SACHARIDY aldehydická skupina Schiffovo, Tollensovo nebo Fehlingovo činidlo, pokud nejde o cyklickou formu reakce cyklických forem se Schiffovým činidlem cyklická forma nereaguje, s Tollensovým a Fehlingovým až po zahřátí při důkazu sacharidů ve vzorku postupujeme takto : 1) obsahuje sacharid? Molischova nebo thymolová reakce 2) mono a oligo nebo polysacharid? nitrochromová reakce pozitivní = mono, oligo 3) polysacharidy lze rozlišit roztokem jódu škrob poskytuje charakteristické zbarvení, celulóza ne 4) mono a oligosacharidy lze rozlišit na redukující a neredukující Tollensovým nebo Fehlingovým činidlem 5) redukující sacharidy lze rozlišit na aldosy a ketosy Selivanovou reakcí Úkol č. 1: Kvantitativní důkazy sacharidů A) Molischovou reakcí B) Nitrochromovou reakcí C) Fehlingovou reakcí D) Selivanovou reakcí E) Reakce s jodem F) Reakce s chlórzinkjódem Molischovo činidlo (10% roztok 1-naftolu v ethanolu) HNO 3 5% roztok chromanu draselného 10%H 2 SO 4 Fehlingův roztok 10%HCl, Selivanovo činidlo (50 ml dest. vody a 0,05 g resorcinolu) roztok jódu roztok glukosy roztok sacharosy roztok maltosy roztok škrobu celulosa chlórzinkjód=maeckerovo činidlo (ve 14 ml destilované vody rozpustíme 30 g ZnCl 2, 5 g KI a 1 g I 2 ). jablko pomeranč med vata pudinkový prášek. filtrační papír struhadlo
kádinky pipeta stojan stojánek na zkumavky kahan Molischova reakce 2ml sacharidu + 3 kapky Molischova činidla převrstvit 2 ml kyseliny sírové (pokud vzorek obsahuje sacharid, na rozhraní vzniká fialový proužek) Nitrochromová reakce 2ml roztoku sacharidu, 3 ml roztoku kyseliny dusičné, 5 kapek chromanu draselného (obsahuje-li mono-, oligosacharid vzniká modré zbarvení) Fehlingovou reakcí 1ml roztoku sacharidu, 2 ml Fehlingova roztoku, zahřívat 3 min ve vodní lázni (obsahuje - li neredukující sacharid vzniká hnědočervená sraženina Cu 2 O) Selivanovou reakcí 1 ml roztoku sacharidu + 0,5 ml HCl + 2 ml Selivanova činidla zahřívat a měřit čas, kdy vznikne červené zbarvení Reakce s jodem 1ml roztoku sacharidu, přikapávat 0,5 ml roztoku jódu (obsahuje-li škrob, vzniká modrofialové zbarvení) Reakce s chlórzinkjódem K celulóze přikápneme chlórzinkjód (vzniká hnědé zbarvení) Tabulky: Reakce glukosa sacharosa maltosa škrob celulosa A)Molischova B)Nitrochromova C)Selivanova D)Fehlingova E)s jodem F)s chlorzinkjodem Reakce jablko pomeranč med pudink vata A)Molischova B)Nitrochromova C)Selivanova D)Fehlingova E)s jodem F)s chlorzinkjodem
Úkol 2: Důkaz škrobu škrobový maz roztok jodu v KI (Lugolův roztok) jodová tinktura zředěná HCl (10% H 2 SO 4 ), 10 % roztok NaOH pudinkový prášek (Solamyl), držák na zkumavky kahan kádinky tyčinka Princip: Škrob jako zásobní látka rostlin je makromolekulární látka (polysacharid), skládá se z vláken amylopektinu a amylosy. Má odlišné vlastnosti než předchozí jednoduché sacharidy. Ve vodě se rozpouští málo, s jodem dává modrofialové zbarvení, které po zahřátí mizí a ochlazením se obnovuje. Reakce škrobového mazu s Fehlingovým činidlem je po zahřátí negativní, pokud však škrobový maz okyselíme kyselinou a zahřejeme, necháme vychladnout a opatrně zneutralizujeme roztokem hydroxidu sodného, dává Fehlingova zkouška pozitivní reakci. Připravte si škrobový maz: do kádinky nalijte 100 ml destilované vody a zahřejte ji k varu. V malém množství studené vody rozmíchejte 1 g škrobu a vlijte jej do horké vody v kádince. Za stálého míchání asi minutu povařte. Po vychladnutí roztok přefiltrujte. Ke 2 ml škrobového mazu ve zkumavce přidejte několik kapek roztoku jodu nebo jodové tinktury. Protřepejte a pozorujte změnu barvy. Poté zkumavku mírně zahřejte do odbarvení a ochlaďte studenou vodou. Pozorujte barevné změny. Na dno zkumavky nasypte půl lžičky Solamylu (pudinku) a přilijte vodu. Zkumavk protřepejte a přikápněte 1 až 2 kapky Lugolova roztoku nebo jodové tinktury a pozorujte. Poté zkumavku zahřejte a pozorujte změny. K 2 ml roztoku škrobového mazu přidejte asi 4 ml Fehlingova činidla. Dokážete, že neobsahuje volnou glukosu. Pak přikápněte několik kapek (1 ml) HCl nebo H 2 SO 4 zneutralizujte ji roztokem NaOH (2 ml) a mírně povařte. Úkol 3: Enzymatická hydrolýza škrobu vodní lázeň kahan teploměr skleněná destička skleněná tyčinka 1% škrobový maz roztok slin (vypláchněte ústa vodou a vyplivněte do kádinky) Lugolův roztok Fehlingův roztok Do první zkumavky dejte 5 cm 3 škrobu a 3 cm 3 vody, do druhé zkumavky opět 5 cm 3 škrobu a
3 cm 3 roztoku slin. Obě zkumavky dejte do vodní lázně 37 o C teplé. Na skleněnou desku naneste 2 řady oddělených kapek Lugolova roztoku. Skleněnou tyčinkou naberte po pár kapek obsahu obou zkumavek a ve 4 minutových intervalech pozorujte změnu zabarvení (tyčinku musíte před dalším použití vždy opláchnout). Řada kapek Lugolova roztoku, do kterých tyčinkou dáváte obsah první zkumavky se nemění, druhá řada mění barvu z modré na hnědou. Pokus provádějte tak dlouho, až budou kapky ve druhé řadě trvale zabarveny hnědě. V tom případě je hydrolýza ukončena. Důkaz proveďte v obou zbytcích s Fehlingovým roztokem. Proveďte závěr. Otázka: Proč se slinami škrob hydrolyzoval? Úkol č.4: Získej škrob z brambor jemné struhadlo hustý cedník nebo řídké plátno miska sklenice talířek lžíce škrabka na brambory syrová brambora Do misky nastrouhej na jemném struhadle oloupanou syrovou bramboru. Přilej 100 150 ml studené vody, směs dobře promíchej a přefiltruj přes řídké plátno nebo přeceď přes hustý cedník. Bramborovou drť dej ještě jednou do misky, přilej 100 ml vody a směs znovu přeceď. Škrob se usadí na dně nádoby. Kapalinu opatrně slij, aby se škrob nezvířil a nevylil se také. Získaný škrob ještě několikrát propláchni studenou vodou, směs nech usadit a až klesne škrob ke dnu, kapalinu slij. Část směsi odeber na jiný talířek a nech volně odpařit vodu. Druhou část použij k následujícímu pokusu. Úkol 5: Důkaz laktosy v mléku 5% roztok kyseliny octové Fehlingův roztok zředěný roztok NaOH (c = 0, 1 mol/dm 3 ) zředěný roztok CuSO 4 (c = 0, 05 mol/dm 3 mléko mléko filtrační papír kádinky pipeta stojan stojánek na zkumavky vařič
Zředíme 5 ml mléka 5 ml vody. Povaříme a přidáme několik kapek kyseliny octové. Vznikne sraženiny, kterou přefiltrujeme. Ve filtrátu dokážeme Fehlingem (na 1ml filtrátu 2 ml Fehlingova činidla) sacharid. Zároveň proveďte se sraženinou důkaz na kasein (bílkovina). Přidáte-li k sraženině kaseinu roztok hydroxidu sodného a síranu měďnatéh, vzniká fialový biuret. Úkol 6: Důkaz sacharosy v cibuli univerzální indikátorové papírky HCl zředěná 1:1 10% Na 2 CO 3 H 2 O cibule 2 kádinky nálevka filtrační papír teploměr Kousek cibule nakrájejte na malé kousky, povařte je v kádince v malém množství vody a zfiltrujte. Potom: a) s filtrátem proveďte zkoušku na škrob Lugolovým roztokem b) k 5 cm 3 filtrátu přidejte stejné množství zředěné HCl, abyste hydrolyzovali přítomné disacharidy a zahřívejte 15 20 minut. Teplota nesmí přestoupit 80 C (při 100 C sacharosa karamelizuje), proto ji kontrolujte teploměrem. Obsah kádinky ochlaďte ponořením do studené vody a zneutralizujte přidáváním roztoku Na 2 CO 3 (ph zjistíte univerzálním indikátorovým papírkem. Fehlingovým činidlem se přesvědčíte, zda došlo k hydrolýze podle rovnice: C 12 H 22 O 11 + H 2 O -----> 2C 6 H 12 O 6 Úkol č.7: Vyrob si karamelové lízátko kovová vánoční formička nebo vykrajovací formička položená na alobalu malý hrnec kovová lžíce špejle krystalový cukr tuk (máslo) Nejdříve si připrav formu na lízátko, lehce ji vytři tukem. Do malého hrnce dej asi 3 lžíce krystalového cukru. Pomalu zahřívej a neustále míchej, až se cukr roztaví a začne pozvolna hnědnou karamelizovat. Dej pozor, ať se cukr nepřipaluje, to by bylo lízátko nahořklé. Světle hnědou taveninu rychle nalij do připravené formičky a vlož do ní špejle. Počkej, až karamel ztuhne. Rada: Tímto způsobem můžeš pro přátele připravit dárek. Nezapomeň karamelové lízátko hezky zabalit. Úkol: Pro svoji typickou barvu (jakou?) se používá karamel k přibarvování nápojů. Toto potravinářské barvivo se značí E 150. Zjisti, které nápoje jej obsahují