Laboratórna diagnostika bakteriálnych infekcií centrálneho nervového systému. Autor: L.Liščáková, spoluautor: Z.Šuláková

Laboratórna diagnostika bakteriálnych infekcií centrálneho nervového systému. Autor: L.Liščáková, spoluautor: Z.Šuláková

Mikrobiálne ochorenia CNS patria medzi najťažšie,vzhľadom na to,že môžu priamo súvisieť s ohrozením života človeka. Biologický materiál od pacienta s podozrením na takéto ochorenie, považujeme za jeden z najzávažnejších. Nutnosť dodržať správny odber,transport,rýchlosť spracovania, zabezpečiť širokú škálu priamej laboratórnej diagnostiky s ohľadom na rýchlosť a citlivosť metodiky. Bakteriologické vyšetrenie doplniť ostatnými lab.vyšetreniami/biochémia,hematológia,patológia,serológia/.

Infekčné postihnutie centrálneho nerv.systému spôsobujú: -Mikroorganizmy spôsobujúce infekciu priamo v NS. -Infekcie primárne lokalizované v inom mieste, ale krvným obehom sa dostali do NS. Materiál vhodný na bakteriologické vyšetrenie: 1.Likvor 2.Hemokultúry 3.Materiály od tiaľ, kde bola primárna infekcia/výter hrdla,rany,stredného ucha,katéter,plodová voda,a.i./

Pri podozrení na meningitídu,encefalitídu /u pacienta pozorujeme prudké bolesti hlavy,vracanie,bradykardia, poruchy vedomia,precitlivelosť na vonkajšie podnety,stuhnutie svalstva atď./lekár odoberá na vyšetrenie vzorku likvoru. Odber mozgovomiechového moku: Lekár, prísne asepticky,zavedie do mozgovomiechového kanála lumbálnou punkciou punkčnú ihlu. Nechá samovolne odkvapkať do sterilnej skúmavky vzorku cca 5 ml/nesmie sa pod tlakom vyťahovať do striekačky/. Vzorka sa musí ihneď doručiť do laboratória, ak to nie je možné-ideálne do 1 hod.a dovtedy ponechať pri izbovej teplote a v tme/nie do chladu!!!/

Vyšetrenie likvoru Centrifugácia 10min. - max. 1500 otáčok sterilne ( ihlou a striekačkou ) zosať supernatant a v sterilnej sklenenej skúmavke varíme 5 min. na AGLUTINÁCIU Sediment- sterilnou novou klučkou (alebo ihlou a striekačkou) očkujeme do označeného poľa na miske: KA CO 2 A CO 2 VL bez ATB Anaerotest Tio Sklíčko ( nové ) zafarbíme podľa Grama Sabourod HF CO 2 Po pomnožení: 1. KA CO 2, 2. A CO 2, 3. Sabourod, 4. HF CO 2 Schéma spracovania likvoru

výhody nevýhody mikroskopia kultivácia Rýchla,hodnotí druh leukocytov,morfolog. baktérií G-, G+, môžu byť aj odumreté Pôdy dodajú živiny,atmosféru,teplotu,pomnožujú,typický rast kolónií, Záchyt až u dostatočného počtu baktérií Vyrastú len životaschopné 12,24,48 hod. Latexová aglutinácia -dôkaz antigénu Spracovanie vzorky na OKM Rýchla,naviazanie na protilátku,môže byť aj odumretá baktéria Obmedzený počet antigénov daný výrobcom setu, poisťovňa platí len časť výkonu

MIKROSKOPIA -materiál sterilne vykvapkáme na podložné sklíčko, -fixujeme,farbíme podľa Grama, -pomocou imerzného oleja pozeráme pri zväčšení -G+ baktérie-tmavo fialové -G- baktérie ružové Obrázky elektrónovej mikroskopie

Farbenie podľa Grama...elektrónový mikroskop

Farbenie podľa Grama elektrónová mikroskopia

Pozitívny nález v likvore od pac.oaim, február 2014 G+ diplokoky-streptococcus pneumoniae,

Kultivácia KA-všetky rastovo nenáročné baktérie A/s rastovým obohacovadlom a CO2/ -rastovo náročné,mikroaerofilné baktérie SAB-kvasinky a plesne VL-anaeróbne baktérie HF-Haemophilus TIO-pomnoženie aeróbnych a anaeróbnych baktérií pri pozitívnom raste nasleduje bioch.dourčenie baktérie a stanovenie ATB.citlivosti

Pozitívny nález v likvore od pac.oaim, február 2014 G+ diplokoky-streptococcus pneumoniae

Sérotypizácia bakteriálneho kmeňa

na čiastočky latexu je naviazaná protilátka proti hľadanej baktérii po pridaní vzorky likvoru prebehne reakcia ak je vo vzorke prítomný daný antigén príde k naviazaniu na protilátku a vzniká aglutinácia/vyčírenie,zrazeninky/ antigén nie je prítomný-neprichádza k naviazaniu/suspenzia ostáva zakalená/ Aglutinácia

Najčastejší pôvodcovia hnisavých, purulentných meningitíd: 1.Neisseria meningitidis A,B,C,Y,W135:výrazné meningeálne príznaky,krvácanie do kože-petechie,zvyčajne po rinofaryngitíde,často spolu so septikémiou, sezonnosť na jar,mladí ľudia,epidemický výskyt typ A a B. (G- diplokoky kávové zrna, pôda A,AB,CO2,48 hod.,aglut.pozit.) 2.Haemophilus influenzae b:deti do 5 rokov po och.dýchacích ciest, stred.ucha,následok môže byť hydrocefalus,strata sluchu,poruchy motoriky a intelektu-v súčastnosti očkovanie. (G-drobné tyčky,hf pôda,pozit. aglutinácia ) 3.Streptococcus pneumoniae:najčastejšie u starých ľudí s pneumóniou,stuhnutie šije,horúčka,poruchy mentality a.i (G+diplokoky lancetovité,ka,viridujúce,pozit.aglutinácia)

4.Streptococcus agalactiae :kolonizuje respiračný,tráviaci trakt a sliznicu pošvy,perinatálne infekcie,novorodenec počas pôrodu prehltne sekréty od matky,tiež po narodení ako nozokomiálna infekcia(g+koky v retiazkach,ka beta hemolýza,pozit.aglutinácia.) 5.Escherichia coli K1:novorodenecké meningitídy, ako HS B. (G- tyčky,pôdy MC,KA,pozit.aglutinácia) 6.Listéria monocytogenes :novorodenci ale i všetky vekové kategórie s oslabenou imunitou,prenos potravinami mlieko,bryndza,mäso,kontakt s domácimi zvieratami,vonkajšie prostredie (G- tyčky, polymorfonukleáry,pôda KA,aglut.nie je k dispozícii) -Staphylococcus aureus,st.epidermidis:metastatické inf.z ložiska (diabetes m.,umelé náhrady,pooperačné rany,úrazy,) -Pseudomonas aeruginosa,acinetobacter,klebsiella pneumoniae,- metastatická inf.,invázia bakt.do krvi,imunitne oslabení pacienti, OAIM-intubovaní,i nozokomialne inf.

Okrem typických purulentných (hnisavých)- bakteriálnych meningitíd môžu byť zápaly CNS tzv.aseptické. Ich klinické príznaky sú často veľmi podobné, ale ich pôvodcov v bakteriologickom laboratoriu(kultivačne,mikroskopicky, aglutinačne) takmer nemožno stanoviť. Pri ich diagnostike je nutná spolupráca daľších laboratórnych zložiek. Pôdy ostali sterilné!? Záver

Etiológia asept.meningitíd 1.Vírusy:Coxackie a ECHO, V.parotitídy,HPV1a2,Varicella zoster,ebv,flavivírusy,togavírus bunyavírusy,koronavírusy,adenovírusy,vírus chrípky,hiv 2.Baktérie:Borelia burgdorferi Mycobactérium tuberkulosis, Mykoplazma pneumoniae, Leptospira 3.Huby:Candida,Cryptococcus, Nocardia,Histoplasma 4.Protozoá:Toxoplazmóza,Trichinelóza,amébiáza Intoxikácie,systémové och. Priama diagnostika-pcr /cca 0,5-1ml vzory likvoru/ Herpetické vírusy, Varicella zoster, EBV, CMV, H.simplex Nepriama diagnostikastanovenie protilátok /vzorka likvoru+séra/ Borélia burgdorferi Materiál preposiela na Úrad verejného zdravotníctva alebo do HPL laboratória OKM úsek serológie

Ďakujem za pozornosť