Diagnostika infekce Chlamydia trachomatis pomocí molekulárně genetické metody real time PCR nejen u pacientek z gynekologických zařízení Mgr. Klára Vilimovská Dědečková, Ph.D. Synlab genetics s.r.o. Molekulární detekce patogenů klara.vilimovska@synlab.cz www.synlab-genetics.cz
Chlamydia trachomatis Intracelulární bakteriální patogen Nejběžnější sexuálně přenosná bakterie Příznaky infekce: bolest při močení uretritida horečka bolesti v podbřišku Neléčení infekce může vést ke sterilitě Obtížné laboratorní stanovení kultivace - neprovádí se z důvodu dlouhé inkubace na tkáňových kulturách serologické stanovení nevypovídá o aktuálním stavu, přítomnosti/nepřítomnosti bakterie v buňkách, zkřížená reaktivita molekulárně genetické vyšetření detekce DNA bakterie metoda real time PCR (polymerázová řetězová reakce) vyšší citlivost, rychlost, vyšší specificita
Metodika vyšetření Odběr klinického materiálu u lékaře (moč, výtěr, ejakulát) Izolace DNA C. trachomatis Kvantitativní detekce DNA C. trachomatis pomocí real time PCR BioRobot M48 (Qiagen) MagAttract Mini M48 kit (Qiagen) Real time PCR cykler Rotorgene (Qiagen) Odběrová sada: remel MicroTest (Thermo Scientific) Odběrová nádoba na moč: Sarstetd
Real time PCR C. trachomatis Primery a sonda cílené na plazmid C. trachomatis Zmožení úseku DNA (amplifikace) během 50 cyklů složených ze 3 kroků Standard Amplifikace o známé DNA koncentraci se projeví změnou fluorescence v určitém cyklu Pozitivní záchyt Kvantitativní výsledek přepočet dle kalibrační křivky na počet genomických kopií v 1 ml vzorku S každou reakcí provádíme: kontrolu odběru vzorku (gen albumin) Negativní kontrola kontrolu PCR reakce (standardní vzorek, pozitivní kontrola) kontrolu laboratorní kontaminace (negativní kontrola) Negativní vzorek
Cíl studie Shrnout výsledky vyšetření detekce C. trachomatis pomocí real time PCR za období 1. ledna 2013 31.12.2015
Populace pacientů ve studii Gynekologické ambulance, nemocnice Urologické ambulance Dermatovenerologické ambulance Zdravotnická zařízení zabývající se léčbou neplodností Zařízení hledající potenciální dárce buněk a tkání zákon ukládá každého potenciálního dárce vyšetřit na pohlavně přenosné onemocnění Celkem: 612 pracovišť, 213 pracovišť pouze 1x Věk: 5 82 let Průměr: 37 let Medián: 34 roků
Rozložení pracovišť dle krajů 12 153 vyšetření 33 IČP 619 2610 14 IČP 117 IČP 11 IČP 291 258 7 IČP 2 27 IČP 1699 vyšetření 21 IČP 30 1 IČP 2 IČP 9 937 14 IČP 651 98 IČP 1320 9 IČP 11 160 IČP interní číslo pracoviště
Výsledky 8000 7000 6000 5000 4000 3000 2000 1000 2013 2014 2015
počet vyšetření real time PCR počet vyšetření real time PCR počet vyšetření real time PCR Výsledky 8000 7000 6000 7569 6351 6572 5000 4000 3000 2000 1000 2013 2014 2015
počet vyšetření real time PCR počet vyšetření real time PCR počet vyšetření real time PCR Výsledky 8000 7569 7000 6000 6688 6351 5667 6572 6074 5000 4000 3000 2000 1000 2013 2014 2015
počet vyšetření real time PCR pts s C. trachomatis počet vyšetření real time PCR pts s C. trachomatis počet vyšetření real time PCR pts s C. trachomatis Výsledky 8000 7569 7000 6000 6688 6351 5667 6572 6074 5000 4000 3000 2000 1000 332 291 264 2013 2014 2015
počet vyšetření real time PCR pts s C. trachomatis ženy s C. trachomatis počet vyšetření real time PCR pts s C. trachomatis ženy s C. trachomatis počet vyšetření real time PCR pts s C. trachomatis ženy s C. trachomatis Výsledky 8000 7569 7000 6000 6688 6351 5667 6572 6074 5000 4000 3000 2000 1000 332 291 264 176 162 164 2013 2014 2015
počet vyšetření real time PCR pts s C. trachomatis ženy s C. trachomatis Pacienti s neplodností (2013-2015) 8000 7602 7000 6948 6000 5000 4000 3000 2000 1000 121 70
počet vyšetření real time PCR počet dárců dárci s C. trachomatis ženy s C. trachomatis Vyšetřování dárců (2013-2015) 2000 1879 1500 1000 1078 500 73 62
Závěr Každý rok jsme diagnostikovali infekci C. trachomatis téměř u 300 pacientů, více u žen. Problémy s neplodností pacientů nebyly u většiny způsobeny infekcí C. trachomatis. Ze zákona povinné vyšetřování potenciálních dárců na C. trachomatis má význam. 73 potenciálních dárců mělo infekci C. trachomatis
Poděkování Všem lékařům za projevenou důvěru. Pořadatelům za příležitost prezentovat naše výsledky.