CSF IZOELEKTRICKÁ FOKUSACE PRO Microgel a Interlab G26

Transkript

1 CSF IZOELEKTRICKÁ FOKUSACE PRO Microgel a Interlab G26 Kit č.: SRE 622K se SCE632M Účel použití Souprava Interlab CSF Isoelectric Focusing Kit je určena pro identifikaci oligoklonálních pásů v párových sérech a CSF za použití izoelektrické fokusace a imunoblotování. Tato technika je považována za zlatý standard pro stanovení intratekální syntézy IgG při klinické diagnostice sclerosis multiplex. Zde je izoelektrická fokusace nejcitlivější metodou pro detekci oligoklonálních pásů v séru a CSF (0.040mg/dl). Princip Tato procedura zahrnuje izoelektrickou fokusaci na agarózovém gelu za použití přístroje Microgel/Interlab G26 a ručního blotování. Izoelektrofokusace na agarózovém gelu umožňuje frakcionaci proteinů ve vzorcích CSF a séra. Kroky imunoblotace umožní transfer proteinů na membránu. Ta projde detekcí IgG oligoklonálních pásů a umožní demonstraci rozdílů, nebo jejich nepřítomnost, v distribuci IgG v CSF a séru stejného pacienta. Imunofixace se značeným anti-igg antisérem umožňuje detekovat pouze pravé vazby IgG oligoklonálních pásů při zvýšené citlivosti detekce, takže lze analýzu obecně provádět na nekoncentrovaném CSF. Paterny IgG imunofixace u CSF a séra stejného pacienta jsou pak vizuálně srovnávány. To umožní detekci oligoklonálních pásů, které představují intratekální syntézu imunoglobulinů. Popis 1. Destičky s agarózovým gelem Složení: Každý gel obsahuje agarózu, amfolyty a aditiva, která nejsou v použitých koncentracích nebezpečná. Každý agarózový gel obsahuje 12 stop a je určen na provedení 6 párů CSF-sérum. Příprava na použití: Agarózové gely jsou k použití přímo. Uchovávání a stabilita: Uchovávejte při pokojové teplotě (15 až 30 C). Nezchlazujte nebo nezmrazujte destičky! DŮLEŽITÉ: gelové destičky uchovávejte v horizontální poloze Gelové desky jsou stabilní do data expirace na obalu. Nepoužívejte gely po datu jejich expirace. 2. Blotovací membrány Složení: Listy nitrocelulózové membrány na imunoblotaci 3. Anodický roztok: Složení: Kyselý roztok. Používá se jako elektrolyt na přípravu stripů anodového kontaktu pro izoelektrickou fokusaci. Tento produkt je klasifikován jako nebezpečný podle direktiv 67/548/CEE a 1999/45/CE a/nebo EC Regulation/1272/2008 (CLP) (a následných předpisů a dodatků). R: 35: Způsobuje závažné poleptání S: 26: V případě kontaktu s očima ihned vypláchněte dostatkem vody a vyhledejte lékaře. S: 28: Po kontaktu s pokožkou ihned omyjte dostatkem vody S: 36/37/39: Používejte vhodné rukavice a ochranu očí/obličeje S: 45: V případě úniku, nebo pokud se necítíte dobře, vyhledejte lékařskou pomoc a ukažte tento štítek Uchovávání a stabilita: Uchovávejte za pokojové teploty (15 až 30 C). Anodický roztok je stabilní do data expirace na obalu. 4. Katodický roztok: Složení: Zásaditý roztok. Používá se jako elektrolyt pro přípravu stripů katodového kontaktu pro izoelektrickou fokusaci. Tento produkt je klasifikován jako nebezpečný podle direktiv EC Regulation 1272/2008 (CLP) (a následných předpisů a dodatků). Výrobek proto vyžaduje bezpečnostní list, který je v souladu s ustanoveními nařízení ES 1907/2006 a následnými změnami. Interlab S.r.l. Via Rina Monti N 26 C.A.P RomE ITALY VAT Tel: Fax: E.MAIL: INFO@INTERLAB-SRL.COM Strana 1 z 6

2 Veškeré dodatečné informace týkající se rizika pro zdraví a / nebo životní prostředí jsou uvedeny v bodech 11 a 12 tohoto listu. H314: Způsobuje těžké poleptání kůže a poškození očí H318: Způsobuje vážné poškození očí. Uchovávání a stabilita: Uchovávejte za pokojové teploty (15 až 30 C). Katodický roztok je stabilní do data expirace na obalu. 5. Kontaktní stripy Složení: Papírové stripy, které zaručují elektrický kontakt mezi gelem a elektrodami v migrační komoře. Příprava na použití: Saturujte dva papírové stripy jednotlivě s 0.6ml anodického a 0.6ml katodického roztoku. Blotujte je za použití nastříhaných bloterů F. Položte je na gel do příslušné pozice (anodické stripy poblíž jamek), před migrací. Uložení: Uchovávejte za pokojové teploty (15 C až 30 C). 6. Blotery A Složení: Tenké listy blotovacího papíru na absorbci přebytku roztoku pufru z agarózové destičky. Příprava na použití: Blotery jsou určeny k použití přímo. Uchovávání: Uchovávejte za pokojové teploty (15 C až 30 C). 7. Blotery F Složení: Nastříhané jednorázově použitelné proužky absorbčního papíru na blotování kontaktních stripů. Příprava na použití: Pro blotování kontaktních stripů nastříhejte blotery podél diagonální osy před použitím. Uchovávání: Uchovávejte za pokojové teploty (15 C až 30 C). 8. Blotery G Složení: Nastříhané absorbční papíry na jedno použití při imunoblotaci Příprava na použití: Blotery jsou určeny k použití přímo. Uchovávání: Uchovávejte za pokojové teploty (15 C až 30 C). 9. Vázací agens Složení: Obsahuje mléčné proteiny Tento produkt není klasifikován jako nebezpečný podle direktiv 67/548/CEE a 1999/45/CE a/nebo EC Regulation/1272/2008 (CLP) (a následných předpisů a dodatků). Příprava na použití: Vázací agens se používá na přípravu 2 pracovních roztoků takto: Vázací roztok 1: Na každý gel: rozpusťte 1 lahvičku vazebného agens v 50 ml fyziologického roztoku. Vázací roztok 2: Na každý gel: zřeďte 5 ml Vázacího roztoku 1 na 50 ml pomocí fyziologického roztoku. Uchovávání a stabilita: Uchovávejte za pokojové teploty (15 až 30 C). Vázací agens je stabilní do data expirace na obalu. 10. Koncentrovaný acetátový pufr Složení: Obsahuje 0.2M acetátového pufru o ph 5.1 Tento produkt není klasifikován jako nebezpečný podle direktiv 67/548/CEE a 1999/45/CE a/nebo EC Regulation/1272/2008 (CLP) (a následných předpisů a dodatků). Příprava na použití: Na každý gel: nařeďte 2ml acetátového koncentrovaného pufru na 20 ml pomocí deionizované vody a ihned jej použijte. Uchovávání a stabilita: Uchovávejte za pokojové teploty (15 až 30 C). Koncentrovaný acetátový pufr je stabilní do data expirace na obalu. 11. Chromogen Složení: Obsahuje 3 amino-9 etylkarbazol Tento produkt je klasifikován jako nebezpečný podle direktiv EC Regulation 1272/2008 (CLP) (a následných předpisů a dodatků). Výrobek proto vyžaduje bezpečnostní list, který je v souladu s ustanoveními nařízení ES 1907/2006 a následnými změnami. Veškeré dodatečné informace týkající se rizika pro zdraví a / nebo životní prostředí jsou uvedeny v bodech 11 a 12 tohoto listu. H350: Může způsobit rakovinu H301: Toxický při požití Příprava na použití: Přidejte 10 ml etanolu a třepejte energicky lahvičku až do úplného rozpuštění prášku. Interlab S.r.l. Via Rina Monti N 26 C.A.P RomE ITALY VAT Tel: Fax: E.MAIL: INFO@INTERLAB-SRL.COM Strana 2 z 6

3 Uchovávání a stabilita: Uchovávejte při 2-8 C. Chromogen je stabilní do data expirace na obalu. 12. Protilátka Složení: kozí protilidské IgG-Fc konjugované s křenovou peroxidázou Tento produkt není klasifikován jako nebezpečný podle direktiv 67/548/CEE a 1999/45/CE a/nebo EC Regulation/1272/2008 (CLP) (a následných předpisů a dodatků). Uchovávání a stabilita: Uchovávejte při 2-8 C. Protilátka je stabilní do data expirace na obalu. 13. Plastový kontejner Složení: kontejner na inkubaci protilátek. MATERIÁLY DODANÉ V KITU: Kit Ref.: SRE622K 60 testů, 6 vzorků na destičku gelu Kód Popis Množ. SFE201M Agarózové destičky 10 SCE160E Kontaktní stripy 1 SFE202M Blotovací membrány 20 SAE917M Plastový kontejner 1 SRE228M Koncentrovaný acetátový pufr (25 ml) 1 SRE156M Vazebné agens (1g) 10 SRE154M Anodický roztok (7ml) 1 SRE155M Katodický roztok (7ml) 1 SCE602A Blotovací papír A (10 ks) 1 SCE602F Blotovací papír F (20 ks) 1 SCE602G Blotovací papír G (10 ks) 1 CD návody Interlab 1 Varování: Tyto soupravy jsou určeny pouze na diagnostiku in vitro! Pro dosažení dobrých výsledků používejte vždy všechny reagencie ze stejné soupravy a držte se přesně instrukcí v pracovním postupu. SCE632M* Antiséra a chromogen Kód Popis Množství SCE624M Protilátka (0,15 ml) 1 SRE622M Chromogen (10 mg) 10 *Kit SCE632M Antiséra a chromogenu je nutné skladovat při 2-8 C. Varování: Provedení je zaručeno pouze při použití s kitem SCE632M Antisera and Chromogen. DALŠÍ NUTNÝ, ALE NEDODANÝ MATERIÁL migrační komora pro CSF (Ref.: SAE923M) 30% roztok peroxidu vodíku (uchovejte při 2-8 C) fyziologický roztok (0.9% w/v NaCl) mikropipeta na objem 7 μl pipeta na objem 0.6 ml váha do 2 kg třepačka etanol Interlab S.r.l. Via Rina Monti N 26 C.A.P RomE ITALY VAT Tel: Fax: E.MAIL: INFO@INTERLAB-SRL.COM Strana 3 z 6

4 Způsob likvidace a zvláštní rizika K zajištění bezpečné likvidace postupujte podle místních předpisů, berte však v úvahu i všechny informace o bezpečné likvidaci použitého materiálu uvedené v Reagents Safety Sheet (bezpečnostní list), který je k dispozici u servisního technika. Další upozornění na zvláštní rizika ve vztahu k použití a likvidaci prostředku, včetně zvláštních ochranných opatření, poskytuje materiál Reagents Safety Sheet (bezpečnostní list), který je k dispozici u servisního technika. Odběr, ošetření a uchovávání vzorků Sérum a CSF stejného pacienta musí být odebráno současně podle konvenčního postupu podle zásad správné laboratorní praxe (GLP). Pro tento test je doporučen vzorek čerstvého séra a CSF. Vzorky mohou být uchovávány uzavřené až 1 týden při 2-8 C. Zmrazená séra a CSF jsou stabilní nejméně jeden měsíc. Příprava vzorku 1. Měřte koncentrace IgG v CSF a séru za použití příslušných metod. 2. Koncentraci IgG v příslušných vzorcích CSF a séra je třeba upravit na stejnou hladinu pomocí destilované vody (použijte nativní vzorky CSF a nařeďte příslušné vzorky séra, aby byla stejná koncentrace IgG s CSF). Jak spustit analýzu Pro spuštění analýzy použijte software Elfolab/Interlab G26. I. Nastavení elektroforetické analýzy 1. Zapněte Interlab G26. Použijte program softwaru Elfolab/Interlab G26 pro výběr typu elektroforetické analýzy. II. Příprava agarózové destičky Před započetím testu rekonstituujte lahvičku chromogenu přidáním 10 ml etanolu. Energicky zatřepejte lahvičkou, aby se prášek úplně rozpustil. 1. Dejte jeden blotter A (Ref.: SCE602A) na povrch agarózového gelu, aby se eliminoval přebytek roztoku pufru a ujistěte se, že kompletně přilnul na povrch gelu. Pak jej rychle odstraňte. DŮLEŽITÉ: Nenechávejte papírový blotter moc dlouho na gelu, aby nedošlo k dehydrataci (Obr.5) 2. Naneste přímo do jamek gelu po 7 μl od každého vzorku a nechte absorbovat 10 minut. 3. Odstřihněte diagonálně podle vyznačení 1 blotter F. Dejte na jednu část blotteru F kontaktní strip. Saturujte kontaktní strip s 0.6 ml anodického roztoku. Blotujte je s druhou částí blotteru F. Položte ho na odpovídající okraj gelu (poblíž jamek). 4. Odstřihněte diagonálně podle vyznačení 1 blotter F. Dejte na jednu část blotteru F kontaktní strip. Saturujte kontaktní strip s 0.6 ml katodického roztoku. Blotujte je s druhou částí blotteru F. Položte ho na odpovídající okraj gelu. 5. Zasuňte gel do držáku. 6. Vložte držák gelu lícem nahoru do jakéhokoliv očíslovaného slotu v parkovací pozici. III. Spouštění elektroforézy Použijte program Elfolab/Interlab G26 pro spuštění procesu, vyberte číslo a pozici držáku gelu ke zpracování a pozici gelové destičky (levá, pravá nebo obě) vložené na každém držáku gelu. IV. Externí ošetření agarózového gelu (immunoblotting) Po kroku fokusace vyjměte gel z držáku gelu a položte ho na stůl. 1. Blotujte gel s listem blotovací membrány 40 sekund (na odstranění přebytku proteinů). Zlikvidujte ji. 2. Přiložte druhou blotovací membránu tak, aby nevznikly bubliny, přidejte 1 blotter G a 2kg závaží. Přitlačte na 30 min. Interlab S.r.l. Via Rina Monti N 26 C.A.P RomE ITALY VAT Tel: Fax: E.MAIL: INFO@INTERLAB-SRL.COM Strana 4 z 6

5 3. Odstraňte blotter G a umístěte blotovací membránu do 40 ml Vázacího roztoku 1. Inkubujte 30 min za třepání. 4. Promyjte dvakrát ve fyziologickém roztoku (2 minuty na každé promytí se třepáním). 5. Vložte blotovací membránu v plastovém kontejneru SAE917M do 20 ml Vázacího roztoku 2. Přidejte 15 μl protilátky (kozí protilidské IgG-Fc konjugované peroxidázou). Inkubujte 30 min za třepání. 6. Promyjte dvakrát ve fyziologickém roztoku (2 minuty na každé promytí se třepáním), pak dvakrát ve vodě (2 minuty na každé promytí se třepáním). 7. Dejte blotovací membránu do 20 ml ředěného acetátového pufru (20mM), přidejte 5 ml rekonstituovaného chromogenu a 25 μl 30% peroxidu vodíku. Nechte vyvíjet barvu 20 min za třepání. 8. Promyjte fyziologickým roztokem 5 minut za třepání, pak ve vodě 2 minuty za třepání a pak nechte vysušit. Operace po analýze Pokud je ukončen analytický cyklus, jsou doporučeny následující kroky údržby: Očistěte elektrody migrační komory měkkým papírovým ubrouskem namočeným v destilované vodě a pak vysušte sloty. Poznámka: Přečtěte si kapitolu o denní údržbě v manuálu přístroje. UPOZORNĚNÍ: Je doporučeno provádět kompletní cyklus s Cleaning Solution SRE243M. Je vhodné promývat jednou za 15 dní podle návodu dodaného s roztokem Cleaning Solution SRE243M. Interní kontrola kvality Před dodáním byly provedeny u každého kitu testy kontroly kvality každé výrobní šarže, aby se ověřily požadavky specifikované v postupech Interlab Quality Control (Q.C.) Procedures. Výsledky testů QC jsou uvedeny v Certificate of Analysis. Řešení potíží V případě změn v provedení kitu, pokud byly dodrženy všechny instrukce na přípravu a uchovávání reagencií, kontaktujte prosím vašeho dodavatele. Následující přehled uvádí možné příčiny problémů a jejich řešení (Kier, G. et al.. Ann. Clin. Biochem. 1990; 27: ) Problém Symptom Příčina Pozadí nitrocelulózy se neobarvilo. Nevybarvily se linie vzorku Stopy vzorku obarvené, ale slabě. Stopy vzorku moc intenzivní. Stopy vzorku zkroucené Pozadí nitrocelulózy se velice obarvilo. (rovnoměrně) (nerovnoměrně obarvilo) Nebyly vloženy žádné vzorky. Byla vynechána protilátka. Byla použita nesprávná protilátka. Nebyl přidán peroxid vodíku do roztoku substrátu. Byl vynechán blokační krok. Neodpovídající promytí před přidáním buď protilátky nebo roztoku substrátu. Bylo vynecháno nebo nebylo odpovídající před-blotování (čistící fáze). Neodpovídající vzorek. Nedostatečný čas na vývoj. Starý nebo kontaminovaný peroxid. Rozklad HRP konjugované protilátky. Nesprávné ph acetátového pufru (mělo by být ph ). Etylaminokarbazol je zoxidovaný. Aplikován přebytek vzorku. Moc vyvinutá barva (vzácně). Neodpovídající zchlazení během IEF. Kondenzace na povrchu gelu při běhu. Infikované vzorky. Použitý fyziologický roztok pro přípravu ředěného vzorku (při běhu je moc silný) Interlab S.r.l. Via Rina Monti N 26 C.A.P RomE ITALY VAT Tel: Fax: E.MAIL: INFO@INTERLAB-SRL.COM Strana 5 z 6

6 Nedošlo k separaci Barvení se omezilo na aplikační jamky. Do gelu nejde proud. Limity detekce Byla provedena sériová ředění IgG typu monoklonálního proužku na přístroji Microgel/Interlab G26 za použití soupravy CSF Isoelectric Focusing Kit. Nejnižší detekovaná koncentrace monoklonálního proužku vizuálně byla mg/dl. Testovací kity INTERLAB pro CSF izoelektrickou fokusaci Kit Přístroj Počet testů SRE622K Interlab G26 60 Výrobce: Interlab-srl Via Rina Monti, Roma Italy Vaše dotazy a požadavky na servis rádi vyřídíme na adrese distributora: BioVendor Laboratorní medicína a. s. Karásek 1767/1, Brno Tel: Fax: info@biovendor.cz Revize české verze: PK /2016 BEZPEČNOSTNÍ ZÁSADY 1. Před započetím stanovení si pečlivě přečtěte všechny instrukce. Ujistěte se, že všemu rozumíte. 2. Nemíchejte reagencie různých šarží. Nepoužívejte expirované reagencie. 3. Dodržujte zásady správné laboratorní praxe a bezpečnostní předpisy. Noste laboratorní plášť, jednorázové latexové rukavice a ochranné brýle. 4. Reagencie, které mohou dráždit pokožku, mají bezpečnostní štítek. Seznamte se v části OBSAH KITU a POPIS s detaily. Bezpečnostní listy jsou k dispozici u výrobce na písemné vyžádání. 5. Všechny chemikálie a a reagencie, pro přípravu analýzy I použité, musí být považovány za potencionálně nebezpečný materiál, podle zásad místních předpisů o bezpečném nakládání s nimi. ODPOVĚDNOST Reklamace budou uznány, pouze pokud budou obsahovat všechny detaily o provedení testu a výsledky. Jakékoliv úpravy postupu testu nebo změny nebo míchání složek různých kitů může mít negativní dopad na výsledky. V takovém případě nebude uznána žádost o náhradu. Bez ohledu na druh reklamace nahradí výrobce pouze náklady, které nepřesáhnou cenu soupravy. Za jakékoliv poškození kitu způsobené při přepravě nenese výrobce odpovědnost. Interlab S.r.l. Via Rina Monti N 26 C.A.P RomE ITALY VAT Tel: Fax: E.MAIL: INFO@INTERLAB-SRL.COM Strana 6 z 6