobentosu. Z odběru je nutné vyloučit místa s přílišnou hloubkou či s velkým zastíněním a místa příliš blízko břehu nebo hladiny. Konkrétní odběrová místa se volí tak, aby se zajistilo, že substrát se nacházel v eufotické zóně a že podklady byly ponořeny ve vodě tak dlouho, aby nárostové společenstvo na nich vytvořené dosáhlo konečného stadia sukcese (doporučeno je minimálně 4 až 6 týdnů v závislosti na podmínkách prostředí). Epiliton se odebírá ideálně z povrchu přirozeně se vyskytujících kamenů, které lze vyjmout z vody ale i z jiných pevných ponořených substrátů jako jsou skály, kamenné mostní pilíře, betonové stěny (nikoli dřevěné). Je vhodné odebrat vzorkek jako směsný nejméně z 5 kamenů v rámci jednoho odběrového úseku. Pokud nelze v celém sledovaném úseku pevný substrát pro odběr epilitonu nalézt a na hladině se nevyskytují ani plovoucí řasy nebo sinice (pleuston), mohou se odebrat vzorky epifytonu, případně epipelonu nebo epipsamonu. Vzorek se odebírá jako směsný nejméně z 5 míst odběrového úseku. Vzorek epipelonu se přednostně odebírá na místech, kde se projevuje rozvoj sinic, rozsivek nebo jiných jednobuněčných fototrofních organismů zbarvením povrchové vrstvy sedimentu. Nikdy se nesměšují jednotlivé typy dohromady (např. epiliton s epifytonem a podobně). Pleuston představuje společenstvo, které je v bezprostředním kontaktu s volnou vodou a odebírá se vždy, když je jeho přítomnost na lokalitě zjištěna. Podle původu se rozlišují: o společenstva epipelonu uvolněného ode dna a budovaného vláknitými sinicemi (přednostně rodů Phormidium a Oscillatoria) s doprovodem epipelických rozsivek (tzv. Oscillatorieta) o společenstva, jejichž edifikátory jsou vláknité řasy (zej. rodů Cladophora, Oedogonium, Enteromorpha, Rhizoclonioum, Vaucheria, ale i Spirogyra a jiné spájivé vláknité řasy). Jejich iniciální vývojová stádia žijí v podobě nárostu na kamenech nebo na rákosinách (zejména na jejich starších částech, přetrvávajících i přes zimu tedy na odumřelých lodyhách a listových pochvách Typha, Phragmites atd.) a po uvolnění (odtržení) se dostávají daleko na volnou hladinu. Do odběrového protokolu je nutné zaznamenat, z jakého podkladu byl řasový nárost odebrán a zda byl na lokalitě odebrán také vzorek pleustonu. Na odběrovém úseku se měří základní fyzikálně - chemické parametry vody (teplota vody, koncentrace rozpuštěného O 2, ph a měrná elektrická vodivost). Měření se provádí zhruba v hloubce, ze které jsou odebírány vzorky nárostových společenstev. 3.3 Vlastní odběr vzorku Epiliton se odebírá z povrchu kamenů, skal nebo jiných objektů dlouhodobě ponořených ve vodě, jako jsou například hráze, mola či mostní pilíře. Nesmí se ovšem jednat o objekty dřevěné. Obecně se pro odběr preferují kameny o velikosti 10 20 cm, protože stabilita tohoto podkladu umožňuje rozvoj společenstva řas a zároveň se s tímto podkladem dobře manipuluje. Z kamenů vybraných k odběru se odstraní případné znečištění (např. organický detrit) rychlým omytím ve vodě a kámen se potom umístí v misce s asi 50 ml vody. Odběr se provádí tvrdým zubním kartáčkem, který se omyje ve vodě z lokality a očistí na čistém povrchu tak, aby se minimalizovalo znečištění rozsivkami či jinými organismy z předchozího vzorku. Silným přitlačením kartáčku se z horního povrchu kamene odstraní řasový nárost. Kartáček se opakovaně oplachuje ve vodě v misce, aby se tam tímto způsobem přenesly odebírané řasy. Viditelná vlákna řas je možné do odběrové lahvičky 4

přenést pinzetou, aby se předešlo jejich poškození. K odběru řasového nárostu se může také použít nůž, skalpel nebo jiný ostrý nástroj, zvláště pokud jsou řasy pevně přichyceny rhizoidy. Také tento nástroj se musí omýt vodou z lokality a očistit. Nárost se případně nemusí z kamene odebírat v misce, ale může se přenést kartáčkem nebo nožem přímo do odběrové lahvičky naplněné vodou z lokality. Epiliton z podkladů, které nelze vyzvednout z vody (skály, hráze, pilíře), je možné odebrat pomocí nože (kompaktní nárost) nebo pomocí kartáčku a odsávačky kartáčkem se nárost uvolňuje a zároveň se nasává odsávačkou. Epifyton z emerzní litorální vegetace (porosty ostřic, orobince, rákosu) se odebírá přiměřeně ostrým předmětem, vhodný je k těmto účelům příborový nůž, či lžíce s přiostřenou hranou. Očištěným odběrovým nástrojem se nárost z rostlin seškrabuje a přenáší do vody v misce či přímo do vzorkovnice. Epifyton ze submerzních porostů měkké vodní flóry (Utricularia, úzkolistých druhů r. Potamogeton, Zanichellia, Lemna, Chara, příp. mechorostů) se odebírá vyjmutím trsu těchto rostlin a vymačkáním do trochy vody v misce. Vzorky epipelonu či epipsamonu se odebírají větší pipetou. Při odběru se nasává horní oživená vrstva bahna či písku do hloubky asi 10 mm. Pleuston se odebírá mělkou síťkou (případně cedníkem) umístěnou na tyči, z níž se pak řasy nebo sinice přenesou do odběrové lahvičky. Odběrová lahvička se nikdy neplní vzorkem až po hrdlo. Suspense se vzorkem by neměla přesahovat asi ¼ objemu lahvičky, jinak hrozí nebezpečí, že v důsledku vyčerpání kyslíku ve vodě dojde k úhynu jemnějších organismů. 3.4. Značení a další nakládání se vzorky Každou vzorkovnici je nutné na povrchu popsat kódem vzorku, typem vzorku, názvem vodního útvaru a datem odběru a doložit k ní odběrový protokol. Do vzorkovnice se nevkládá papírek s označením vzorku, mohl by způsobit úhyn citlivějších druhů a ovlivnit výsledek stanovení. Vzorky se transportují do laboratoře v chladicím boxu bez přístupu světla a až do zpracování jsou přechovávány v chladničce. Pokud nelze vzorky zpracovat do 48 hodin po odběru, je nutné je ihned po odběru zakonzervovat konzervačními činidly. Nejvhodnější je konzervace formaldehydem na výslednou koncentraci 2-3 %. V konzervovaném vzorku se mění zbarvení chloroplastů a dochází k deformaci buněk (u organismů bez pevných buněčných stěn často k nepoznání), takže se ztíží nebo zcela znemožní identifikace. Proto se přistupuje ke konzervaci jen ve výjimečných případech, kdy skutečně nelze splnit podmínku časového intervalu mezi odběrem a rozborem vzorku. 4. ZPRACOVÁNÍ VZORKU Odebrané vzorky fytobentosu je nutné nejprve krátce analyzovat v čerstvém stavu, a to co nejdříve po odběru (nejpozději do 48 hodin). Při zpracování v laboratoři se: do laboratorního protokolu zaznamenají základní údaje o vzorku a jeho stavu, provádí determinace řas a sinic alespoň do taxonomické úrovně vyznačené v taxalistech jako závazná determinační úroveň, stanoví a zaznamená do laboratorního protokolu údaj o abundanci (viz dále), registruje stav organismů - údaje o pohyblivosti, přítomnosti deformovaných buněk, tvarových abnormit, buněk s poškozeným buněčným obsahem, zastoupení prázdných schránek (frustulí) rozsivek, resp. mrtvých zbytků těl jiných organismů (rozsivky se pak dále determinují na základě zhotovení trvalých preparátů, viz. Zhotovení trvalých preparátů), 5

pořizuje kreslená nebo fotografická dokumentace druhů, které se nepodařilo určit a jejichž taxonomické postavení je potřeba později konzultovat s odborníky na jednotlivé taxonomické skupiny, u neurčených druhů podle potřeby zaznamenávají údaje o velikosti, tvarové proměnlivosti apod.; zejména je nutno připojit poznámky o morfologických znacích rozsivek, jejichž určení bude možné až v trvalém preparátu, do laboratorního protokolu zaznamenají odkazy na pořízenou dokumentaci, výsledky rozboru fototrofní složky podle možností doplní i o údaje o výskytu jiných organismů než řas a sinic. Podrobný mikroskopický rozbor řasového společenstva se provádí ve světelném mikroskopu, a to nejprve při slabším zvětšení (cca 100 násobném), poté i při silnějším zvětšení, umožňujícím lepší poznání diakritických znaků. Kvantitativní zastoupení jednotlivých druhů se provádí při slabším zvětšení, a to pomocí odhadní stupnice, která druhy zařazuje do určitých intervalů na základě odhadu jejich abundance v mikroskopickém preparátu analyzovaného vzorku (Sládečková & Marvan 1978). Nejčastěji se používá stupnice: abundance základní stupnice modifikovaná stupnice druh masově zastoupený, s pokryvností 90-100% 6 7 druh velmi hojný, s pokryvností 50-90% 5 6 druh hojný, s pokryvností 20-50% 4 5 druh dost hojný, s pokryvností 5-20% 3 4 druh zřídkavý, s pokryvností 1-5% 2 3 druh velmi zřídkavý, s pokryvností 0,1-1% 1 2 druh ojediněle zastoupený, s pokryvností do 0,1% + 1 Zpracování vzorku rozsivek Pro přesné druhové určení rozsivek je nutné z rozsivkových schránek odstranit buněčný obsah a poté připravit mikroskopický preparát pomocí uzavíracího média. Buněčný obsah je možné odstranit za použití silného oxidačního činidla. Nejčastěji používané oxidační činidlo je peroxid vodíku, který se také doporučuje v ČSN. Část vzorku se ve zkumavce zalije peroxidem vodíku. Je vhodné použít širší zkumavku, ve vzorku zpravidla dochází k tvorbě pěny a v úzké zkumavce se může část vzorku vylít. Vzorek se pak nechá 24 hodin stát. Jeli suspenze usazená na dně, je možno supernatant slít a vyměnit za destilovanou vodu. To se pak ještě alespoň 2x opakuje. Vzorky pocházející z vápencových oblastí se doporučuje před oxidačním procesem přelít zředěnou kyselinou chlorovodíkovou, v níž se rozpustí vysrážený CaCO 3. Existuje však i řada dalších metod, které je možné využít. Pro přípravu trvalého preparátu se vyčištěná suspenze rozsivkových schránek naředí do vhodné koncentrace. Pokud je suspenze mléčně bílá nebo zakalená, zředí se destilovanou nebo demineralizovanou vodou. Hustota schránek rozsivek se může také ověřit odpařením kapky suspenze na podložním sklíčku a prohlédnutím pod mikroskopem při středním zvětšení (400 ). Pokud je suspenze hodně řídká, je nutné vzorek centrifugovat a tento postup opakovat až do dosažení vhodné koncentrace, při níž se rozsivky v preparátu vzájemně nepřekrývají. Zkumavka obsahující suspenzi rozsivek se protřepe a čistou Pasteurovou pipetou se odpipetuje část suspenze ze střední části zkumavky. Kapka suspenze se pak umístí na čisté krycí sklíčko a nechá odpařit umístěním v suchém bezprašném prostředí (např. v exsikátoru) 6

nebo opatrným zahříváním nad plamenem nebo na teplé plotně. Výsledkem by měl být jemný šedý film pokrývající asi dvě třetiny krycího sklíčka. Při všech uvedených operacích je nutné až úzkostlivě dbát na to, aby nedocházelo k přenosu rozsivek z jiného vzorku. Měla by se proto používat pipeta s velmi širokým hrdlem, která jde dobře promýt. Zejména při sériové přípravě preparátů, při níž se používá centrifugace k zahuštění příliš řídké suspenze, je nutné věnovat velkou péči promytí centrifugačních zkumavek, příp. raději se vyhnout centrifugaci a místo ní vzorek zahustit prostou sedimentací, a to i za cenu, že příprava preparátu se prodlouží. Po odpaření se s použitím zalévacího média zhotoví preparát. Čisté podložní sklíčko se na chvilku podrží nad plamenem nebo horkou plotnou, aby bylo dokonale suché, a kápne se na něj médium s vyšším indexem lomu světla (Pleurax nebo Naphrax). Na kapku se položí krycí sklíčko s vrstvičkou přichycených rozsivek. I toto krycí sklíčko by se mělo předtím podržet nad plamenem, aby se odstranily zbytky vody, které by se mohly držet v nedokonale vysušených rozsivkových schránkách. Celý preparát se pak v pinzetě přidržuje nad plamenem, příp. nad horkou elektrickou plotnou, a to tak dlouho, až se pod krycím sklíčkem začnou tvořit bubliny a médium se rozteče pod celou jeho plochu. Pak se může ještě horký preparát položit někam na místo, které nemůže poškodit zvýšenou teplotou, a jemně přitlačit, příp. upravit polohu krycího sklíčka, které v tomto stavu lze ještě po podložním sklíčku posouvat. Bublinky rozpuštěné pod krycím sklíčkem po chvíli samy zmizí. Po zchladnutí se může preparát zkontrolovat pod mikroskopem. V ideálním případě je v preparátu 10 20 schránek rozsivek v jednom zorném poli při zvětšení 1000 x). Hotový preparát se označí kódem vzorku, místem a datem odběru. Podobně se i označí zásobní suspenze pro případ zhotovení dalších preparátů. V trvalém preparátu se opětovně provede determinace rozsivek se záznamy o abundanci jednotlivých taxonů. Ty je pak nutno převést na původní vzorek. Poznámka: Kromě citované ČSN 75 7715 je k hodnocení ekologického stavu vody v ČR k dispozici ČSN EN 13946 (75 7707) Jakost vod - Návod pro rutinní odběr a úpravu vzorků bentických rozsivek z řek (účinnost od 1.11.2003); a dále ČSN EN 14407 (75 7722) Jakost vod - Návod pro identifikaci a kvantifikaci bentických rozsivek z vodních toků a pro interpretaci dat. Oproti výše uvedenému postupu, založenému na hodnocení celého komplexu fytobentosu, má hodnocení omezené jen na rozsivkovou komponentu bentického společenstva nižší výpovědní hodnotu a postup, předepisující kvantifikaci rozsivek počítáním buněk/valv v trvalých preparátech, je pro potřeby hodnocení ekologického stavu zbytečně pracný. 5. DETERMINACE Při determinaci se používá základní taxonomická literatura. Dnes jsou pro členské státy EU všeobecně přijímaným standardem svazky ediční řady Süsswasserflora von Mitteleuropa. Podle nich by se měla volit jména a koncepce jednotlivých taxonů. Toto však nelze brát jako závazný předpis. Jejich univerzální používání je omezeno tím, že nejsou na všech pracovištích k dispozici, a jednak i tím, že náplně jmen pro mnohé taxony byly od doby vydání příslušného svazku změněny (a to nezřídka i samotnými autory svazku; týká se to zejména povýšení určitého infraspecifického taxonu, např. variety, do ranku samostatného druhu, ale i rozpadu velkých rodů až i na desítky úžeji vymezených rodů). Kromě toho některé taxonomické skupiny nebyly pro toto určovací kompendium zpracovány. Je tedy nutno připustit i používání jiných určovacích pomůcek. Je však vždy velmi žádoucí v laboratorním protokolu o tom vést příslušný záznam. 7

6. ODBĚROVÝ A DETERMINAČNÍ PROTOKOL Viz přílohy. 7. ARCHIVACE Z primárních záznamů je nezbytné archivovat odběrový a originální determinační protokol. Před archivací je nutno zkontrolovat úplnost jejich vyplnění. Dobu, po kterou je nutno archivovat vzorky, stanovuje zadavatel odběrů dle typu monitoringu. 8. BEZPEČNOST PRÁCE Práce ve vodě nebo v její blízkosti může být nebezpečná. Je odpovědností uživatele stanovit náležitá bezpečnostní a i zdravotní opatření a zajistit shodu se všemi podmínkami národních i případných interních předpisů. 9. LITERATURA ČSN 75 7715 (757715) Jakost vod - Biologický rozbor - Stanovení nárostů (účinnost 1.8.1998). ČSN EN 13946 (75 7707) Jakost vod - Návod pro rutinní odběr a úpravu vzorků bentických rozsivek z řek. ČSN EN 14407 (75 7722) Jakost vod - Návod pro identifikaci a kvantifikaci bentických rozsivek z vodních toků a pro interpretaci dat. SLÁDEČKOVÁ, A. & MARVAN, P., 1978: Fytobentos. - In: Hindák, F. et al.: Sladkovodné riasy. - Slov. pedagog. naklad., Bratislava, p. 62-104. 8

Determinační protokol pro analýzu fytobentosu stojatých vod Pleuston KÓD ODBĚRU: DATUM ODBĚRU: DATUM DETERMINACE: VODNÍ ÚTVAR: ODEBRAL: DETERMINOVAL: KÓD VZORKU: PODPIS: STAV VZORKU: nativní, fixovaný; trvalý preparát STUPNICE: základní, modifikovaná DET. LITERATURA: Jméno taxonu Hojnost Poznámka Jméno taxonu Hojnost Poznámka 9

Determinační protokol pro analýzu fytobentosu stojatých vod Nárostové společenstvo KÓD ODBĚRU: DATUM ODBĚRU: DATUM DETERMINACE: VODNÍ ÚTVAR: ODEBRAL: DETERMINOVAL: KÓD VZORKU: TYP VZORKU: PODPIS: STAV VZORKU: nativní, fixovaný; trvalý preparát STUPNICE: základní, modifikovaná DET. LITERATURA: Jméno taxonu Hojnost Poznámka Jméno taxonu Hojnost Poznámka 10

PROTOKOL O ODBĚRU BIOTY STOJATÝCH VOD - FYTOBENTOS vodní útvar kód odběru datum vzorkaři srážky oblačnost vodní květ ano ne zbarvení vody pach fotodokumentace ne < 20% bezbarvá žádný provedl: ano - mrholení 20-40 % výška vodní hladiny zelená slabý popis: ano - déšť 40-60% zvýšená hnědá intenzivní ano - mrznoucí 60-80% normální šedá popis pachu ano - sněhové > 80% snížená žlutá silně snížená červená průhlednost m teplota vzduchu poznámky o C odběrový úsek KÓD VZORKU NÁROSTU pleuston odebrán ano ne KÓD VZORKU PLEUSTONU čas odběru fyz-chem. ukazatele zaměření GPS - pravý kraj odběrového úseku přesnost hloubka měření m typ nárostu GPS zem. délka N GPS - zem. šířka E GPS (m) t vody o C epiliton m ph epifyton emerz. makrofyta vodivost µs/cm epifyton subm. makrofyta zaměření GPS - levý kraj odběrového úseku přesnost rozp. O 2 mg/l epipelon GPS zem. délka N GPS - zem. šířka E GPS (m) nasyc. O 2 % epipsamon m zastínění odběrového úseku % průměrná hloubka v místech odběru nárostu m pokryv hladiny vegetací % 11