MOŽNOSTI DIAGNOSTIKY INTOXIKACÍ ANTIDEPRESIVY. MARIE STAŇKOVÁ a, PETER ONDRA b a PETR KURKA a. Experimentální část

Transkript

1 MOŽNOSTI DIAGNOSTIKY INTOXIKACÍ ANTIDEPRESIVY MARIE STAŇKOVÁ, PETER ONDRA b PETR KURKA Ústv soudního lékřství FN Ostrv, 17. listopdu 1790, Ostrv-Porub, b Ústv soudního lékřství FN Olomouc, Hněvotínská 3, Olomouc mrie.stnkov@tiscli.cz, petr.kurk@fnspo.cz ondr@tunw.upol.cz Došlo , přeprcováno , přijto Klíčová slov: ntidepresiv nových genercí, nlýz ntidepresiv, TLC, GC-MS Úvod Pojem ntidepresiv (AD) 1 zhrnuje psychofrmk, která přímo specificky působí n depresivní stvy endogenního (vznikjícího uvnitř orgnismu), méně již n deprese exogenního původu, npř. deprese somtogenní sociogenní. Jde o chemicky různorodou skupinu látek s rozdílnými frmkokinetickými frmkodynmickými vlstnostmi, metbolismem, výskytem nežádoucích účinků, rozdílnou toxicitou. Ze širokého sortimentu této skupiny léčiv byl vybrán ntidepresiv nových genercí, která z velké části nhrdil reltivně toxická léčiv ze skupiny tzv. tricyklických ntidepresiv. Výskyt různých forem poruch náldy, depresí úzkostných stvů mjí dle sttistických údjů stále rostoucí tendenci. Roční prevlence se odhduje téměř n 10 %. Je tedy zřejmé, že léčb těchto problémů přináší i rostoucí spotřebu uvedených léků, jejichž účinné látky se pk objevují stále čstěji i v biologickém mteriálu nlyzovném v toxikologických lbortořích. S novými ntidepresivy se setkáváme u kutních intoxikcí především v kombinci s dlšími léčivy nebo lkoholem, to u úmyslných nebo náhodných (především mlé děti), při kontrole terpie, zneužití td. Toxikologická nlýz je důležitou součástí dignostických postupů potřebných k získání informce o kutní nebo chronické expozici vyšetřovné osoby toxikologicky význmné látce noxe. K získání vlidních výsledků toxikologického vyšetření je potřeb volit vhodný biologický mteriál. Běžně odebírný biologický mteriál k toxikologickému vyšetření u živých osob je moč, žludeční obsh (zvrtky, výplch žludku) krev. U mrtvých osob kromě uvedených mteriálů i vzorky tkání (játr, ledviny). Dlším krokem je izolce nox z biologického mteriálu. Výběr izolčního postupu závisí n druhu nlyzovného biologického mteriálu, chrkteru hledné či stnovovné látky, volbě následně použité nlytické metody k průkzu či stnovení vlstní látky td. Důležitá pk je i volb nlytické metody pro účely záchytu, identifikce stnovení stopových koncentrcí nox v biologickém mteriálu. Přední místo v nlýze nových ntidepresiv zujímjí seprční techniky. V mnoh toxikologických lbortořích je pro záchyt identifikci extrhovných látek stále využíván metod tenkovrstvé chromtogrfie. Anlýze nových ntidepresiv je v litertuře věnováno již málo nových prcí 2,3. Metod GC-MS je stále nejcitlivější, specifická univerzální nlytická metod pro nlýzu nízkomolekulárních látek. Spojení plynové chromtogrfie s hmotnostní detekcí poskytuje účinnou seprci, selektivitu citlivost detekce umožňuje využít širokých dtbází hmotnostních spekter. Právě využití této techniky pro záchyt identifikci jednotlivých látek ze skupiny nových ntidepresiv jejich metbolitů je věnován celá řd prcí. Většinu ntidepresiv je možno zchytit identifikovt bez předchozí derivtizce 4,5. Murer Bickeboeller nlyzují ntidepresiv ve formě jejich cetylderivátů 6, Ep spol. 7 po derivtizci N-methylbis(trifluorcetyl)midem. Ke kvlittivní nlýze cíleně změřené n úzký okruh látek je využíván tké metod HPLC, to s využitím UV detektoru 8 či hmotnostního detektoru 9. Pro kvntittivní nlýzu nových ntidepresiv je rovněž využíván metod plynové chromtogrfie, to s použitím plmenoionizčního detektoru (FID) 10 citlivého termoionizčního detektoru (NPD, ATP) 11,12. Více se používá metod GC-MS Pro kvntittivní nlýzu nových ntidepresiv je více prcí věnováno využití vysokoúčinné kplinové chromtogrfie (HPLC). Z detektorů jsou nejvíce zstoupeny UV detektory, fluorescenční detektory detektory s diodovým polem (DAD) Stále více prcí je změřeno n využití spojení HPLC s hmotnostním detektorem (LC-MS) V článku je popsán možnost průkzu stnovení vybrných ntidepresiv (mprotilin, minserin, trzodon, milnciprn, mirtzpin, moclobemid, citloprm, fluoxetin, fluvoxmin, proxetin, sertrlin venlfxin) chromtogrfií n tenké vrstvě plynovou chromtogrfií s hmotnostní detekcí včetně výtěžnosti extrkce sledovných látek tuhou fází z biologického mteriálu. Byly stnoveny limity detekce (LOD) limity kvntifikce (LOQ) pro sledovná AD. Byly vyprcovány metody kvntifikce příslušných ntidepresiv v krvi (séru) sledován linerit klibrčních závislostí těchto metod v rozshu od terpeutických ž po letální koncentrce. Experimentální část Chemikálie Byly použity chemikálie diethylether p.. nestbilizovný, kyselin chlorovodíková konc., dichlormethn, isopropyllkohol, methnol, cetonitril, ethyl-cetát, monik (25% vodný roztok), kyselin fosforečná, sírn sodný bezvodý (vše p.., Pent Chrudim, ČR), ethnol, hydroxid 916

2 sodný(p.., Jn Kulich Hrdec Králové, ČR), hydrogenfosforečnn drselný trihydrát (p.., Merck, Německo), octn sodný, sírn monný (p.., Lch-Ner, s.r.o. Nertovice, ČR). Substnce ntidepresiv: citloprm hydrobromid fluoxetin hydrochlorid od fy Zentiv, Prh, ČR, fluovoxmin mleát, mprotilin hydrochlorid, minserin hydrochlorid, proxetin hydrochlorid, sertrlin hydrochlorid, trzodon hydrochlorid venlfxin hydrochlorid fy Sigm Aldrich, USA. Milnciprn hydrochlorid byl izolován z tbletové formy léku Ixel fy Pierre Fbre Médicment, Boulogne Cedex, Frncie, mirtzpin byl izolován z tbletové formy léku Remeron fy N. V. Orgnon, Oss, Nizozemsko moclobemid byl izolován z tbletové formy léku Aurorix fy Hoffmnn-L Roche Ltd, Bsel, Švýcrsko. Identit byl ověřen bodem tání nlýzou metodou GC-MS. Stndrdní roztoky ntidepresiv byly připrveny o koncentrci 0,025 mg ml 1 v ethnolu (odpovídá koncentrci bzí jednotlivých ntidepresiv). Stndrdní roztok vnitřního stndrdu propiverinu v ethnolu byl připrven o koncentrci 0,06 mg ml 1. Aprtur Extrkce tuhou fází byl proveden s použitím extrkčních kolonek SPEC-DAU, 3 ml, 30 mg, Vrin, USA, SPE Evidex, 6 ml, 400 mg, J&W Scientific, USA, DC- Alufolien Kieselgel 60, 0,2 mm fy Merck, Německo. Mteriál metody Pro účely kvlittivní nlýzy byly u přípdů kutní intoxikce dodány moč, přípdně žludeční obsh pcient. Pokud šlo o kontrolu terpie, byl vždy dodán moč v přípdech letálních intoxikcí žludeční obsh, jterní tkáň moč (pokud bylo možno odebrt). Pro kvntittivní nlýzu (stnovení hldiny) byl dodán srážlivá krev. Zprcování vzorků Kvlittivní nlýz Vzorky ml moče (M) zfiltrovného žludečního obshu (ŽO) byly po úprvě ph n hodnotu 3 4 zředěnou kyselinou chlorovodíkovou extrhovány do etheru. Po úprvě ph vodné fáze n hodnotu 10 byl znovu proveden extrkce do etheru. Extrkce byl proveden dvkrát z kyselého dvkrát z lklického prostředí. K extrkci byl brán vždy 1,5 násobek objemu etheru k objemu vodné fáze. Ether byl odpřen n vodní lázni do such. Odprky byly oznčeny M(A) příp. ŽO(A) extrkty z kyselého prostředí M(B) příp. ŽO(B) extrkty z lklického prostředí. Moč byl poté podroben kyselé hydrolýze. K moči byl přidán koncentrovná kyselin chlorovodíková (1 ml koncentrovné kyseliny chlorovodíkové n 10 ml moče). Směs se 10 min vřil pod zpětných chldičem, po ochlzení úprvě ph n 8 10 byl proveden extrkce do 1,5 násobného objemu etheru k objemu vodné fáze. Po odpření byl odprek oznčen M(H). Odprky byly pro nlýzu rozpuštěny v 0,5 ml ethnolu. Kvntittivní nlýz Pro účely kvntittivní nlýzy byl ntidepresiv izolován extrkcí tuhou fází (SPE) následujícím postupem: kondicionce: 0,5 ml methnolu, 0,5 ml fosfátového pufru (ph 6); plikce vzorku (1 ml sér s přídvkem 10 µl vnitřního stndrdu 4 ml fosfátového pufru o ph 6); promytí: 0,5 ml destilovné vody, 0,5 ml cetátového pufru o ph 4,5, 0,5 ml methnolu, 5 min vkuum; eluce: 2 1 ml směsi dichlormethn-isopropyllkohol-monik (4:1:0,1). Eluát byl odpřen při teplotě 40 C v proudu dusíku do such odprek byl rozpuštěn v 0,05 ml methnolu. Stejným postupem byly zprcovány vzorky pro klibrci v rozshu 0,02 2,00 mg l 1 pro citloprm, mprotilin, minserin, mirtzpin, sertrlin venlfxin, 0,10 2,00 mg l 1 pro fluoxetin, fluvoxmin, milnciprn, moclobemid proxetin 0,50 2,50 mg l 1 pro trzodon. Anlýz chromtogrfií n tenké vrstvě (TLC) Pro nlýzu etherových extrktů M(B) přípdně M(H) obshujících izolovná ntidepresiv z příslušného biologického mteriálu byl použit modifikovný systém dle Večerkové 26. Extrkty rozpuštěné v 0,5 ml ethnolu byly nnášeny n vrstvu silikgelu (DC Alufolien Kieselgel) proti směsi stndrdů (dizepm, minofenzon, fenmetrzin, kodein, tropin ozn. DAFCA). Chromtogrfické desky byly vyvíjeny v soustvě ethyl-cetát-ethnolmonik (36:2:2) detegovány těmito činidly: kyselin sírová v ethnolu (1:1), Drgendorffovo činidlo jod v chloroformu. Po postřiku kyselinou sírovou v ethnolu byl chromtogrm prohlížen v UV světle při nm. Anlýz plynovou chromtogrfií s hmotnostní detekcí (GC-MS) Kvlittivní nlýz Anlýzy byly provedeny n přístroji GC-MS firmy Shimdzu, Jponsko. Plynový chromtogrf GC 17 A, hmotnostní detektor MS QP 5050 s elektronovou ionizcí (EI, 70 ev). Kolon kpilární, délk 30 m, průměr 0,32 mm, tloušťk filmu 0,25 µm 5 % poly(fenylsiloxnu) fáze Zebron ZB 5 (firmy Phenomenex, USA). Podmínky nlýzy: teplot injektoru 250 C, detektoru (interfce) 280 C, progrm nlýzy 80 C (20 C/ min) 270 C (15 min), nosný plyn helium s konstntním průtokem 2,2 ml min 1 teplotní progrm 1. Anlýzy byly provedeny ve skenovcím modu v rozshu m/z K identifikci bylo použito srovnání retenčních čsů t R hmotnostních spekter seprovných látek s t R hmotnostními spektry stndrdů. 917

3 Tbulk I GC-MS chrkteristiky nlyzovných ntidepresiv Antidepresivum m/z t R [min] pík č. (obr. 4) Citloprm 58, ,1 10 Fluoxetin 59, 183 7,9 1 Fluvoxmin 187, 276 8,0 2 Mprotilin 59, ,7 8 Minserin 193, 264 9,9 5 Milnciprn 204, 246 8,3 3 Mirtzpin 195, ,2 7 Moclobemid 100, ,0 6 Proxetin 192, ,5 12 Sertrlin 262, ,9 9 Trzodon 176, ,6 Venlfxin 58, 134 9,2 4 Propiverin b 183, ,2 11 Jiný teplotní progrm (teplotní progrm 2); b vnitřní stndrd Kvntittivní nlýz Stnovení ntidepresiv ve vzorcích sér (krve) po jejich izolci metodou SPE bylo provedeno metodou GC- MS z podmínek uvedených výše. Pouze pro stnovení trzodonu je nutné změnit teplotní progrm nlýzy n 150 C (30 C/min) 280 C (10 min) s konstntním průtokem nosného plynu heli 2,0 ml min 1 teplotní progrm 2. Anlýz byl prováděn v SIM modu s 2 hodnotmi m/z pro stnovovnou látku s 2 hodnotmi m/z pro vnitřní stndrd (tb. I). Do přístroje byl dávkován 1 µl vzorku. Výsledky diskuse Zprcování biologického mteriálu V použitém postupu klsické frkční extrkce (moči žludečního obshu) do etheru přecházejí sledovná ntidepresiv jejich metbolity do extrktu z lklického prostředí M(B). Sertrlin jeho metbolity proxetin s metbolity se v moči ncházejí ve volné formě jen v nízkých koncentrcích je vhodné jejich uvolnění z konjugátu kyselou hydrolýzou. Pro účely kvntittivní nlýzy byl použit izolce vybrných ntidepresiv extrkcí tuhou fází (SPEC- DAU) postupem modifikovným pro izolci bzických látek. Byl určen extrkční výtěžnost, která se u většiny sledovných ntidepresiv pohybuje nd 70 %, pouze u moclobemidu trzodonu je výtěžnost nižší (kolem 40 %), le i u nich je výtěžnost reprodukovtelná (tb. II). Anlýz metodou TLC Pro sledovná ntidepresiv byl testován citlivost detekce (kyseliny sírová v ethnolu, Drgendorffovo činidlo jod v chloroformu). Použitý postup detekce je málo citlivý pro záchyt fluxetinu, fluvoxminu, sertrlinu proxetinu v moči, protože uvedená ntidepresiv se do mo- Tbulk II Výtěžnosti extrkce ntidepresiv, limity detekce kvntifikce Antidepresivum Výtěžnost extrkce [%] RSD [%] Výtěžnost extrkce b [%] RSD [%] LOD c [ng ml 1 ] LOQ d [ng ml 1 ] Citloprm 98 4,4 95 5,9 0,5 2 Fluoxetin 80 4,7 85 6, Fluvoxmin 72 8,9 73 2, Mprotilin 75 4,0 90 4,3 2 5 Minserin 99 2,7 94 6,4 0,5 2 Milnciprn 93 4,9 91 5, Mirtzpin 80 9,0 82 6,5 0,5 2 Moclobemid 40 2,5 49 9,3 2 5 Proxetin 81 6,2 92 6, Sertrlin 86 5,3 83 7,0 0,5 2 Trzodon 40 9,3 49 9, Venlfxin 99 3,6 91 5,8 0,5 2 Výtěžnost extrkce při koncentrci 0,2 mg l 1, b výtěžnost extrkce při koncentrci 2,0 mg l 1, c LOD limit detekce, d LOQ limit kvntifikce 918

4 Tbulk III Regresní rovnice korelční koeficienty klibrčních přímek ntidepresiv Obr. 1. Anlýz TLC vybrných ntidepresiv; desk: DC- Alufolien Kieselgel, vyvíjecí soustv: ethyl-cetát-ethnolmonik (36:2:2); 1 DAFCA (dizepm, minofenzon, fenmetrzin, kodein, tropin), 2 citloprm, 3 fluoxetin; 4 fluvoxmin; 5 mprotilin; 6 minserin; 7 moclobemid, 8 trzodon; A detekce činidly: kyselin sírová, Drgendorffovo činidlo, jod v chloroformu, B fluorescence v UV světle (365 nm) po postřiku kyselinou sírovou. PF původní form léčiv, M metbolit Antidepresivum Regresní rovnice R 2 Citloprm y = 2,2133 x 0,0198 0,9996 Fluoxetin y = 0,1976 x 0,0057 0,9986 Fluvoxmin y = 0,0443 x + 0,0002 0,9976 Mprotilin y = 0,7341 x 0,0035 0,9997 Minserin y = 0,8258 x 0,0033 0,9932 Milnciprn y = 0,1493 x 0,0013 0,9971 Mirtzpin y = 1,2566 x 0,0236 0,9987 Moclobemid y = 0,5993 x ,9945 Proxetin y = 0,1716 x 0,006 0,9989 Sertrlin y = 0,4076 x + 0,0036 0,9965 Trzodon y = 0,4615 x + 0,0154 0,9866 Venlfxin y = 4,3793 x 0,0238 0,9877 Koncentrční intervl: 0,02 2,00 mg l 1 pro citloprm, mprotilin, minserin, mirtzpin, sertrlin venlfxin, 0,10 2,00 mg l 1 pro fluoxetin, fluvoxmin, milnciprn, moclobemid proxetin, 0,50 2,50 mg l 1 pro trzodon če vylučují v původní formě pouze v minimálním množství. Záchyt v žludečním obshu při předávkování je i u uvedených látek dosttečně citlivý, pokud nejde o intoxikci směsí léků. TLC jko identifikční metod v použitém uspořádání je dosttečná pro rychlý průkz citloprmu, mprotilimu, minserinu, moclobemidu, trzodonu venlfxinu (záchyt od cc 1 µg ve skvrně). Velmi citlivá je pro citloprm, který dává s Drgendorffovým činidlem postupně tmvnoucí skvrnu (záchyt od cc 0,2 µg ve skvrně), mirtzpin trzodon, které v UV světle vykzují modrou fluorescenci (citlivost od cc 0,2 µg ve skvrně). Záznmy TLC nlýzy některých AD jsou uvedeny n obr. 1. Anlýz metodou GC-MS Kvlittivní nlýz Sledovná ntidepresiv jejich metbolity lze z- poměr ploch AD/vnitřní stndrd koncentrce, mg l -1 3 poměr ploch AD/vnitřní stndrd 1,2 1,0 0,8 0,6 0,4 0,2 0, koncentrce, mg l -1 Obr. 2. Závislost poměru plochy píku ntidepresiv (AD) vnitřního stndrdu n koncentrci jednotlivých AD v séru; 1 moclobemid, 2 minserin, 3 mirtzpin, 4 citloprm, 5 venlfxin Obr. 3. Závislost poměru plochy píku ntidepresiv (AD) vnitřního stndrdu n koncentrci jednotlivých AD v séru; 6 fluvoxmin, 7 milnciprn, 8 fluoxetin, 9 proxetin, 10 sertrlin, 11 trzodon, 12 mprotilin 919

5 Intenzit (x10,000,000) TIC Obr. 4. GC-MS chromtogrm sér s přídvkem stndrdů ntidepresiv; podmínky extrkce progrm nlýzy je uveden v textu. 1 fluoxetin, 2 fluvoxmin, 3 milnciprn, 4 venlfxin, 5 minserin, 6 moclobemid, 7 mirtzpin, 8 mprotilin, 9 sertrlin, 10 citloprm, 11 vnitřní stndrd propiverin, 12 proxetin. Koncentrce AD v séru 5 mg l 1, citloprm venlfxin 0,5 mg l 1. Anlýz ve skenovcím modu t R, min Tbulk IV Stnovené hldiny ntidepresiv v krvi u letálních přípdů předávkování Číslo Pohlví/věk Antidepresivum Hldin [mg l 1 ] Dlší léky Hldin [mg l 1 ] 1. Ž/41 citloprm 0,80 promethzin 10,20 2. Ž/47 moclobemid 18,20 promethzin 7,44 3. M/50 minserin 1,33 levomepromzin 0,51 dosulepin 2,76 lkohol 0,49* 4. M/38 moclobemid 32,00 promethzin 19,00 lkohol 1,88* 5. M/51 citloprm 1,24 levomepromzin 0,04 ketmin NQ 6. M/37 citloprm 2,39 morphin 2,52 lkohol 1,20* 7. Ž/55 minserin 0,02 trmdol 2,15 sertrlin 0,76 zolpidem 0,22 betxolol 0,12 8. M/74 trzodon 3,20 betxolol 0,35 lkohol 2,45* 9. Ž/51 trzodon 7,90 ibuprofen 56,50 dibenzepin 30,00 chlordizepoxid 0, M/55 mprotilin 12,20 zolpidem 1, M/39 citloprm 3,31 metoprolol 40,20 Toxické hldiny: citloprm nd 0,5 mg l 1, moclobemid nd 3 mg l 1, minserin nd 0,5 mg l 1, sertrlin nd 0,5 mg l 1, trzodon nd 4 mg l 1, mprotilin nd 0,5 mg l 1 (27), NQ nekvntifikován, * hldin lkoholu v g kg 1 920

6 Intenzit Intenzit Intenzit t R, min b c m/z m/z Obr. 5. GC-MS chromtogrm sér pcient intoxikovného moclobemidem; nlýz v SIM modu () s m/z pro moclobemid (b) m/z pro vnitřní stndrd (c) (propiverin) chytit identifikovt v použitém systému GC-MS nlýzy (teplotní progrm 1). Pouze pro záchyt trzodonu je nutno použít vyšších teplot (teplotní progrm 2). Sledovná ntidepresiv některé jejich metbolity v moči je možno nlýzou GC-MS zchytit jednoznčně identifikovt po plikci terpeutických dávek. Záchyt proxetinu sertrlinu jejich metbolitů v moči je možný po jejich uvolnění z konjugátu kyselou hydrolýzou. Kvntittivní nlýz Stnovení ntidepresiv ve vzorcích krve (sér) po jejich izolci extrkcí tuhou fází bylo provedeno metodou GC-MS. Byly stnoveny limity detekce (LOD) kvntifikce (LOQ). Jko mez detekce byl brán hodnot poměru signálu píku sledovného ntidepresiv k šumu (S/N) = 3, jko mez stnovitelnosti (kvntifikce) pk poměr S/N = 10. Výsledky jsou uvedeny v tb. II. Pro většinu sledovných ntidepresiv je použitá metod dosttečně citlivá limit kvntifikce je výrzně nižší než v ligtertuře uváděná nejnižší terpeutická hldin (citloprm, minserin, mprotilin, mirtzpin, moclobemid, sertrlin venlfxin). Pro osttní ntidepresiv je použitá metod dosttečná pro jejich stnovení v přípdech kutních intoxikcí. Lineární odezv použité metody byl ověřen n stndrdních roztocích ntidepresiv v rozshu tří řádů (od nejnižších terpeutických hldin ž po hldiny toxické přípdně letální). K výpočtu směrnice regresní křivky, úseku n ose Y i korelčního koeficientu R 2, který byl ve většině přípdů vyšší než 0,99, byl použit metod lineární regrese. Prmetry klibrčních křivek jsou uvedeny v tb. III. N obr. 2 3 jsou uvedeny klibrční přímky pro jednotlivá AD. N obr. 4 je uveden chromtogrfický záznm nlýzy sér s přídvkem vybrných ntidepresiv n obr. 5 jsou záznmy reálného vzorku nlyzovného sér při intoxikci moclobemidem. Metod byl plikován při kvntifikci ntidepresiv u letálních i neletálních přípdů intoxikcí. V tb. IV jsou uvedeny výsledky nlýz u přípdů letálních intoxikcí novými ntidepresivy v kombinci s jinými léčivy. Závěr V článku jsou uvedeny možnosti záchytu identifikce vybrných ntidepresiv nových genercí (mprotilin, minserin, trzodon, milnciprn, mirtzpin, moclobe- 921

7 mid, citloprm, fluoxetin, fluvoxmin, proxetin, sertrlin venlfxin) v biologickém mteriálu. Záchyt identifikce v použitém uspořádání metod TLC GC-MS jsou dosttečně citlivé spolehlivé pro většinu sledovných ntidepresiv. Pro účely kvntittivní nlýzy metodou GC-MS byl použit izolce sledovných ntidepresiv z biologického mteriálu (krev, sérum) extrkcí tuhou fází (SPEC-DAU) s postupem modifikovným pro bzické látky. Metod je u všech sledovných AD dosttečně citlivá pro přípdy kutních intoxikcí u většiny ntidepresiv (citloprm, fluoxetin, fluvoxmin, minserin, mprotilin, mirtzpin, moclobemid, sertrlin, trzodon venlfxin) citlivá i pro jejich stnovení v rozpětí terpeutických hldin. LITERATURA 1. Švestk J.: Psychofrmk v klinické prxi. Grd Publishing, Prh Misztl G., Hopkl H., Slwik T.: Act Pol. Phrm. 54, 257 (1997). 3. Nováková E.: Soud. Lék. 49, 2 (2004). 4. Lcssie E., Rgot S., Gulier J. M., Mrquet P., Lchtre G.: Act. Clin. Belg. Suppl. 1, 20 (1999). 5. Goeringer K. E., Rymon L., Christin G. D., Logn B. K.: J. Forensic Sci. 45, 633 (2000). 6. Muer H. H., Bickeboeller-Friedrich J.: J. Anl. Toxicol. 24, 340 (2000). 7. Ep C. B., Bouchoux G., Amey M., Cochrd N., Svry L., Bumnn P.: J. Chromtogr. Sci. 36, 365 (1998). 8. Dllet Ph., Lbt L., Kummer E., Dubost J. P.: Eur. J. Emergency Med. 8, 79 (2001). 9. Berzs Nevdo J. J., Villsenor Lleren M. J., Contento Slcedo A. M., Agus Nuevo E.: J. Chromtogr. Sci. 38, 200 (2000). 10. Kollroser M., Schober C.: Chromtogrphi Mrtinez M. A., Snchez de l Torre C., Almerz E.: J. Anl. Toxicol. 28, 174 (2004). 12. Fontnille P., Jourdil N., Villier C., Bessrd G.: J. Chromtogr., B: Biomed. Sci. Appl. 692, 337 (1997). 13. Stch R. F., Murer H. H.: J. Anl. Toxicol. 27, Burrows D. L., Hgrdom A. N., Hrln G. C., Wllen E. D. B., Ferslew K. E.: J. Anl. Toxicol. 27, Reymond P., Amey M., Spucne A., Lmbert S., Konrt H., Ep C. B., Bumnn P. J.: J. Chromtogr. 616, 221 (1993). 16. Gillrd Y., Pepin G.: Forensic Sci. Int. 87, 239 (1997). 17. Ohkubo T., Osni T., Sugwr K., Ishid M., Otni K., Mihr K., Ysui N.: J. Phrm. Phrmcol. 47, 340 (1995). 18. Duverneuil Ch., de l Grndmison G. L., de Mzncourt Ph, Alvrez J. C.: Ther. Drug Monit. 25, Titier K., Csting N., Scotto-Gomez E., Pehourcq F., Moore N., Molimrd M.: Ther. Drug Monit. 25, Tournel G., Houdret N., Hedouin V., Deveu M., Gosset D., Lhermitte M.: J. Chromtogr., B.: Biomed. Sci. Appl. 761, 147 (2001). 21. Kristoffersen L., Bugre A., Lundnes E.: J. Chromtogr., B: Biomed. Sci. Appl. 734, 229 (1999). 22. Nir M. B., Aron J. J., Prognon P., Mhuzier G.: Anlyst 123, 2267 (1998). 23. Guttech U., Reutsch K. M.: Clin. Chem. Lb. Med. 41, Jun H., Zhiling Z., Nunce L.: J. Chromtogr., B.: Anl. Technol. Biomed. Life Sci. 820, 33 (2005). 25. Horkins J. M., Gross A. S., Shenfield G. M., Rivory L. P.: J. Chromtogr., B: Biomed. Sci. Appl. 754, 319 (2001). 26. Večerková J.: Postupy při záchytu identifikci léčiv jejich metbolitů v biologickém mteriálu pomocí chromtogrfie n tenkých vrstvách. SPN, Prh Schulz M.: Phrmzie 58, 448 M. Stňková, P. Ondr b, nd P. Kurk ( Institute of Forensic Medicine, University Hospitl, Ostrv, b Institute of Forensic Medicine, Fculty of Medicine, Plcký University, Olomouc): The Possibilities of Dignostics in Antidepressnt Intoxictions The rticle presents the possibilities of identifiction of selected ntidepressnts of new genertions in biologicl mterils. Identifiction of the drugs by TLC nd GC- MS fter ether extrction from biologicl mterils (urine, stomch content) ws tested. The detection is sensitive nd relible for most of the drugs. For quntittive GC-MS nlysis, the drugs were isolted from blood or serum by solid phse extrction (SPE). The recovery of most drugs is over 70 %. Limits of detection (LOD, 3 S/N) s well s limits of quntifiction (LOQ, 10 S/N) hve been determined. The LOD re ng l 1 for citloprm, mprotiline, minserine, mirtzpine, moclobemide, sertrline nd venlfxine, 15 ng l 1 for fluoxetine nd milnciprn nd 50 ng l 1 for fluvoxmine, proxetine nd trzodone. LOQ re 2 5 ng l 1 for citloprm, mprotiline, minserine, mirtzpine, moclobemide, sertrline nd venlfxine, 50 ng l 1 for fluoxetine nd milnciprn nd 100 ng l 1 for fluvoxmine, proxetine nd trzodone. For ll the monitored drugs, the method is sufficiently sensitive in cute intoxictions nd for most of the drugs lso in determintion of therpeutic levels. 922