Problematika, přínosy a omezení stanovení stopových prvků ve vlasech.



Podobné dokumenty
Sledování olova v krvi u exponovaných osob

Arteriální hypertenze vysoký krevní tlak

Metodický postup stanovení kovů v půdách volných hracích ploch metodou RTG.

Jednotné pracovní postupy testování odrůd STANOVENÍ OBSAHU TANINŮ V ČIROKU SPEKTROFOTOMETRICKY


Metodický pokyn pro stanovení obsahu rtuti (Hg) a kadmia (Cd) v přenosných bateriích nebo akumulátorech

Jednotné pracovní postupy zkoušení krmiv STANOVENÍ OBSAHU VÁPNÍKU, DRASLÍKU, HOŘČÍKU, SODÍKU A FOSFORU METODOU ICP-OES

TECHNICKÉ UKAZATELE PRO PLÁN KONTROL JAKOSTI VOD V PRŮBĚHU VÝROBY PITNÉ VODY

Ch - Stavba atomu, chemická vazba

7 denní experimentální měření imisí v lokalitě Košíky u Otrokovic

MINERÁLNÍ A STOPOVÉ LÁTKY

Revidované referenční hodnoty pro sledované toxické prvky v krvi a moči české populace

Epidemiologie, 4. seminář. SCREENING SCREENINGOVÉ TESTY v epidemiologii

Obsah 5. Obsah. Úvod... 9

KOMPLEXOMETRIE C C H 2

Základní příčiny: Jiné hledisko třídění příčin: 1) genetická vnímavost

Nové normy na specifikace dřevních pelet, dřevních briket, dřevní štěpky a palivového dřeva pro maloodběratele

Základy pedologie a ochrana půdy

VYUŽITÍ TEPELNÉHO ZMLŽOVAČE V AAS

č. 98/2011 Sb. VYHLÁŠKA ze dne 30. března 2011 o způsobu hodnocení stavu útvarů povrchových vod, způsobu hodnocení ekologického potenciálu silně

Oligobiogenní prvky bývají běžnou součástí organismů, ale v těle jich již podstatně méně (do 1%) než prvků makrobiogenních.

VYHODNOCENÍ VÝSLEDKŮ MĚŘENÍ FAKTORŮ PRACOVNÍHO PROSTŘEDÍ STOMATOLOGICKÝCH PRACOVIŠŤ

Základní stavební částice

Vzdělávací oblast: Člověk a příroda. Vyučovací předmět: Chemie. Třída: tercie. Očekávané výstupy. Poznámky. Přesahy. Žák: Průřezová témata

HYCOL. Lis tová hno jiva. HYCOL-Zn kulturní rostliny. HYCOL-Cu kulturní rostliny. HYCOL-E OLEJNINA řepka, slunečnice, mák

Citlivostní analý za pojistna sazba

2. ÚVODNÍ USTANOVENÍ KANALIZAČNÍHO ŘÁDU

PEMZA, ALTERNATIVNÍ FILTRAČNÍ MATERIÁL VE VODÁRENSTVÍ

PŘÍLOHY. k návrhu SMĚRNICE EVROPSKÉHO PARLAMENTU A RADY

Kontrola kvality. Marcela Vlková ÚKIA, FNUSA Veronika Kanderová CLIP, FN Motol

10. Minerální výživa rostlin na extrémních půdách

Hodnocení ankety MM N = 39

Elektronová mikroskopie v materiálovém výzkumu

ENVItech Bohemia s.r.o. Vyhodnocení kvality ovzduší v Otrokovicích v roce 2015

CA15-3 IRMA Souprava CA15-3 IRMA umožňuje přímé in-vitro kvantitativní stanovení s tumorem asociovaného antigenu CA15-3 v lidském séru

13/sv. 8 (85/503/EHS) Tato směrnice je určena členským státům.

CRP. Axis - Shield. SINGLE TESTS CRP kvantitativní stanovení pomocí přístroje NycoCard Reader II

KANALIZAČNÍ ŘÁD. stokové sítě obce NENKOVICE

Vybrané toxické a benefitní prvky v krvi seniorů (grant IGA) srovnání s výsledky MZSO

DESET LET SLEDOVÁNÍ KVALITY VODY A SEDIMENTU PRAŽSKÉHO BOTIČE LUCIE VEČEŘOVÁ,DANA KOMÍNKOVÁ, JANA NÁBĚLKOVÁ, HANA HORÁKOVÁ

Pro Hané. Kniha vyšla díky laskavé podpoøe firem. doc. MUDr. Eliška Sovová, Ph.D., MBA OTÁZEK A ODPOVÌDÍ O KREVNÍM TLAKU

SBÍRKA ZÁKONŮ ČESKÉ REPUBLIKY

Sekvenční injekční analýza laboratoř na ventilu (SIA-LOV) (Stanovení obsahu heparinu v injekčním roztoku)

Dolomitické vápno a stabilizace popílků

Posílení spolupráce p mezi MZLU a dalšími institucemi v terciárním vzdělávání a výzkumu CZ.1.07/2.4.00/12.045

ZAJIŠTĚNÍ SPRÁVNOSTI VÝSLEDKŮ PŘI STANOVENÍ STOPOVÝCH PRVKŮ. Věra Spěváčková, Mája Čejchanová, Lucie Kašparová, Kateřina Wranová SZÚ, Praha

Technologie pro úpravu bazénové vody

SCENIHR přijal toto stanovisko dne 26. srpna 2014 k veřejné konzultaci. Veřejná konzultace bude končit 16. listopadu 2014.

Denitrifikace odpadních vod s vysokou koncentrací dusičnanů

Preanalytická fáze krevních vzorků

PSA ELISA test pro kvantitativní stanovení celkového prostatického specifického antigenu (PSA) v lidském séru

Předcházíme onemocněním srdce a cév. MUDR. IVAN ŘIHÁČEK, Ph.D. II. INTERNÍ KLINIKA FN U SVATÉ ANNY A MU, BRNO

Ústřední komise Chemické olympiády. 48. ročník 2011/2012. ŠKOLNÍ KOLO kategorie D ŘEŠENÍ SOUTĚŽNÍCH ÚLOH

Číslo projektu: CZ.1.07/1.5.00/ Ročník: 1. pro obory zakončené maturitní zkouškou

HACH CHEMIKÁLIE, REAGENCIE A STANDARDY

Seminář 9 - k lékopisné problematice SÚKL

Oborový workshop pro ZŠ CHEMIE

UPLATNĚNÍ ABSOLVENTŮ FAKULTY TĚLESNÉ VÝCHOVY A SPORTU UNIVERZITY KARLOVY V PRAZE NA PRACOVNÍM TRHU

ZÁSADY SPRÁVNÉ LABORATORNÍ PRAXE VYBRANÁ USTANOVENÍ PRAKTICKÉ APLIKACE

CÍL 8: SNÍŽENÍ VÝSKYTU NEINFEKČNÍCH NEMOCÍ

Kontaminace životního prostředí vlivem zimní údržby v okolí komunikací

Progesteron ELISA test pro kvantitativní stanovení progesteronu v lidském séru nebo plazmě

Prevence rizik v oblasti metalurgie a zpracování kovů

NÁVOD K POUŽITÍ VÁPNÍK 600 KATALOGOVÉ ČÍSLO 207

Technické služby Nové Strašecí, s.r.o. Lipová 1172, Nové Strašecí IČ: , DIČ: CZ

MIKROELEMENTY 79. ZE Xlil.SEMINÄRE 0 METODICE STANOVENÍ A VÝZNAMU STOPOVÝCH PRVKO V BIOLOGICKÉM MATERIÁLU

Druhá část: období od do Autor: RNDr. Ing. Karel Volf. Zpracováno pro: BAKTOMA spol. s r.o., ČSA 2, Velká Bystřice

Vliv zimní údržby na životní prostředí

3.5 CHEMISMUS MINAMATA ZASTOUPENÍPRVKŮ V PŘÍRODĚ KOLOBĚH RTUTI. Obsahy prvků v zemské kůře. Zastoupení hlavních prvků

ODBĚR, PŘÍPRAVA, PŘEPRAVA A UCHOVÁVÁNÍ VZORKŮ

Poznámky k používání této příručky... 4 Seznamte se se suchým ledem a oxidem uhličitým... 6 Použití suchého ledu... 7

KVALITA GELU HYDRATOVANÉHO OXIDU TITANIČITÉHO Z HLEDISKA KALCINAČNÍHO CHOVÁNÍ

PŘÍBALOVÁ INFORMACE: INFORMACE PRO PACIENTA. FOTIL FOTIL FORTE oční kapky, roztok pilocarpinum hydrochloridum, timololi maleas

Monitorování hladiny metalothioneinu a thiolových sloučenin u biologických organismů vystavených působení kovových prvků a sloučenin

AKREDITOVANÁ ZKUŠEBNÍ LABORATOŘ č.1489 AKREDITOVÁNA ČESKÝM INSTITUTEM PRO AKREDITACI, o.p.s. DLE ČSN EN ISO/IEC 17025:2005

NUTRIMON Přívod vybraných minerálních látek v populaci ČR

Krev namísto křišťálové koule

DESFERAL prášek pro přípravu injekčního roztoku (deferoxamini mesilas)

RNDr. Jan Pretel Organizace Český hydrometeorologický ústav, Praha Název textu Předpoklady výskytu zvýšené sekundární prašnosti

BIOLOGICKÉ LOUŽENÍ KAMÍNKU Z VÝROBY OLOVA

Vliv selenu, zinku a kadmia na růstový vývoj česneku kuchyňského (Allium sativum L.)

Bílá kniha. Elektrostatický náboj při vážení Inovativní řešení detekce. Shrnutí

Vzdělávací oblast: Člověk a příroda Vzdělávací obor (předmět): Chemie - ročník: PRIMA

Nebolí, není vidět, přesto může způsobit infarkt

Česká Republika Ústřední kontrolní a zkušební ústav zemědělský organizační složka státu, Hroznová 2, Brno

KANALIZAČNÍ ŘÁD STOKOVÉ SÍTĚ MĚSTA. Borohrádek

Úbytek stratosférického ozónu a pozorované abiotické poškození rostlin u nás

Voltametrie (laboratorní úloha)

Za hranice nejistoty(2)

ZNEČISTĚNÍ OVZDUŠÍ VE SVITAVÁCH PLYNNÝMI ŠKODLIVINAMI A PRACHEM

OLOVO. MUDr.Vendulka Machartová, Ph.D. Klinika pracovního lékařství LF UK a FN Plzeň

B. PŘÍBALOVÁ INFORMACE

CEA ELISA test pro kvantitativní stanovení karcinoembryonického antigenu (CEA) v lidském séru

Závislost tvrdosti odlitků Al slitin na době stárnutí a průběhu tepelného zpracování

LABORATOŘE GEOLOGICKÝCH ÚSTAVŮ

Odpadní voda (odtok z čistírny odpadních vod) uměle obohacena o cílové ukazatele.

ZÁZRAČNÉ HOUBY V KOSTCE - ZDRAVI-VITAMINY-DOPLNKY - vitamínové doplňky a alternativní medicín

Péče o pacienty s hemofilií ve FN Ostrava včera, dnes a zítra. R. Hrdličková

Protokol o zkoušce. : ALS Czech Republic, s.r.o. : Radim Opluštil. : Zákaznický servis : Bezručova 608/36

MUDr. Stanislav Trèa, CSc. PLÁNOVANÉ RODIÈOVSTVÍ Nejlepší cesta k narození zdravého dítìte

Transkript:

Snímek 1 Problematika, přínosy a omezení stanovení stopových prvků ve vlasech. Václav S E N F T Ústav klinické biochemie a hematologie FN a LF UK Plzeň S analýzou vlasů se na našem pracovišti zabýváme dlouhodobě. Zaujalo nás, že když se do internetového vyhledávače zadá heslo: Analýza vlasů, vyhrne se množství komerčních inzerátů slibujících až zázračné zdravotní benefity. Tato prezentace probírající přehledně uvedenou problematiku se pokouší odpovědět na otázku, zda je aplikace analýzy vlasů skutečně vždy relevantní a až zázračně přínosná, jak slibují inzeráty nebo zda má i svá omezení a úskalí.

Snímek 2 Analýza vlasů je metoda, která změří množství makrominerálů, stopových prvků a těžkých kovů ve Vašem těle. Tím odhalí Váš aktuální zdravotní stav, včetně budoucích rizik rozvoje onemocnění jako je vysoký krevní tlak, cukrovka, či selhání nadledvin vlivem přepracování. Umožní Vám postarat se o svůj organismus přesně podle jeho individuálních potřeb, které jsou v mnoha případech velmi odlišné od běžných výživových doporučení. Díky analýze budete mít více energie, dosáhnete optimální váhy, zbavíte se únavy během dne a zlepší se Vaše psychická pohoda. Nejdříve pro ilustraci na třech slidech citace z jednoho internetového inzerátu. Na tomto slidu je úvodní slib

Snímek 3 Analýza vlasů pomůže při klinických projevech syndromu špatného vstřebávání (poruchy gastrologické), poruchách regulace žláz s vnitřní sekrecí (poruchy hormonální), poruchách neurologických, poruchách dermatologických (lupenka, vitiligo, vypadávání vlasů ), léčbě obezity, onemocnění kostí a kloubů, poruchách kardiologických, otravách toxickými prvky, dlouhodobém fyzickém vypětí v práci, při výkonnostním sportovním tréninku, rehabilitaci, prevenci Na tomto slidu pokračuje inzerát vyjmenováním při čem všem analýza vlasů pomůže

Snímek 4 Analýza vlasů je vhodná pro 1. Znalostní pracovníky - manažery, právníky, podnikatele, a další. 2. Lidi se zájmem o vlastní zdraví. 3. Lidi s trvalými zdravotními obtížemi a civilizačními nemocemi. A konečně zde inzerát uvádí, pro koho je uvedená metoda vhodná. Zřejmě pro drtivou většinu populace, zvláště té movitější

Snímek 5 Anatomie vlasů Na tomto slidu jen několik obrázků pro připomenutí základních termínů z anatomie kůže a vlasů., jako je vlasový váček (folikul), kortex, medula,

Snímek 6 Vlasový vývojový cyklus Období aktivního růstu (anagenní): až 2-5 let, normálně se v něm nachází cca 85-95% vlasů na hlavě Přechodné období (katagenní): asi 2 týdny, postupně odumírá papila, která zajišťuje zásobování vlasu Klidové stadium (telogenní): asi 3 měsíce, starý vlas je vytlačován novým vlasem. V tomto stadiu je normálně 10-15% vlasů Pro využití možnosti nahlédnout pomocí analýzy vlasů do historie organizmu je velmi důležitá informace o rychlosti růstu vlasů a o cyklických vlasových vývojových cyklech. Vlasy rostou rychlosti asi 1 (0,6-1,4) cm/měsíc. Růst vlasů ale podléhá cyklickému procesu. Vlasový cyklus probíhá ve třech obdobích: Období aktivního růstu (anagen) trvá až 5 let a normálně se v něm nachází 85-95% vlasů na hlavě. Následuje krátké, asi 2 týdenní přechodné období (katagen), kdy papila, která se podílí na vývoji a zásobování vlasu, postupně odumírá. Vlas pak přechází do tříměsíčního klidového stadia (telogen), kdy se vlas uvolňuje z papily, pomalu se posouvá nahoru. V té době již z folikulu vyrůstá vlas nový, který pak starý vlas vytlačuje. Denně tak vypadne v průměru 60-90 vlasů. V této fázi se normálně nachází 10-15% vlasů na hlavě Životnost vlasu je tedy 2-5 let. Tím je omezen možný rozsah nahlédnutí do historie.

Snímek 7 Důvody pro volbu analýzy vlasů Vlasy se snadno neinvazivně odebírají. (Ovšem pozor na standardizaci odběru!!!) Vlasy se snadno uchovávají do doby analýzy. Koncentrace řady prvků je ve vlasech vyšší než v krvi či v moči. Stačí malé množství. Vyšetření ve vlasech umožňuje získat retrospektivní informace o dlouhém časovém období (až roky). Jaké jsou důvody a jaké plynou výhody z toho, že se zvolí analýza stopových prvků ve vlasech? -Vlasy se dají snadno, neinvazivně odebrat.. -Vlasy se bez problémů uchovají až do doby analýzy -Stačí malé množství vlasů, protože koncentrace řady prvků je ve vlasech vyšší, než v krvi či moči. -Nezastupitelnou roli mají vlasy při získávání retrospektivních informací o historii vyšetřovaného organismu. Zatímco při analýze krve či moči získáme informaci o několika dnech před odběrem, pomocí analýzy vlasů lze obsáhnout časové období dlouhé až několik let. (5-7 roků). Ovšem je nutné standardizovat odběr. Běžnou chybou např. je, že se vlasy špatně uloží, dojde k jejich vzájemnému posunu a potom dojde k zkreslení výsledku v jednotlivých časových obdobích. Odběr vlasů by tedy měla dělat poučená osoba. Samozřejmě jako u všeho ani zde nejsou jen pozitivní a výhodné vlastnosti.

Snímek 8 Faktory ovlivňující koncentraci prvků ve vlasech Fyzikální faktory (forma a typ látky obsahující sledované prvky, např. ph, koncentrační gradient, ) Biologické faktory (věk, pohlaví, zdravotní stav, struktura vlasů, výška, hmotnost, krevní tlak, ) Personální variabilita (hygienické návyky, vlasová kosmetika, životní styl, ) Vlivy prostředí (místo bydliště, doprava, čistota ovzduší, profesionální expozice, ) Analytické a metodologické problémy (odběr, čištění, mineralizace, validace, normály, ) Unikátní možnost nahlédnutí do historie organizmu je ale velmi limitována tím, že koncentraci prvků ve vlasech ovlivňuje velké množství faktorů. Faktory lze zhruba shrnout do následujících hlavních kategorií: Fyzikální faktory (forma a typ látky obsahující sledované prvky, např. ph, koncentrační gradient, ) Biologické faktory (věk, pohlaví, zdravotní stav, struktura vlasů, krevní tlak, výška, hmotnost, ) Personální variabilita (hygienické návyky-vlasová kosmetika, životní styl, ) Vlivy prostředí (místo bydliště, čistota ovzduší, profesionální expozice, ) Analytické a metodologické problémy (odběr, čištění, mineralizace, validace, normály, ) Faktory mohou způsobit pozitivní i negativní (ale třeba i žádné) ovlivnění koncentrace. Vliv některých faktorů (např. profesionální expozice) je zřejmý, vliv jiných je často nečekaný či nesrozumitelný. Pro relevantní interpretaci výsledku je proto velmi důležité zvážit při všechny dostupné informace.

Snímek 9 Některé z problémů spojených s analýzou vlasů Vlasy mohou být změněné používáním vlasové kosmetiky (barvy, šampony, kondicionéry, laky) i péčí o vzhled vlasů (ondulování, natáčení). U vlasů principiálně hrozí vnější kontaminace vlasů z okolního pracovního i životního prostředí. Vlasy je nutné před analýzou zmineralizovat. Při této operaci může docházet jednak ke ztrátám prvků, jednak ke kontaminaci z použitých reagencií. Zatím je nedostatečná analytická standardizace a validace analýzy vlasů. -1 -Především u žen se často vyskytuje používání různých přípravků vlasové kosmetiky (barvy, šampony, kondicionéry, laky, aj.) které mohou podstatnou mírou změnit obsah stopových prvků ve vlasech. Např. modrý odstín vlasů se dosahuje kobaltem, zelený mědí, apod. -Obsah prvků ve vlasech mohou ovlivnit i mechanické operace péče o vlasy (natáčení a ondulování při vysoké teplotě, apod.) - 2-Vždy je potenciálně možná vnější kontaminace vlasů např. nasedáním vzdušného prachu ať již z pracovního, tak z životního prostředí. -3- Vlasy je nutné převést do roztoku (zmineralizovat). Při tom na jedné straně hrozí ztráta prvků např. vytěkáním při vyšší mineralizační teplotě, na druhé straně je riziko kontaminace vlasů prvky z použitých mineralizačních chemikálií. -4- Určité problémy způsobuje zatím nedostatečná analytická standardizace a validace analýzy vlasů -Jak lze uvedené problémy minimalizovat?

Snímek 10 Lze omezit vliv vlasové kosmetiky a péče o vlasy? Doporučuje se, aby se analyzovaly pouze vlasy, které nebyly před odběrem barveny, běleny, ondulovány, rovnány, lakovány apod. (To je ale v praxi, zvláště u žen, nereálné.) Lze odebírat např. jen 1 cm od hlavy, tj. nejnovější část vlasu, která by neměla být ovlivněná např. barvením, které proběhlo před měsícem. (Tím se ale ztrácí výhoda možnosti získat dlouhodobou retrospektivní informaci.) Vlasová kosmetika a péče o vlasy může podstatným způsobem ovlivnit hladiny jednotlivých prvků ve vlasech. Např.: - vlasové šampony obsahují selen ve formě sulfidů - vlasové barvy obsahují olovo, kobalt, měď aj. Doporučuje se proto brát k analýze pouze vlasy, které nebyly před odběrem pod vlivem vlasové kosmetiky a péče o vlasy, tj. nebyly barvené, bělené, ondulované, lakované apod. V praxi je to ovšem jen těžko realizovatelný požadavek. Zkuste přimět nějakou ženu k tomu, aby si nechala vlasy dlouhou dobu bez jakékoliv péče. Trochu se nechá vliv vlasové kosmetiky omezit tím, že se k analýze bere jen např. 1 cm od hlavy, tj. nová část vlasu, která nebyla zasažena např. barvením které proběhlo před měsícem. Ztrácí se tak ale podstatná výhoda analýzy vlasů, tj. možnost pokrýt retrospektivně dlouhé období do minulosti.

Snímek 11 Lze omezit vliv vnější kontaminace? Standardní součástí analýzy vlasů musí být čištění (mytí) vlasů před analýzou. Metodika mytí vlasů musí být zvolena tak, aby se odstranila vnější kontaminace, ale aby se neovlivnil endogenní obsah prvků ve vlasech. Zvolená metodika musí být stabilně dodržována, aby byla možnost porovnávání výsledků. Lze omezit vliv vnější kontaminace? Ano, lze. Naprosto nezbytnou součástí každé analýzy vlasů musí být čištění (mytí) vlasů před analýzou. Metodika mytí vlasů musí být přitom nastavena (optimalizována) tak, aby se odstranila vnější kontaminace, ale aby přitom nedošlo k ovlivnění endogenní koncentrace prvků ve vlasech. Vždy je riziko, že po mytí zůstane část exogenní kontaminace a současně se ztratí část endogenního obsahu prvků. Po zvolení vhodné metodiky je důležité aby byl postup mytí stabilně dodržován a aby tak bylo možné provádět dlouhodobé porovnávání výsledků. V literatuře je popsáno velké množství způsobů mytí vlasů. Na dalším slide je uveden příklad postupu IAEA.

Snímek 12 Mytí vlasů dle IAEA Procedura Kolikrát Poznámka Nastřihání vlasů na á 0,3 cm a promíchání Promytí s 1:200 zřed. Tritonem X100 1 x Získá se tak reprezentativní vzorek 4 x Propláchnutí acetonem 1 x Nechat uschnout Propláchnutí dest. vodou 3 x Propláchnutí acetonem 2 x Vysušit při 75 C Na tomto slidu je uveden standardní postup mytí vlasů publikovaný IAEA (hlavní autor Ryabukin YS: Activation analysis of hair as an indicator of contamination of man by environmental trace element pollutants. IAEA Report IAEA/RL/50, Vienna, 1978. Z tabulky je na první pohled vidět, že se jedná o poměrně zdlouhavý a pracný nicméně nezbytný postup.

Snímek 13 Vlas před a po mytí Na foto je na první pohled patrný vliv mytí zaprášených vlasů před analýzou.

Snímek 14 Lze omezit potenciálně negativní vliv mineralizace? Metodiku mineralizace je nutné zvolit tak, aby se co nejvíce omezilo potenciální riziko ztráty prvků způsobené např. vytěkáním a na druhé straně aby se maximálně omezila možná kontaminace vzorku použitými reagenciemi. Za optimální se považuje vysokotlaká mikrovlnná mineralizace za použití nejčistších reagencií (např. Suprapur Merck) Obecným rizikem při mineralizaci je na jedné straně možná ztráta prvků způsobená např. vytěkáním, na druhé kontaminace vzorků reagenciemi použitými při mineralizaci. Riziko vytěkání je možné omezit jednak kontrolou maximálně použité teploty, jednak použitím uzavřeného tlakového systému. Uzavřený tlakový systém má i tu výhodu, že se výrazně zmenší potřebné množství mineralizačních reagencií (např. v otevřeném systému se musí opakovaně dolévat kyselina) a tím sníží možnost kontaminace. Kontaminaci snižuje i použití co nejčistších reagencií např. kyseliny kvality Suprapur. Uvedené důvody prakticky vylučují použití otevřené mineralizace, ať již na suché cestě (spalování v Pt kelímku), tak i na mokré cestě (zahřívání ve zkumavce s opakovaně přidávanými mineralizačními reagenciemi. Jako optimální se jeví tlaková mikrovlnná mineralizace.

Snímek 15 Tlaková mikrovlnná mineralizace vlasů (Milestone) Procedura Množství Poznámka Navážení vlasů Cca 200 mg Do teflonové nádobky Převrstvení konc. HNO 3 2 ml konc. HNO 3 Uzavřít nádobku až po a konc. H 2 O 2 1 ml konc. H 2 O 2 cca 1 min 1. Krok 5 min 250 W V mikrovlnné peci 2. Krok 1 min 0 W V mikrovlnné peci 3. Krok 5 min 250 W V mikrovlnné peci 4. Krok 5 min 400 W V mikrovlnné peci 5. Krok 12 min 600 W V mikrovlnné peci Ochlazení, otevření, kvant. převedení do odměr. baňky, doplnění V tabulce jsou uvedeny základní kroky postupu při tlakové mikrovlnné mineralizaci pomocí mineralizátoru ETHOS fi Milestone, který dlouhodobě používáme v naší laboratoři.

Snímek 16 Analýza zmineralizovaných vlasů Validace metody: Analyzátor (AAS, ICP-MS) Preciznost (dříve přesnost) opakování analýzy Přesnost (dříve správnost) - referenční materiály Mez detekce Referenční interval (normální hodnoty) Interpretace výsledku Standardizace validované metody Po vstupních operacích, tj. po mytí a mineralizaci následuje vlastní analýza. Většinou se používají analyzátory AAS nebo ICP. Použití ICP svádí k velmi širokému spektru prvků. Je ovšem důležité dát pozor na mez stanovitelnosti, tj. neuvádět kvantitativně výsledky u prvků, kde je nalezená koncentrace hluboko nejen pod mez stanovitelnosti, ale často i pod mez detekce. Špatným způsobem provedená, neověřená analýza může samozřejmě také podstatným způsobem ovlivnit výsledek. Je proto třeba, aby metoda byla validovaná a potom standardizovaná, tj. prováděná stále stejně. Validace metody zahrnuje jednak prověření a určení základních analytických vlastností metody (přesnost, správnost, mez detekce, ), jednak určení referenčního intervalu čili normálních hodnot. A tím definování interpretace výsledku. Přesnost se prověří opakováním analýzy homogenního vzorku a to jednak za podmínek opakovatelnosti, jednak za podmínek reprodukovatelnosti. Správnost se nechá prověřit mezilaboratorní kontrolou (bohužel pro vlasy zatím téměř nedostupnou), nebo analýzou některého z dostupných referenčních materiálů (my např. používáme referenční materiál No. 397 Community Bureau of Referenvce : Human hair. Viz další slide

Snímek 17 Příklad certifikovaného referenčního materiálu BCR (Community Bureau of Reference, European Commission) Certified reference material CRM 397: Trace elements in human hair Prvek Obsah (µg/g) Nejistota (µg/g) Cd 0,521 0,024 Hg 12,3 0,5 Pb 33,0 1,2 Se 2,00 0,08 Zn 199 5 Tento referenční materiál Evropské komise je dodáván v podobě velmi jemného šedého prášku ve skleněné lahvičce. V lahvičce je teflonová kulička, která slouží k protřepání, promíchání a homogenizaci materiálu před použitím (doporučená doba protřepávání vždy před použitím je 5 minut).

Snímek 18 Referenční interval (normální hodnoty) Vybrané laboratoře (normály µg/g vlasů) Prvek A B C D E F Al < 9 8-28 < 7 < 8 < 10 < 17 As < 4 0,4-2,8 < 0,06 < 0,1 < 1 < 1,12 Co 0,3-0,6 2,4-6 0,013-0,05 0,01-0,03 <0,1 0,02-0,45 Fe 21-46 20-40 5,14-14 10-18 10-34 5,46-13,7 Pb < 8 2-20 < 1 < 0,8 < 6 < 5 Mn 1,2-2,4 0,6-1,8 0,15-0,65 0,08-0,29 0,7-2,5 0,07-1 K 50-180 30-180 8-38 4-22 50-150 5-40 Se 1,2-2,3 10-30 0,95-1,7 0,9-1,5 0,4-1,2 0,21-5,46 Určení referenčního intervalu je zcela zásadní pro správnou interpretaci výsledku. Je to dosud problematická záležitost. V tabulce jsou uvedeny referenční intervaly udávané 6 vybranými laboratořemi z USA, které se zůčastnily mezilaboratorní kontroly analýzy prvků ve vlasech v roce 2001. Seidel S, et al: Assessment of Commercial Laboratories Performing Hair Mineral Analysis, JAMA, 2001, 285: 67-72. Jsou patrné značné rozdíly mezi jednotlivými laboratořemi u některých prvků. Např. Se od 1,2 až do 30 Pb pd <1 až do 20 K od 22 až do 180 Samozřejmě takové rozdíly v tom, co laboratoř považuje za normální hodnoty mají za následek velké rozdíly v interpretaci výsledků. Viz další slide

Snímek 19 Interpretace výsledků u 19 prvků ve vlasech při mezilaboratorním srovnání Kategorie Vybrané laboratoře počet prvků z celkem 19 zařazených do jednotlivých kategorií A B C D E F Zvýšené 1 1 2 1 1 0 Normální 4 14 14 13 10 14 Snížené 14 4 3 5 8 5 Al, As, Ca, Co, Cr, Cu, Fe, Hg, K, Mg, Mn, Mo, Na, Ni, P, Pb, Se, V, Zn Laboratoře, jejichž normální hodnoty pro analýzu prvků ve vlasech byly uvedeny na předešlém slidu, se zúčastnily projektu mezilaboratorního porovnání, při kterém byl připraven homogenní vzorek vlasů od jednoho dárce ( 40 letá žena, vlasy odebrané z různých míst hlavy, nastřihány na 3 cm části, důkladně promíchány a do každé laboratoře bylo odesláno cca 1 g těchto vlasů. ) Počet analyzovaných prvků v jednotlivých laboratořích se pohyboval od 16 do 39. Rozdílná interpretace výsledků u 19 prvků, které analyzovaly všechny laboratoře (Al, As, Ca, Co, Cr, Cu, Fe, Hg, K, Mg, Mn, Mo, Na, Ni, P, Pb, Se, V, Zn) je vidět v tabulce. Zatímco laboratoř A považovala za normální jen 4 prvky, ostatní laboratoře považovaly za normální 10-14 prvků.

Snímek 20 Stejná koncentrace při různém časovém průběhu Konc. A Konc. B Čas Čas Konc. C Konc. D Čas Čas Ve skutečnosti je situace ještě složitější: Můžeme totiž dostat stejnou koncentraci prvku ve vlasech při naprosto různém časovém průběhu. Na tomto slidu jsou schematické příklady, při kterých by výsledná konc. Ve vzorku vlasů byla stejná: -žlutá čára= průběh konc. Ve vlasech -světle modrá úsečka = časový interval zachycený ve vzorku vlasů Přitom např. B, resp. C zachycuje pokles koncentrace v čase, což je zhoršující se situace (u žádoucího biogenního prvku) či zlepšující se situace (u toxického prvku) Obráceně A, příp. D zachycuje nárůst koncentrace v čase, což je zlepšující se situace (u žádoucího biogenního prvku) či zhoršující se situace (u toxického prvku) Hodnocení či interpretace podle nalezené koncentrace by bylo stejné? Výsledek je také velmi závislý na délce analyzované části vlasů, čili na délce zachyceného období před odběrem vzorku. Viz další slide:

Snímek 21 Závislost nalezené koncentrace na délce a pozici analyzované části vlasů Konc. 100 20 200 100 50 Čas Na slidu je schematicky zachycen možný časový průběh koncentrace ve vlasech (žlutá čára). Peak může být způsoben např. nějakým potravním doplňkem nebo třeba jen letním obdobím se zvýšenou konzumací ovoce a zeleniny. Při volbě různě dlouhých částí vlasu jsou výsledky velmi rozdílné. Určovat nějaké jednoduché univerzální normály pro koncentraci ve vlasech se z tohoto pohledu zdá velmi obtížné.

Snímek 22 Ni ve vlasech a nehtech dobrovolníka po týdenní expozici při výrobě NiSO 4 6 5 4 Nehty Vlasy µg/g 3 2 1 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 týdny Ale abych jen stále nemluvil o problémech a úskalích analýzy vlasů. Nyní bych již proto rád uvedl několik pozitivních příkladů využití analýzy vlasů z naší praxe. První příklad je z monitorování expozice toxickým sloučeninám niklu: Sledovali jsme pracovníky z výroby sloučenin niklu. Mimo stanovení v moči a krvi jsme analyzovali i obsah Ni ve vlasech a v nehtech. Podařilo se nám do sledování zapojit jako dobrovolníka studenta, který na pracovišti realizoval týdenní praxi. Po týdnu stráveném ve výrobě síranu nikelnatého odevzdával dobrovolník v 1-2 týdenních intervalech vzorky vlasů a zhruba v měsíčních intervalech vzorky nehtů. Na grafu je patrné maximum ve vlasech asi 1 měsíc po expozici (udává se, že vlasy rostou asi 1 cm/měsíc) a v nehtech asi 4 měsíce po expozici (nehty za tu dobu dorostly tak, že exponovaná část se dostala do odebíratelné pozice. Obecný závěr z tohoto experimentu by se dal formulovat tak, že analýza vlasů je vhodná pro monitorování doby řádově měsíc před odběrem a delší.

Snímek 23 Fe ve vlasech 60 50 40 30 20 Fe ve vlasech (µg/g) 10 0 Konec Střed U hlavy Normál (30-20) (20-10) (10-0) (Období v měsících před odběrem) Druhý příklad využití analýzy vlasů zachycuje klinický případ, kdy na hematoonkologickém oddělení měli pacientku, která ztrácela tak rychle železo, že za půl roku dostala asi 70 transfůzí (Dostala přezdívku iron lady. Klinici se na nás obrátili s následujícím požadavkem: Asi před půl rokem u pacientky proběhla invazivní terapie a klinici potřebovali vědět, zda ke ztrácení železa docházelo již před nebo až po onom zákroku. Jediná možnost byla analýza vlasů. Na grafu jsou znázorněny výsledky, které prokázaly, že nízkou hladinou železa pacientka trpěla již dávno před oním terapeutickým zákrokem. Analýza vlasů tedy dodala klinikům potřebnou informaci a umožnila další volbu terapie.

Snímek 24 Pb ve vlasech (µg/g) po 6 měsíčním užívání preparátu FE Femikalp 3,5 3 2,5 2 1,5 1 0,5 0 Celé vlasy 6 cm od hlavy Konce vlasů Třetí příklad se týká užívání volně prodejného preparátu FE Femikalp dováženého z Indie, což jsou tablety vyrobené z různých léčivých rostlin. Na grafu je názorně vidět, že 6 cm část vlasů od hlavy, tj. část zahrnující dobu po kterou byl preparát užíván, má výrazně vyšší hladinu olova, než konce vlasů, které zachycují dobu před užíváním preparátu. Vlevo je ještě vidět zprůměrovaný obsah v celých vlasech.

Snímek 25 Několik dalších příkladů aplikace využití analýzy vlasů. Zvýšený obsah Cd ve vlasech dětí (použití kalů z čistírny jako hnojivo na zahradě) Zvýšený obsah Hg ve vlasech u pacienta u kterého byly nalezeny kapičky rtuti v plicích Roční perioda zvýšeného obsahu Pb u rodiny. Dále již jen heslovitě několik dalších příkladů využití analýzy vlasů: 1)Při analýze asi 100 vzorků vlasů dětí jsme narazili na 3 vysoké výsledky Cd. Nejdříve jsem se domníval, že došlo třeba ke kontaminaci, ale pak jsem zjistil, že se jedná o tři děti z jedné rodiny. Spojil jsem se s rodinou a snažil se zjistit kde se Cd vzalo. Rodina nejdřív reagovala tak, že je to vyloučené, že patří mezi lidi se zvýšenou péčí o zdraví a že si většinu zeleniny a ovoce vypěstují na vlastní zahradě daleko od silnice. Pak jsem ale vypátral, že tam nechali navézt asi 20 nákladních aut kalů z městské čistírny v Plzni. Je známo, že čistírenské kaly obsahují hodně Cd. Nerezová mrkev. 2) Na klinice pracovního lékařství vyšetřovali muže u kterého rentgenologové vznesli hypotézu, že má v plicích velké množství kapiček rtuti (viz další slide). Skutečně jsem nalezli zvýšenou hladinu Hg nejen v moči,ale i ve vlasech. Zatím se pátrá, jak se mohla rtuť do plic dostat. Hypotéza injekce rtuti. 3) Z dětské kliniky se na nás obrátili s podezřením, že mají asi 10 letou dívku exponovanou olovu. Skutečně jsme nalezli zvýšené množství Pb ve vlasech. Pro jistotu jsme vyšetřili celou rodinu a byli exponováni všichni. U matky, která měla dlouhé vlasy a proto jsme mohli realizovat stanovení zahrnující až 3 roky zpětně, jsme nalezli roční periodu zvýšeného obsahu Pb ve vlasech? Hypotéza, že si jednou za rok udělají něco atypického nebo v atypickém nádobí a tím se exponují zatím není potvrzena ani vyvrácena.

Snímek 26 Snímek plic před a po objevení kapiček rtuti Tento slide je uveden jen jako zpestření

Snímek 27 INZERÁT: Biochemický rozbor vlasů Citace z internetové adresy: Analýza vlasů umožní vyhodnotit Vaše stravovací návyky a stanovit hladiny toxických prvků, kterým jste byli vystaveni. Umožní doporučit změnu životosprávy a doplňkovou léčbu. Výsledky obdržíte poštou na dobírku. Doporučeno dětem, ženám, pracujícím, sportovcům, Základní řada: Na, K, Mg, Ca, Cr, Mn, Fe, Co, Cu, Zn: 990 Kč Rozšířená řada: navíc Se a Mo: 1990 Kč Toxická řada: Al, Cd, Hg, Pb, As, Ni: 1090 Kč Jak se tedy po probrání přínosů, ale i metodických problémů analýzy vlasů postavit k úvodní otázce, tj. zda mají skutečně pravdu v poslední době se hojně vyskytující internetové inzeráty (viz slide), které celou problematiku prezentují jako zcela bezproblémovou záležitost, která umožňuje udělat u každého člověka jednoduché doporučení co má dělat či změnit aby si vylepšil zdraví. Nedílnou součástí každé takové inzerce je samozřejmě údaj o tom kolik či lépe kolikrát a jakým způsobem se musí zaplatit. Pozn.: Laboratoře v USA si za analýzu vlasů účtují od 30 do 69 dolarů za vzorek, čili cenu uvedenou v zde citovaném inzerátu lze prezentovat jako světovou..

Snímek 28 Je analýza vlasů přínosná a obecně použitelná? ANO u případů s vysokou expozicí toxických prvků a u některých pacientů s již velmi vážnými chorobami. NE u individuálních výsledků jednotlivců běžné populace. Příliš velké interindividuální rozdíly způsobené mnoha a mnoha faktory. Problém normálu. Zatím často nedostatečná analytická standardizace. Zatím jen velmi omezené informace o souvislostech konc. ve vlasech a vlivu na cílový orgán a zdravotní stav. Jak celé sdělení shrnout? Na jedné straně uvedené úspěšné aplikace, na druhé straně diskutované problémy doprovázející analýzu vlasů. Je tedy analýza vlasů prospěšná a bez problémů obecně použitelná? Na základě vlastních zkušeností i dle údajů v literatuře bych problematiku rozdělil na dvě části: Analýza vlasů je vesměs přínosná u případů s vysokou expozicí toxických prvků (příklady Pb, Cd, Hg) a pak u některých pacientů s již velmi závažnými chorobami (příklad Fe) Inzerované plošné využití u jedinců z běžné populace je ale stále více než problematické. Důvodů je celá řada: -Jsou příliš velké interindividuální rozdíly způsobené mnoha a mnoha faktory. Je problém určení normálních koncentrací a tím správné interpretace. - Zatím často není dostatečná analytická standardizace. - Zatím jsou jen velmi omezené vědecké informace o souvislostech konc. Ve vlasech a vlivu na cílový orgán či zdravotní stav.

Snímek 29 Děkuji za pozornost