Jana Nohejlová. Studentská vědecká konference

Transkript

1 Jana Nohejlová Školitel: MUDr. Petr Hájek, Ph.D. Ústav anatomie Lékařská fakulta v Hradci Králové Univerzita Karlova v Praze Studentská vědecká konference

2 Barvené mozkové řezy jsou užitečnou pomůckou při výuce neuroanatomie Cílem barvení je zvýraznit kontrast mezi bílou a šedou hmotou

3 Sincke (1926) berlínská modř Mainland (1928) delší trvanlivost barvy Mulligan (1931) ochranný film Modifikace: Green (1933), Tompsett (1956), Gregg (1975), Le Masurier (1935) Hewitt (1959) barvení bílé hmoty (Sudan) Braak (1978) Astra Blue; Heller, Stoddard (1986) Alcian Blue Alston (1981) Wu, Kiernan (2001) - tetrasodná sůl kyseliny Cu-ftalocyanin tetrasulfonové (CPTS) Loftspring et al. (2008) - CPTS bez použití zahřátého fenolu

4 Modifikace Mulliganovy barvicí metody dle Le Masuriera (1935), naposledy úspěšně použita v roce 2003 Setření ostrého kontrastu mezi bílou a šedou hmotou

5

6 Zjistit příčinu selhání Le Masurierovy metody Zvolit vhodnou alternativní barvicí techniku Aplikovat barvení také na tkáně fixované v alkoholovém roztoku

7 Fixované lidské mozky darované pražským psychiatrickým pracovištěm v roce 2003 (dále označeny jako mozky Praha ) Lidské mozky fixované ve formalínu v r Lidské mozky fixované v letech v alkoholovém roztoku (etanol, glycerol, formalín, aceton a voda v poměru 14:1:3:3:8)

8 Le Masurierova metoda (Le Masurier, 1935): 2 min ponoření mozkových řezů do Mulliganova roztoku (40 g krystalického fenolu, 5 g síranu měďnatého, 1,25 ml 0,1M kyseliny chlorovodíkové v 1 litru destilované vody) při 60-65ºC 2 min oplach pod tekoucí vodou 2 min v 1% roztoku chloridu železitého 2 min oplach pod tekoucí vodou 2 min v 1% roztoku ferrokyanidu draselného 8 h oplach pod tekoucí vodou

9 Alstonova metoda (Alston, 1981): 20 min v Mulliganově roztoku při pokojové teplotě 20 s ve směsi xylen/polyclens* (100:1 V/V) 10 s ve 2% roztoku hydroxidu sodného 2 min ve 2% roztoku ferrokyanidu draselného 8h oplach pod tekoucí vodou * Polycell Polyclens Trade Brush Cleaner byl v pokusu nahrazen Rokoředidlem UNI RK002 na základě dostupnosti a odpovídajícího složení

10 Věk dárce (Roberts a Hanaway, 1969) Poškození bílé hmoty (Mainland, 1928, Blair, 1932) Přítomnost krve Druh a délka fixace, refixace Krájecí nástroje, materiál nádob Čistota, objem a koncentrace chemikálií Reakční časy Chemické složení a teplota vody, délka oplachu

11 mozek č. 1 mozek č. 2 10% formalín

12 Le Masurier, strana A dvojnásobná koncentrace CuSO4, strana A Le Masurier, strana B dvojnásobná koncentrace CuSO4, strana B

13 mozky Praha bez oplachu s oplachem 3 měsíční fixace 1 měsíční fixace 3 m. 1 m. mozky Praha

14 alkoholová fixace

15 Alston Le Masurier mozky Praha nově fixované mozky

16 Le Masurierova metoda se v posledních letech jeví z neznámých důvodů v místních podmínkách jako nespolehlivá Alstonova metoda je adekvátní náhradou, je dostatečně účinná i v případě alkoholové fixace Mozky darované ústavu anatomie v r nejsou pro barvení vhodné

17

18 doc. MUDr. Dáša Slížová, CSc. MUDr. Petr Hájek, Ph.D. MUDr. Filip Caisberger MUDr. Petr Hejna, Ph.D., MBA Ing. Pavel Šiman, CSc., MUDr. Pavel Tomšík, Ph.D. p. Jarmila Slezáková, laborantky ústavu anatomie

19 Alston RL. A batch staining method for brain slices allowing volume measurements of gray and white matter using an image analyzing computer (Quantimet 720). Stain Technol 1981; 56: Hewit W. A method for staining whole brains for gross and macroscopic study. J Anat 1959; Vol 93: Le Masurier HE. Simple method of staining macroscopic brain sections. Arch NeurPsych 1935; 34(5): Loftspring MC et al. Selective gray matter staining of human brain slices: optimized use of cadaver materials. Biochem Histochem 2008; 83(3): Mulligan JH. A method of staining the brain for macroscopic study. J Anat 1931; Vol 65: Suriyaprapadilok L, Withyachumnarnkul B. Plastination of Stained Sections of the Human Brain: Comparison between Different Staining Methods. J Int Soc Plastination 1997; Vol 12, No 1: Wu M, Kiernan JA. A new method for surface staining large slices of fixed brain using a copper phthalocyanine dye. Biotech Histochem 2001; 76(5-6):