No. 1- určete MW, vysvětlení izotopů ESI/APCI + 325 () 102 (35) 327 (33) 326 (15) 328 (5) 150 200 250 300 350 400 450 500 ESI/APCI - 323 () 97 (51) 325 (32) 324 (13) 326 (6) 150 200 250 300 350 400 450 500 - šum bude v dalších spektrech pro jednoduchost zanedbán - izotopické píky nebudou většinou zakresleny
No. 2 - určete MW, popište ionty APCI + 403 () 425 (29) = 22 = 16 441 (5) 150 200 250 300 350 400 450 500 = 38 Úkol: jaké změny očekáváte po přídavku 5 mm octanu amonného do mobilní fáze APCI - 401 () 150 200 250 300 350 400 450 500
No. 3 - určete MW, ionizační mód, popište ionty APCI + 601.5 () 603.5 (56) 905.8 (4) 263.3 (2) 265.3 (1) 883.8 (26) 200 300 400 500 600 700 800 900 921.8 (1) ESI + 905.8 () 601.5 (20) 603.5 (11) 921.8 (22) 200 300 400 500 600 700 800 900
No. 4 APCI + 422 () 424 (96) 288 (5) 316 (4) 380 (2) 378 (2) 439 (5) 441 (5) 150 200 250 300 350 400 450 500 APCI - 420 () 422 (98) 59 (51) 378 (22) 376 (22) 480 (5) 482 (5) 150 200 250 300 350 400 450 500 APCI +, MS/MS 422 378 () 380 (97) 422 (2) 424 (2) 150 200 250 300 350 400 450 500
No. 5 - určete MW ESI + 415 829 200 300 400 500 600 700 800 900
No. 6 - určete MW a další strukturní informace APCI + 451 150 200 250 300 350 400 450 500 405 421 435 473 492 APCI - 450 150 200 250 300 350 400 450 500
No. 7 - určete MW a popište ionty ESI + 414 472 432 ESI - 448
No. 8 ESI + 1029.6 975.6 Interpretace spektra? O jaký typ látky jde? 1090.3 927.1 1158.5 1235.8 883.1 1323.8 1425.5
No. 9 - určete MW, popište ionty APCI + 405 () 149 (32) 427 (29) 167 (4) 279 (1) 391 (2) 443 (5) 150 200 250 300 350 400 450 500 APCI - 403 () 150 200 250 300 350 400 450 500
1/ Určete polaritu záznamů. 2/ Určete MW a popište ionty. No. 10 [M+H] + -C 2 H 5 OH -CO [M-H] - -C 2 H 5 OH
Určete MW a popište ionty? Existuje alternativní řešení? No. 11 - Tvorba radikál iontů 422 423 422
No. 12 - určete M R a maximum informací APCI + 410 364 366 368 408 412 425 427 429 150 200 250 300 350 400 450 500 APCI - 408 79 81 326 328 362 364 366 406 410 150 200 250 300 350 400 450 500 Úkol: nakreslete izotopickou obálku včetně intenzit pro dimerní ion [2M+H]+
No. 13 - určete M R a strukturní informace APCI + 421 391 405 475 150 200 250 300 350 400 450 500 375 443 APCI - 420 150 200 250 300 350 400 450 500
No. 14 popište ionty a určete M R Intens. 5 x10 309.85 série iontů [M-xH]x- a [M-(x+y)H+yNa]x- maximální pozorovaný náboj x a/nebo maximální počet vyměnitelných protonů y = počet iontových skupin 3 2 310.06 1 310.31 310.56 310.81 311.07 0 309.5 310.0 310.5 311.0 Intens. 5 x10 243.24 1.25 1.00 0.75 0.50 0.25 0.00 243.43 243.63 243.84 244.05 243.0 243.5 244.0 244.5
No. 15 identifikujte degradační produkty Výchozí informace: barvivo C.I. Direct Red 7 bylo elektrolyticky degradováno za redukčních podmínek, vzniklé produkty byly analyzovány pomocí HPLC/MS Úkol: identifikujte produkty a navrhněte reakční mechanismus degradace ESI- () 355 NH 2 N N H 3 CO OCH 3 N N NH 2 Výchozí barvivo C.I. Direct Red 7 (C 34 H 28 O 8 N 6 S 2 ) SO 3 H (52) 711 (10) 733 SO 3 H 200 300 400 500 600 700 800 ESI- Degradační produkt A () 237 APCI+ Degradační produkt B () 245 (12) 286 150 200 250 300 150 200 250 300
No. 15 identifikujte degradační produkty barvivo C.I. Acid Yellow 9 bylo elektrochemicky degradováno v NaCl kvůli čistění odpadních vod, HPLC/ESI-MS záporný mód, v základním skenu převládal ion, ze kterého bylo následně automaticky měřeno MS/MS spektrum HO MS/MS 356 3 S N N NH 2 HPLC 292 Acid Yellow SO 3 H M R =357 171 248 276 184 356 150 200 250 300 A B C 12.9 MS/MS 172 Produkt A 108 MS/MS 173 Produkt B 155 109 80 155 172 80 173 50 150 200 50 150 200
No. 15 identifikujte degradační produkty barvivo C.I. Acid Yellow 9 bylo elektrochemicky degradováno v NaCl kvůli čistění odpadních vod, HPLC/ESI-MS záporný mód, v základním skenu převládal ion, ze kterého bylo následně automaticky měřeno MS/MS spektrum HO MS/MS 356 3 S N N NH 2 HPLC 292 Acid Yellow SO 3 H M R =357 171 248 276 184 356 150 200 250 300 A B C 12.9 MS/MS 191 Produkt C 127 64 80 129 191 193 50 150 200
No. 16 identifikujte neznámou látku Výchozí informace: stopové stanovení polární látky v odpadních vodách se nezdařilo kvůli složité matrici a problémům s nízkou retencí této polární látky. Po derivatizaci s benzoylchloridem, extrakci do pentanu, následném odpaření do sucha, rozpuštěním v mobilní fázi a HPLC/ESI-MS analýze (C18 kolona, mobilní fáze 55 acetonitril - voda izokraticky) bylo dosaženo požadované citlivosti, selektivity i zlepšení retence. Úkoly: 1/ pokuste se zintepretovat pozorované ionty, určit M R a navrhnout strukturu neznámé látky, 2/ zdůvodněte vysokou intenzitu iontu 149 () 149 (4) 271 (21) 293 (1) 309 (16) 334 50 150 200 250 300 350 400 Reference: Anal. Chem. 71 (1999) 2288
No. 17 identifikujte neznámou látku Výchozí informace: platí všechny informace z předchozího příkladu, kromě hlavní složky byly ve vzorku odpadní vody detegovány další látky, spektum jedné z nich je uvedeno zde Úkol: identifikujte na základě analogie () 177 (5) 299 (13) 321(1) 337 (9) 362 50 150 200 250 300 350 400
No. 18 - identifikujte! 46 62 APCI - 50ACN/W 50 150 200 250 300 350 400 APCI - 50ACN/W + 5 mm NH 4 Cl 351 353 50 150 200 250 300 350 400
Typické zkouškové otázky - význam izotopů v hmotnostní spektrometrii, vysvětlit na příkladech - dusíkové pravidlo - vysvětlit principy ionizačních technik: EI, CI, ESI, APCI, APPI, MALDI -určení M R proteinů pomocí ESI - jaký je rozdíl mezi EI spektry a spektry měřenými měkkými ionizačními technikami, vysvětlit na modelovém příkladu - vysvětlit fyzikální principy hmotnostních analyzátorů: magnetický analyzátor s dvojí fokusací iontů, Q, iontová past (sférická vs. lineární), TOF (včetně použití reflektronu a QqTOF uspořádání) - co je to tandemová hmotnostní spektrometrie a MS n? k čemu se používá? - vysvětlete, jak byste správně provedli kvantitativní měření s pomocí HPLC/MS - jakými způsoby lze provést kalibraci v hmotnostní spektrometrii? u jakým typů analyzátorů je kalibrace zvlášť důležitá? - vysvětlit princip a praktické využití GC/MS a HPLC/MS - jak budete volit ionizační techniku podle typu analytu? na čem bude volba záviset? - základy interpretace hmotnostních spekter