Sekce 1 Cen Shimdzu 1S-01 IZOLACE, SEPARACE A CHARAKTERIZACE ROSTLINNÝCH GLYCEROGLYKOLIPIDŮ MARIE ZÁBRANSKÁ,b, VLADIMÍR VRKOSLAV JOSEF CVAČKA Ústv orgnické chemie biochemie AV ČR, v.v.i., Flemingovo nám. 2, 166 10 Prh 6; b Ktedr nlytické chemie PřF UK, Hlvov 2030/8, 128 43 Prh 2 mrie.zbrnsk@uochb.cs.cz Mezi rostlinné glyceroglykolipidy ptří monoglktosyldicylglyceroly (MGDG), diglktosyldicylglyceroly (DGDG) sulfoquinovosyldicylglyceroly (SQDG). Tyto lipidy utváří strukturu biologických membrán fotosyntetizujících orgnismů. Jednotlivé molekuly se liší přítomností různých mstných kyselin vázných v poloze sn-1 sn-2 n glycerolu. Zájem o studium těchto lipidů vzrůstá hlvně díky jejich protinádorovým protizánětlivým účinkům 1. V rámci této práce byly lipidy izolovány z rostlin pomocí modifikovné Folchovy metody tenkovrstvé chromtogrfie n silikgelu. Získné glyceroglykolipidy byly seprovány n koloně Nucleosil C18. K chrkterizci lipidů byl použit hmotnostní spektrometrie s elektrosprejovou ionizcí v kldném i záporném módu. Používán byl hmotnostní spektrometr s nízkým i vysokým rozlišením. Seprce MGDG bylo docíleno v binárním systému methnolu vody, přičemž počáteční složení grdientu odpovídá 75 % methnolu 25 % vody. Celková dob nlýzy je 90 minut. Pro seprci DGDG je nutné použít ternární grdient cetonitrilu, methnolu vody. Počáteční složení optimlizovné mobilní fáze odpovídá 65 % cetonitrilu 35 % vody, n konci nlýzy je v mobilní fázi přítomen pouze methnol. Celková dob nlýzy je 80 minut. V rámci studi elučního chování SQDG byly doposud provedeny dílčí experimenty. V součsné době je vyvíjen izolční postup, který by zjistil účinnější extrkci těchto lipidů z rostlinného mteriálu. Pomocí optimlizovných metod byly identifikovány oxidovné i neoxidovné formy glyceroglykolipidů. Bylo zjištěno, že pro správnou identifikci mstných kyselin vázných n glycerolu je nutné využití vysokého rozlišení, protože spektr oxidovných neoxidovných forem jsou velmi podobná. Optimlizovné metody byly mimo jiné použity pro chrkterizci MGDG DGDG v huseníčku rolním (Arbidopsis thlin). Celkem bylo identifikováno 73 glktolipidů, přičemž 27 z nich bylo popsáno nově (16 oxidovných/11 neoxidovných). Tto práce vzniká z podpory grntu GA ČR 203/09/0139, výzkumných záměrů Z4 055 0506, MSM 0021620857 projektu SVV 2012-265201. 1. Med N., Koki Y., Ohtni S., Hd T., Yoshid H., Mizushin Y.: Food Chem. 112, 205 (2009). 1S-02 VYUŽITÍ ELEKTROD NA BÁZI BÓREM DOPOVANÉHO DIAMANTU A PLATINY V AMPÉROMETRICKÉ DETEKCI AMINODERIVÁTŮ NAFTALENU A BIFENYLU V HPLC JAROSLAVA ZAVÁZALOVÁ, HANA DEJMKOVÁ, KAROLINA PECKOVÁ JIŘÍ BAREK Univerzit Krlov v Prze, Přírodovědecká fkult, Ktedr nlytické chemie, UNESCO lbortoř elektrochemie životního prostředí, Albertov 6, 128 43 Prh 2 jroslv.zvzlov@ntur.cuni.cz Aminoderiváty nftlenu bifenylu jsou, jkož i jiné minoderiváty polycyklických romtických uhlovodíků (APAH), prokázné či podezřelé krcinogeny mutgeny 1,2. Polohové isomery orgnických sloučenin jko chemická individu mohou mít různé biologické účinky. Z tohoto důvodu je žádoucí je od sebe odlišit. Elekrochemicky oxidovtelná minoskupin umožňuje elektrochemickou detekci APAH s využitím trdičních i netrdičních elektrodových mteriálů, npř. n bázi bórem dopovného dimntu. Ten si získl oblibu především díky širokému potenciálovému oknu, odolnosti vůči psivování mechnické elektrochemické stbilitě 3. Tto práce se zbývá možností mpérometrické detekce vybrných genotoxických minoderivátů polycyklických romtických uhlovodíků, konkrétně 1-minonftlenu, 2-minonftlenu, 2-minobifenylu 4-minobifenylu, v HPLC. Jko prcovní elektrody mpérometrického detektoru byly použity pltinová elektrod v mikrocylindrickém 3 tubulárním 4 uspořádání bórem dopovná dimntová elektrod ve wll-jet uspořádání. Byly optimlizovány detekční podmínky, změřeny klibrční závislosti určeny meze stnovitelnosti jednotlivých látek porovnány prcovní chrkteristiky jednotlivých detektorů. Dále byl vyvinut metod stnovení nnomolárních koncentrcí studovných látek v lidské moči pomocí HPLC-ED s využitím předběžné seprce prekoncentrce pomocí extrkce n tuhé fázi. Tto práce byl finnčně podporován MŠMT ČR (projekt MSM 0021620857 KONTAKT (AMVIS) projekt ME10004), Univerzitou Krlovou v Prze (projekt SVV 2012-265201, projekt UNCE 2012/44 Center for Suprmoleculr Chemistry), Grntovou genturou České republiky (projekt P206/12/G151). JZ děkuje Univerzitě Krlově, Přírodovědecké fkultě (projekt STARS) z finnční podporu. 1. http://www.irc.fr/en/publictions/list/monogrphs/, stženo 5. 3. 2012. 2. Cheung Y., Lewis D. F. V., Ridd T. I., Gry T. J. B., Ionnides C.: Toxicology 118, 115 (1997). 3. Peckov K., Musilov J., Brek J.: Crit. Rev. Anl. Chem. 39, 148 (2009). 4. Pecková K., Mocko V., Opekr F., Swin G. M., Zim J., Brek J.: Chem. Listy 100, 124 (2006). 5. Cvčk J., Opekr F., Brek J., Zim J.: Electronlysis 12, 39 (2000). 493
Sekce 1 Cen Shimdzu 1S-03 SEPARACE NÍZKOMOLEKULÁRNÍCH LÁTEK NA MONOLITICKÝCH STACIONÁRNÍCH FÁZÍCH MAGDA STAŇKOVÁ, JIŘÍ URBAN, VERONIKA ŠKEŘÍKOVÁ PAVEL JANDERA Ktedr nlytické chemie, Fkult chemicko-technologická, Univerzit Prdubice, Studentská 573, 532 10 Prdubice mgd.stnkov@student.upce.cz Součsným trendem v kplinové chromtogrfii je miniturizce, což umožňuje použití drhých ditiv, snížit spotřebu mobilních fází i množství dávkovného vzorku. Použití monolitických stcionárních fází v kpilární chromtogrfii je velmi výhodné z hledisk jejich sndné příprvy přímo uvnitř křemenné kpiláry. Monolit je souvislý kus porézního mteriálu, který vyplňuje celý prostor kolony připrvuje se rdikálovou polymercí směsi obshující funkční monomer, síťující monomer, porogenní rozpouštědl iniciátor rekce. Z účelem zvýšení účinnosti seprce nízkomolekulárních látek byl studován vliv délky řetězce síťujícího monomeru v polymetkrylátových monolitických kolonách. Zákldní polymerční směs obshovl funkční monomer luryl metkrylát ethylen dimetkrylát jko síťující monomer. Ten byl v polymerční směsi postupně nhrzován dimetkryláty s různou délkou řetězce mezi dvěm metkrylátovými jednotkmi. Postupnou optimlizcí byl pro chromtogrfii v systému obrácených fází připrven kolon umožňující velmi rychlou izokrtickou seprci směsi šesti lkylbenzenů pod dvě minuty. Její účinnost dosáhl 71 000 teoretických pter/metr pro zdržovnou látku benzen. Silně polární látky jsou velmi těžko dělitelné v systému obrácených fází, proto byl polymerční směs optimlizován tké pro použití v chromtogrfii hydrofilních interkcí, která umožňuje dosttečnou retenci pro jejich rozdělení. Luryl metkrylát byl nhrzen zwitteriontovým funkčním monomerem po optimlizci složení polymerční směsi z použití různých síťujících monomerů byl vybrán kolon s účinností 69 000 teoretických pter/metr pro zdržovnou látku thiomočovinu. Optimlizovné kolony byly použity pro seprce komplexních směsí fenolických látek. Dále byl studován vliv prcovní teploty n kvlitu seprce získné pozntky byly plikovány v dvourozměrné kplinové chromtogrfii. Připrvené monolitické kolony mohou být s úspěchem použity všude tm, kde je potřeb získt rychlé přesné informce o složení komplexních směsí polárních i nepolárních látek v mlém množství vzorku. Je tedy možné je využít pro nlýzy potrvinářských vzorků, nlýzy vzorků životního prostředí nebo seprce biologicky ktivních látek. Tto práce vznikl z podpory projektu GA ČR P206/12/0398. 1S-04 STANOVENÍ ENZYMOVÉ AKTIVITY -N-ACETYLHEXOSAMINIDASY POMOCÍ KAPILÁRNÍ ELEKTROFORÉZY V OFFLINE A ONLINE USPOŘÁDÁNÍ TOMÁŠ KŘÍŽEK, VERONIKA DOUBNEROVÁ b, HELENA RYŠLAVÁ b PAVEL COUFAL Univerzit Krlov v Prze, Přírodovědcká fkult, Ktedr nlytické chemie, Hlvov 8, 128 43 Prh 2, b Univerzit Krlov v Prze, Přírodovědcká fkult, Ktedr biochemie, Hlvov 8, 128 43 Prh 2 krizek@ntur.cuni.cz -N-cetylhexosminids (EC 3.2.1.52) ktlyzuje hydrolýzu koncových N-cetylglukosminových N-cetylglktosminových jednotek oligoschridů glykokonjugátů 1,2. U hub rostlin je součástí binárních chitinolytických systémů, které hrjí důležitou roli při regenerci buněčných stěn, uchycení orgnismu k podložce podobně. Hexosminids se všk vyskytuje i u člověk, kde se účstní degrdčních procesů. V této práci byl vyvinut elektroforetická metod pro stnovení N,N,N -tricetylchitotriosy, N,N -dicetylchitobiosy N-cetylglukosminu, jko substrátů produktu studovného enzymu. Metod byl úspěšně využit pro utomtizovné sledování průběhu rekce pro stnovení některých vlstností enzymu, jko je závislost ktivity n ph nebo určení substrátové specificity. Kromě klsického provedení v tzv. offline uspořádání, tedy s enzymovou rekcí probíhjící ve vilce mimo elektroforetický systém, jsou studovány tké možnosti využití tzv. online přístupu, kdy k mísení substrátu enzymu, jejich rekci seprci produktů dochází přímo uvnitř kpiláry. Konkrétně jde o využítí metody Trnsverse Diffusion of Lminr Flow Profiles (TDLFP) 3, která n rozdíl od dřívějších online metodik nevyžduje znlost elektroforetických pohyblivostí enzymu substrátu. Nespornou výhodou online přístupu je minimální spotřeb substrátu enzymu, která se pohybuje v řádu stovek nnolitrů. Vysoký stupeň utomtizce s sebou přináší zvýšení reprodukovtelnosti snížení rizik kontmince nebo ztráty vzorku. Tto práce vznikl z podpory Univerzity Krlovy v Prze (projekt SVV 2012-265201), GAUK (projekt 710) MŠMT ČR (projekt MSM0021620857). 1. Plíhl O., Sklenář J., Hofbuerová K., Novák P., Mn P., Pompch P., Kvn, D., Ryšlvá H., Weignerová L., Chrvátová-Pišvejcová A., Křen V., Bezoušk K.: Biochemistry 46, 2719 (2007). 2. Ettrich R., Kopecký V., Hofbuerová K., Bumruk V., Novák P., Pompch P., Mn P., Plíhl O., Kutý M., Kulik N., Sklenář J., Ryšlvá H., Křen V., Bezoušk K.: BMC Struct. Biol. 7, 32 (2007). 3. Okhonin V., Liu X., Krylov S. N.: Anl. Chem. 77, 5925 (2005). 494
Sekce 1 Cen Shimdzu 1S-05 ŠTÚDIUM MOŽNOSTÍ ANALÝZY SACHARIDOV V PROTEÍNOVÝCH VZORKÁCH VERONIKA KOMOROWSKA MILAN HUTTA Ktedr nlytickej chémie, Prírodovedecká fkult, Univerzit Komenského v Brtislve, Mlynská dolin CH-2, 842 15 Brtislv, Slovenská republik komorowsk@fns.unib.sk Prác bol zmerná n počitočné overenie možností nlýzy schridov vyskytujúcich s vo vzorke popri látkch proteínového chrkteru. Výskum sme vykonli n modelovej vzorke, ktorú predstvovl výživový doplnok s liečebným účinkom s komerčným názvom Wobenzym, ktorý obshuje šesť druhov enzýmov medzi pomocnými látkmi j monohydrát lktózy schrózu. Vyvinuli sme jednoduchú rýchlu metódu úprvy vzorky n odstránenie proteínov pomocou prídvku cetonitrilu následnej úprvy n sorbente Silsorb Amín. N sepráciu schridov sme využili HILIC- HPLC-ELSD metódu. Obsh schrózy v jednej tblete výživového doplnku s hmotnosťou 300 mg sme stnovili n 21,1 ± 0,7 mg lktózy n 18,9 ± 0,9 mg. Postupy metódy využité v tejto práci budú ďlej zužitkovné pri nlýze glykoproteínov n nšom prcovisku, n ktorých správnu identifikáciu je vhodné proteínovú schridovú zložku nlyzovť osobitne. Táto prác vznikl vďk podpore projektu Priemyselný výskum nových liečiv n báze rekombinntných proteínov, ITMS projektu: 26240220034. Agentúr Ministerstv školstv, vedy, výskumu športu SR pre štrukturálne fondy EÚ: Podporujeme výskumné ktivity n Slovensku/Projekt je spolufinncovný zo zdrojov EÚ. 1S-06 CHARACTERIZATION OF VOLATILE ORGANIC COMPOUNDS COMPOSITION OF DISTILLATE OBTAINED FROM SORBUS DOMESTICA BY COMPREHENSIVE GAS CHROMATOGRAPHY OLGA VYVIURSKA, IVAN ŠPÁNIK, ANTÓNIA JANÁĆOVÁ SOLOMIYA PYSAREVSKA,b Institute of Anlyticl Chemistry, Slovk University of Technology, 812 37 Brtislv, Slovki, b Deprtment of Anlyticl Chemistry, Ivn Frnko Ntionl University, 79000 Lviv, Ukrine olg.vyviursk@stub.sk Recently, gret del of emphsis hs been plced on the protection of ntionl products ccordingly to Europen Union legisltion. For instnce, lcoholic beverges mde from fruits of Service Tree (Sorbus Domestic) re specified for Slovki nd Czech Republic region. These distilltes re often vlued by experts due to their specific rom nd tste chrcteristics, which re defined by presence of prticulr orgnic compounds. In ddition, Service Tree fruits re fmous for its ntioxidnt effect nd few studies hve been devoted to this question 1,2. Thus, our work ws devoted to determintion of voltile orgnic compounds content of Service tree distillte (Bosc distillery, Slovki). Liquid-liquid extrction procedure with pentne ws pplied for the preconcentrtion. For the seprtion nd nlyzing comprehensive gs chromtogrphy system coupled to time-of-flight mss spectometry (GC GC- TOF MS) ws used. In order to obtin more detiled nlysis of the smple two column systems with different seprtion mechnisms were utilized. Such pproch provides possibility to observe VOC profile of the lcoholic distillte from different points of view. For exmple, the combintion of non-polr HP-PONA (50 m 0.2 mm 0.5 m) column in the first dimension nd semi-polr BPX-50 (2 m 0.1 mm 1 m) column is very effective for seprtion of non-polr compounds nd is typicl orthogonl system. Wheres ppliction of high polr DB-FFAP (30 m 0.25 mm 0.25 m) for the first dimension llows to improve seprtion of polr compounds nd the chromtogrphic system receives some fetures of reverse orthogonlity. The results obtined from these two column combintions hve been compred nd more thn 400 compounds hve been identified. The identifiction of compounds ws performed using the dt softwre nd lso with ppliction of GCxGC dt of stndrd compounds. This work ws supported by project VEGA no. 1/0972/12. REFERENCES 1. Termentzi A., Kefls P., Kokklou E.: Food Chem. 1234, 106 (2008). 2. Termentzi A., Zervou M., Kokklou E.: Food Chem. 371, 116 (2009). 1S-07 ANALÝZA SUPRAMOLEKULOVÝCH POVRCHOVÝCH NANOŠTRUKTÚR POMOCOU HMOTNOSTNEJ SPEKTROMETRIE SEKUNDÁRNYCH IÓNOV SOŇA HALÁSZOVÁ, MONIKA STUPAVSKÁ, MONIKA JERIGOVÁ,b DUŠAN VELIČ,b Prírodovedecká fkult Univerzity Komenského v Brtislve, Ktedr fyzikálnej teoretickej chemie, Mlynská dolin, 842 15 Brtislv 4, b Medzinárodné lserové centrum, Ilkovičov 3, 812 19 Brtislv son.hlszov@gmil.com Štúdium povrchových nnoštruktúr je dôležité z hľdisk ich širokého upltneni v rôznych plikáciách. Snhou je študovť komplexné funkčné systémy so špecifickými vlstnosťmi. Toto s dá docieliť podrobným skúmním suprmolekulových povrchových nnoštruktúr, ktoré v nšom projekte z chemického hľdisk pozostávjú z hostiteľskej molekuly - cyklodextrínu, do ktorej je implementovná nnočstic Fe. Celý tento komplex s nchádz n zltom substráte. Tiolov- 495
Sekce 1 Cen Shimdzu né cyklodextríny boli zvolené zámerne, kvôli ich schopnosti tvoriť inkluzné komplexy schopnosť vizť s n substrát zlt. N rozhrní pevnej plynnej fázy môže dôjsť k inkludovniu norgnickej molekuly do kvity cyklodextrínu, pričom vzniká suprmolekulový komplex. Cyklodextríny sú tktiež schopné vytvárť štruktúry podobné smoposkldným monomolekulovým vrstvám (Self-Assembled Monolyers, SAM) n povrchoch tuhých plnárnych substrátov. Tvorbu správnie s vzniknutých suprmolekulových povrchových nnoštruktúr je možné nlyzovť technikou hmotnostnej spektrometrie sekundárnych iónov. Pomocou tejto nlytickej techniky je možné skúmť frgmentáciu monotiolovného -cyklodextrínu výskyt suprmolekulového komplexu n zltom povrchu. Experiment tvorby inklúzneho komplexu monotiolovný -cyklodextrín + Fe je vykonný primo v predkomore hmotnostného spektrometr pomocou Knudsenovej efúznej cely. Ďlšou výhodou je vysoké vákuum v hlvnej komore, rovnko ko j v predkomore, čo zručuje inertné prostredie merni príprvy. Hlvným zámerom tohto projektu je podrobné preštudovnie zefektívnenie príprvy suprmolekulových povrchových nnoštruktúr pozostávjúcich z komplexu hostiteľ hosť (hostiteľ tiolovný -cyklodextrín, hosť Fe) n zltom povrchu. Štúdium tvorby suprmolekulových komplexov so železom n substráte je v dnešnej dobe vysokoktuáln tém 1 vďk ich možnému upltneniu v oblsti informčných technológií. Táto prác vznikl z podpory grntov ERDF OP R&D, Project met-qute- Centrum excelentnosti kvntových technológií APVV-0491-07. LITERATÚRA 1. Rbr, L., Arnyosiov, M., Velic, D.: Appl. Surf. Sci. 257, 6 (2011). 1S-08 VLIV PEROXIDU VODÍKU A HYDROXYLOVÉHO RADIKÁLU NA TVORBU MALONDIALDEHYDU V BUŇKÁCH U937 ZUZANA MATUŠKOVÁ, MAREK RÁC b, MICHAL KŘUPKA c PAVEL ANZENBACHER Ústv frmkologie, Lékřská fkult, Univerzit Plckého v Olomouci, Hněvotínská 3, 775 15 Olomouc, b Ktedr biofyziky, Přírodovědecká fkult, Univerzit Plckého v Olomouci, 17. Listopdu 1192/12, 771 46 Olomouc, c Ústv imunologie, Lékřská fkult, Univerzit Plckého v Olomouci, Hněvotínská 3, 775 15 Olomouc zuzu.mtuskov@seznm.cz Mlondildehyd (MDA), jko mrker lipidové peroxidce, se používá ke stnovení oxidčního stresu v biologických systémech. Oxidční stres nezhrnuje pouze lipidovou peroxidci, tedy poškození lipidů, le tké poškození proteinů DNA. Cílem této studie bylo zjistit, zd jsou lipidy poškozovány společně s proteiny, nebo poškození lipidů probíhá odlišně než je u proteinů. V této studii byly použity buňky lidského monocytárního lymfomu (U937) k nim byl přidán roztok peroxidu vodíku nebo roztok peroxidu vodíku se sírnem železntým. Tto směs byl inkubován 30 minut ve tmě při lbortorní teplotě. Následně byly buňky centrifugovány, pomocí ultrzvuku rozbity nkonec k nim byl přidán roztok 2,4-dinitrofenylhydrzinu (DNPH). Toto derivtizční činidlo vytvořilo s mlondildehydem komplex MDA-DNPH, který byl měřen pomocí HPLC s UV detekcí při 310 nm (cit. 1 ). Mobilní fáze byl připrven z 25 mm triethylminu s ph 3,5 cetonitrilu v poměru 1:1. Dále byl použit kolon s reverzní stcionární fází C 18 předkolonou se stejnou stcionární fází. Anlýz probíhl 10 min při 35 C. Ze změřených nlýz bylo zjištěno, že po přidání peroxidu vodíku k buňkám U937 nedošlo k žádným změnám v hldinách MDA-DNPH ve srovnání s kontrolním vzorkem. Nproti tomu při použití peroxidu vodíku se sírnem železntým, kdy dojde k Fentonově rekci vzniku hydroxylového rdikálu, došlo ve srovnání s kontrolním vzorkem ke čtyřnásobnému nárůstu hldiny MDA-DNPH. Tyto výsledky potvrzují, že lipidy nejsou primárním cílem rektivních forem kyslíku k poškození lipidů nestčí jen peroxid vodíku, nýbrž hydroxylový rdikál vytvořený Fentonovou rekcí. Tto práce vznikl z podpory grntů CZ.1.05/2.1.00/01.0030, CZ.1.05/2.1.00/01.0007, MSM6198959215 MSM6198959223. 1. Pilz J., Meineke I., Gleiter Ch. H.: J. Chromtogr., B 742, 315 (2000). 1S-09 VYUŽITÍ FOTOAKTIVOVATELNÝCH NANOSOND A HMOTNOSTNÍ SPEKTROMETRIE KE STUDIU STRUKTURY A INTERAKCÍ CYTOCHROMU P450 2B4 A CYTOCHROMU B 5 TOMÁŠ JEČMEN,b, MONIKA KOBEROVÁ b, PETR NOVÁK,b, PETR HODEK b, JIŘÍ HUDEČEK b MIROSLAV ŠULC,b Mikrobiologický ústv AV ČR, v.v.i., Vídeňská 1083, Prh, b Univerzit Krlov, Hlvov 8, Prh toms.jecmen@centrum.cz Cytochromy P450 (P450) jsou terminálními monooxygensmi biotrnsformčního systému, který se účstní detoxikce cizorodých látek, metbolismu léčiv bohužel i ktivce některých krcinogenů. Ktlytická ktivit některých P450 je ovlivňován jejich fkulttivním redoxním prtnerem cytochromem b 5, který může v ktlytickém cyklu P450 zprostředkovávt přenos druhého elektronu. K rozšíření dosvdních zjištění o struktuře zkoumných proteinů jejich vzájemných interkcích, konkrétně v málo prozkoumné oblsti jejich ukotvení v lipidické membráně, jsme vyvinuli novou metodu fotoznčení. Při rekombinntní expresi cytochromu b 5 jsme nhrdili 3 methioniny loklizovné v membránové kotvě proteinu fotoktivovtelným nlogem methioninu, který se po ozáření UV světlem kovlentně 496
Sekce 1 Cen Shimdzu váže n blízké minokyselinové řetězce fixuje tk jejich přípdnou interkci. Fotoktivovtelný cytochrom b 5 jsme použili jko sondu k mpování membránové topologie P450 2B4. Ob cytochromy jsme in vitro rekonstituovli v lipidické membráně, směs jsme fotoktivovli elektroforeticky jsme seprovli vzniklé rekční produkty. Podle molekulové hmotnosti se ptrně jedná o komplexy obou proteinů v molárních poměrech 1:1, 1:2 2:1. Jednotlivé proteinové komplexy byly vyříznuty z gelu po odbrvení štěpeny protesou. Vzniklá směs peptidů byl nlyzován LC-FT-ICR hmotnostní spektrometrií s vysokým rozlišením. Identifikovli jsme intergující minokyseliny cytochromů v prostředí lipidické membrány vůbec poprvé jsme tké přímo potvrdili interkci membránových helixů zkoumných proteinů. V závislosti n experimentálním provedení rekonstituce proteinů do lipidické membrány byl předpokládán slbší/silnější vzb cytochromu b 5. Nším přístupem bylo prvděpodobně nlezeno odlišné kovlentní spojení proteinů odpovídjící strukturně odlišné orientci cytochromu b 5 v lipidické membráně. Získné strukturní informce jsou využity pro zpřesňování in silico modelů jejich interkce, vlidci experimntrálních postupů in vitro rekonstituce následně i výsledků frmkologického či toxikologického testování v tomto systému. Podporováno GA ČR (P207/12/0627 305/09/H008) projektem Univerzity Krlovy v Prze (projekt UNCE #42). boli uskutočňovné pri nízkom ph (ph 4) s cieľom odstrániť potenciálne interferujúce zložky (slbé kyseliny) prítomné v pitných vodách. Pre študovné nlyty boli dosihnuté RSD hodnoty migrčných čsov v rozmedzí 0,1 2,7 %. Pre plochy ich píkov boli dosihnuté RSD hodnoty v rozmedzí 1,2 9,9 %. Použitím 900 nl objemu dávkovnej vzorky n čip boli získné detekčné limity (LOD) v rozmedzí 45 180 g l 1 pre nlyty. Pri ZE stnovenich s výťžnosti HAA pohybovli v rozshu 67 101 % pri ITP-ZE stnovenich s dné hodnoty pohybovli v rozmedzí 59 103 %. Nižšie výťžnosti študovných HAA boli predovšetkým spôsobené ich dsorbciou n povrch knálikov n čipe. Študovné boli j rôzne niónicky migrujúce látky, ko potenciálne komigrujúce zložky, prítomné n rôznych koncentrčných úrovnich v pitných vodách (chlorid, fluorid, bromid, jodid, sírn, oxlát, dusičnn, dusitn, octn fosfát). Pri ITP-ZE stnovenich hlogénoctových kyselín, z uvedených zložiek interferovli ib octn fosfát. Negtívny vplyv dných zložiek v reálnych vzorkách vôd bol eliminovný použitím off-line predúprvy n báze extrkcie membránou (SLME). Táto predúprvná technik umožnil selektívnu extrkciu prekoncentrovnie nlytov v reálnych vzorkách pitných vôd. Tto práce vznikl z podpory grntov VEGA 1/1149/12, VVCE 0070-07 nd OPVV-2009/4.1/02-SORO (CE Green II). 1S-10 STANOVENIE VEDĽAJŠÍCH PRODUKTOV DEZINFEKCIE PITNÝCH VÔD NA ELEKTROFORETICKOM ČIPE LADISLAV DANČ, MARIÁN MASÁR RÓBERT BODOR Ktedr nlytickej chémie, Prírodovedecká fkult Univerzity Komenského V Brtislve, Mlynská dolin CH-2, 842 15 Brtislv ldislv.dnc@fns.unib.sk Cieľom práce bol vývoj nových metód kpilárnej elektroforézy (CE) n čipe pre sepráciu stnovenie niektorých neprchvých vedľjších produktov dezinfekcie pitných vôd, ktoré vznikjú pri chlorácii, príp. ozonizácii. V tomto kontexte boli študovné kyseliny monochlóroctová, dichlóroctová, trichlóroctová, monobrómoctová dibrómoctová. Hlogénoctové kyseliny (HAA) sú toxické pre ľudí, živočíchy rstliny niektoré z nich vykzujú krcinogénne vlstnosti. CE seprácie boli relizovné n čipe so spájnými knálikmi (CC) vodivostnými detektormi umiestnenými n oboch koncoch seprčných knálikov. Zónovoelektroforetické seprácie (ZE) uskutočňovné v druhom seprčnom knáliku boli kombinovné s elektroforetickou (ZE-ZE) lebo izotchoforetickou (ITP-ZE) prekoncentráciou nlytov. ZE seprácie hlogénoctových kyselín boli študovné v rôznych nosných elektrolytoch v rozmedzí ph 4 6. Pri ITP-ZE sepráciách hlogénoctových kyselín bol ITP použitá n CC čipe ko dávkovci technik vzorky. ITP seprácie 497