Rapid-VIDITEST. Rotavirus. (Jednokrokový kazetový test pro in vitro diagnostiku rotavirů ve stolici ) Návod k použití soupravy

Transkript

1 Rapid-VIDITEST Rotavirus (Jednokrokový kazetový test pro in vitro diagnostiku rotavirů ve stolici ) Návod k použití soupravy Výrobce: VIDIA spol. s r.o., Nad Safinou II 365, Vestec, Jesenice u Prahy, Tel: , Fax: , objednavky@vidia.cz, Web: POUŽITÍ: Rapid-VIDITEST Rotavirus je jednokrokový imunochromatografický test pro kvalitativní detekci rotavirů ve stolici. Pouze pro laboratorní použití. ÚVOD: Virová gastroenteritida je infekční onemocnění vyúsťující do zvracení a průjmu. Gastroenteritidu způsobují včetně rotavirů také noroviry, adenoviry, sapoviry a astroviry. Hlavní příznaky virové gastroenteritidy je vodnatý průjem a zvracení. Infikované osoby můžou mít také bolesti hlavy, horečku a křeče v břiše (bolesti břicha). Ve většině případů, příznaky začínají po 1 až dvou dnech po infekci virem způsobujícím gastroenteritidu a mohou trvat od 1 do 10 dnů v závislosti na infikujícím viru. Některé studie ukázaly, že délka trvání příznaků je přibližně 4 až 5 dní. Rotaviry jsou nejčastější příčinou akutních průjmů u dětí do dvou let. PRINCIP TESTU: Rapid-VIDITEST Rotavirus je kvalitativní imunochromatografický test pro stanovení rotavirů ve stolici. Na testovacích zónách membrány kazety jsou navázány myší monoklonální protilátky proti virovým antigenům. V průběhu testování vzorek reaguje s barevným konjugátem, který byl imobilizovaný na membráně (anti-rotavirus myší monoklonální protilátky červená mikročástice). Směs barevného konjugátu a vzorku se pohybuje směrem nahoru přes testovací zóny kapilární vzlínavostí. V případě pozitivního výsledku budou specifické protilátky imobilizované na testovací zóně membrány vázat barevné částice. Objeví se různé barevné linky v závislosti na přítomnosti viru ve vzorku. Pomocí těchto linek se interpretuje výsledek. Směs se pohybuje dále směrem nahoru do kontrolní zóny, kde jsou imobilizované protilátky pro kontrolní zónu. V té by se měla vždy objevit zelená linka. Přítomnost zelené linky ověřuje: 1) že se použil dostatečný objem vzorku, 2) že došlo ke správné vzlínavosti vzorku, 3) interní kontrolu reagencií. 1

2 OBSAH SOUPRAVY: - testovací kazety - odběrové zkumavky s aplikační tyčinkou obsahující ředicí roztok pro vzorky - návod k použití - certifikát kontroly balení POTŘEBNÝ MATERIÁL NEDODÁVANÝ SE SOUPRAVOU: - nádoba na sběr vzorků - jednorázové rukavice - stopky SBĚR A PŘÍPRAVA VZORKŮ: Odeberte dostatečné množství vzorku (1-2g nebo 1-2 ml v případě tekutého vzorku). Vzorky odebírejte do čistých odběrových nádob. Test by měl proběhnout co nejdříve po odebrání vzorku stolice. Pokud to není možné, lze vzorky uchovávat 1-2 dny před testováním v chladničce při 2-4 C. V případě delšího skladování, maximálně 1 rok, by se měly vzorky uchovávat zmrazené při -18 až -28 C. Po rozmražení nechte vzorky před testem vytemperovat na laboratorní teplotu. Příprava vzorků a) Odšroubujte víčko odběrové zkumavky s ředicím roztokem (1). b) Pomocí aplikační tyčinky na víčku odběrové zkumavky odeberte z různých částí vzorku stolice malé množství (přibližně 100 mg) vzorku stolice (2). Zašroubováním víčka odběrové zkumavky ponoříte aplikační tyčinku do ředicího roztoku. V případě tekutého vzorku odeberte vzorku kapátkem a přidejte 100 l vzorku do odběrové zkumavky c) Důkladně promíchejte zkumavku za účelem dobré homogenizace vzorku (3). 2

3 PRACOVNÍ POSTUP: Před testováním nechte testovací kazetu a vzorek stolice vytemperovat na laboratorní teplotu (15-30 C). Neotvírejte obal, dokud nejste připraveni provést test. 1. Po vytemperování kazety otevřete obalovou folii v označeném místě. 2. Znova protřepejte odběrovou zkumavku se vzorkem stolice za účelem dobré homogenizace vzorku. Uřízněte nebo ustřihněte konec špičky zkumavky (4). 3. Těsně před použitím vyjměte Rapid-VIDITEST Rotavirus z obalové folie a položte ho na vodorovnou podložku. Nedotýkejte se membrány v místě testovací zóny a zóny pro aplikaci vzorku. Použijte samostatnou odběrovou zkumavku a kazetu pro každý vzorek a kontrolu zvlášť. 4. Přidejte přesně 5 kapek nebo 150 l naředěného vzorku z odběrové zkumavky do oválného okénka označeného šipkou a písmenem S (5). 5. Po 10 minutách odečtěte výsledek (objeví se barevné linky). 3

4 INTERPRETACE VÝSLEDKŮ: Vzorky se aplikují na bílý konec kazety. Výsledky se odečítají v prostředním bílém okénku. Úsek tohoto okénka blíže k bílému konci kazety se nazývá,,výsledková zóna. Úsek okénka dále od bílého konce se nazývá,,kontrolní zóna. Zelená Červená Červená Negativní Rotavirus pozitivní Neplatný Neplatný NEGATIVNÍ: Objeví se pouze ZELENÁ linka v kontrolní zóně. Výsledková zóna zůstane čistá. POZITIVNÍ: Kromě kontrolní ZELENÉ linky se objeví také ČERVENÁ linka ve výsledkové zóně. NEPLATNÝ: Test je neplatný, pokud se v kontrolní zóně neobjeví zelená linka bez ohledu na přítomnost červené linky ve výsledkové zóně. Důvodem nepřítomnosti kontrolní linky může být nedostatečný objem vzorku nebo nesprávné provedení testu. V tomto případě opakujte přípravu vzorku a proveďte test na nové testovací kazetě. Pokud se problém opakuje, kontaktujte distributora. Poznámka k interpretaci výsledku: Intenzita červené barevné linky ve výsledkové zóně závisí na koncentraci antigenů ve vzorku. Tímto testem nelze kvantitativně stanovit množství antigenu ani jeho nárůst v průběhu onemocnění. PLATNOST TESTU: Test je platný pouze v případě, když se v kontrolní zóně objeví zelená linka. V testu je použit interní standard. Zelená linka, která se objevuje v kontrolní zóně je vnitřní kontrolou testu. Potvrzuje dostatečný objem vzorku a správný průběh testu. Čisté pozadí je interní negativní kontrolou pozadí. Pokud test funguje správně, pozadí ve výsledkové zóně by mělo zůstat čisté a nemělo by mít vliv na odečtení výsledku. 4

5 OMEZENÍ TESTU: 1. Rapid-VIDITEST Rotavirus poukazuje jen na přítomnost rotavirů ve vzorku (kvalitativní detekce) a měl by být použit pro detekci rotavirů jen ve vzorcích stolice. Tímto testem nelze získat kvantitativní výsledky ani hodnotit nárůst koncentrace rotavirových antigenů. 2. Nadbytečné množství vzorku stolice může vést k nesprávnému výsledku (objevují se hnědé linky). V tomto případě je nutné opakovat přípravu vzorku a test. 3. Některé vzorky stolice můžou zvyšovat intenzitu kontrolní linky. 4. Pokud je výsledek testu negativní a klinické příznaky přetrvávají, doporučujeme použít jinou metodu pro potvrzení výsledku. Negativní výsledek nevylučuje možnou rotavirovou infekci. 5. Výsledky tohoto testu poskytují předpokládanou diagnózu rotavirové infekce. Lékař by měl diagnózu stanovit až po laboratorním a klinickém potvrzení infekce. 6. Test musí být udělán do dvou hodin po otevření zataven 7. Výrobce nezaručuje funkčnost testu po uplynutí expirační doby. OČEKÁVANÉ HODNOTY: Každým rokem je v USA je v důsledku rotavirové infekce hospitalizováno přibližně dětí, zaznamenáno návštěv pohotovostí dětí mladších 5 let a půl milionu návštěv praktických lékařů. Odhaduje se, že v USA ročně zemře 100 dětí v důsledku komplikací rotavirové infekce. Rotavirové infekce postihují populace všech socioekonomických skupin a vyskytují se stejně v industrializovaných i rozvojových krajinách. Rozdíly v hygienických opatřeních nebo dodávkách vody pravděpodobně nesouvisí s incidencí rotavirových infekcí. ÚČINNOST TESTU: Hodnocení účinnosti testu bylo provedeno porovnáním výsledků Rapid-VIDITEST Rotavirus s komerčně dostupným testem na stanovení rotavirů na bázi ELISA. Citlivost: Při stanovení citlivosti vykazuje Rapid-VIDITEST Rotavirus shodu >98% s jinými komerčně dostupnými testy. Specificita: Při stanovení specifity vykazuje Rapid-VIDITEST Rotavirus shodu >99% s jinými komerčně dostupnými testy. Křížové reakce: Nebyly zaznamenány žádné křížové reakce s jinými gastrointestinálními patogeny, organismy a látkami příležitostně se vyskytujícími v stolici: adenoviry, astroviry, E.coli, Campylobacter, Giardia lamblia a lidský hemoglobin. 5

6 SKLADOVÁNÍ A STABILITA: Skladujte v originálním obalu při teplotě 2-30 C. Test je stabilní do data expirace uvedeného na obalu. Nezmrazujte. BEZPEČNOSTNÍ OPATŘENÍ: - Pouze pro in vitro diagnostiku. - Nepoužívejte po uplynutí expirační doby. - Se vzorky manipulujte jako s potenciálně infekčním materiálem. - Odpad likvidujte jako biologický infekční odpad v souladu s příslušnými předpisy. REFERENCE: 1. SILVA DE OLIVEIRA, CONSUELO; LINHARES, ALEXANDRE C. et al., Rotavirus: clinical features and prevention, Jornal de Pediatria - Vol. 75, Supl.1, POUŽITÉ SYMBOLY: Určeno pro diagnostiku in vitro Datum expirace Číslo šarže (LOT) Výrobce Poslední revize tohoto návodu: 04/2013 6