HODNOCENÍ KVALITY CERVIKÁLNÍHO HLENU

HODNOCENÍ KVALITY CERVIKÁLNÍHO HLENU Řešitel: Ing. Jan Beran Spoluřešitelé: prof. Ing. Ladislav Štolc, CSc. Ing. Jaroslava Trnovská FOND ROZVOJE VYSOKÝCH ŠKOL č. projektu 2395/2011/G4 Katedra speciální zootechniky, FAPPZ, ČZU v Praze

Úvod Vyšetření hlenu děložního krčku (cervikálního hlenu hraje u skotu významnou úlohu v prevenci poruch zabřezávání. Je jedním z hlavních ukazatelů probíhající říje. Může upozornit na některé hormonální poruchy, metabolické poruchy a zánětlivé procesy. Včasným zachycením těchto změn je možno předat takové plemenice dříve k léčení a zamezit vzniku chronických a těžko léčitelných onemocnění.

Metody hodnocení cervikálního hlenu Subjektivní metody: charakter hlenu tažnost Objektivní metody: množství stanovení ph obsah acetonu obsah močoviny arborizace (krystalizace) test přežitelnosti spermií v hlenu

Subjektivní metody Podle charakteru hlenu je možno přibližně určit údobí říje a prognózu provedení inseminace podle následujících kritérií: charakter hlenu tažnost hlenu není začátek říje střed říje čirý, vodnatý, volně vytéká vazký, lesklý, sklovitý, visí kolem 30 cm mizí konec říje hustý, lepkavý, někdy krvavý

Subjektivní metody Výraznější zákal hlenu poukazuje na zvýšenou přítomnost leukocytů při zánětlivých procesech později se objevují bělavé, žlutavé, nazelenalé nebo hnědočervené vločky hnisu. Změny konzistence poukazují na hormonální nebo metabolické poruchy. Do cervikálního hlenu mohou pronikat různé toxické látky, které mohou působit spermiotoxicky.

Princip krystalizace Zvýšená hladina estrogenů v krvi způsobí krystalizaci některých tělních tekutin: - (sliny, nosní sekret, slzy a hlen děložního krčku) Podle krystalizace hlenu posuzujeme: - Fyziologický průběh říje - Hladinu estrogenů - Metabolické poruchy, minerální poruchy - Zánětlivé procesy

Praktické využití krystalizace hlenu Specifická krystalizace hlenu děložního krčku určení optimální doby pro inseminaci Největší pravděpodobnost pro zabřeznutí je při kapraďovité krystalizaci Při atypické krystalizaci je pravděpodobnost minimální

Hodnocení krystalizace

Arborizace (krystalizace)

Arborizace (krystalizace) Nikon Eclipse E200

Větvičkovitá krystalizace - proestrus

Větvičkovito plavuňovitá krystalizace

Plavuňovitá krystalizace - 1. polovina říje

Smíšené formy Větvičkovito plavuňovito kapraďovitá krystalizace Plavuňovito kapraďovitá krystalizace

Kapraďovitá krystalizace 2. polovina říje (nejvhodnější)

Zbobtnalá krystalizace (po skončení říje)

Atypická krystalizace (při metabolických poruchách)

Celularizace (při zánětech)

Test přežitelnosti spermií v cervikálním hlenu Provádí se v případech poklesu plodnosti plemenic v chovu skotu. Indikací těchto vyšetření je: - nízká březost po 1. i všech inseminacích, - přebíhání plemenic v prodloužených intervalech s podezřením na ranou embryonální mortalitu (v důsledku neadekvátní výživy nebo přívodu toxických látek do metabolismu plemenic)

Test přežitelnosti s permií v cervikálním hlenu

Test přežitelnosti spermií v cervikálním hlenu Termoblock FALC pro dva bloky analogový

Test přežitelnosti spermií v cervikálním hlenu

Množství TB 224A od firmy Denver Instrument

ph metr ph metr 330i od firmy WTW

ph metr 330i od firmy WTW Měření ph

Obsah acetonu Stanovení obsahu acetonu na plynové chromatografii, hade-space metodou Příprava vzorku: navážení vzorku cervikálního hlenu do 20 ml hade-space vialky přidáme 10 ml nasyceného roztoku NaCl vialkyponoříme do vodní lázně vytemperované na 70 C na dobu 1 hodiny

Obsah acetonu Vlastní měření: po vyjmutí vialekz lázně odpipetujeme 5 µl plynu z horní části vialky pomocí gas mikropipety do injektoru Teplotní režim injektoru: 50 C (1 minuta), po 10 C/1 min. až do 55 C 30 metrová kolona typu FAMEWAX

Obsah acetonu Vyhodnocení obsahu acetonu ve vzorku: pro detekci vzorku se použije detektor FID výsledky: vyhodnoceny v závislosti na kalibrační acetonové řadě programem Clarity

plynový chromatograf(glc) Master GC od firmy Dani Obsah acetonu

Obsah acetonu příprava vzorků

Obsah acetonu měření vzorků

Obsah acetonu - vyhodnocení [mv] 20 C:\Documents and Settings\Okrouhla\data\aceton2010\aceton12042011\std36504 C:\Documents and Settings\Okrouhla\data\aceton2010\aceton12042011\std36512 15 voltage 10 1,273 aceton 1 1,0 1,1 1,2 1,3 1,4 1,5 1,6 1,7 Time [min.]

Obsah acetonu - vyhodnocení [V] C:\Documents and Settings\Okrouhla\data\aceton2010\aceton12042011\std36504 C:\Documents and Settings\Okrouhla\data\aceton2010\aceton12042011\std36512 0,8 0,6 voltage 0,4 0,2 0,0 1,27 aceton 1 0 1 2 3 4 Time [min.]

Obsah močoviny Stanovení obsahu močoviny spektrofotometrická metoda upravená metodika pro stanovení močoviny v odpadní vodě (Katedra chemie ČZU v Praze, Ing. Matyáš Orsák, Ph.D.) Příprava chemikálií: Diacetylmonooxim(DMO) 2,5 g rozpustit ve 100 ml vody Thiosemikarbazid(TSC) 0,25 g rozpustit ve 100 ml vody Směs kyselin (SK) 300 ml 85% H 3 P0 4 + 10 ml H 2 SO 4 doplnit na 500 ml vody Směsné činidlo 10 ml DMO + 4 ml TSK + 200 ml SK zásobní standard 0,25 g močoviny do 500 ml pracovní standard 20x naředit např. 5 ml do 100 ml

Obsah močoviny Příprava vzorku: navážení vzorku cervikálního hlenu do kádinky nařědění5 ml destilované vody homogenizace vzorku do 25 ml odměrné baňky napipetujeme0,5 ml zhomogenizovanéhovzorku a doplníme destilovanou vodou na objem 5 ml

Obsah močoviny Příprava kalibrační řady do 25 ml odměrných baněk se pipetuje: stand. roztok dest. voda konc. močoviny [ ml ] [ ml ] [ µg ] 0 5 slepý pokus 0,5 4,5 12,5 1 4,0 25,0 2 3 50,0 3 2 75,0 4 1 100,0 5 0 125,0

Obsah močoviny Měření vzorku: do všech baněk (včetně kalibračních vzorků a slepého pokusu) přidáme 15 ml činidla baňky vložíme do sušárny vyhřáté na 120 C po 40 min. baňky vyjmeme, ochladíme na 20 C a doplníme destilovanou vodou po rysku (na celkový objem 25 ml) promícháme a měříme na spektrofotometru v 1 cm kyvetě při vlnové délce 528 nm sestrojíme kalibrační křivku, hodnoty močoviny ve vzorku odečteme a přepočítáme na mg/l

Obsah močoviny - homogenizace Silent Crusher M, Heidolph Instruments

Obsah močoviny - měření spektrofotometr Genesys 10vis

Zdroje Hegedüšová, Z. a kol. (2010). Detekce říje v chovech skotu cesta ke zlepšení úrovně reprodukce. Agrovýzkum Rapotín, s. r. o., ISBN: 978-80-87144-21-3. Louda, F. a kol. (2001). Inseminace hospodářských zvířat se základy biotechnických metod. ČZU v Praze, ISBN: 80-213-0702-1. Rob, O. a Stehlík, I. (1983). Cvičení z reprodukce hospodářských zvířat II. VŠZ v Praze. Fotografie: Ing. Jan Beran Ing. Monika Okrouhlá, Ph.D.