N217019 - Laboratoř hydrobiologie a mikrobiologie



Podobné dokumenty
N Laboratoř hydrobiologie a mikrobiologie

N Laboratoř hydrobiologie a mikrobiologie

ICT podporuje moderní způsoby výuky CZ.1.07/1.5.00/ Chemie laboratorní technika. Mgr. Dana Kňapová

N Laboratoř hydrobiologie a mikrobiologie

Cíle práce. Výběr alternativních metod pro detekci:

Vyvažování tuhého rotoru v jedné rovině přístrojem Adash Vibrio

Baby centrum M O T Ý L E K, s.r.o.

Inovace výuky prostřednictvím šablon pro SŠ

T7TVO05 ODŽELEZOVÁNÍ A ODKYSELOVÁNÍ PODZEMNÍ VODY PROVZDUŠOVÁNÍ A FILTRACÍ

TĚHOTENSKÉ TESTY. gynekologické vyšetření (hmatatelné změny v pochvě i děloze) imunologické těhotenské testy (provedené s pomocí moči či krve)

Inovace a zkvalitnění výuky prostřednictvím ICT. Svařování. Název: Svařitelnost,technologické zásady,příprava materiálu Ing. Kubíček Miroslav.

DUM 16 téma: Kreslení šroubu se 6HR hlavou

Zadávací dokumentace na dodávku výpočetní techniky

Pracovní návrh. VYHLÁŠKA Ministerstva práce a sociálních věcí. ze dne o hygienických požadavcích na prostory a provoz dětské skupiny do 12 dětí

ČÁST PÁTÁ POZEMKY V KATASTRU NEMOVITOSTÍ

SBOČKA DOPRAVNÍCH POTRUBÍ RK

Základní pojmy Při kontrole výrobků se zjišťuje, zda odpovídají požadavkům rozměry, tvary a jakost ploch při použití předepsaných měřicích postupů.

OBEC HORNÍ MĚSTO Spisový řád

269/2015 Sb. VYHLÁŠKA

Metody hodnocení rizik

Laboratorní příručka

BIODEGRADACE POLYCHLOROVANÝCH BIFENYLŮ IMOBILIZOVANÝMI BUŇKAMI PSEUDOMONAS SP2

VI. Finanční gramotnost šablony klíčových aktivit

ZAŘÍZENÍ PRO ODBĚR VZORKŮ VZ

Vyhláška č. 294/2015 Sb., kterou se provádějí pravidla provozu na pozemních komunikacích

Zvyšování kvality výuky v přírodních a technických oblastech CZ.1.07/1.128/ Nástrahy virtuální reality (pracovní list)

Obchodní podmínky pro spolupráci se společností Iweol EU s.r.o.

STANOVISKO č. STAN/1/2006 ze dne

3.01 Adsorpce na aktivním uhlí co dokáže uhlí(k). Projekt Trojlístek

Směrnice kvestorky AMU č. 1/2004

KATALOGOVÝ LIST. VENTILÁTORY RADIÁLNÍ STŘEDOTLAKÉ RSM 800 až 1250 jednostranně sací

Výzva k podání nabídky a prokázání splnění kvalifikace ve zjednodušeném podlimitním řízení na stavební práce

Protokol č. 33/10. Zkouška tepelného výkonu, stanovení účinnosti, zkouška přetížení krbová vložka KV 025G/TV

N Laboratoř hydrobiologie a mikrobiologie

uzavírají podle ustanovení 1746 odst. 2 zákona č. 89/2012 Sb., občanský zákoník (dále jen občanský zákoník ), tuto

Zadání. Založení projektu

PALETOVÉ REGÁLY SUPERBUILD NÁVOD NA MONTÁŽ

Příloha 5. Pracovní list z chemie. Úkol č. 1: Důkaz thiokyanatanových iontů ve slinách

otisk podacího razítka finančního úřadu

Mezní kalibry. Druhy kalibrů podle přesnosti: - dílenské kalibry - používají ve výrobě, - porovnávací kalibry - pro kontrolu dílenských kalibrů.

k OBSLUZE a instalaci TŘÍCESTNÉ MÍSÍCÍ ARMATURY VERNER ČSN EN ISO 9001: 2009

VYR-32 POKYNY PRO SPRÁVNOU VÝROBNÍ PRAXI - DOPLNĚK 6

Všeobecné obchodní podmínky společnosti OT Energy Services a.s. platné od

Smlouva o provádění certifikace (zpracovatel registrační číslo: M2 - P

Zadávací dokumentace k veřejné zakázce k podlimitní veřejné zakázce na dodávky

Zvyšování kvality výuky technických oborů

RSM WT-2013/ZA-26 TECHNICKÉ PODMÍNKY ROZTOK DUSIČNANU AMONNÉHO A MOČOVINY 1. PŘEDMĚT TECHNICKÝCH PODMÍNEK

Test genotoxicity na cibuli (Allium cepa)

NÁVŠTĚVNÍ ŘÁD. venkovní bazény. Aquacentra Pardubice, Jiráskova ul provozovatel PAP Pardubice o.p.s.

HLINÍKOVÁ OKNA A DVEŘE WINSTAR ALU

Čl. I. Vyhláška č. 106/2001 Sb., o hygienických požadavcích na zotavovací akce pro děti, ve znění vyhlášky č. 148/2004 Sb.

VENTILÁTORY RADIÁLNÍ RSI 800 až 2000 jednostranně sací

FAKULTNÍ NEMOCNICE BRNO. Jihlavská 20, Brno tel:

Pokyny České pošty pro označování Doporučených zásilek čárovými kódy

Ubytovací a požární řád

Měření ph látek pomocí čidla kyselosti ph

1 Popis vzorku. 2 Detekční limit vyšetření. 3 Časová náročnost. 4 Zpracování vzorku. 4.1 Množství vzorku. 4.2 Odběr vzorků.

N Laboratoř hydrobiologie a mikrobiologie

Zadávací dokumentace k veřejné zakázce dle zákona č. 137/2006 Sb., o veřejných zakázkách (dále jen zákon )

Měření změny objemu vody při tuhnutí


P Ř I Z N Á N Í CHRUDIMI C Z A. a ) do I. ODDÍL - údaje o poplatníkovi (podílovém fondu) 6)

Umělá koupaliště

Používání služebních mobilních telefonů a prostředků pro přenos dat

Metodika pro nákup kancelářské výpočetní techniky

Spolek Bubakov.net (dále jen spolek ) Stanovy spolku

SEZNAM PŘÍLOH TECHNICKÁ ZPRÁVA

Západní město Stodůlky, Administrativní dům A2 plynovod 1.etapa

VNITŘNÍ ŘÁD ŠKOLNÍ DRUŽINY

DLAŽBA PLOŠNÁ HLADKÁ povrch Standard

MĚSTO NOVÁ BYSTŘICE SMĚRNICE PRO ZADÁVÁNÍ A EVIDENCI VEŘEJNÝCH ZAKÁZEK MALÉHO ROZSAHU (VZMR)

Příloha I. Provedení testu akutní toxicity se světélkujícími bakteriemi Vibrio fischeri metodou Flash (Standardní operační procedura RECETOX)

Oblastní stavební bytové družstvo, Jeronýmova 425/15, Děčín IV

Jméno a příjmení: Datum odevzdání protokolu:

TECHNICKÁ ZPRÁVA. Rekonstrukce budovy č.p. 2380, ul. Pod Nemocnicí, Louny - PZTS

MONTÁŽNÍ NÁVOD DELTA DESIGN PLECHOVÉ KAZETY, LAMELY A TRAPÉZY

P Ř I Z N Á N Í k dani z příjmů právnických osob

studie parkovací d m Butovská / Ji ín

Ovoce do škol Příručka pro žadatele

Zadávací dokumentace k veřejné zakázce dle zákona č. 137/2006 Sb., o veřejných zakázkách (dále jen zákon )

ODŮVODNĚNÍ VEŘEJNÉ ZAKÁZKY DLE 156 ZÁKONA 137/2006 Sb., O VEŘEJNÝCH ZAKÁZKÁCH

Podniková norma energetiky pro rozvod elektrické energie ŽELEZOBETONOVÉ PATKY PRO DŘEVĚNÉ SLOUPY VENKOVNÍCH VEDENÍ DO 45 KV

MONITORING OF WATER POLLUTION OF ŽELEČSKÝ STREAM UNDER ŽELEČ VILLAGE SLEDOVÁNÍ ZNEČIŠTĚNÍ ŽELEČSKÉHO POTOKA POD OBCÍ ŽELEČ

Technologický projekt 321/2. Hodnocení kvality kompozitních směsí na bázi pšeničné mouky

Bakterie (laboratorní práce)

Všeobecné podmínky provozu sběrných míst kolektivního systému Eltma

Program pro poskytování dotací z rozpočtu města Moravská Třebová Číslo předpisu: 6/2015 Výtisk č.: 01

SMLOUVA O DÍLO č.2/2015 uzavřená podle 2586 a násl. zák. č. 89/2012 Sb., občanského zákoníku, ve znění pozdějších předpisů, dále jen OZ

3 nadbytek. 4 bez starostí

1. Prodávající: Česká spořitelna, a.s. IČO: , DIČ: CZ se sídlem: Olbrachtova 1929/62, Praha 4, Krč

CENÍK SLUŽBA ETHERNET. Účinnost od Ceny uvedeny bez i s 20% DPH 1. PODMÍNKY

uzavírají Smlouvu o nájmu věcí movitých uzavřenou podle 2201 zákona č. 89/2012 Sb., občanského zákoníku, ve znění pozdějších předpisů

Využití ICT techniky především v uměleckém vzdělávání. Akademie - VOŠ, Gymn. a SOŠUP Světlá nad Sázavou

Zadávací dokumentace k veřejné zakázce dle zákona č. 137/2006 Sb., o veřejných zakázkách (dále jen zákon )

Upíše-li akcie osoba, jež jedná vlastním jménem, na účet společnosti, platí, že tato osoba upsala akcie na svůj účet.

SO 182 DIO NA RYCHLOST. SILNICI R4 PS, km 9,196-11,926

Projekt Podpora rozvoje emočního vývoje, předčtenářských dovedností a moderních metod vzdělávání v MŠ reg. č.: CZ.1.07/1.3.50/

VYHLÁŠKA č. 84/2008 Sb. ze dne 26. února 2008

84_2008_Sb. 84/2008 Sb. VYHLÁŠKA. ze dne 26. února 2008

Použití homeopatického léčivého přípravku v uvedených terapeutických indikacích je založeno výhradně na homeopatických zkušenostech.

Transkript:

ÚSTAV TECHOLOGIE VODY A PROSTŘEDÍ 217019 - Laboratoř hydrobiologie a mikrobiologie ázev úlohy: Metody IDEXX využívající technologii definovaného substrátu Vypracováno v rámci projektu: Inovace a restrukturalizace předmětu Laboratoř hydrobiologie a mikrobiologie PIGA číslo projektu Řešitel C_VŠCHT_2015_013 ifis číslo projektu doc. RDr. Jana Říhová Ambrožová, Ph.D. 217 17 5642 Spoluřešitelé Ing. Dana Vejmelková, Ph.D. Ing. Vladimíra Škopová Rok zpracování: 2015 1

Metody IDEXX využívající technologii definovaného substrátu Oblast použití: Tato metoda platí pro stanovení koliformních bakterií, Escherichia coli, enterokoků a bakterií Pseudomonas aeruginosa v dezinfikovaných i nedezinfikovaných vodách (povrchových, pitných, podzemních, odpadních apod.). Mez detekce a mez stanovitelnosti: Teoretická mez detekce je 1 KTJ/100 ml. Mez stanovitelnosti jsou 3 KTJ/100 ml pro 95% pravděpodobnost kladného výsledku za podmínek použití 100 ml vzorku. Pracovní rozsah: Pro Quanti-Tray (51 komůrek)platí rozsah koncentrací 1 až 200 organismů ve 100 ml. Pro Quanti- Tray/2000 (96 komůrek) je rozsah koncentrací od 1 do 2 419 organismů ve 100 ml vzorku. Stanovený ukazatel: Metoda Colilert je testem průkaznosti na přítomnost koliformních bakterií a Escherichia coli v pitné vodě. Existuje verze Colilert-18 umožňující zjištění výsledků přítomnosti koliformních bakterií a Escherichia coli již po 18 h expozice. Metoda odpovídá požadavkům stanovení ukazatele dle ČS E ISO 9308-1 pro stanovení koliformních bakterií a Escherichia coli. (Metoda Colisure se používá v případě detekce koliformních bakterií a Escherichia coli v odpadních, zakalených a znečištěných vodách.) Metoda Enterolert-E je metoda detekce enterokoků ve vodě (Enterococcus faecium, Enterococcus faecalis), její použití je v souladu s požadavky normy ČS ISO 7899-2. Existuje verze Enterolert-DW určená přímo pro pitnou vodu. Metoda Pseudalert je určená pro detekci bakterií Pseudomonas aeruginosa v souladu s požadavky normy ČS ISO 16 266. Podstata zkoušky: Metody jsou založené na podstatě klasických metod nejvíce pravděpodobnějšího počtu, tzv. MP (Most Probable umber). amísto standardního nasazení vzorků s činidlem do zkumavek dle modelu MP zde probíhá rozdělení směsi vzorku a činidla do plat Quanti-Tray (popř. Quanti- Tray/2000). Směs je rozdělena do jednotlivých komůrek automaticky zatavovačkou Quanti-Tray Sealer. Po inkubaci je počet pozitivních komůrek pomocí přiložené tabulky převeden na nejpravděpodobnější koncentraci organismů (MP). Obecně jsou použité metody rychlé, snadné a v mnoha případech i přesné na určení počtu koliformních bakterií a Escherichia coli (Colilert), enterokoků (Enterolert), Pseudomonas aeruginosa (Pseudalert). Pozitivní reakce je dána vybarvením komůrek plata (popř. plastové lahvičky v případě metody P/A), které je způsobeno reakcí na přítomnost specifického enzymu. 2

Vyhodnocení testů je založeno na následujících barevných reakcích: U koliformních bakterií a Escherichia coli je indikace založena na přítomnosti enzymu -galaktosidázy. Přítomné bakterie Escherichia coli používají enzym -glukoronidázu na štěpení metyl-umbelliferyl--d-glukuronidu, což se projevuje v UV 365 nm modrou fluorescencí. U metody Colisure je enzym -glukoronidáza využit na štěpení chlorofenyl red--dgalaktopyranosidu. U enterokoků je využíváno reakce na přítomnost enzymu -glukosidázy. U pseudomonád se využívá detekce přítomných bakterií v UV 365 nm. Doba a teplota kultivace se řídí typem použitého substrátu. Přístroje a pomůcky: Pipety s možností aplikace objemu 1 a 10 ml, jednorázové špičky. Bunsenův kahan. Zatavovačka IDEXX, gumové podložky (součást sady k zatavovačce). Plata Quanti-Tray a Quanti-Tray/2000. Sterilní plastové lahvičky. Termostaty (na požadované teploty dle ukazatele). UV lampa pracující při 365 nm. MP tabule pro vyhodnocení výsledků (viz příloha 1 a 2). Chemikálie: Používané chemikálie jsou stupně čistoty ch.č. nebo p.a. Voda se používá destilovaná nebo demineralizovaná bez specifických požadavků na jakost. Tato voda se používá i pro potřeby ředění vzorku. Reakční činidla pro Colilert: WP020 (20 reakcí), WP0200 (200 reakcí). Reakční činidla pro Colilert-18: WP020-18 (20 reakcí), WP0200-18 (200 reakcí). Reakční činidla pro Colisure: WCLS20 (20 reakcí), WCLS200 (200 reakcí). Reakční činidla pro Enterolert: WET020 (20 reakcí), WET0200 (200 reakcí). Reakční činidla pro Pseudalert: WET020 (20 reakcí), WET0200 (200 reakcí). Protipěnivý roztok (WAFDB) o objemu 20 ml, který lze aplikovat až na 400 vzorků. Postup zkoušky: ejprve se předehřeje zatavovací zařízení Quanti-Tray Sealer. Do sterilní (plastové) lahvičky se nalije 100 ml neředěného popř. patřičně naředěného vzorku vody. K ředění je možné použít destilovanou vodu. K objemu 100 ml se přidá obsah činidla (média) pro detekci cílového organismu (WP020 a WP200 pro Colilert, WP020-18 a WP200-18 pro Colilert-18, WCLS20 a WCLS200 pro Colisure, WET020 a WET200 pro Enterolert). V některých případech, kdy vzorek stále pění, lze použít i protipěnivý roztok. 3

Po promíchání a rozpuštění obsahu v lahvičce se celý objem přelije do plata Quanti-Tray (popř. Quanti-Tray/2000). Plato se umístní do gumové podložky dodávané k zatavovačce (typ plata musí odpovídat typu použité gumové podložky, jinak dojde k vylití obsahu plata do zařízení). Plato s gumovou podložkou se vloží do předehřátého zařízení zatavovačky a zataví se (viz obr. 1). Zatavená plata se po určitou dobu kultivují v termostatu při teplotě určené cílových organismem: o Colilert se kultivuje po dobu 24 h při teplotě 35-37 (± 0,5) C, u Colilert-18 je doba zkrácena na 18 h. Colisure, který se vyhodnocuje po 24 h lze odečíst i po 48 h. o Enterolert-E a Enterolert-DW se kultivuje při teplotě 41 (± 0,5) C po dobu 24 h. o Pseudalert se kultivuje při teplotě 38 (± 0,5) C po dobu 24 h. Obr. 1. Vzhled použitých plat. Vlevo pro 51 komůrek, vpravo pro 96 komůrek. Vyhodnocení zkoušky: Pravděpodobný počet mikroorganismů se zjistí převedením počtu pozitivních reakcí v komůrkách plata Quanti-Tray (51 komůrek) a Quanti-Tray/2000 (49 velkých komůrek a 48 malých komůrek) na index MP dle převodních tabulek dodávaných výrobcem (zde příloha 1 a 2). Pozitivní reakci u metody Colilert a Colilert-18 vykazuje žluté zabarvení komůrek, což je indikace přítomnosti koliformních bakterií. Escherichia coli modře fluoreskuje pod UV lampou při 365 nm. U metody Colisure je pozitivní reakcí změna barvy z původně žlutě zabarvených komůrek na fialovočervenou. Přítomné bakterie Escherichia coli se vyznačují pod UV lampou při 365 nm modrou fluorescencí. Pozitivní reakci u metody Enterolert-E vykazuje modrou fluorescenci pod UV lampou při 365 nm. U metody Enterolert-DW je změna barvy komůrek z původní modré na zelenou indikací pozitivní reakce. Pozitivní reakci u metody Pseudalert vykazuje modrou fluorescenci pod UV lampou při 365 nm. Uvádění výsledků: Výsledky se uvádí jako MP na 100 ml vzorku. V případě ředěného vzorku je nutné použité ředění ve výsledku zohlednit. 4

Příloha 1 MP tabule pro vyhodnocení pozitivních reakcí při použití plata s 51 komůrkami (zdroj: www.idexx.com/water) 5

Příloha 2 MP tabule pro vyhodnocení pozitivních reakcí při použití Quanti-Tray/2000 (zdroj: www.idexx.com/water) 6

Příloha 2 MP tabule pro vyhodnocení pozitivních reakcí při použití Quanti-Tray/2000 (zdroj: www.idexx.com/water) - pokračování 7

Příklad 1 Vyhodnocení testu Enterolert-DW Zadání: Zjistěte početní zastoupení enterokoků ve vzorku odpadní vody. Do lahvičky na 100 ml aplikujte objem 10 ml z původního vzorku. Řešení: Při přípravě vzorku, ředění a kultivaci se postupuje dle pokynů uvedených v tomto návodu. Po ukončení doby kultivace se přistoupí k vyhodnocení zkoušky. Spočítají se pozitivní velké komůrky a pozitivní malé komůrky. Pozitivní komůrky mají žlutozelenou barvu, negativní komůrky jsou modře zabarvené (nezreagovaly). Dle přílohy 2 se zjistí odpovídající MP index. V tomto případě, byly označeny všechny negativní komůrky symbolem, ty jsou z vyhodnocení vyloučeny. Počet velkých pozitivních komůrek je 38 (do počtu se započítává i ta, skrz kterou se nalévá vzorek), počet malých pozitivních komůrek je 15. Po odečtu z MP tabule: 100,8 MP/100 ml. utné je uvažovat i použitý objem vzorku (zde 10 ml). Výsledek je 1 008 MP/100 ml. Plato po ukončení kultivace. Plato po ukončení kultivace vyznačené negativní komůrky. 8

Příklad 2 Vyhodnocení testu Colilert Zadání: Zjistěte početní zastoupení koliformních bakterií a Escherichia coli u vzorku odpadní vody. Do lahvičky na 100 ml aplikujte objem 10 ml z původního vzorku. Řešení: Postupuje se dle pokynů uvedených v tomto návodu. Po ukončení doby kultivace se přistoupí k vyhodnocení zkoušky. Spočítají se pozitivní velké komůrky a pozitivní malé komůrky. Pozitivní mají žlutou barvu a jsou koliformními bakteriemi. Plato se přiloží pod UV lampu a spočítají se modře svítící komůrky, které jsou E. coli. Dle přílohy 2 se zjistí odpovídající MP index. Počet pozitivních (žlutých) komůrek indikujících přítomnost koliformních bakterií je 49 velkých a 41 malých, po odečtu z MP tabule: 1203,3 MP/100 ml. Po vystavení plata UV lampě, modře fluoreskující indikující přítomnost E. coli, je 48 velkých a 19 malých, po odečtu z MP tabule: 260,3 MP/100 ml. utné je uvažovat i použitý objem vzorku (zde 10 ml). Výsledek je 12 033 MP/100 ml koliformních bakterií a 2 603 MP/100ml E. coli. Plato po ukončení kultivace pozitivní komůrky jsou žlutě zabarvené a indikují přítomnost koliformních bakterií. Plato pod UV lampou, modře fluoreskující komůrky indikují přítomnost Escherichia coli. 9

Příklad 3 Vyhodnocení testu Pseudalert Zjistěte početní zastoupení pseudomonád ve vzorku odpadní vody. Do lahvičky na 100 ml aplikujte objem 10 ml z původního vzorku. Řešení: Postupuje se dle pokynů uvedených v tomto návodu. Po ukončení doby kultivace se přistoupí k vyhodnocení zkoušky. Po ukončení doby kultivace se přistoupí k vyhodnocení zkoušky. Plato se vystaví UV lampě a spočítají se pozitivní velké komůrky a pozitivní malé komůrky, které fluoreskují modře. Dle přílohy 2 se zjistí odpovídající MP index. V tomto případě, byly označeny všechny velké negativní komůrky symbolem, ty jsou z vyhodnocení vyloučeny. Počet velkých pozitivních komůrek je 40 (do počtu se započítává i ta, skrz kterou se nalévá vzorek), počet malých pozitivních komůrek je 5. Po odečtu z MP tabule: 85,7 MP/100 ml. utné je uvažovat i použitý objem vzorku (zde 10 ml). Výsledek je 857 MP/100 ml. Plato po ukončení kultivace. Plato pod UV lampou, modře fluoreskující komůrky indikují přítomnost pseudomonád. 10

Použitá literatura: Říhová Ambrožová, J. 2008. Mikrobiologie v technologii vod. Skriptum VŠCHT Praha, 252 pp., ISB 978-80-7080-676-0 (2. přepracované vydání), AA 26,32 www.idexx.com/water (on-line, 13.04.2015) 11