LABORATORNÍ PŘÍRUČKA IVF LABORATOŘ

Strana 1/24 Dokumentace integrovaného systému managementu LP-SP-IVF-01 LABORATORNÍ PŘÍRUČKA IVF LABORATOŘ Pracovní funkce Zpracoval Zástupce odborné vedoucí IVF laboratoře Schválil Vedení laboratoří SP Jméno MUDr. Š. Vilímová MUDr. Vladimír Sobotka, Doc. MUDr. Tonko Mardešić, CSc. Datum 26.3.2015 30.3.2015 Podpis Za řízení dokumentu odpovídá: Manažer IVF Platné od: 1.4.2015 Za revize a aktualizaci dokumentu odpovídá: Odborný vedoucí IVF

Strana 2 (celkem 24)

Strana 3 (celkem 24) Obsah Dokumentace integrovaného systému managementu... 1 LP-SP-IVF-01... 1 1 Úvod... 6 1.1 Účel a rozsah platnosti... 6 1.2 Odpovědnost... 6 1.3 Definice, zkratky, pojmy... 6 1.4 Související dokumentace... 7 2 Identifikace laboratoře a důležité údaje... 8 2.1 Základní informace o laboratoři... 8 2.2 Úroveň a stav akreditace pracoviště... 9 2.3 Organizace laboratoře, její vnitřní členění, vybavení a personální obsazení... 9 2.4 Provozní doba... 10 2.5 Zaměření laboratoře... 10 2.6 Přehled nabízených vyšetření... 10 2.7 Informace o poskytovaných vyšetřeních... 11 2.7.1 Vyšetření v embryologické laboratoři... 11 2.7.2 Vyšetření v andrologické laboratoři... 11 3 Manuál pro odběry primárních vzorků... 12 3.1 Identifikace primárního vzorku... 12 3.2 Žádanka pro laboratorní vyšetření... 13 3.2.1 Žádanka pro hodnocení spermiogramu... 13 3.2.2 Žádanka pro hodnocení oocytů... 13 3.2.3 Žádanka pro morfologické hodnocení embyí... 13 3.3 Informovaný souhlas... 13 3.4 Používaný odběrový systém... 14 3.5 Příprava pacienta před vyšetřením... 14 3.6 Postup pro odběr vzorku... 15 3.6.1 Odběr oocytů... 15 3.6.2 Hlavní chyby při odběru oocytů:... 15 3.6.3 Odběr ejakulátu... 15 3.6.4 Hlavní chyby při odběru ejakulátu:... 16 3.7 Operace se vzorkem, stabilita, převzetí laboratoří... 16 3.8 Základní informace k bezpečnosti při práci se vzorky... 17 3.9 Informace k předání vzorků... 17 4 Preanalytické procesy v laboratoři... 18 4.1 Příjem vzorků v IVF laboratoři... 18 4.1.1 Identifikace pacienta na štítku zkumavky... 18 4.2 Kriteria pro přijetí nebo odmítnutí vadných (nestandardních) primárních vzorků... 18 4.3 Manipulace se vzorky a skladování materiálu před vyšetřením... 19 5 Fáze po vyšetření... 19 5.1 Likvidace biologického materiálu po vyšetření... 19 6 Vydávání výsledků a komunikace s laboratoří... 19 6.1 Forma vydávaných výsledků... 19 6.1.1 Telefonické sdělování výsledků... 20 6.1.2 Komunikace s lékaři indikujícími vyšetření... 20

Strana 4 (celkem 24) 6.2 Výsledkový list... 20 6.3 Vydávání výsledků přímo pacientům... 20 6.4 Úhrada vyšetření samoplátci a cizinci... 21 6.5 Změny výsledků a nálezů... 21 6.6 Doby trvání jednotlivých vyšetření... 21 6.7 Konzultační činnost laboratoře... 21 6.8 Způsob řešení stížností... 22 7 Přílohy... 22

Strana 5 (celkem 24) Předmluva Vážené kolegyně, vážení kolegové, všichni naši klienti, tato Laboratorní příručka Vám přináší informace o naší laboratoři a jejích službách pro Vás. Je určena lékařům, zdravotním sestrám a pacientům. Doufáme, že v ní naleznete vše potřebné pro naši dobrou spolupráci. Kolektiv pracovníků IVF laboratoře PRONATAL, společnost s ručením omezeným

Strana 6 (celkem 24) 1 Úvod 1.1 Účel a rozsah platnosti Cílem příručky je informovat lékaře, pacienty a žadatele o laboratorní vyšetření o tom, jaká vyšetření IVF laboratoř Sanatoria PRONATAL poskytuje, o podmínkách správného odběru vzorků a systému evidence a zpracování vzorků v IVF laboratoři, o způsobu vydávání výsledků a způsobu komunikace mezi pacientem, lékařem a laboratoří. V této příručce mohou pacienti i ošetřující lékaři nalézt potřebné informace o indikovaných vyšetřeních, odkazy na formuláře pro informovaný souhlas. Příručka IVF laboratoře PRONATAL je součástí řízené dokumentace PRONATAL medical group; její aktuální verze je dostupná na webových stránkách www.pronatal.cz. Tištěná verze je k dispozici v laboratoři. 1.2 Odpovědnost Za zpracování a aktualizaci této příručky odpovídá odborný vedoucí IVF laboratoře. 1.3 Definice, zkratky, pojmy Pmg SP ISM PISM zaměstnanec pracovník LP COCs IUI IVF ICSI zkrácený název pro PRONATAL medical group jako síť center a společností jako organizačních složek, vázaných smluvními a majetkovými vztahy, obecně organizace Sanatorium PRONATAL - zkrácený název pro PRONATAL společnost s ručením omezeným, která je nositelem vlastnických práv k ochranné známce a know-how certifikovaného ISM s autonomními akreditovanými laboratořemi, obecně řídicí společnost integrovaný systém managementu příručka integrovaného systému managementu, používá se jako první složka kódu pro všechny příručky, v tomto systému vydávané osoba s uzavřenou pracovní smlouvu podle Zákoníku práce osoba vykonávající činnost pro organizaci nebo jednotlivé společnosti, se smluvním vztahem uzavřeným buď podle Zákoníku práce (zaměstnanec), nebo podle jiných právních úprav. Tato definice platí i pro personál subdodavatelů laboratorní příručka kumulo-oocytární komplexy intrauterinní inseminace in vitro fertilizace intracytoplasmatická injekce spermie do oocytu

Strana 7 (celkem 24) PICSI hcg WHO TZ PLUS SPA NORD REPRO RČ SOP PP fysiologická ICSI, neboli Pre-selected ICSI lidský choriongonadotropin Světová zdravotnická organizace tkáňové zařízení centrum PRONATAL PLUS centrum PRONATAL SPA centrum PRONATAL NORD centrum PRONATAL REPRO rodné číslo standardní operační postup pracovní postup 1.4 Související dokumentace Žádanka na punkci oocytů a embryí (součást lékařské zprávy) Výsledkové listy 1.1.01. Žádost a informovaný souhlas s léčbou neplodnosti metodou mimotělního oplodnění a souvisejícími metodami 3.03. Žádanka o zpracování spermatu 3.12. Poučení při odběru ejakulátu 3.25. Poučení o zásadách zisku spermií mimo Sanatorium PRONATAL 1-SOP-Pmg-02 Punkce oocytů 4-SOP-Pmg-06 Hodnocení oocytů 4-SOP-Pmg-08 Hodnocení embryí v průběhu in vitro kultivace 4-SOP-Pmg-14 Hodnocení ejakulátu dle manuálu WHO 6-SOP-Pmg-01 Zisk ejakulátu OS-06-Pmg Vedení zdravotnické dokumentace a ochrana dat OS-07-Pmg Nakládání s odpady

Strana 8 (celkem 24) 2 Identifikace laboratoře a důležité údaje Název organizace Identifikační údaje Statutární zástupci organizace PRONATAL, společnost s ručením omezeným IČ: 61250813 DIČ: CZ61250813 MUDr. Vladimír Sobotka MUDr. Tonko Mardešić,CSc. Adresa Na Dlouhé mezi 4/12, 147 00 Praha 4 Kontaktní údaje Název pracoviště +420-261711 606, www.pronatal.cz IVF laboratoř Adresa Na Dlouhé mezi 4/12, Praha 4 Telefon laboratoř +420-261711606 Okruh působnosti laboratoře Předmět činnosti Odborný vedoucí laboratoře Zástupce odborné vedoucí laboratoře Vedoucí laborantka Odborný garant Manažer kvality E-mail Webové stránky Pro PRONATAL, společnost s ručením omezeným Provádění vyšetření biologického materiálu v oblasti IVF MVDr. L. Jelínková, CSc., jelinkova@pronatal.cz MUDr. Š. Vilímová, vilimova@pronatal.cz M. Chybová Doc. MUDr. T. Mardešić, CSc., MUDr. V. Sobotka Ing. Radim Frolík frolik@pronatal.cz www.pronatal.cz, 2.1 Základní informace o laboratoři IVF laboratoř je pracoviště Laboratoří Sanatoria PRONATAL, které jsou součástí společnosti PRONATAL, společnost s ručením omezeným. Zajišťuje laboratorní služby pro gynekologickou a urologickou ambulanci SP.

Strana 9 (celkem 24) Vyšetření jsou prováděna pro pojištěnce českých i zahraničních zdravotních pojišťoven i pro samoplátce. Laboratoř pracuje nestranně a nezávisle na mateřské organizaci co se týká výsledků vyšetření, kvality jejích služeb a správnosti vyšetření. 2.2 Úroveň a stav akreditace pracoviště Certifikace dle ISO 9001:2008 IVF laboratoř je zahrnuta do integrovaného systému managementu Pronatal medical group, který je certifikován podle normy ČSN EN ISO 9001:2009. Akreditace dle ISO 15189 Laboratoř je akreditována Českým institutem pro akreditaci, o.p.s. podle ČSN EN ISO 15189:2007. Laboratoř má zaveden systém managementu podle ČSN EN ISO 15189:2013. Povolení SÚKL IVF laboratoř je rozhodnutím SÚKLu schválenou diagnostickou laboratoří podle zákona 296/2008 Sb. a vyhlášky 422/2008 Sb. pro oblast lidských tkání a buněk. IVF laboratoř se pravidelně účastní systému externího hodnocení kvality. 2.3 Organizace laboratoře, její vnitřní členění, vybavení a personální obsazení I. Členění laboratoře IVF laboratoř Sanatoria PRONATAL je členěna na dva úseky: úsek embryologie úsek andrologie II. Prostory pracoviště Laboratoř se nachází v I. podlaží budovy na adrese Na Dlouhé mezi 4/12, 147 00 Praha 4. Ve stejné budově jsou umístěny i ordinace gynekologů, urologa a zákrokový sálek.

Strana 10 (celkem 24) 2.4 Provozní doba Provozní doba (minimální) pondělí pátek sobota, neděle příjem materiálu od 8:00 do 15:00 hodin dle medicínských požadavků od 8:00 do 15:00 hodin, podle dohody možno přizpůsobit dle potřeb klientů 2.5 Zaměření laboratoře Naše laboratoř provádí metody asistované reprodukce a s nimi související vyšetření: Akreditované: spermiogram (vyšetření spermatu) dle WHO manuálu hodnocení oocytů hodnocení embryí Neakrediované: preparace spermií pro IUI (intrauterinní inseminace) preparace gamet (oocytů a spermií) a fertilizace oocytů in vitro konvenční IVF metodou nebo mikromanipulační technikou ICSI (intracytoplasmatická injekce spermie)/picsi ( fysiologická ICSI pre selected ICSI) kultivace a příprava embryí pro transfer in utero asistovaný hatching prováděný mechanicky biopsie blastomer a trofoektodermu mechanicky prováděná v rámci preimplantačního screeningu aneuploidií, preimplantační diagnostiky chromosomálních strukturálních aberací a monogenních chorob kryokonzervace embryí, gamet (oocytů, spermií) a testikulární tkáně 2.6 Přehled nabízených vyšetření Hodnocení spermií Hodnocení oocytů Hodnocení embryí

Strana 11 (celkem 24) 2.7 Informace o poskytovaných vyšetřeních 2.7.1 Vyšetření v embryologické laboratoři 2.7.1.1 Hodnocení oocytů a embryí Hodnocení oocytů a embryí je nedílnou součástí metodiky zajišťující léčbu sterility pomocí in vitro fertilizace. Hodnocení oocytů je prováděno dle 4-SOP-Pmg - 06 Hodnocení oocytů. K získání oocytů je nezbytný invazivní výkon, kterým je punkce (odběr) oocytů vaginální, výjimenčně také abdominální, cestou po předchozí hormonální stimulaci pacientky. Punkce oocytů je prováděna na základě indikace lékaře gynekologa. Místem pro odběr oocytů je zákrokový sálek SP, který bezprostředně sousedí s IVF laboratoří. Po předání folikulární tekutiny s oocyty do IVF laboratoře, následuje jejich separace z folikulární tekutiny a hodnocení pod stereomikroskopem. Hodnocení oocytů zahrnuje hodnocení COCs (kumulo-oocytárních komplexů) podle charakteru kumulární masy, hodnocení zralosti a morfologických znaků oocytů. Oocyty jsou po krátké době tzv. preinkubace (2-6 hodin) fertilizovány metodou konvenční in vitro fertilizace (použity jsou celé COCs) nebo mikromanipulační metodou ICSI/PICSI. Úspěšnost celého procesu in vitro fertilizace je mj. závislá na dodržení standardních podmínek při vyhledávání COCs ve folikulární tekutině, denudaci oocytů a hodnocení zralosti a morfologických znaků oocytů; tato činnost je prováděna v laminárním boxu (třída čistoty A) při teplotě 36-37 C. V termínu hodnocení embryí je obsaženo hodnocení fertilizace oocytů 16 20 hod. po jejich inseminaci, během další kultivace (2 5, resp. 6 dní) hodnocení pravidelnosti dělení buněk, velikosti a počtu blastomer, počtu buněčných jader, podílu buněčných fragmentů, u stadia blastocysty velikosti blastocelu, hodnocení ICM a trofoektodermu, příp. fysiologického hatchingu. Hodnocení je prováděno pod stereomikroskopem a invertovaným mikroskopem, v laminárním boxu (třída čistoty A) při teplotě 36-37 C. Hodnocení embryí je prováděno dle 4-SOP-Pmg-08 Hodnocení embryí v průběhu in vitro kultivace. Indikace k vyšetření: 1. léčba neplodnosti metodou mimotělního oplodnění 2.7.2 Vyšetření v andrologické laboratoři 2.7.2.1 Hodnocení spermiogramu Hodnocení ejakulátu je základní vyšetření plodnosti muže. Hodnocení spermií je prováděno dle 4-SOP-Pmg-14 Hodnocení ejakulátu dle manuálu WHO. Toto vyšetření je indikováno při podezření na infertilitu či subfertilitu u muže. Výsledkem vyšetření ejakulátu je spermiogram. Zhodnocením jednotlivých parametrů spermiogramu je možné stanovit diagnózu. Hranice normy u jednotlivých parametrů SPG jsou definovány v Manuálu

Strana 12 (celkem 24) Světové zdravotnické organizace WHO pro vyšetření a zpracování lidského spermatu. Normální hodnoty spermiogramu byly stanoveny na základě rozsáhlého klinického výzkumu, kdy spodní hranice normy byla určena podle nejnižší hodnoty daného parametru u mužů, kteří za 12 měsíců pravidelného nechráněného styku dosáhli gravidity u partnerky. Stanovení normálních hodnot spermiogramu umožňuje standardizaci vyšetření ejakulátu a srovnatelnost výsledků v mezinárodním měřítku. Pro standardizaci výsledků je nutné dodržovat určené podmínky způsobu odběru ejakulátu, zejména dobu pohlavní abstinence. Indikace k vyšetření: 1. k základnímu vyšetření - spermiogram 2. pro kryokonzervaci ejakulátu 3. pro další použití: IUI mimotělní oplození formou IVF/ICSI/PICSI 4. pro darování spermatu 3 Manuál pro odběry primárních vzorků V této kapitole jsou popsány správné způsoby odběru a identifikace primárních vzorků biologického materiálu. Obsažené informace jsou důležité nejen pro pracovníky laboratoře, ale zejména pro odesílající lékaře gynekology, urology a personál zodpovědný za odběry a označení primárních vzorků a manipulaci se vzorky. Správný způsob odběru primárních vzorků a správná manipulace s nimi do doby převzetí v IVF laboratoři jsou důležité pro správný výsledek vyšetření. Každý primární vzorek (nádobka či zkumavka s biologickým materiálem) musí být jednoznačně identifikován a do laboratoře musí být dodán s nalepeným identifikačním štítkem a s vyplněnou žádankou o vyšetření. 3.1 Identifikace primárního vzorku Vzorky biologického materiálu bez řádné identifikace se v laboratoři nesmí vyskytovat. Každý vzorek biologického materiálu musí být označen tak, aby byla zajištěna jednoznačná identifikace a nezaměnitelnost vzorku. Pracovník provádějící odběr vzorku nalepí na odběrovou nádobu identifikační štítek s těmito údaji: jméno a příjmení pacienta rodné číslo (číslo pojištěnce), datum narození nebo identifikační číslo pacienta vygenerované v IVF centru (u nepojištěných cizinců samoplátců) Za jednoznačné označení vzorku odpovídá pracovník provádějící odběr biologického materiálu.

Strana 13 (celkem 24) 3.2 Žádanka pro laboratorní vyšetření 3.2.1 Žádanka pro hodnocení spermiogramu Pracovník provádějící odběr primárního vzorku zapisuje na žádanku: jméno a příjmení pacienta rodné číslo (číslo pojištěnce), datum narození nebo identifikační číslo pacienta vygenerované v IVF centru (u nepojištěných cizinců samoplátců) kód zdravotní pojišťovny pacienta titul, jméno a příjmení, odbornost a identifikační číslo lékaře požadujícího vyšetření (IČP); vždy je nutné razítko a podpis lékaře požadované vyšetření datum odběru základní diagnózu dle MKN-10 odpovídající klinické údaje o pacientovi datum a čas odběru primárního vzorku (pokud jsou dostupné a jsou podstatné pro péči pacienta) datum a čas přijetí vzorku laboratoří, pokud to je účelné datum vystavení žádanky jako nepovinný údaj je možno uvést bydliště či telefonní číslo pacienta Za správnost vyplnění žádanky zodpovídá pracovník pověřený lékařem indikujícím vyšetření. Lékař svým podpisem potvrzuje správnost údajů na žádance. Veškeré údaje musí být vyplněny čitelně. Údaje psané rukou musí být vždy čitelné a požadavky jednoznačně formulované. 3.2.2 Žádanka pro hodnocení oocytů Pro hodnocení oocytů není vypisována žádanka. Podklady pro provedení hodnocení vyplývají z plánování punkcí oocytů a z dokumentace o pacientce, ketré jsou dostupné pracovníkům laboratoře. 3.2.3 Žádanka pro morfologické hodnocení embyí Pro morfologické hodnocení ebryí není vypisována žádanka. Činnost hodnocení je nedílnou součástí procesu IVF a jeho provedení vyplývá z popisu procesu. Záznamy o provdení hodnocení jsou součástí dokumentace o pacientce. 3.3 Informovaný souhlas Informovaný souhlas vyšetřované osoby s vyšetřením je součástí lékařské dokumentace pacienta a je uložen v dokumentaci pacienta. Bez lékařské indikace není možné přijmout vzorek do laboratoře a provést žádné vyšetření. Indikující lékař je zodpovědný za správné informování pacienta před vyšetřením. Před odběrem oocytů je nezbytný písemný souhlas: 1.1.01. Žádost a informovaný souhlas s léčbou neplodnosti metodou mimotělního oplodnění a souvisejícími metodami.

Strana 14 (celkem 24) Před vyšetřením ejakulátu je nutná písemná žádost pacienta: 3.03. Žádanka o zpracování spermatu 3.4 Používaný odběrový systém Primární vzorky biologického materiálu (oocyty, embrya, ejakulát) musí být do laboratoře dodávány ve sterilních jednorázových odběrových nádobkách nebo zkumavkách. Odběrové nádoby na ejakulát: Odběrové kelímky, výrobce: F.L.Medical, dodavatel: firma Dispolab, katalogové číslo: 25036 1080 Zkumavky na odběr oocytů: Odběrové zkumavky 14 ml, výrobce: Greiner Bio One, dodavatel: Dialab, katalogová čísla: 191 170, 191 160 Kultivační misky pro kultivaci embryí: Misky 4 well NUNC, výrobce: Nunc A/S, dodavatel: fa Schoeller Pharma, katalogové číslo: 144444 Center Well Dish, výrobce: NUNC A/S, dodavatel: firma Schoeller Pharma, katalogové číslo: 150260 Petriho misky NUNC, výrobce: NUNC A/S, dodavatel: firma Schoeller Pharma, katalogové číslo: 150270 PRIMOVISION misky, výrobce: Cryo-Innovation Ltd., dodavatel: fa Digital Pro, katalogové číslo: TLD09-01, TLD09-02, TLD16-01, TLD16-02 3.5 Příprava pacienta před vyšetřením Odběr oocytů Před odběrem oocytů je nutná příprava pacientky ošetřujícím gynekologem (hormonální stimulace, event. spontánní cyklus). Ovariální stimulace je nedílnou součástí IVF a svým vlivem na kvalitu získaných oocytů bezprostředně ovlivňuje výsledky celé léčby. Volba optimálního stimulačního protokolu při léčbě metodou mimotělního oplodnění má za cíl získání optimálního počtu oocytů a optimální kvality (zralosti) oocytů. Závěrečné zrání folikulů je navozeno aplikací hcg; odběr oocytů je plánován za 34-36 hodin po aplikaci hcg. Odběr ejakulátu Před odběrem ejakulátu a jeho vyšetřením v andrologické laboratoři je nezbytné, aby byla dodržena sexuální abstinence (doba od poslední ejakulace by měla být v rozmezí 2 7 dnů). Pacient musí být řádně ústně i písemně poučen o zásadách odběru ejakulátu. Odběr musí být proveden dle hygienických zásad, uvedených na Poučení při odběru ejakulátu v odběrové místnosti.

Strana 15 (celkem 24) 3.6 Postup pro odběr vzorku 3.6.1 Odběr oocytů Oocyty se získávají v naprosté většině případů transvaginální punkcí (přes poševní stěnu) pod kontrolou vaginální ultrazvukové sondy viz 1-SOP-Pmg-02 Punkce oocytů. Tento výkon se provádí ambulantně v krátké anestezii, výjimečně v analgosedaci. Bolestivost výkonu je však minimální a na výslovné přání pacientky jej lze provádět i bez anestezie či pouze v místním znecitlivění. Po odběru je nutné neustále udržovat zkumavky s folikulární tekutinou v teplotním rozmezí 36-37 C (v termobloku umístěném na vyhřívané plotýnce). 3.6.2 Hlavní chyby při odběru oocytů: neoznačená nebo nedostatečně označená zkumavka nezbytnou součástí procesu je jednoznačné nezaměnitelné označení zkumavek s folikulární tekutinou (s COCs, resp. oocyty), které jsou předávány v termobloku ze zákrokového sálku (jméno a příjmení pacientky, rodné číslo pacientky) tak, aby v žádném případě nemohlo dojít k záměně. teplota pokud nebylo dodrženo teplotní rozmezí, při kterém musí být s folikulární tekutinou s COCs, resp. oocyty zacházeno, je proveden záznam v embryologickém protokolu. Odebrané řádně označené vzorky s folikulární tekutinou je nutno přijmout v každém případě (jsouli splněny předepsané podmínky před přijetím pacientky k OPU na zákrokový sál např. osobní doklady k identifikaci pacientky); není možné je odmítnout (jedná se součást léčby). nepodepsaný informovaný souhlas 3.6.3 Odběr ejakulátu Zisk ejakulátu je standardně prováděn masturbací, v odběrové místnosti v blízkosti andrologické laboratoře, aby se zabránilo teplotním výkyvům vzorku a aby byl minimalizován čas mezi odběrem a zpracováním vzorku viz 6-SOP-Pmg-01 Zisk ejakulátu. Vzorek má být odebírán po standardní době pohlavní abstinence, minimálně 2 a maximálně 7 dnů, do sterilní, jednoznačně označené nádobky se širokým hrdlem. Nádobka je označena jménem, příjmením, rodným číslem pacienta. Odběr ejakulátu v odběrové místnosti TZ Odběr ejakulátu je prováděn v odběrové místnosti tkáňového zařízení k tomu určené (v těsné blízkosti andrologické laboratoře) a do označené plastové nádobky (nádobku vydává pracovník andrologické laboratoře). V odběrové místnosti musí být písemné instrukce pro odběr ejakulátu, jak hygienické aspekty, tak poučení o důležitost kompletnosti vzorku (všechny frakce ejakulátu). Po získání vzorku předá pacient uzavřenou nádobku s ejakulátem osobně do andrologické laboratoře, laborantka zkontroluje předání (kontrola identifikačních údajů na žádance s údaji na odběrové nádobce). Odběr mimo TZ

Strana 16 (celkem 24) Odběr mimo TZ je možný až po dvou prokazatelně neúspěšných pokusech v odběrové místnosti tkáňového zařízení. V tom případě pacient obdrží Poučení o zásadách zisku spermií mimo Sanatorium Pronatal; toto Poučení potvrdí jak lékař, tak pacient svým podpisem. Pacient obdrží označenou sterilní nádobku na vzorek. Ejakulát musí být dopraven do laboratoře pouze osobně, do hodiny po odběru, při teplotě 20 C až 37 C. Při předání vzorku potvrdí pacient původ vzorku za použití formuláře Prohlášení při předání ejakulátu. Výjimečně lze upustit od pokusu získat vzorek v odběrové místnosti, např. u onkologických pacientů, hospitalizovaných v jiném zařízení. V tom případě převezme vzorek od pacienta pracovník TZ za použití předepsaných formulářů. 3.6.4 Hlavní chyby při odběru ejakulátu: během transportu nedodržení požadované teploty vzorku a doby transportu nevyhovující délka sexuální abstinence akutní onemocnění vyšetřovaného muže, antibiotická léčba odběr do nestandardních nádobek (např. lékovky ) nepopsaná nebo nedostatečně popsaná zkumavka nepodepsaný informovaný souhlas Vyšetření lze provést ve všech výše uvedených případech, avšak je třeba pacienta, event. indikujícího lékaře upozornit, že výsledek není příliš validní a je jej třeba za standardních podmínek zopakovat. 3.7 Operace se vzorkem, stabilita, převzetí laboratoří Odběr primárních vzorků probíhá: oocyty na zákrokovém sálku. Ze zákrokového sálku je okénkem do IVF laboratoře předán přenosný termoblok se zkumavkami obsahujícími punktovanou folikulární tekutinu. Všechny zkumavky v termobloku jsou označeny štítkem se jménem, příjmením, rodným číslem pacientky. Každý termoblok obsahuje vždy punktát pouze jedné pacientky. V embryologické laboratoři jsou termobloky umístěny na vyhřívanou plochu laminárního boxu. ejakulát v odběrové místnosti tkáňového zařízení k tomu určené (v těsné blízkosti andrologické laboratoře), ve výjimečných (indikovaných) případech i mimo TZ za splnění podmínek uvedených v Poučení (viz bod 3.6.2). Po získání vzorku předá pacient uzavřenou nádobku s ejakulátem osobně do andrologické laboratoře, laborantka zkontroluje předání. Ejakulát ponechán v odběrové nádobce po dobu 20 (max. 60 minut) při laboratorní teplotě (18-28 C) za účelem zkapalnění viz SOP Zisk ejakulátu. embrya - nelze hovořit o odběru materiálu v pravém slova smyslu; embrya vznikají na základě spojení gamet (oocytů a spermií), které získáváme při odběru folikulární tekutiny a ejakulátu. Hodnocení morfologických znaků a vývoje embryí je prováděno v laminárním boxu (třída čistoty A) při teplotě 36-37 C (vyhřívaná plotýnka) co nejkratší možnou dobu; kultivace embryí probíhá v CO2/O2 inkubátoru. Pokud zjistíme, že nebylo dodrženo teplotní rozmezí, při kterém musí být s embryi zacházeno, provedeme záznam v embryologickém protokolu.

Strana 17 (celkem 24) 3.8 Základní informace k bezpečnosti při práci se vzorky Obecné zásady bezpečnosti práce s biologickým materiálem jsou obsaženy ve Vyhlášce Ministerstva zdravotnictví č. 306/2012 sb o podmínkách předcházení vzniku a šíření infekčních onemocnění a o hygienických požadavcích na provoz zdravotnických zařízení a ústavů sociální péče. Na základě této vyhlášky byly stanoveny tyto zásady pro bezpečnost práce s biologickým materiálem: každý vzorek (veškerý biologický materiál) je nutno považovat za potenciálně infekční; při zacházení s ním musí být dodržovány všechny zásady správné laboratorní praxe. žádanky ani vnější strana zkumavky nesmí být kontaminovány biologickým materiálem. vzorky jsou umístěny do uzavíratelných zkumavek či jiných nádob tak, aby nemohlo dojít k rozlití, potřísnění biologickým materiálem nebo jinému znehodnocení vzorku. Vyšetření dárců buněk na sexuálně přenosné choroby (hepatitis B a C, HIV 1,2 a syfilis dle přílohy č. 4 vyhlášky 422/2008 Sb.), a to v době odběru oocytů a spermií. 3.9 Informace k předání vzorků Nádobky s buňkami musí být jednoznačně označeny, aby nedošlo k záměně. Identifikační údaje uvedené na primárním vzorku se musí shodovat s údaji na žádance. Vzorek musí být jednoznačně identifikován nejméně následujícími údaji: jméno a příjmení vyšetřované osoby číslo pojištěnce (rodné číslo), resp. rok narození datum odběru; event. čas předání vzorku do laboratoře, je-li to účelné Laboratoř vzorku vede záznamy o přijetí vzorků v knize odběru vzorků a v databázích programu zdravotnické dokumentace SmartMEDIX (v této databázi je možno vytisknout štítky s identifikačními údaji pacienta) a Meditex. Ke každé šarži buněk musí být přiložen protokol o získání buněk, provedených vyšetřeních u původců buněk a o zpracování buněk. Ke zpracování nejsou přijímány vzorky, jejichž původci jsou pozitivní na HIV. V případě HCV jsou přijímáni pouze pacienti, u kterých se jedná o přeléčenou infekci, s výsledky testu PCR neg.

Strana 18 (celkem 24) 4 Preanalytické procesy v laboratoři 4.1 Příjem vzorků v IVF laboratoři 4.1.1 Identifikace pacienta na štítku zkumavky Všichni pracovníci IVF laboratoře jsou zaškoleni pro příjem vzorků. Přijímající pracovník provádí kontrolu neporušenosti zkumavek a nádobek s primárními vzorky, zda jsou zřetelně, čitelně a úplně vyplněny identifikační štítky a zda souhlasí údaje na štítkách s údaji na žádankách. Do databáze se zapisuje: jméno a příjmení pacienta rodné číslo (číslo pojištěnce, datum narození) pacienta jméno odesílajícího lékaře požadované vyšetření 4.2 Kriteria pro přijetí nebo odmítnutí vadných (nestandardních) primárních vzorků Chyby zjištěné při příjmu vzorků: 1/ chyby identifikace a/ chybějící a nedohledatelná identifikace při CHYBĚJÍCÍ A NEDOHLEDATELNÉ IDENTIFIKACI na zkumavce vzorek nelze přijmout b/ neúplná identifikace NEDOSTATEČNĚ OZNAČENÝ VZOREK - částečně nesprávné jméno nebo RČ, případně chybí jedna část identifikace na štítku a na žádance je kompletní identifikace pacienta, ale vzorek nelze zaměnit s jiným vzorkem v takovém případě vzorek lze přijmout; současně je třeba provést záznam o neshodě v dokumentaci pacienta 2/ chyby na žádance Pokud je vzorek jednoznačně identifikovatelný, ale chybí pouze některé údaje na žádance, jsou po ústní nebo telefonické domluvě s lékařem požadujícím vyšetření nebo ze SmartMEDIXU doplněny chybějící údaje. 3/ chyby při odběru Při zjištění chyb při odběru vzorku (např. nesprávná zkumavka, málo materiálu) je tato informace zapsána na žádanku a přijímající pracovník rozhodne, zda je možné vzorek dále zpracovat příp. s jakým omezením. Pokud nelze některá vyšetření provést, je o tom žadatel informován a důvod je zaznamenán do výsledkového listu. 4/ postup při porušení celistvosti odběrových zkumavek Zjistí-li přijímající pracovník, že je odběrová zkumavka poškozena, vzorek se zpracuje. Tato skutečnost je zaznamenána do databáze SmartMEDIX k příslušnému vzorku, do písemné

Strana 19 (celkem 24) dokumentace o vzorku a do Knihy neshod. V případě jakýchkoliv nejasností ve výsledku vyšetření je požadován nový odběr, pokud to typ vzorku dovolí. 5/ nekvalitní materiál Všechny informace o odchylkách v kvalitě biologického materiálu jsou zaznamenány v příslušných protokolech výsledkovém listu. 4.3 Manipulace se vzorky a skladování materiálu před vyšetřením Odebraný biologický materiál (folikulární tekutina, ejakulát) je vyšetřován bezprostředně po odběru a dodání do laboratoře; manipulace s embryi probíhá za předepsaných podmínek během jejich kultivace. 5 Fáze po vyšetření 5.1 Likvidace biologického materiálu po vyšetření Morfologicky abnormální, nezralé a neoplozené oocyty, stejně jako embrya nevhodná k přenosu in utero a kryokonzervaci a dále nepoužitelný ejakulát (po zhodnocení parametrů, po fertilizaci) jsou - stejně jako materiály, které přišly do kontaktu s biologickými vzorky - hodnoceny a likvidovány jako nebezpečný odpad a tudíž umístěny do koše na nebezpečný odpad dle OS-07-Nakládání s odpady. Jehly a skleněné kapiláry jsou vyhozeny do kontejnerů určených pro ostrý nebezpečný odpad. 6 Vydávání výsledků a komunikace s laboratoří 6.1 Forma vydávaných výsledků Kontrola výsledků Hodnocení oocytů a embryí provádí VŠ pracovník embryologické laboratoře, který je k hodnocení zaškolen. Každý výsledek je kontrolován odpovědnou osobou (vedoucím laboratoře či jeho zástupcem). Hodnocení spermií provádí laborantka, která je k hodnocení zaškolena. Každý výsledek je kontrolován vedoucí laborantkou. Veškeré operace prováděné během vyšetření jsou dohledatelné a autorizované podpisem. Vydávání výsledků IVF laboratoř vydává výsledky vyšetření vždy v písemné formě, zároveň jsou zaneseny do dekursu pacienta/ky. Předávání kopií výsledků pacientům se řídí Směrnicí OS-06-Pmg-Vedení zdravotnické dokumentace a ochrana dat.

Strana 20 (celkem 24) Hodnocení oocytů a embryí je součástí zprávy vydávaně ošetřujícím gynekologem po ovariální punkci, resp. po přenosu embryí in utero. V případě hodnocení parametrů ejakulátu je pacientovi předána kopie výsledku na vyžádání (3.01), pouze osobně, na základě předložení dokladu totožnosti s fotografií. Výsledky vyšetření jsou sděleny partnerce pacienta pouze po jeho písemném informovaném souhlase. Pacientům interpretuje výsledky vždy pověřený pracovník TZ s odpovídající odborností. 6.1.1 Telefonické sdělování výsledků Telefonicky se výsledky hodnocení oocytů, embryí či spermií nesdělují. Výjimečně v nutných případech sdělíme pacientům nezbytné údaje, po ověření totožnosti pomocí předem domluveného hesla, zaznamenaného v databázi SMARTMedix. 6.1.2 Komunikace s lékaři indikujícími vyšetření S lékaři v rámci TZ, indikujícími vyšetření, komunikují pracovníci laboratoře denně na ranním hlášení nebo v průběhu dne osobně či telefonicky. Odesílajícím externím lékařům (týká se vyšetření ejakulátu) je odeslán výsledek vyšetření v písemné podobě prostřednictvím vyšetřovaného pacienta (výsledkový list předán proti podpisu pacienta). 6.2 Výsledkový list Výsledkový list v písemné podobě obsahuje: identifikaci pacienta (jméno a RČ), příp. číslo vzorku, diagnózu identifikaci laboratoře, která výsledek vydala identifikaci vyšetření identifikaci požadujícího subjektu (indikujícího vyšetření) datum odběru vzorku podpis osoby, která vyšetření provádí výsledek vyšetření a jednotky příslušné referenční intervaly (pokud jsou určeny) a hodnocení výsledků, je-li účelné jméno a podpis osoby osoby, která výsledek propustila příp. interpretaci výsledků a jiné poznámky (např. kvalita primárního vzorku, která mohla nežádoucím způsobem ovlivnit výsledek vyšetření), razítko zařízení. 6.3 Vydávání výsledků přímo pacientům Výsledkový list s vlastními výsledky hodnocení oocytů a embryí je součástí závěrečné lékařské zprávy, je předáván automaticky pacientce po ukončení IVF cyklu. Lékařskou zprávu předává ošetřující lékař. Výsledkový list hodnocení spermiogramu je předáván na vlastní žádost pacienta. K předání výsledku vyšetření spermiogramu je kompetentní vedoucí IVF laboratoře nebo jeho zástupce a vedoucí laborantka andrologické laboratoře.

Strana 21 (celkem 24) 6.4 Úhrada vyšetření samoplátci a cizinci Úhrady vyšetření samoplátců a cizinců se řídí vnitřními předpisy společnosti PRONATAL Medical group a platným ceníkem. 6.5 Změny výsledků a nálezů Oprava identifikace pacienta Opravou identifikace pacienta se rozumí oprava rodného čísla a změna nebo významná oprava příjmení a jména pacientů, příp. způsobu pojištění. Pracovník laboratoře opraví data v databázi předepsaným způsobem, vedoucí laboratoře opravu zkontroluje, propustí výsledek, vytiskne nový výsledkový list a odešle s případným komentářem indikujícímu lékaři. Při opravě pojišťovny nebo drobných opravách jména se na oddělení nezasílá nový výsledkový list, oprava se zaznamená v laboratoři v dokumentaci pacienta. Oprava výsledkové části Opravou výsledkové části se rozumí oprava (změna údajů) textové informace u odeslaných výsledkových listů. Pokud některý pracovník zjistí, že byl výsledek špatně stanoven a odeslán, informuje vedoucího úseku. Ten rozhodne, jak se výsledek opraví. Co nejdříve se domluví s odesílajícím lékařem na výměně původního výsledkového listu za správný. Laboratoř eviduje opravu výsledkové části v programu zdravotnické dokumentace SmartMEDIX. Změna nálezu musí být zaznamenaná v dokumentaci pacienta s datem a jménem osoby odpovědné za tuto změnu. V laboratoři je uložen původní výsledek a nový výsledkový list s vysvětlením, jaký byl důvod změny nálezu. 6.6 Doby trvání jednotlivých vyšetření hodnocení kvality oocytů je prováděno bezprostředně po jejich odběru hodnocení embryí je prováděno denně (po celou dobu jejich kultivace) a je k dispozici před embryotransferem, resp. kryokonzervací hodnocení ejakulátu je prováděno po jejich zkapalnění cca do hodiny po odběru; výsledek vyšetření je k dispozici cca za 2 hodiny po odběru 6.7 Konzultační činnost laboratoře Upozornění a komentáře k výsledkům ovlivňující interpretaci jsou uvedeny v textové části výsledkového listu. Individuální konzultace jsou umožněny kontaktem s odbornými pracovníky laboratoře. Konzultaci za úsek embryologie provádí vedoucí laboratoře, jeho zástupce, nebo

Strana 22 (celkem 24) kvalifikovaný embryolog. Konzultaci za úsek andrologie je kompetentní provádět vedoucí laborantka úseku andrologie. 6.8 Způsob řešení stížností Postup při převzetí a řešení stížnosti klientů je popsán ve vnitřních předpisech Pmg. Veškerá opatření a aktivity v rámci kontroly kvality v Pmg směřují k tomu, aby situace směřující ke vzniku stížnosti vůbec nevznikaly. Každý pracovník je povinen převzít stížnost. Málo závažné stížnosti vyřeší na místě a informuje vedoucí laboratoře. Závažnější stížnosti předá k řešení vedoucímu laboratoře. Pro registraci stížností slouží příslušné formuláře. 7 Přílohy Nejsou

Strana 23 (celkem 24) ROZDĚLOVNÍK Řízené dokumentace číslo: LP-SP-IVF-01 Číslo Datum Funkce a jméno převzal a byl seznámen Podpis Orig. 1.4.2015 Ing. R. Frolík manažer kvality Laboratoří SP 1 1.4.2015 MVDr.L.Jelínková, CSc. vedoucí laboratoře IVF 2 1.4.2015 www stránky (elektronicky) 3 1.4.2015 P2 MUDr.T.Valenta (elektronicky) 4 1.4.2015 P3 M.Lukešová (elektronicky) 5 1.4.2015 P4 D.Skácelová, Dis. (elektronicky) 6 1.4.2015 P5 Mgr.A.Dvořáková (elektronicky) 7 1.4.2015 P6 D.Plašilová (elektronicky) 8 9 10

Strana 24 (celkem 24) ZÁZNAM O SEZNÁMENÍ Řízené dokumentace číslo: LP-SP-IVF-01 Číslo Datum Funkce a jméno byl seznámen Podpis 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20