Zajímavé kazuistiky z laboratoře Kamila Kutějová a kol. Spadia Lab Setkání uživatelů Průtokové cytometrie Beckman Coulter květen 2016, Mikulov
Myelom biklonální Pacientka 80 let, hematoonkol.ambulance FNO, monoklonální gamapatie IgG kappa + IgA lambda 4,8 g/l, chronická nefropatie, urolitiasa, korové cysty ledvin, diabetická nefropatie, pozitivní paraprotein v séru, v dif.dg. sek. amyloidoza ledvin Genetika: cytogenetické vyšetření neprokázalo přítomnost chromozomové aberace, FISH vyšetření na imunofluorescenčně značených plazmatických buňkách prokázalo přítomnost monozomie 13, delece 14q/monozomie 14, zmnožení 1q21, delece 1p32 a susp.delece (hraniční hodnoty pozitivity) 17p13 (delece p53 genu)
Myelom biklonální Zkumavka MM: clambdafitc /ckappape /CD138 PC5.5 /CD27 PC7 /CD56 APC / CD19 APC AF750 /CD38 PB /CD45 KromeOrange + zkumavka LST: kappa+cd8 FITC/lambda+CD56 PE/CD5 PC5.5/CD38 PC7/CD3 APC/CD19 APC F750/CD20+CD4 PB/ CD45 KromeOrange PerFix nc (Beckman Coulter)
Myelom biklonální Naměřeno 500 000 leukocytů 1,2 % PC (CD38+CD138+)
Myelom biklonální N PC (CD19+CD56 ), A PC (CD19 CD56+/CD19 CD56 /CD19+CD56+) Polyklonální PC (n PC) cytoplazmatická exprese kappa/lambda >0,3 a <3,0
Myelom biklonální J N PC (CD19+CD56 ), n PC (polyklonální) ckappa/clambda = 1,3
Myelom biklonální E A PC (CD19 CD56+), a PC (clambda klonální) ckappa/clambda = 0,09
Myelom biklonální L A PC (CD19 CD56 ), a PC (ckappa klonální) ckappa/clambda = 4,5
Myelom biklonální
Myelom biklonální
Akutní promyelocytární leukémie 53letý muž, příznaky anemie, dušnost (CT vyloučilo plicní embolii), pancytopenie, bez významné koagulopatie Cytologie: bohatě buněčná dřeň infiltrována patologickými promyelocyty, cytoplazma je světle bazofilní, v plazmě často několik Auerových tyčí, nalezeny četné faggot cells, část abnormálních promyelocytů má velmi jemnou prachovitou granulaci, okraje plazmy prázdné, pupencovitě vytažené abnormální promyelocyty v rozpočtu 80%. Červená řada je výrazně redukována, normoblastická. Megakaryocyty nenalezeny. Lymfocyty a plazmocyty bpn. CT: plíce rozvinuté, v levém horním laloku v S3 subpleurálně patrné objemné lehce nepravidelné patol.ložisko vel. 37x32x39 mm s centrální kavitou, jiné ložiskové změny nezjištěny.
Akutní promyelocytární leukémie Genetika: cytogenetickým vyšetřením nalezeno 70% buněk s translokací t(15;17)(q24;q21) spřestavbou genů PML/RARα, závěr: byla prokázána přítomnost PML/RARα t(15;17) fúzního transkriptu. Diagnostický souhrn: akutní promyelocytární leukémie, střední riziko dle Sanze, PML/RARα pozitivní, vstupně pancytopenie (neutropenie gr.4), klinicky anamnesticky meléna, ložisko v levém horním laloku levé plíce s centrální kavitou
Akutní promyelocytární leukémie AML panel 1.zkumavka: CD16 FITC /CD10 PE /CD13 ECD /CD34 PC7 /CD123 APC /CD11b APC AF750 / CD15 PB /CD45 KromeOrange 2.zkumavka: CD64 FITC /CD56 PE /CD34 PC7 /CD14 APC /CD7 APC AF700 /CD19 APC AF750 / HLA DR PB /CD45 KromeOrange 3.zkumavka: CD36 FITC /CD61 PE /CD33 PC5.5 /CD34 PC7 / CD117 APC /CD71 APC AF750 / CD38 PB /CD45 KromeOrange + akutní orientační zkumavka (cmpo FITC/cCD79a PE/cCD3 APC.)
Akutní promyelocytární leukémie 1.zkumavka CD13+ CD15 slabě CD10
Akutní promyelocytární leukémie 2.zkumavka CD14 CD19 CD56 HLADR CD7
Akutní promyelocytární leukémie 3.zkumavka CD33++ CD117+
Akutní promyelocytární leukémie cytoplazmatické znaky cmpo+
Akutní promyelocytární leukémie APL tvoří 5 8 % všech akutních myeloidních leukémií Predominují atypické promyelocyty, zastoupení blastů < 20% Genetika: téměř 99% všech APL translokace t(15;17)(q22;q12), která má za následek vznik fúzního genu PML/RARα Morfologicky: typická hypergranulární forma a variantní mikrogranulární (hypogranulární) forma Histologie KD: hypercelulární, původní krvetvorba je zcela setřena promyelocyty.u AML M3v jsou granula leukemických promyelocytů velmi jemná, prachovitá.leukemické buňky s mnohočetnými Auerovými tyčemi faggot cells
Akutní promyelocytární leukémie FCM: ovlastní imunofenotyp je charakteristický silnou expresí CD33 a MPO při současné negativitě HLA DR oznak CD15 může být slabě pozitivní opozitivní exprese CD13 a CD65 oznaky CD14, CD34 a CD117 bývají obvykle negativní u mikrogranulární formy může být častěji pozitivita CD34 a častá exprese primitivního znaku CD117 oaberantní exprese CD2 častější u mikrogranulární formy ossc vysoký u hypergranulární formy, u mikrogranulární formy nižší hodnoty SSC, typický nález je silná autofluorescence
Akutní promyelocytární leukémie Hranice mezi klasickou hypergranulární a variantní formou AML M3 není ostrá a existují přechodné formy. Pacienti s původní diagnózou hypergranulární formy AML M3 mohou relabovat ve formě variantní AML a zcela vzácně i naopak. Odpověď na léčbu je dobrá. U přibližně 1% akutních promyelocytárních leukémií fúzuje gen RARα s jinými geny než PML APL s variantními translokacemi.
Akutní promyelocytární leukémie s variantní translokací NPM/RARα Pacient 77 let, vstupně trombocytopénie a sekundární koagulopatie Květen 2015 v cytologii převažuje těžce dysplastická granulopoeza s převahou mladých forem (myeloblasty 0,4%, promyelocyty 8,4%, myelocyty 70%), atypická hrubá granulace, Auerovy tyče nepřítomny, faggot cells nepřítomny, PML/RARα nega vní dg.myelodysplasticko myeloproliferativní onemocnění (MDS MPN) Březen 2016 lehce nižší buněčnost, v nátěrech převažují abnormální hypergranulární promyelocyty (41,6%) s jemným jaderným chromatinem, s hrubou sytě basofilní granulací překrývající jádro, Auerovy tyče ani faggot cells nenalezeny, červená řada výrazně početně pod normou, megakaryocyty nezastiženy
Akutní promyelocytární leukémie s variantní translokací NPM/RARα V.s. akutní promyelocytární leukémie AML M3 Genetika: vyšetřením vzorku kostní dřeně nebyla prokázána přítomnost fúzního transkriptu PML/RARα t(15;17), byl detekován fúzní transkript NPM1/RARα t(5;17)
Akutní promyelocytární leukémie s variantní translokací NPM/RARα CD13+
Akutní promyelocytární leukémie s variantní translokací NPM/RARα CD14 CD56+ HLA DR CD7 CD19
Akutní promyelocytární leukémie s variantní translokací NPM/RARα CD33 CD117 cmpo+
Akutní promyelocytární leukémie s variantní translokací NPM/RARα APL s variantními translokacemi tvoří přibližně 1% akutních promyelocytárních leukémií Často nebývají vůbec nalezeny Auerovy tyče, zvláště ne mnohočetné ( faggot cells ), u formy NPM/RARα nebyly světelnou mikroskopií Auerovy tyče nikdy identifikovány Bývá větší zrající granulocytární komponenta, často tento typ APL morfologicky stojí na pomezí M2 a M3 ve FAB klasifikaci Leukemické buňky často exprimují NK znak CD56 Horší terapeutická odpověď i prognóza než klasická forma APL
Děkuji za pozornost