Odběr, zpracování a uchování klinických vzorků

Transkript

1 Obecně Výsledky laboratorních testů, zejména RT-PCR závisí na druhu klinického materiálu, odběru, uchování a transportu. Nejpodrobnější informace o přítomnosti infekčního agens poskytne analýza klinického materiálu odebraného z různých lokalizací. Tato možnost je však spojena s tím, že odebrané vzorky musí být samostatně analyzovány. Chcete-li snížit pracnost a náklady na analýzu, lze tyto vzorky (již vyizolované) spojit. Pro stanovení patogenů pomocí RT-PCR detekčních kitů RG detect lze použít různé druhy klinických vzorků: urogenitální, rektální a oropharyngeální stěry, sekret spojivky, výpotek z váčků a erozivněulcerózní léze lidské pokožky, výpotek z membrán sliznic, moč a močový sediment, sektet prostaty, biopsie, plná krev, plazma, sliny, likvid, sputum, bronchoalevolární laváž, stolice. Klinické vzorky a jejich využití v detekci patogenů - Urogenitální stěry, sediment moči, sekret prostaty jsou doporučené klinické vzorky k detekci DNA Mycoplasma genitalium, Mycoplasma hominis, - Sekret spojivky, rektální a oropharyngeální stěry jsou doporučené klinické vzorky k detekci DNA Neisseria gonorrhoeae. - Urogenitální, rektální a oropharyngeální stěry, výpotek z váčků a erozivně-ulcerózní léze lidské pokožky, výpotek z membrán sliznic jsou doporučené klinické vzorky k detekci DNA Treponema pallidum. - Vaginální stěry jsou doporučené klinické vzorky k detekci DNA Gardnerella vaginalis. - Sputum, bronchoalveolární laváž, plné krv, materiál z biopsie jsou doporučené klinické vzorky k detekci DNA Mycoplasma/Chlamydophila pneumoniae V následujícím rozdělení jsou nejčastěji používané klinické vzorky: MUŽI Druh klinického materiálu Diagnostické využití Detekce Uretrální stěry Moč Stěr/výpotek z ulcerózně-erozivní léze Sekret prostaty STD*- sexuálně přenosné infekce OM**- oportunní mikroorganismy Screening STD*, etiologická diagnostika uretritidy, monitoring antibakteriální léčby uretritidy Screening STD*, etiologická diagnostika uretritidy Diferenciální diagnostika infekcí, které způsobují ulcerózně-erozivní léze etiologická diagnostika bakteriální prostatitidy Mycoplasma genitalium Mycoplasma hominis, Treponema pallidum Mycoplasma genitalium

2 Ve většině případů diagnostiky akutní uretritidy, nebo relapsu chronické uretritidy se nejvíce využívá stěr z přední části uretry. U chronických, oligosymptomatických zánětlivých procesech a prostatitidě se nejvíce využívá sekret prostaty. První proud ranní moči po masáži prostaty se odebírá dodatečně. K diagnóze mužské neplodnosti se dodatečně analyzuje ejakuát. Pro creeningové testy na sexuálně přenosné infekce je vhodné použít první část moči, protože může být odebrána neinvazivně. ŽENY Druh klinického materiálu Diagnostické využití Detekce Screening děložního čípku pomocí HPV testu High-risk HPV Cervikální stěry Stěr/výpotek z ulcerózněerozivní léze Moč Vaginální stěr/výtok STD*- sexuálně přenosné infekce OM**- oportunní mikroorganismy Etiologická diagnostika cervicitidy, endrometritidy. Monitoring antibakteriální léčby cervicitidy. Diferenciální diagnostika infekcí, které způsobují ulcerózně-erozivní léze Diferenciální diagnostika uretritidy, cystitidy Screening High-risk HPV (pro ženy ve věku od 25 let) Screening STD* Diferenciální diagnostika syndromu patologického výtoku z vagíny Mycoplasma genitalium, Treponema pallidum Mycoplasma hominis, Treponema pallidum Mycoplasma genitalium Mycoplasma genitalium, Gardnerella vaginalis, Mycoplasma hominis,

3 Uretrální stěry Ve většině případů se po detekci sexuálně přenosných infekcí jsou použity stěry z přední části uretry. 1) Před provedením vlastního stěru z uretry se očistí ústí močové trubice sterilním tamponem namočeným ve sterilním fyziologickém roztoku 2) Poté močovou trubici masírovat. 3) Poté se odběrový tampón zavede pomalým šroubovitým pohybem do hloubky 2-4 cm uretry, kde je doporučeno rotovat 3-5 sekund tak, aby bylo odebráno co nejvíce buněčného materiálu (epitelií). 4) Vyjmutí tamponu se provádí opět pomalým šroubovitým pohybem. 5) Tampon se ihned po odběru vloží do sterilní 1,5 ml zkumavky s transportním médiem. 6) Jakmile je tampon ponořen v transportním médiu, rotačním pohybem v délce trvání cca 15 vteřin se uvolní odebraný materiál do média. 7) Následně se tampon vyjme ze zkumavky, popř. se přelomí na označeném místě a uzavře ve zkumavce část s tamponem, zbylou část zlikvidovat jako infekční odpad. Při manipulaci je třeba se vyhnout vzniku aerosolu POZOR! Pacient nesmí před odběrem alespoň 2 hodiny močit. Sekret prostaty Sekret prostaty se využívá k diagnostice infekcí reprodukčních orgánů. 1) Před provedením vlastního odběru se očistí zevní ústí močové trubice sterilním tamponem namočeným ve sterilním fyziologickém roztoku. 2) Zavést prst do konečníku a provést šetrnou masáž prostatické žlázy. 3) Sekret vytékající z uretry se zachytí do sterilní nádobky resp. do zkumavek se speciálními transportními médii. POZOR! Odběr prostatického sekretu provádíme nejlépe po 2-3 denní sexuální abstinenci. Prostatický sekret získáme prostatickou masáží. Provádí se nejlépe v genupektorální poloze, po omytí genitálu. Moč První proud ranní moči je adekvátní klinický materiál pro detekci sexuálně přenosných infekcí a vhodný jako alternativa uretrálních stěrů, protože je to neinvazivní procedura. Před provedením vlastního odběru se zevní očistí ústí močové trubice sterilním tamponem namočeným ve sterilním fyziologickém roztoku. 1) Do suché,sterilní nádobky odebrat první proud ranní moči (20-25 ml). 2) Nádobku uzavřít, označit. POZOR! Pacient nesmí před odběrem alespoň 2 hodiny močit. Během noci před odběrem doporučujeme pacientům nepožívat nadměrné množství tekutin. Před odběrem je třeba důkladné omytí genitálií, není možné vyšetření močového sedimentu provádět u žen v období menstruace. Dále se doporučuje moč zpracovat dle postupu popsaném v kapitole Transport a uchování.

4 Cervikální stěry Cervikální stěry jsou určeny k diagnostice všech forem infekcí způsobených Chalmydia trachomatis, Neasseria gonorrhoeae, Human papilloma virus, Mycoplasma genitalium. Analýza poskytuje informace o efektivitě léčby výše uvedených infekcí. 1) Před provedením vlastního odběru je doporučeno odstranit hlenovou vrstvu vatovým tamponem. 2) Zavést sondu (odběrový tampon) do hloubky 1 1,5 cm cervixu 3) Rotovat sondou po dobu 3 5 sekund tak, aby bylo odebráno co nejvíce buněčného materiálu (epitelií). 4) Odstranit sondu bez kontaktu s vaginální stěnou. 5) Vložit do zkumavky s transportním mediem a rotačním pohybem v délce trvání cca 15 sec. uvolnit odebraný materiál do media. 6) Zkumavky se vzorkem uzavřít a popsat. 7) Použitou sondu zlikvidovat jako infekční odpad. POZOR! Při manipulaci s klinickými vzorky je třeba se vyhnout vzniku aerosolu. Odebraný materiál by měl obsahovat dostatečné množství cylindrických epitelových buněk. Vaginální stěry Vaginální stěry jsou určeny k diagnostice Mycoplasma genitalium, Mycoplasma hominis, a dalších bakteriálních vaginóz. Dále tyto stěry lze použít i k diagnostice cervikálních patogenů (při použití kitů RG detect ) C.trachomatis a N.gonorrhoeae. 1) Před provedením vlastního odběru je doporučeno odstranit hlenovou vrstvu vatovým tamponem. 2) Rotovat sondou po povrchu cervixu po dobu 3 5 sekund tak, aby bylo odebráno co nejvíce buněčného materiálu (epitelií). 3) Vložit do zkumavky s transportním mediem a rotačním pohybem v délce trvání cca 15 sec. uvolnit odebraný materiál do media. 4) Zkumavky se vzorkem uzavřít a popsat. 5) Použitou sondu zlikvidovat jako infekční odpad. POZOR! Při manipulaci s klinickými vzorky je třeba se vyhnout vzniku aerosolu. Odebraný materiál by měl obsahovat dostatečné množství cylindrických epitelových buněk.

5 Doporučené odběrové soupravy Odběr, zpracování a uchování Odběrové soupravy jsou kompatibilní s izolační soupravou DNA express. Technologie flocked swabs. Odběrové soupravy obsahují transportní medium. Toto Medium slouží k přepravě, skladování stěrů a výtoků odebraných z urogenitálního traktu, krku, konečníku, oční spojivky, erozivně-ulcerózní léze lidské kůže a sliznic k následnému rozboru materiálu pro detekci sexuálně přenosných infekcí a dalších infekcí reprodukčního systému pomocí polymerázové řetězcové reakce (PCR) a detekce sekvence nukleové kyseliny pomocí PCR souprav. Transportní medium je sterilní solný pufr růžové barvy, který je doplněn o mukolytické, konzervační a stabilizační látky. Mukolytický agent zajišťuje zkapalňování hlenu, poskytuje efektivní a homogenní míchání klinického materiálu s transportním mediem. Konzervační a stabilizační látky brání růstu nespecifické mikroflory a předčasné lýze buněk, poskytují dlouhodobou stabilitu RNA / DNA mikroorganismů a virů v širokém rozsahu teplot. Druhy odběrových souprav: Kit pro odběr, transport a uchování uretrálních stěrů Katalogové číslo: P0815 Použití: Kit pro odběr, transport a uchování uretrálních stěrů před vlastní izolací. Vhodný pro odběr z malých či méně přístupných oblastí, jako jsou odběry z očí, uší, nosních průchodů, krku a urogenitálního traktu. Vhodný pro dětské odběry. Kit pro odběr, transport a uchování endocervikalních stěrů Katalogové číslo: P0709 Použití: Kit pro odběr, transport a uchování endocervikalních stěrů před vlastní izolací. Transport a uchování Klinické vzorky by měly být odebrány do sterilní zkumavky a transportním mediem. 1) Vzorky (kromě moči) mohou být transportovány a uchovávány při těchto podmínkách: laboratorní teplota +18 až +25 C po dobu 28 dní při teplotě +2 až +8 C po dobu 3 měsíců při teplotě -20 C není stanoveno (po rozmražení se dále neuchovává) 2a) Vzorky moči (bez přidání transportního media*)mohou být transportovány a uchovávány při těchto podmínkách: laboratorní teplota +18 až +25 C po dobu 6 h při teplotě +2 až +8 C po dobu 24 h 2b) Vzorky moči/sediment (po přidání transportního media*)mohou být transportovány a uchovávány při těchto podmínkách: při teplotě +2 až +8 C po dobu 24 h při teplotě -20 C po dobu 1 týdne při teplotě -68 C není stanoveno (po rozmražení se dále neuchovává)

6 * Zpracování vzorku moči (sediment): I. Promíchat nádobku s močí. II. Napipetovat 1 ml vzorku moči do 1,5 ml sterilní zkumavky pomocí bariérových špiček. III. Centrifugovat zkumavku s močí 5 minut při g. Pokud bude moč obsahovat velké množství krystalů moči- resuspendovat horní část solné pelety v 1 ml a centrifugovat znovu. IV. Odstranit supernatatnt. V. Přidat transportní medium k peletě (finální objem 0,2 ml). Opatrně vortexovat. Takto připraveny vzorek moči (peleta s transportním mediem) může být uchován dle bodu 2b. Klinické vzorky musí být transportovány v chladícím boxu s chladícími vložkami po dobu nezbytně nutnou! Doporučené izolační soupravy Pro správnou detekci DNA pomocí amplifikačních kitů RG detect výrobce doporučuje použití izolačních souprav DNA Express a DNA Express B. Tyto soupravy jsou určeny k izolaci DNA z. Soupravy jsou kompatibilní s kity RG detect. IVD, CE součástí kitů RG detect je Vnitřní kontrola, která slouží ke kontrole izolace,tak možné inhibice PCR (kromě kitu M./C pneumoniae RG detect a HPV) Druhy izolačních souprav: DNA Express Katalogové číslo: P0701 Použití: Kit pro izolaci DNA z klinických materiálů (moč, výtěr sliznic urogenitálního traktu, krku, konečníku, spojivek, erozí a vředů). Získaná DNA je vhodná k testování pomocí PCR souprav, které detekují agens pohlavně přenosných nemocí způsobených Treponema pallidum, Mycoplasma genitalium, Mycoplasma hominis, Ureaplasma species, Gardnerella vaginalis, Trichomonas vaginalis a HPV. DNA Express B Katalogové číslo: P0813 Použití:Kit pro izolaci DNA z tělních tekutin a biopsií (plná krev, plazma, sediment moči, sliny, likvor, sputum, materiál z biopsie, broncho-alveolární laváž, stolice, sekret prostaty). Minimální objem klinického vzorku potřebného k izolaci je 0,1 ml. Získaná DNA je vhodná k následnému testování pomocí PCR souprav, na stanovení přítomnosti DNA Mycoplasma genitalium, Mycoplasma hominis,, Mycoplasma pneumoniae a Chlamydophila pneumoniae či dalších infekčních agens. SÍDLO PROVOZOVNY A TECHNICKÉ ODDĚLENÍ: Institute of Applied Biotechnologies a.s. Služeb 4, Praha 10, , Česká Republika Tel: Fax: iabio@iabio.cz