Rapid-VIDITEST. Rota-Adeno. (Jednokrokový blisterový test pro in vitro diagnostiku rotavirů a adenovirů) Návod k použití soupravy

Transkript

1 Rapid-VIDITEST Rota-Adeno (Jednokrokový blisterový test pro in vitro diagnostiku rotavirů a adenovirů) Návod k použití soupravy Výrobce: VIDIA spol. s r.o., Nad Safinou II 365, Vestec, Jesenice u Prahy, Tel: , Fax: , objednavky@vidia.cz, Web: POUŽITÍ: Rapid-VIDITEST Rota-Adeno je jednokrokový barevný imunochromatografický test pro kvalitativní detekci antigenů rotaviru a adenoviru ve stolici pro diagnózu infekce způsobené rotaviry a adenoviry. Pouze pro laboratorní použití. ÚVOD: Virová gastroenteritida je infekce způsobené různými viry, které mají za následek zvracení nebo průjem. Gastroenteritidu může způsobit mnoho různých virů, včetně rotavirů, norovirů, adenovirů, sapovirů a astrovirů. Hlavními příznaky virové gastroenteritidy jsou vodnatý průjem a zvracení. Postižená osoba může mít také bolesti hlavy, horečku a křeče v břiše. Obecně platí, že se příznaky začnou objevovat 1-2 dny po infekci virem vyvolávajícím gastroenteritidu a může trvat po dobu 1 až 10 dnů v závislosti na tom, který virus je původcem nemoci. Některé výzkumy ukázaly, že doba trvání příznaků je 3-4 dny. Akutní průjem u dětí mladších dvou let věku je nejčastěji zapříčiněn rotaviry. Adenoviry a astroviry způsobují průjem většinou u malých dětí, ale k nakažení může dojít i u starších dětí a dospělých osob. PRINCIP TESTU: Rapid-VIDITEST Rota-Adeno je kvalitativní imunochromatografický test pro stanovení rotaviru a adenoviru ve stolici. Na testovacích zónách membrány jsou navázány myší monoklonální protilátky proti antigenům rotaviru a adenoviru.v průběhu testování vzorek reaguje s barevným konjugátem, který byl imobilizovaný na membráně (anti-rotavirové monoklonální protilátky a/nebo anti-adenovirové monoklonální protilátky). Směs barevného konjugátu a vzorku se pohybuje směrem nahoru kapilární vzlínavostí. V případě pozitivního výsledku specifické protilátky imobilizované na testovací zóně membrány vážou směs barevného konjugátu a objeví se jedna nebo dvě barevné linky. Zelená linka se objeví v kontrolní zóně a její přítomnost ověřuje: 1) že se použil dostatečný objem vzorku 2) že došlo ke správné vzlínavosti vzorku 3) interní kontrolu reagencií. 1

2 OBSAH SOUPRAVY: - Testovací blistery (stripy) - Odběrová zkumavka s aplikační tyčinkou obsahující ředicí roztok pro vzorky - Návod k použití - Certifikát kontroly balení POTŘEBNÝ MATERIÁL NEDODÁVANÝ SE SOUPRAVOU: - nádoba na sběr vzorků - zkumavky nebo lahvičky - jednorázové rukavice - stopky SBĚR A PŘÍPRAVA VZORKŮ: Shromážděte dostatečné množství stolice (1-2 g nebo ml tekutého vzorku). Vzorky stolice by měly být odebrány do čistých odběrových nádob (žádné konzervační látky nebo přepravní média). Vzorky lze uchovávat v chladničce (2-8 C) po dobu 1-2 dnů před testováním. V případě delšího skladování, maximálně 1 rok, by se měly vzorky uchovávat zmrazené při -20 C. Před použitím vzorky nechte vytemperovat na laboratorní teplotu. POSTUP: Příprava vzorků Pro každý vzorek použijte samostatnou odběrovou zkumavku. Odšroubujte víčko odběrové zkumavky a ponořením aplikační tyčinky na víčku odběrové zkumavky do vzorky naberte malé množství vzorku stolice (cca 125 mg) (zanořte čtyřikrát). Zašroubujte lahvičku s pufrem a vzorkem stolice. Důkladně promíchejte zkumavku za účelem dobré homogenizace vzorku (3). V případě kapalných vzorků stolice, odsajte fekální vzorek kapátkem a přidejte 125 µl do odběrové lahvičky s pufrem. Naberte malé množství vzorku Promíchejte vzorek s ředícím roztokem vzorek Odlomte špičku zkumavky Pracovní postup: Před testováním nechte testovací blister, vzorek stolice a ředící roztok vytemperovat na laboratorní teplotu (15-30 C). Neotvírejte sáček, dokud nejste připraveni provést test. Pro provedení testu můžete zvolit způsob a) nebo b). a) Použití blisteru jako kazetového testu 1. Oddělte blister, držte jej za nezakrytý konec a otevřete obalovou fólii. Strip nevyjímejte z obalu a použijte ho co nejdříve. 2. Znova protřepejte odběrovou zkumavku se vzorkem stolice za účelem dobré homogenizace vzorku. Blister se stripem položte na vodorovnou podložku a označte jej. 2

3 3. Přidejte přesně 5 kapek naředěného vzorku z odběrové zkumavky na bílý konec stripu. Po 10 minutách odečtěte výsledek. b) Ponořením 1. Oddělte blister, držte jej za nezakrytý konec a otevřete obalovou fólii. 2. Znova protřepejte odběrovou zkumavku se vzorkem stolice za účelem dobré homogenizace vzorku. Přeneste 10 kapek vzorku homogenizovaného v ředicím roztoku z odběrové zkumavky do čisté lahvičky nebo zkumavky. Ponořte testovací strip bílým koncem do zkumavky tak, aby strip nebyl ponořen hlouběji než po rysku vyznačenou pod bílými šipkami. Nechte ho ponořený 1-3 minuty a pak ho položte na vodorovnou podložku. Po 10 minutách odečtěte výsledek. Jako kazetový test 5 kapek Ponořením 10 kapek Ponořte strip Počkejte 10 minut vzorek INTERPRETACE VÝSLEDKU: Adenovirus Rotavirus Adenovirus-Rotavirus Negativní Neplatný Adenovirus pozitivní: Ve výsledkové zóně se objeví dvě linky. ČERVENÁ linka v místě označeném T1 a ZELENÁ kontrolní linka v místě označeném C. Rotavirus pozitivní: Ve výsledkové zóně se objeví dvě linky. ČERVENÁ linka v místě označeném T2 a ZELENÁ kontrolní linka v místě označeném C. Adenovirus-Rotavirus pozitivní: Ve výsledkové zóně se objeví tři linky. ZELENÁ linka v místě označeném C, a dvě ČERVENÉ v místě označeném T1 at2. Negativní: Objeví se pouze ZELENÁ linka (kontrolní) v místě označeném C. Neplatný: Test je neplatný, pokud se v kontrolní zóně neobjeví ZELENÁ linka bez ohledu na to, zda se v zóně výsledku objeví jedna nebo obě červené linky. Důvodem nepřítomnosti kontrolní linky může být nedostatečný objem vzorku nebo nesprávné provedení testu. Zkontrolujte pracovní postup a opakujte test s novou testovací sadou. Pokud problém přetrvává, přestaňte testovací soupravu používat a kontaktujte svého distributora. 3

4 Poznámka k interpretaci výsledku: Intenzita červené barevné linky v místě označeném (T1 a T2) závisí na koncentraci antigenů ve vzorku. Nicméně tímto kvalitativním testem nelze kvantitativně stanovit množství antigenu ani jeho nárůst v průběhu onemocnění. PLATNOST TESTU: V testu je použit interní standard. - Zelená linka, která se objevuje v kontrolní zóně (C) je vnitřní kontrolou testu. Potvrzuje dostatečný objem vzorku a správný průběh testu. OMEZENÍ TESTU: 1. Rapid-VIDITEST Rota-Adeno pouze naznačuje přítomnost rotavirové a adenovirvé infekce ve vzorku (kvalitativní detekce) a měl by být použit pouze pro detekci rotavirů a adenovirů ve vzorku stolice. Tímto kvalitativním testem nelze kvantitativně stanovit množství antigenu ani zvýšení koncentrace antigenů v průběhu onemocnění. 2. Nadbytečné množství vzorku stolice může vést k nesprávnému výsledku (objevují se hnědé linky). V tomto případě je nutné opakovat test se vzorkem naředěným pufrem. 3. Některé vzorky stolice mohou snížit intenzitu kontrolní linie. 4. Pokud je výsledek testu negativní a klinické symptomy přetrvávají, doporučuje se provést jiný test za použití jiných klinických metod. Negativní výsledek nemusí kdykoli vyloučit možnost infekce rotavirem a adenovirem. 5. Tento test pouze naznačuje přítomnost rotavirové a adenovirové infekce. Lékař by měl diagnózu stanovit až po laboratorním a klinickém potvrzení infekce. OČEKÁVANÉ VÝSLEDKY: Každý rok je v USA hospitalizováno asi dětí nakažených rotavirovou infekcí, odhadem dětí mladších než 5 let navštíví pohotovost a půl milionu dětí se objeví v ordinacích lékařů. Odhaduje se, že v USA umírá každý rok 100 dětí v důsledku komplikací způsobených rotavirovou infekcí. Rotavirus postihuje populaci ve všech socioekonomických skupinách a je stejně rozšířený ve vyspělých i rozvojových zemích, takže není pravděpodobné, že na výskyt infekce mají vliv sanitární či zásobovací postupy v daných oblastech. Rotavirové infekce se objevují v USA v podzimních měsících na jihozápadě a do jara se pak přesouvají na severovýchod, takže infekce jsou nejčastější v průběhu zimních měsíců. Nicméně se rotavirová infekce může objevit kdykoliv během roku. Adenoviry způsobují průjem většinou u malých dětí, ale můžou postihnout i starší děti a dospělé osoby. Adenovirové infekce se vyskytují v průběhu celého roku. ÚČINNOST TESTU: Citlivost a specifita Vyhodnocení bylo provedeno porovnáním výsledků získaných pomocí Rapid-VIDITEST Rota-Adeno a jiného komerčně dostupného rotarovirového testu (Ridascreen Rotavirus ELISA test, r-biopharm) a Adenovirus byl potvrzen pomocí PCR. Rapid-VIDITEST Rota-Adeno je vysoce specifický pro detekci rotaviru (>98%) a pro detekci adenoviru (>99%). Byla též zjištěna vysoká citlivost, pro detekci rotaviru (>99%) a pro detekci adenoviru (>99%) ve srovnání s výsledky komerčního membránového testu. 4

5 Použití myších monoklonálních protilátek při výrobě Rapid-VIDITEST Rota-Adeno zajišťuje vysoký stupeň specificity pro detekci těchto virů. Křížová reaktivita Byla stanovena křížové reaktivita testu Rapid-VIDITEST Rota-Adeno. Křížová reaktivita nebyla zaznamenána u níže uvedených běžných gastrointestinálních patogenů, jiných organismů a látek, které se občas vyskytují ve stolici: Astrovirus, Campylobacter, Clostridium difficile, Cryptosporidium parvum, Entamoeba hystolitica, Enterovirus, Escherichia coli, Giardia lamblia, Helicobacter pylori, Listeria monocytogenes, Norovirus, Salmonella, Shigella, Staphylococcus aureus. SKLADOVÁNÍ A STABILITA: Skladujte v originálním obalu chlazené nebo při laboratorní teplotě (2-30 C). Test je stabilní do data exspirace uvedeného na obalu. Test musí zůstat v uzavřeném obalu až do použití. Nezmrazujte. BEZPEČNOSTNÍ OPATŘENÍ: - Pouze pro in vitro diagnostiku. - Nepoužívejte po uplynutí expirační doby. - Test by měl zůstat v uzavřeném obalu až do použití. - Nepoužívejte test, pokud je sáček poškozen. - Dodržujte zásady správné laboratorní praxe, používejte ochranný oděv, ochranné rukavice, nejezte, nepijte a nekuřte. - Se vzorky manipulujte jako s potenciálně infekčním materiálem. - Odpad likvidujte v souladu jako biologický infekční odpad v souladu s příslušnými předpisy. - Test musí být proveden do 2 hodin od otevření sáčku. REFERENCE: 1. SILVA DE OLIVEIRA, CONSUELO; LINHARES, ALEXANDRE C. et al., Rotavirus: clinical features and prevention, Jornal de Pediatria - Vol. 75, Supl.1, GUILLERMO BERNAOLA, WALTER LUQUE. et al., Fisiopatología de las Infecciones por Adenovirus, Paediatrica Asociación de Médicos Residentes del Instituto de Salud del Niño Oct Mar Volumen 4, Nº 2 Págs POUŽITÉ SYMBOLY: Určeno pro diagnostiku in vitro Datum exspirace Teplotní omezení Číslo šarže (LOT) Výrobce Poslední revize tohoto návodu: 03/2015 5

6 6