Stádník, L. Doležalová, M. Možnosti optimalizace oplozovací schopnosti inseminačních dávek býků

Stádník, L. Doležalová, M. Možnosti optimalizace oplozovací schopnosti inseminačních dávek býků

ÚVOD PLODNOST základní vlastnost ekonomika chovu - úroveň je nedostatečná = ekonomicky dlouhodobě neudržitelná % zabřezávání 70 65 60 55 50 45 40 Vývoj produkce mléka a zabřezávání jalovic a krav dojených plemen 67,5 63,2 62,6 62,2 62,362,4 6662 6893 6285 6421 5755 8267 8047 7659 7726 7811 7537 7365 7155 61 62 61,4 60,7 60,7 60 60 59,4 8371 8000 7500 7000 6500 6000 52,2 5500 5000 44,9 43,3 42,7 42,8 3980 42,3 41,8 41,6 41,7 41,5 41,1 40,3 40 40,9 4500 4000 3500 1990 2000 2002 2003 2004 2005 2006 2007 2008 2009 2010 2011 2012 2013 2014 rok kg mléka / 305 dná laktace zabřezávání - krávy zabřezávání - jalovice KU mléko kg 2

ÚVOD DOJNICE (JALOVICE) x BÝCI zvýšený zájem čerstvý ejakulát ID - maximalizovat genetický potenciál plemeníka široké použití ID dopad - Optimalizace technologických postupů výroby ID Cílem: udržet oplozovací schopnosti ejakulátu zlepšit efektivitu chovu - vyšší úroveň zabřezávání dojnic, nižší spotřeba ID, kratší mezidobí 3

Technologický proces výroby ID Odběr ejakulátu vstupní hodnocení, parametry ejakulátu Ředění snaha předejít chladovému šoku, ochrana membrány spermie - ředidla (bezžloutkové, žloutkové, mléčné, Tris, na bázi sójového lecithinu,..) - aditiva do ředidel např. LDL cholesterol stabilizace membrán, různé koncentrace Chlazení a ekvilibrace = adaptace spermií na zpomalení metabolismu - pomalé chlazení z 34 C na 4 C - uchování ID v chladícím boxu 30 minut - 24 hodin - interakce ředidlo vs délka ekvilibrace Mrazení - možné poškození všech částí spermie snížení oplozovací schopnosti ejakulátu - kontrolovatelný proces mrazení, přesná kontrola tvorby ledových krystalů - velké množství metod (Direct Freezing snaha najít ideální mrazicí křivku) 4

1) ŘEDĚNÍ metodický postup Odběr ejakulátu - skupina plemenných býků (n=4), VIII 2014 - ejakulát standardně odebrán a v laboratoři vyhodnocen (objem, hustota a motilita) - minimální koncentrace 0,7 x 10 6 mm -3 a motilita 70% Ředění a zpracování ejakulátu - ředidla - AndroMed, BullXcell, Optidyl - pejety 0,25 ml, chlazení rychlostí 0,2 C/min na 4 C, ekvilibrace - 2 hodiny - pejety byly standardně mrazeny metodou Direct Freezing komerční křivka - n = 20 ID/býk/varianta Hodnocení spermií - rozmrazování 38 ± 1 C, 30 s - termodynamický test přežitelnosti spermií (0, 30, 60, 90, 120 min po rozmrazení) - barvení na živé/mrtvé spermie (Eosin, Nigrosin) - hodnocení pomocí fázového mikroskopu 5

1) ŘEDĚNÍ výsledky % motilita 76 66 56 46 36 26 16 Motilita a podíl živých spermií v závislosti na použitém ředidle A B A,a ANDROMED OPTIDYL BULLXCELL B nejnižší podíl živých spermií po rozmrazení - AndroMed (P < 0,01) VIA podíl živých spermií % MOT průměrná motilita spermií v průběhu TD testu MODE rozdíl motility v průběhu TD testu (120 0 min po rozmrazení) nejnižší průměrná motilita i největší pokles motility v průběhu TD testu Andromed (P < 0,01) Optidyl a BULLXcell - vyšší motilita a větší životaschopnosti spermií po rozmrazení A,a B VIA MOT MODE 6

1) ŘEDĚNÍ výsledky Vliv ředidla a individuality býka na motilitu spermií po rozmrazení 54 49 % motilita 44 39 34 29 ANDROMED OPTIDYL BULLXCELL 24 I II III IV býk I a III - nejvyšší průměrné motility při ředění ředidlem Optidyl býk II a IV - nejvyšší průměrné motility při ředění ředidlem BULLXcell nejnižší motilita vždy při ředění AndroMedem lepší motilita Optidyl a BullXcell ředidla na bázi vaječného žloutku býk 7

2) EKVILIBRACE metodický postup Odběr ejakulátu - skupina plemenných býků (n=6), IV - IX 2014 - ejakulát standardně odebrán a v laboratoři vyhodnocen (objem, hustota a motilita) - minimální koncentrace 0,7 x 10 6 mm -3 a motilita 70% Ředění a zpracování ejakulátu - ředidlo AndroMed - koncentrace spermií 10 x 10 6 v ID - pejety 0,25 ml, chlazení rychlostí 0,2 C/min na 4 C - 3 délky ekvilibrace - 30, 120 a 240 minut, komerční mrazící křivka - n = 20 ID / býk / varianta Hodnocení spermií - rozmrazování 38 ± 1 C, 30 s - termodynamický test přežitelnosti spermií (0, 30, 60, 90, 120 min po rozmrazení) - hodnocení pomocí fázového mikroskopu 8

2) EKVILIBRACE výsledky Vliv délky ekvilibrace na motilitu spermií celkově a v průběhu TD testu 41 50 A,B 40 45 39 % motilita 38 37 36 B 40 35 motilita 0 minut motilita 30 minut motilita M60 motilita M90 35 motilita M120 34 A 30 33 25 32 30 minut 120 minut 240 minut Nejvyšší motilita - ekvilibrace 240 minut (P < 0,01) Nejnižší motilita - ekvilibrace 30 minut (P < 0,01) 30 120 240 délka ekvilibrace (min) Nejvhodnější - ekvilibrace 120 minut (praxe) a více = vyšší motilita po rozmrazení 9

Vliv délky ekvilibrace a individuality býka na motilitu spermií po rozmrazení 55 50 45 2) EKVILIBRACE výsledky % motilita 40 35 30 ekvilibrace 30 minut ekvilibrace 120 minut ekvilibrace 240 minut 25 20 I II III IV V VI u většiny býků (I, II, V a VI) nejvyšší průměrná motilita po rozmrazení - ekvilibrace 240 minut býk III - nejvhodnější ekvilibrace 120 minut býk IV nejvyšší motilita - ekvilibrace 30 minut Vliv individuality býka jednoznačný, nezanedbatelný býk 10

3) MRAZENÍ metodický postup Odběr ejakulátu - skupina plemenných býků (n=9), IV 2013 - II 2014 - ejakulát standardně odebrán a v laboratoři vyhodnocen (objem, hustota a motilita) - minimální koncentrace 0,7 x 10 6 mm -3 a motilita 70% Ředění a zpracování ejakulátu - ředidlo AndroMed - koncentrace spermií 10 x 10 6 v ID - pejety 0,25 ml, chlazení rychlostí 0,2 C/min na 4 C, ekvilibrace - 2 hodiny - mrazení - 4 mrazicích křivek: standardní 3 fázová, 2 fázová, 3 fázová s rychlým poklesem teploty a 3 fázová s pomalejším poklesem teploty Hodnocení spermií - rozmrazování 38 ± 1 C, 30 s - termodynamický test přežitelnosti spermií (0, 30, 60, 90, 120 min po rozmrazení) - hodnocení pomocí fázového mikroskopu 11

10-10 -30 3-fázová -50 2-fázová C -70-90 3-fázová pomalá -110 3-fázová rychlá -130-150 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 min 12

50 Vliv typu mrazicí křivky na motilitu spermií po rozmrazení 45 B A 40 a C,b,c A 3) MRAZENÍ výsledky % motilita 35 30 25 20 15 b D D E B,a C D E c 0 minut 30 minut 60 minut 90 minut 120 minut 10 3-fázová 2-fázová 3-fázová rychlá 3-fázová pomalá nejvyšší motilita - 2 fázová mrazicí křivka (P < 0,01) nejnižší motilita - 3 fázová křivka s rychlým poklesem teploty nejlepší výsledky - 2 fázová křivka (počáteční teplota v komoře 4 C, v první fázi mrazení klesá na -10 C rychlostí 4 C/min, ve druhé fázi teplota klesá na -150 C rychlostí 40 C/min) 13

3) MRAZENÍ výsledky Vliv interakce býka a typu mrazicí křivky na motilitu spermií po rozmrazení 50 45 40 % motilita 35 30 25 20 3-fázová 2-fázová 3-fázová rychlá 3-fázová pomalá 15 10 I II III IV V VI VII VIII IX býk I, II, III, IV, V, VII, VIII a IX - nejvyšší motilita při 2 fázové křivce všichni býci nejnižší motilita - 3 fázová křivky s rychlým poklesem nejlepší výsledky - 2 fázová mrazicí křivka, býk 14

ZÁVĚR průkazný vliv individuality býka, významný rozdíl v parametrech ID po rozmrazení dle: výběru ředidla, volby délky ekvilibrace, zvoleného typu mrazící křivky interakce všech vlivů? individualizace výroby ID jednotlivých plemeníků umožní vyšší efektivitu/lepší oplozovací schopnost 15