LABORATOŘ EXPERIMENTÁLNÍ MEDICÍNY. Marián Hajdúch. Fórum onkologů a zástupců pojišťoven

LABORATOŘ EXPERIMENTÁLNÍ MEDICÍNY Vyšet etření mutací genu KRAS u pacientů s metastatickým karcinomem kolorekta indikovaných k léčbě panitumumabem Marián Hajdúch Fórum onkologů a zástupců pojišťoven 16.5.2008

LABORATOŘ EXPERIMENTÁLNÍ MEDICÍNY HER rodina receptorů Ligandy: EF TF-α Amphiregulin Betacellulin HB-EF Epiregulin Hereguliny NR2 NR3 Hereguliny Betacellulin Doména bohatá na cystein HER1/EFR erbb1 HER2 erbb2 neu HER3 erbb3 Salomon D, Brandt R, Ciardiello F, et al. Crit Rev Oncol Hematol. 1995;19:183-232. Woodburn J. Pharmacol Ther. 1999;82:241-250. HER4 erbb4 Tyrosinkinázová doména

LABORATOŘ EXPERIMENTÁLNÍ MEDICÍNY HER/EFR inhibitory Monoklonální protilátky Inhibice signální transdukce a další mechanismy Imunitní odpověď??? trastuzumab cetuximab panitumab další cílí HER2, HER2 pozitivní karcinom prsu registrační status: schválený pro paliativní i adjuvantní léčbu indikace/klinické zkoušky: ca prsu, další tumory málo efektivní, s výjimkou dětského osteosarkomu? cílí EFR1, kolorektální rakovina, H&N registrační status: schválený pro paliativní léčbu indikace/klinické zkoušky : H&N nový standard léčby?, karcinom prsu, pankreatu, NSCLC cílí EFR1, kolorektální rakovina registrační status: schválený pro paliativní léčbu indikace/klinické zkoušky: Fáze II/III u dalších solidních nádorů

LABORATOŘ EXPERIMENTÁLNÍ MEDICÍNY Klinické a molekulární prediktory účinnosti EFR1 TK inhibitorů příklad NSCLC Klinické: 1. nekuřáci (<5 krabiček za život, nebo nekuřák po >25 let?) 2. ženy 3. asiaté 4. adenocarcinomy včetně BAL 5. pacienti s kožní toxiciou Molekulární: EFR1-TK mutace v exonech 19-21 EFR1 amplifikace EFR1 overexprese nemá prediktivní váhu!!! K-ras mutace negativní prediktor

EFR1 dráha intracelulární signalizace

KRAS dráha intracelulární signalizace

AKTIVACE KRAS PROTEINU

AKTIVACE KRAS PROTEINU - MUTACE

MUTACE KRAS V NÁDORECH

Možné mutace na kodonech 12-T & 13-C KRAS genu Kras Mutation Analysis -- Theoretical Pattern [Examples* (not all possibilities are listed)] 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 enotype A T C A T C A T C Wild Type TC T C Mutant [1] ATC A T C Mutant [2] TTC TT C Mutant [3] CTC C T C Mutant [4] CTC C T Mutant [5] TTC T T C Mutant [6] ATC A T C Mutant [7] TTC TT C

135 analyzovaných biopsií NSCLC KRAS mutace 5 mutací v kodonu 12 K-Ras 9 mutací v kodonu 12 K-Ras 1 mutace v kodonu 13 K-Ras ( 4% ) 1 mutace v kodonu 13 K-Ras (7%) Number of samples St 733 St 961 St 852 St 320 St 865 St 189 St 931 St 945 St 252 St 1026 Amount of Mutant DNA % 60% 46% 45% 32% 31% 31% 27% 17% 12% 7% Beckman capillary sequencing Codon 12 Codon 13 T- ly C- ly TT- Cys TT- Cys AT- Asp TT- Cys TT- Cys TC- Cys Codon 12 T- ly TT- Cys TT- Cys AT- Asp TT- Cys TT- Cys TT- Val TT- Cys TT- Cys TT- Cys Pyrosequencing Codon 13 C- ly TC- Cys

TECHNIKA qpcr sondy typu škorpión MUTATIONS LOD approx. 1% 1. ly12asp (T>AT) 2. ly12ala (T>CT) 3. ly12val (T>TT) 4. ly12ser (T>AT) 5. ly12arg (T>CT) 6. ly12cys (T>TT) 7. ly13asp (C>AC) Time to result Detection of low level mutations (<10%) Fragmented DNA Work Flow TheraScreen Diagnostic Kit < 3 hours Yes +++ Simple DNA Sequencing > 8 hours No + Complex

LABORATOŘ EXPERIMENTÁLNÍ MEDICÍNY Predikce účinnosti na cetuximab ene copy number for epidermal growth factor receptor (EFR) and clinical response to antiefr treatment in colorectal cancer: a cohort study. Moroni M, Veronese S, Benvenuti S, Marrapese, Sartore-Bianchi A, Di Nicolantonio F, ambacorta M, Siena S, Bardelli A. Lancet Oncol. 2005 May;6(5):279-86 8/9 pacientů s objektivní odpovědí na cetuximab vykázalo amplifikaci EFR1 genu nebo vysokou polyzomii chromozomu 7. Naproti tomu žádný z 21 pacientů bez klinické odpovědi na terapii tuto genetickou anomálii v nádoru neměl (P<0.0001). KRAS mutation status is predictive of response to cetuximab therapy in colorectal cancer. Lievre A, Bachet JB, Le Corre D, Boige V, Landi B, Emile JF, Cote JF, Tomasic, Penna C, Ducreux M, Rougier P, Penault-Llorca F, Laurent-Puig P. Cancer Res. 2006 Apr 15;66(8):3992-5. KRAS mutace byla nalezena ve 13 nádorech (43%) a byla spojena s rezistencí na cetuximab (KRAS mutace u 0% z 11 responderů versus 68.4% z 19 nonresponderů; P = 0.0003). OS je lepší u pacientů bez KRAS mutace (P = 0.016; medián 16.3 versus 6.9 měsíců). Studie rovněž potvrdila význam EFR1 amplifikace.

LABORATOŘ EXPERIMENTÁLNÍ MEDICÍNY Predikce účinnosti na cetuximab Multicenter phase II and translational study of cetuximab in metastatic colorectal carcinoma refractory to irinotecan, oxaliplatin, and fluoropyrimidines. Lenz HJ, et al. J Clin Oncol. 2006 Oct 20;24(30):4914-21. 346 pacientů s metastatickým kolorektálním karcinomem refrakterních na irinotekan, oxaliplatinu, fluoropyrimidiny léčeno cetuximabem v monoterapii. RR byl cca 12%. odpovědi na terapii tuto genetickou anomálii v nádoru neměl (P<0.0001). PFS byl 1,4 versus 6,6 měsíce. Klinický benefit (RR a PFS) nekoreloval s EFR1 expresí, mutacemi ani amplifikací, ale celkové přežití korelovalo s EFR1 amplifikací (p=0,03).

LABORATORY OF EXPERIMENTAL MEDICINE Panitumumab -Vectibix - SPC 1. NÁZEV PŘÍPRAVKU Vectibix 20 mg/ml koncentrát pro přípravu infuzního roztoku 2. KVALITATIVNÍ A KVANTITATIVNÍ SLOŽENÍ Jeden ml koncentrátu obsahuje 20 mg panitumumabu. Jedna injekční lahvička obsahuje buď 100 mg panitumumabu v 5 ml, 200 mg v 10 ml nebo 400 mg ve 20 ml koncentrátu. Pokud byl přípravek připraven k podání podle pokynů uvedených v bodě 6.6., výsledná koncentrace panitumumabu by neměla přesahovat 10 mg/ml. Panitumumab je humánní monoklonální Ig2 protilátka produkovaná savčí buněčnou linií (CHO) za pomoci rekombinantní DNA technologie. Pomocné látky: 1 ml koncentrátu obsahuje 0,150 mmol sodíku, což odpovídá 3,45 mg sodíku. Úplný seznam pomocných látek viz bod 6.1 3. LÉKOVÁ FORMA Koncentrát pro přípravu infúzního roztoku. Bezbarvý roztok, který může obsahovat okem viditelné amorfní částice panitumumabu. 4. KLINICKÉ ÚDAJE 4.1 Terapeutické indikace Vectibix je určen v monoterapii k léčbě pacientů s metastazujícím kolorektálním karcinomem exprimujícím EFR, vykazujícím expresi nemutovaného ( wild-type ) onkogenu KRAS (Kirsten rat sarcoma viral oncogene homolog), u kterých selhala léčba chemoterapeutickými režimy zahrnujícími fluoropyrimidin, oxaliplatinu a irinotekan.

Fig 1. CONSORT diagram. BSC, best supportive care; WT, wild-type. Amado et al.: Wild-Type KRAS Is Required for Panitumumab Efficacy in Patients With Metastatic Colorectal Cancer JCO 26, 2008

Fig 2. Progression-free survival by treatment within KRAS groups. Progressionfree survival by randomized treatment in (A) mutant and (B) wild-type KRAS groups. Hazard ratios (HR) are shown for panitumumab (panit.) versus best supportive care (BSC) adjusted for randomization factors (Eastern Cooperative Oncology roup score, geographic region). MUT WT Amado et al.: Wild-Type KRAS Is Required for Panitumumab Efficacy in Patients With Metastatic Colorectal Cancer JCO 26, 2008

Fig 3. Subset analyses of progressionfree survival in the KRAS wild-type group. Hazard ratio (HR; circle) and 95% CI (horizontal lines) adjusted for randomization factors for panitumumab (panit.) versus best supportive care (BSC). Amado et al.: Wild-Type KRAS Is Required for Panitumumab Efficacy in Patients With Metastatic Colorectal Cancer JCO 26, 2008

Fig 4. Waterfall plots showing maximum percent decrease in target lesions (blinded central radiology). (A) Patients receiving panitumumab, mutant KRAS. (B) Patients receiving panitumumab, WT KRAS. (C) Best supportive care (BSC) patients, mutant KRAS. (D) BSC patients, WT KRAS. Percentages are best response within each KRAS group, excluding missing or nonassessable postbaseline tumor assessments. PANIT-MUT PANIT-WT BSC-MUT BSC-WT Amado et al.: Wild-Type KRAS Is Required for Panitumumab Efficacy in Patients With Metastatic Colorectal Cancer JCO 26, 2008

Fig 5. Kaplan-Meier curves for overall survival by treatment and KRAS status. Hazard ratio (HR) for wild-type (WT) versus mutant (MT) KRAS status adjusted for randomized treatment and randomization factors. Amado et al.: Wild-Type KRAS Is Required for Panitumumab Efficacy in Patients With Metastatic Colorectal Cancer JCO 26, 2008

Fig A1. (A) Progression-free survival and (B) overall survival by KRAS WT status among patients receiving panitumumab after progression on best supportive care alone. HR, hazard ratio; WT, wild-type; MT, mutant; events, deaths; N, sample size. MUT Amado et al.: Wild-Type KRAS Is Required for Panitumumab Efficacy in Patients With Metastatic Colorectal Cancer JCO 26, 2008

Figure 1. TTP according to the K-RAS (A) and K-RAS and/or BRAF (B) mutational status. Benvenuti S. et al. Oncogenic Activation of the RAS/RAF Signaling Pathway Impairs the Response of Metastatic Colorectal Cancers to Anti Epidermal rowth Factor Receptor Antibody Therapies. Cancer Res 67, 2007

Diagnostika KRAS v Laboratořích prediktivní onkologie v ČR HRADEC KRÁLOVÉ PRAHA PLZEŇ OLOMOUC BRNO 2008- úhrada kitů společností AM EN, v jednání externí kontrola kvality

Nové kódy od roku 2009 v přípravě Fluorescenční in situ hybridizace lidské DNA se značenou sondou za účelem indikace cílené protinádorové léčby. Kvantitativní PCR reakce na cykléru s měřením v reálném čase za účelem indikace cílené protinádorové léčby. Imunohistochemické vyšetření exprese proteinu za účelem indikace cílené protinádorové léčby. Tkáňová mikrodisekce za účelem molekulárního vyšetření pro indikaci cílené protinádorové léčby.

DĚKUJI ZA POZORNOST A SPOLUPRÁCI!