Příspěvek k hodnocení prognostického potenciálu indexu proliferace a apoptózy plazmatických buněk u mnohočetného myelomu

Transkript

1 Příspěvek k hodnocení prognostického potenciálu indexu proliferace a apoptózy plazmatických buněk u mnohočetného myelomu Minařík J., Ordeltová M., Ščudla V., Vytřasová, M., Bačovský J., Špidlová A. III.interní klinika a Oddělení klinické imunologie LF Univerzity Palackého a FN Olomouc Brno 12/24

2 MNOHOČETNÝ MYELOM C R A B I MM klonální, nekontrolovaná proliferace a akumulace neoplasticky transformovaných el. B- buněčné linie/plazmocytů (CD 138 +) provázená produkcí M-proteinu ( paraproteinu ) prokazatelného v séru nebo v moči a projevy orgánové dysfunkce CRABI

3 MM KLONÁLNÍ KOMPARTMENTY MYELOMOVÝCH BUNĚK K. EXPANZE (GF) ~1% (<1-3,7%) nezralé plasmoblasty G G 1,S,G 2,M fáze PCLI - % S-fáze (DNA) G G 1,S,G 2,M fáze -Dg. 1-2% - v GF: M-3 (15-1%) K. KMENOVÝCH bb. (velmi malý) totipotentní samoobnova doplňování K. expanze K. DIFERENCIAČNÍ dominující,největší zástava proliferace/diferenciace ve zralé Pb ztráta My. bb -apoptóza -nekrobióza

4 MM KLONÁLNÍ KOMPARTMENTY MYELOMOVÝCH BUNĚK K. EXPANZE (GF) ~1% (<1-3,7%) nezralé plasmoblasty G G 1,S,G 2,M fáze PCLI - % S-fáze (DNA) G G 1,S,G 2,M fáze -Dg. 1-2% - v GF: M-3 (15-1%) K. KMENOVÝCH bb. (velmi malý) totipotentní samoobnova doplňování K. expanze K. DIFERENCIAČNÍ dominující,největší zástava proliferace/diferenciace ve zralé Pb ztráta My. bb -apoptóza -nekrobióza Poměr: produkce bb. ve fázi růstové (k.expanze) ztráty bb.ve f.apoptotické ( k. diferenciační) nárůst hodnot klin. progrese steady state f. plateau /stability Snížení hodnot regrese/ remise MM

5 MM : PF - VNITŘNÍ VLASTNOSTI MY. bb. MORFOLOGIE Plasmobl. typ NCA My. bb. CITLIVOST K TERAPII KR NR ER IMUNOFENOTYP PROLIFERACE APOPTÓZA KARYOTYP CD VLA 5- CD 2+ CD 1+ CD 15+ CD 27- PC PI/CD 138 BrdUr LI Ki 67 S -TK růst in vitro Annexin V 7 - AAD TUNEL INSTA Kaspázy FISH, CGH del 13q, 22q abnormní klon t (4;14), t(14;18) akt. telomerázy

6 Cíle studie vyšetření cytokinetických parametrů při diagnóze MM zhodnocení jejich prognostického významu stanovení optimálních diskriminačních hodnot pro prognózu nemoci

7 Charakteristika souboru n-117; věk M 66let (44-85); M/Ž,92:1 (56/61) Léčba: konvenční chemoterapie (VBMCP, MP, VAD) Stádium (Durie- Salmon) st.iii-52 44% st.i-15 13% st.ii-5 43% Imunochemické typy IgM 1 1% IgA 23 2% BJ 11 9% IgG 81 69% NS 1 1% A 87 (74%) B 3 (26%) Kappa 77 (66%) Lambda 39 (33%)

8 Propidium-jodidový index PC-PI/CD 138 PC-PI/CD138 kinetický ukazatel proliferačního potenciálu Vyjadřuje procentuální výskyt plazmatických buněk v S-fázi buněčného cyklu Metoda stanovení: 1) Izolace buněk aspirátu kostní dřeně pomocí konstantního gradientu 2) Identifikace myelomových buněk pomocí specifické monoklonální protilátky anti-cd138 3) Barvení intracelulární DNA pomocí propidium-jodidu 4) Analýza vzorků systémem průtokové cytometrie

9 PI/CD 138 Mean G1 = 235. CV G1 = 3.5 % G1 = 97. Mean G2 = CV G2 = 3.7 % G2 =.1 % S = 3. G2/G1 = 1.93 Chi Sq. = 4.6 Cell No. = 4255 S-fáze (%) (PI/CD 138 )

10 Propidium-jodidový index KT 1 Cum Survival [%] 8 6 Mediány: 13 měsíců 42 měsíců PC-PI/CD138 < 2,8 2 >= 2, log rank test: p =,5 [měsíce]

11 Propidium-iodidový index 1 KT Cum Survival [%] 8 6 log rank p=,14 log rank p=,76 log rank p=,13 PC-PI/CD138 2,-2,7 < 2, 2 >= 2, log rank test: p =,8 [měsíce]

12 Apoptotický index Apoptóza: programovaná smrt buňky Aktivní vícestupňový děj Fyziologická odpověď na řadu podnětů Eliminace nežádoucích či nepotřebných buněk z organismu Apoptotický index: procento myelomových buněk jevících známky apoptózy

13 Apoptotický index Fosfatidylserin (PS) uložen na vnitřní straně BM Při apoptóze transformace PS na vnější stranu BM Ztráta integrity buněčné membrány, fragmentace DNA, kondenzace jádra a cytoplazmy Metoda stanovení: 1) Identifikace myelomových plazmocytů užitím monoklonální protilátky anti CD-138 2) Navázání annexinu-v na fosfatidylserin 3) Odečtení apoptotického indexu (průtoková cytometrie)

14 AI/CD 138 B1:,5% B1:,3% B2: 1,2% B2: 2,2% B3: 96,7% B3: 74,1% B4: 1,7% B4: 23,3% Propidium iodid Propidium iodid Annexin V FITC (%) Annexin V FITC (%)

15 Apoptotický index KT 1 Cum Survival [%] PC-AI/CD 138 >= 4, M 16 měsíců < 4, log rank test: p =,12 [měsíce]

16 Apoptotický index 1 KT Cum Survival 8 6 log rank p=,31 log rank p=,96 log rank p=,12 PC-AI/CD 138 > 8, 4,-8, 2 < 4, log rank test: p =,12 [měsíce]

17 Souhrnný index 1 KT Cum Survival [%] PI/AI <,7 1 M 18 měsíců >=,7 log rank test: p =,32 [měsíce]

18 Závěr Propidium jodidový a apoptotický index významné ukazatele kinetiky myelomových plazmocytů Metodiky stanovení jsou dostupné, rychlé a výtěžné a použitelné v běžné klinické praxi Statisticky významná korelace PC-PI a PC-AI/CD 138 vzhledem k celkovému přežívání Podstatný rozdíl v mediánech přežití u skupin s rozdílnou proliferační a apoptotickou aktivitou Optimální diskriminační hodnoty v našem souboru - u propidium-jodidového indexu 2,8%, u apoptotického indexu 4,% Možnost rozdělení nemocných do prognosticky odlišných skupin a tím i výběr individuálně zvolené léčby