Protokoly z Lab. cv. z mikrobiológie, externé bakalárske štúdium Meno: Dátum: Názov: Aseptická práca, sterilizácia, živné médiá, izolácia čistej kultúry, metódy na stanovenie počtu mikroorganizmov 1. Vymenujte základné princípy aseptickej práce: 2. Uveďte, čo je to sterilizácia a aký je jej význam: 3. Stručne uveďte, čo je to kultivačné médium a aký je jeho význam: 4. Charakterizujte živné médiá pripravené v priebehu cvičenia (názov, používaná skratka, chemický základ, skupina mikroorganizmov pre ktorú je určené) 5. Uveďte podmienky sterilizácie a) živných médií pripravených v priebehu cvičenia: b) Petriho misiek používaných na cvičeniach: 6. V bodoch popíšte postup prípravy a) agarových platní: b) šikmých agarov: 7. Na aké účely slúžia a) agarové platne: b) šikmé agary: 8. Ako možno získať mikroorganizmy z okolitého prostredia:
9. Charakterizujte čistú kultúru mikroorganizmov: 10. Stručne opíšte použitú metódu izolácie čistej kultúry: 11. Zhodnoťte úspešnosť Vašej izolácie čistej kultúry zo zmesi mikroorganizmov z okolitého prostredia a uveďte prípadne problémy a príčiny: 12. Vymenujte základné metódy na stanovenie počtu mikroorganizmov a ich princípy: 13. Aké sú podmienky stanovenia počtu kvasiniek priamou mikroskopickou metódou (v Bürkerovej komôrke): 14. Uveďte spôsob výpočtu a výsledok pri stanovení počtu kvasiniek v 1 ml suspenzie: 2
Názov: Baktérie (makroskopické a mikroskopické pozorovanie, základné biochemické diagnostické testy) 1. Vymenujte, aké znaky charakterizujú kolóniu baktérií: 2. Aké základné tvary baktérií poznáte a ako môžu byť usporiadané: 3. Čo je to natívny preparát a aké je jeho praktické uplatnenie: 4. Popíš použitý postup negatívneho zobrazenia: 5. Prečo sa preparáty fixujú a aký je najčastejší postup fixácie v bakteriológii: 6. Uveďte druhy diagnostických farbení aj s ich princípmi: 7. Popíšte, ako ste farbili fixované preparáty pri a) Gramovom farbení: b) farbení bakteriálnych endospór: 8. Na čo sa používa "pomocný KOH test" a čo je jeho princípom: 3
9. Zakreslite výsledky makroskopického a mikroskopického pozorovania modelových baktérií a doplňte chýbajúce údaje a) Bacillus subtilis Makrovzhľad kolónie: Natívny preparát: Negatívne zobrazenie: pohyb: tvar buniek: usporiadanie buniek: Gramovo farbenie: Farbenie bakteriálnych endospór: farba: farba: KOH test: b) Micrococcus luteus Makrovzhľad kolónie: Natívny preparát: Negatívne zobrazenie: pohyb: tvar buniek: usporiadanie buniek: Gramovo farbenie: farba: KOH test: c) Escherichia coli 4
Makrovzhľad kolónie: Natívny preparát: Gramovo farbenie: pohyb: farba: KOH test: d) Pseudomonas aeruginosa Makrovzhľad kolónie: Natívny preparát: Gramovo farbenie: pohyb: farba: KOH test: 10. Oxidačno-fermentačný test - O/F test c) zloženie živného média: 0.2 g peptónu, 0.5 g NaCl, 2 g glukózy, 0.03 g K 2 HPO 4, 2 g agaru a 100 ml H 2 O rozvariť, pridať 1 ml brómtymolovej modrej a upraviť ph na modrozelenú farbu média Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa F - zaliať asi 1 cm vrstvou zmesi pafin:vazelína (1:1) 37 C, 24 h, tma, staticky 5
f) výsledok: 11. Utilizácia laktózy c) zlozenie živného média: 1 %-ná peptónová voda (1 g peptónu, 0.5 g NaCl, 0.1 ml brómtymolovej modrej, 100 ml H 2 O, ph upravené na modrozelenú farbu média) obsahujúca 1 % laktózy Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa, 37 C, 24 h, tma, staticky f) výsledok: 12. Metylred a Vogest-Proskauerov test c) zloženie živného média: peptón-glukózová pôda (5 g peptónu, 5 g glukózy, 5 g K 2 HPO 4, 100 ml H 2 O) Escherichia coli, Serratia marcescens, Pseudomonas aeruginosa, 37 C, 24 h, tma, staticky f) výsledok: 6
13. Oxidázová skúška c) zlozenie živného média: Mäsopeptónovy agar Pseudomonas aeruginosa, Escherichia coli, 37 C, 24 h, tma, staticky f) výsledok: 14. Katalázová skúška c) zlozenie živného média: Mäsopeptónový agar Bacillus subtilis, Micrococcus luteus, 37 C, 24 h, tma, staticky f) výsledok: 7
Názov: Vláknité huby (makroskopické a mikroskopické pozorovanie) 1. Charakterizujte vláknité huby (zaradenie do systému, morfológia, rozmnožovanie) 2. Aké makroskopické a mikroskopické znaky sa sledujú pri charakterizácii vláknitých húb: 3. Popíšte postup prípravy preparátov na mikroskopické pozorovanie vláknitých húb: 4. Zakreslite a šípkami k obrázku popíšte znaky modelových vláknitých húb a) Rhizopus makroskopické: b) Mucor makroskopické: 8
c) Aspergillus makroskopické: d) Penicillium makroskopické: e) Alternaria alternata makroskopické: f) Fusarium makroskopické: 9
Názov: Kvasinky (makroskopické a mikroskopické pozorovanie, základné biochemické diagnostické testy) 1. Charakterizujte kvasinky (zaradenie do systému, morfológia, rozmnožovanie) 2. Aké makroskopické a mikroskopické znaky sa sledujú pri charakterizácii kvasiniek: 3. Zakreslite a popíšte znaky modelových kvasiniek a) Saccharomyces cerevisiae makroskopické na stuženom médiu: v kvapalnom médiu: b) Schizosaccharomyces pombe makroskopické na stuženom médiu: v kvapalnom médiu: 10
c) Candida utilis makroskopické na stuženom médiu: v kvapalnom médiu: d) Rhodotorula glutinis makroskopické na stuženom médiu: v kvapalnom médiu: e) Aureobasidium pullulans makroskopické na stuženom médiu: v kvapalnom médiu: f) Endomycopsis javanensis makroskopické na stuženom médiu: v kvapalnom médiu: 11
4. Kvasné skúšky - utilizácia sacharózy a maltózy c) zlozenie živného média: 1 % kvasničný autolyzát (100 ml, 1.5 ml brómtymolovej modrej, ph upraviť na modrozelenú farbu média) obsahujúci 2 % sacharózy, resp. laktózy Candida albicans, Candida tropicalis, Candida utilis a Candida lipolytica 26 ºC, 24 h, svetlo-tma, staticky f) výsledok: 5. Asimilácia C a N zdrojov - auxanografia c) zlozenie živného média: -C médium (0.5 g (NH 4 ) 2 SO 4, 0.1 g KH 2 PO 4, 0.05 g MgSO 4, 0.1 ml 1 % kvas. autolyzátu, 2 % agaru, 100 ml H 2 O) -N médium (2 g glukózy, 0.1 g KH 2 PO 4, 0.05 g MgSO 4, 0.1 ml 1 % kvas. autolyzátu, 2 % agaru, 100 ml H 2 O) Saccharomyces cerevisiae, Rhodotorula glutinis, Candida albicans a Candida utilis hustá suspenzia kvasiniek vo fyziologickom roztoku, výsledná koncentrácia suspenzie v médiu 2 % f) výsledok: 6. Uveďte význam, princíp a využitie testu vitality kvasiniek: 12