Analýzy v Sekci aplikovaného výzkumu zelenin a speciálních plodin VÚRV, v.v.i. Marie Nosálková Sandra Benická Přemysl Indrák

Transkript

1 Analýzy v Sekci aplikovaného výzkumu zelenin a speciálních plodin VÚRV, v.v.i. Marie Nosálková Sandra Benická Přemysl Indrák

2 Představení Sekce aplikovaného výzkumu VÚRV v.v.i. : vznik v roce 1994 jako nástupce Oddělení genových zdrojů VŠÚZ součást Centra regionu Haná v současné době celkem 22 pracovníků z toho 6 kurátorů, 6 polních pracovníků 4 pracovníci v laboratořích, z toho 2 analytici

3 Budova Sekce aplikovaného výzkumu VÚRV

4 CENTRUM REGIONU HANÁ Konečný projekt realizace probíhá

5 Genetické zdroje zeleniny rod Lactuca (salát polní) je zastoupen 30 položkami rod Capsicum (paprika) 509 položkami rod Daucus (mrkev) obsahuje přes 400 položek rod Allium tj. česnek - obsahuje přes 600 cibule šalotky (Allium ascalonicum ) je kolem 130.

6 Aromatické, kořeninové a léčivé kopr vonný (Anethum graveolens) 30 položek fenykl obecný (Foeniculum vulgare) 23položek Mentha (máta) 40 položek Oregano (dobromysl) 45 položek Thymus (tymián) 50 položek Melissa (meduňka) 10 položek Salvia (šalvěj) 20 položek Artemisia (pelyněk) 15 položek Lavandula (levandule) 20 položek Cannabis (konopí) 28 položek Callendula (měsíček) 28 položek Nicotiana (tabák) 191 položek rostliny

7 22 zaměstnanců 10,5 ha obhospodařované půdy 150 stabilních izolačních klecí Laboratoř pro základní stanovení obsahových látek (sušina, silice- destilační aparatury, GC, HPLC) Laboratoř molekulární biochemie Fytotron Infekční pole (Plasmodiophora brassicae) Sušárna

8 Ošetřování a hodnocení kolekce

9 Sušárna

10 Laboratoře : Laboratoř molekulární biochemie Laboratoř mykologická, fytopatologická a entomologická Laboratoře analytické

11 Laboratoře analytické Provádí fyzikálně-chemické zkoušky: příprava a zpracování vzorků k analýze (destilace, extrakce, dekarboxylace, lyofilizace, ztráta sušením ) analýza zpracovaných vzorků dalšími separačními metodami (GC, HPLC)

12 Využívané separační techniky UHPLC Dionex UltiMate 3000 s DAD a MSD (TSQ quantum access max) Thermo Fischer. Ve většině případů jsou používány kolony Nucleodur C18 Gravity, 100 x 2 mm /1,8 um + guard kolonky s identickou náplní. Slouží pro identifikaci a stanovení látek typu flavonoidů, rostlinných barviv, alkaloidů apod.

13 GC AGILENT 7890A

14 Užívané kapilární kolony (od firmy HP resp. Agilent): nepolární: HP-1 60 m x 0,53 mm/5 μm HP-5 30m x 0,32 mm/0,25 μm HP-5MS 30m x 0,25 mm/0,25 μm polární: DB-WAX 30 x 0,25mm/0,25 μm HP-Innowax 60m x 0,53 mm/1 μm Equity m x 0,25 mm/0,25 μm Supelcowax 10 15m x 0,53 mm/1 μm

15 DESTILAČNÍ APARATURY

16 Stanovení jednotlivých druhů aromatických, kořeninových a léčivých rostlin U aromatických rostlin obsahujích těkavé látky se provádí izolace komplexu těkavých látek téměř výlučně destilací s vodním parou a to metodou modifikovanou pro naše účely vycházející z příslušného lékopisného článku. Postup je následující: - do kulaté baňky se zábrusem navážíme určité množství rostlinného materiálu. Toto množství se liší podle toho jedná-li se o čerstvý materiál nať a nebo o suchý materiál nať či semena. - k takto připravenému vzorku se přidá destilovaná voda, do zábrusu se vloží destilační aparátek pro analýzu silicí, baňka se vloží do topného hnízda. Za mírného varu probíhá destilace po dobu 4 hodin. Silice po ochlazení v chladiči se hromadí v kalibrované části aparátku. - po ukončení destilace a ochlazení kapaliny v baňce se odečte množství vydestilované silice a přepočítá se na %. Takto získaná silice či éterický olej se uchová v zásobní viálce v ledničce při cca 4 C až do doby GC analýzy.

17 GC analýza těkavých komponent silice probíhá za standardních podmínek. Opět vycházíme z metodik uvedených v lékopisu modifikovaných pro naše účely. Např. GC analýza silice levandule probíhá na koloně HP5-MS s teplotním gradientem 70 C/15 min.-nárůst teploty 2 C/min.- na 180 C, průtok 1 ml He/min., split 1:100, vzorek je ředěn 1:100 hexanem pokud se jedná o stanovení majoritních komponent v tomto případě injektujeme 1 μl roztoku vzorku a nebo je injektován objem 0,1 μl přímo silice pro zjištění a identifikaci všech eluovaných látek. Tak, jak je popsáno v lékopisných článcích hodnotíme tzv. chromatografický profil.

18 Chromatogram I : Stanovení chromatografického profilu silice tymiánu Použité kolony : DB-WAXETR HP5-MS

19 Chromatogram II : Stanovení chromatografického profilu silice levandule Použité kolony : DB-WAXETR HP5-MS

20 Chromatogram III : Stanovení chromatografického profilu levandule Požitá kolona : INNOWAX 60 m Průtok 1,5 ml

21 Chromatogram IV : Stanovení chromatografického profilu levandule Požitá kolona : INNOWAX 60 m Průtok 3,0 ml

22 Chromatogram V : Stanovení chromatografického profilu Cannabis sativa

23 DĚKUJI ZA POZORNOST A PŘEJI PĚKNÝ DEN