ACID VIOLET IMMUNOFIXATION POSTUP PRO SÉRUM A KONCENTROVANOU MOČ NA: Interlab G26 Interlab G26 Easy Fix

Transkript

1 ACID VIOLET IMMUNOFIXATION POSTUP PRO SÉRUM A KONCENTROVANOU MOČ NA: Interlab G26 Interlab G26 Easy Fix Kit Ref. SRE627K - SRE628K - SRE639K WITH ANTISERA AND FIXATIVE KIT SCE232M Účel použití Imunofixační soupravy SRE627K, SRE628K a SRE639K jsou určeny pro kvalitativní imunologickou identifikaci monoklonálních komponent v lidském séru a koncentrované moči. Soupravy pro imunofixaci Interlab SRE627K, SRE628K a SRE639K jsou určeny práci s plně automatizovaným přístrojem Interlab G26 (s Easy Mask) a Interlab G26 Easy Fix. Shrnutí Alper a Johnson v roce 1969 použili imunofixaci jako detekční metodu pro identifikaci genetických polymorfismů ceruloplasminu a charakterizaci produktů konverze C3 složky komplementu. Později využili tuto novou techniku pro identifikaci proteázového inhibitoru alfa 1 antitrypsinu. Imunofixační elektroforetická technika byla představena v laboratoři v roce 1976 pro studium a identifikaci polyklonálních a monoklonálních gamopatií. Polyklonální zvýšení množství imunoglobulinů je způsobeno aktivací několika různých klonů B lymfocytů, naproti tomu monoklonální gamopatie jsou charakterizovány nadprodukcí jednoho typu imunoglobulinu v důsledku malignace původních B lymfocytů. Velmi vzácným jevem u monoklonálních imunoglobulinů je přítomnost fragmentu těžkého řetězce jediné třídy. Vzorky pacientů jsou normálně vyšetřovány pomocí elektroforézy sérových a močových proteinů (SPE). Vzorky s abnormálními výsledky, tedy nadbytečnými proužky od Alfa 1 až k extrémně katodické Gama zóně či proužky, které migrují společně s normálním proteiny, jsou dále zkoumány s využitím metody imunofixace (IFE) pro zjištění jejich biochemické identity. Monoklonální proužek je charakterizován přítomností jediného typu imunoglobulinu. Proužky, které jsou výsledkem přítomnosti jiných proteinů než imunoglobulinů, nemohou být definovány jako monoklonální. Imunofixační elektroforéza kombinuje elektroforetickou separaci proteinů následovanou imunoprecipitací s využitím specifických antisér. Jde o rutinně používanou metodu na identifikaci monoklonálních imunoglobulinů v séru či moči. IFE umožňuje jednoduchou interpretaci, rychlé výsledky a má dostatečnou citlivost k nízkým hladinám monoklonálních imunoglobulinů, která může být zjištěna v případě časných myelomatóz. IFE je využívána v klinických laboratořích, kde je primárně nástrojem detekce monoklonálních gamopatií. Dalšími aplikacemi jsou například genetické studie, výzkum či forenzní medicína. Princip Imunofixační elektroforéza se stala vhodným klinickým nástrojem pro rychlou identifikaci monoklonálních proteinů v lidském séru a moči. Princip imunofixační elektroforézy je založen na vizualizaci specifických proteinů tvorbou komplexů antigen-protilátka po elektroforetické separaci proteinů. Pacientské vzorky séra či koncentrované moči jsou aplikovány do specifických stop na agarózovém gelu. Hlavní skupiny proteinů jsou separovány elektroforézou v alkalickém ph. Po ukončení migrace je jedna stopa ošetřena chemickým fixačním roztokem pro zafixování všech proteinů k získání referenčního paternu vzorku. Ostatní stopy agarózové destičky jsou imunofixovány antiséry s rozdílnými vazebnými specifitami k doménám různých lidských imunoglobulinům: těžké řetězce IgG, IgA, IgM a lehké řetězce kappa a lambda. Interakce antigenu (imunoglobulin ve vzorku) a protilátky Interlab S.r.l. Via Rina Monti N 26 C.A.P RomE ITALY VAT Tel: Fax: E.MAIL: INFO@INTERLAB-SRL.COM Str. 1 z 17

2 antiséra vede k tvorbě nerozpustného komplexu, který je-li vhodný poměr protilátek k antigenům se vysráží jako proužek. Rychlost precipitace závisí na teplotě, ph, iontové síle roztoku. Po imunofixaci se agarózové destičky denaturují, promyjí od přebytečných rozpustných proteinů a vysrážené neboli imunofixované proteiny se barví. Nadbytečné barvivo se odstraní odbarvovacím krokem a gel je poté usušen. Pozice obarvených imunofixovaných proužků se porovnávají s proužky na referenčním elektroforetickém paternu na proteiny, což umožní určení biochemické identity proteinů. U monoklonálních gamopatií vytvoří IFE obvykle oddělené přesně definované vysrážené proužky. U polyklonálních gamopatií se po vysrážení objevují difúzní vysrážené proužky na rozdíl od ostrých proužků u monoklonálních gamopatií. Dodávaný materiál: Souprava: SRE627K 20 testů, 2 vzorky na gelu Souprava: SRE628K 40 testů, 4 vzorky na gelu Souprava: SRE639K 60 testů, 6 vzorků na gelu Kód Popis SRE627K SRE628K SRE639K SFE171M Agarózové destičky N/A 10 N/A SFE170M Agarózové destičky 10 N/A N/A SFE209M Agarózové destičky N/A N/A 10 SCE160M Houbičky nasycené pufrem (10 ks) SRE634L Barvivo Acid violet (500 ml) SRE160M Promývací roztok pro imunofixaci (100 ml) SRE153M Ředicí roztok pro imunofixaci (6ml) 1 N/A 1 SRE152M Ředicí roztok pro imunofixaci (12ml) N/A 1 1 SAE606M Zásobník na vzorky (10 ks) SCE602A Blotovací papír A (10 ks) SCE602N Blotovací papír N (10 ks) Postup procedury na CD Varování: Tyto soupravy jsou určeny pouze na diagnostiku in vitro! Pro dosažení dobrých výsledků používejte vždy všechny reagencie ze stejné soupravy a držte se přesně instrukcí v pracovním postupu. Další materiál požadovaný ale nedodaný Interlab G26 a Interlab G26 Easy Fix Kód Popis Množství SRE201M Odbarvovací roztok 6X100 ml SRE150M Roztok k promývání aplikátorů (80ml) 1 SCE232M* Antisérový a fixační kit Kód Popis Množství SCE240M Fixační roztok (1,5 ml) 1 SCE236M Anti-Human-IgG (1 ml) 1 SCE235M Anti-Human-IgA (1 ml) 1 SCE237M Anti-Human-IgM (1 ml) 1 SCE238M Anti-Human-Kappa (1 ml) 1 SCE239M Anti-Human-Lambda (1 ml) 1 *Antisérový a fixační kit SCE232M je nutné skladovat při 2-8 C. Varování: Správné provedení je zajištěno jen, pokud je souprava použita s antisérovým a fixačním kitem SCE232M. Interlab S.r.l. Via Rina Monti N 26 C.A.P RomE ITALY VAT Tel: Fax: E.MAIL: INFO@INTERLAB-SRL.COM Str. 2 z 17

3 Mikropipety pro nanášení 5 až 100 l, 1000 l; pipety pro nanášení 10 ml. Interlab G26 Kód Popis Množství SAE910M Easy Mask pro Interlab G26 1 Pro kit SRE627K: rigid mask na 2 vzorky SAE895M Pro kit SRE628K: rigid mask na 4 vzorky SAE846M Pro kit SRE639K: rigid mask na 6 vzorků SAE845M Interlab G26 Easy Fix Kód Popis Množství Držák antisér Držák blotovacího papíru 1 Pro kit SRE627K: rigid mask na 2 vzorky Pro kit SRE628K: rigid mask na 4 vzorky Pro kit SRE639K: rigid mask na 6 vzorků Pro přístroje bez auto sampleru Kód Popis Množství SAE200M Plastová maska pro ruční dispenzaci vzorků 1 Popis 1. Agarózové desky Složení: Každá deska obsahuje agarózu v Barbital-Tris pufru s konzervační látkou a stabilizátorem. Tento produkt není klasifikován jako nebezpečný podle direktiv 67/548/CEE a 1999/45/CE a/nebo EC Regulation/1272/2008 (CLP) (a následných předpisů a dodatků). Příprava na použití: Jednotlivě zabalené desky jsou připraveny k přímému použití. Skladování a stabilita: Uchovejte při teplotě od 15 do 30 C. Nechlaďte! Uchovávejte gely v horizontální poloze! Nepoužívejte gely s prošlou expirací. Známky znehodnocení: -Přítomnost tekutiny uvnitř balení gelu. -Nestejnoměrná tloušťka gelu znamená dehydrataci. -Kontaminace bakteriemi či houbami 2. Houbičky nasycené pufrem Složení: Barbital-Tris pufr se stabilizátorem a konzervační látkou v alkalickém ph. Tento produkt není klasifikován jako nebezpečný podle direktiv 67/548/CEE a 1999/45/CE a/nebo EC Regulation/1272/2008 (CLP) (a následných předpisů a dodatků). Příprava na použití: Houbičky nasycené pufrem jsou určeny k přímému použití Skladování a stabilita: Uchovejte při pokojové teplotě od 15 do 30 C. Houbičky jsou stabilní do data expirace na obalu. Nepoužívejte po uplynutí data expirace. Známky znehodnocení: Zlikvidujte všechny houbičky, pokud byl porušen obal nebo byly vysušené. Pozn.: Občas se mohou vyskytnout černé nebo hnědé skvrny na houbičkách; jejich přítomnost nemá vliv na kvalitu výsledků 3. Roztok barviva Acid violet Složení: barvivo Acid violet v kyselém roztoku Tento produkt není klasifikován jako nebezpečný podle direktiv 67/548/CEE a 1999/45/CE a/nebo EC Regulation/1272/2008 (CLP) (a následných předpisů a dodatků). Příprava k použití: Určeno k přímému použití Skladování a stabilita: Uchovejte při teplotě od 15 do 30 C. Roztok musí být vyměněn každých 5 barvicích cyklů (5 agarózových destiček). Známky znehodnocení: Žádné Interlab S.r.l. Via Rina Monti N 26 C.A.P RomE ITALY VAT Tel: Fax: E.MAIL: INFO@INTERLAB-SRL.COM Str. 3 z 17

4 4. Promývací roztok pro aplikátory (pouze pro Interlab G26 série 33) Složení: Surfaktant ve vodném roztoku s konzervační látkou. Tento produkt není klasifikován jako nebezpečný podle direktiv 67/548/CEE a 1999/45/CE a/nebo EC Regulation/1272/2008 (CLP) (a následných předpisů a dodatků). Příprava na použití: k přímému použití Známky znehodnocení: Přítomnost zákalu. Skladování a stabilita: Uchovejte při teplotě od 15 do 30 C. Roztok je stabilní do data expirace na obalu. 5. Promývací roztok pro imunofixaci Složení:Vodný roztok PBS pufru a konzervační látky. Tento produkt je klasifikován jako nebezpečný podle direktiv 67/548/CEE a 1999/45/CE a/nebo EC Regulation/1272/2008 (CLP) (a následných předpisů a dodatků). R:25 Toxický při požití R:32: Při kontaktu s kyselinami se uvolňují velmi toxické plyny R:52/53 Nebezpečné pro vodní organizmy, může způsobit dlouhodobý nevratný efekt na vodní prostředí S: 29 Nevylévejte do odpadu S: 45 V případě nehody, pokud se necítíte dobře, vyhledejte ihned lékaře S: 60 Tyto materiály a jejich obaly je nutné považovat za nebezpečný odpad Příprava pro použití: Zřeďte 25 ml koncentrovaného roztoku na konečný objem 1000ml pomocí destilované vody. Známky znehodnocení: Přítomnost zákalu. Skladování a stabilita: Uchovejte při teplotě od 15 do 30 C. Koncentrovaný roztok je stabilní do data expirace na obalu. 6. Imunofixační ředicí roztok Složení:Bromfenolová modř v roztoku Tris-HCl. Tento produkt není klasifikován jako nebezpečný podle direktiv 67/548/CEE a 1999/45/CE a/nebo EC Regulation/1272/2008 (CLP) (a následných předpisů a dodatků). Příprava k použití: Imunofixační ředidlo je určeno k přímému použití Známky znehodnocení: Přítomnost precipitátu. Skladování a stabilita: Skladujte za pokojové teploty (15-30 C). Roztok je stabilní do data expirace. 7. Jednorázový zásobník na vzorek Složení: Jednorázové plastikové destičky s jamkami pro vzorky. Příprava k použití: Destičky jsou připraveny k přímému použití. Skladování: Skladujte za pokojové teploty (15-30 C). 8. Blottery A Použití: Nařezané absorpční papíry k jednomu použití pro blotování přebytečného pufru z gelové desky před aplikací vzorku a pro blotování přebytečného fixačního roztoku a antisér po imunofixačním kroku. Skladování: Uchovávejte na suchém místě při pokojové teplotě (15-30 C). 9. Blottery N Použití: Nařezané absorbční papíry k jednomu použití pro blotování přebytečného fixačního roztoku a antisér z gelové desky po imunofixačním kroku. Skladování: Uchovejte při teplotě od 15 do 30 C. 10. Antisérový a fixační kit (Kód: SCE232M, NENÍ OBSAŽEN V SOUPRAVĚ) Antiséra Složení: Purifikované frakce imunoglobulinů z králičího, ovčího a kozího antiséra. Všechna antiséra jsou protilidské celkové imunoglobuliny. Tento produkt není klasifikován jako nebezpečný podle direktiv 67/548/CEE a 1999/45/CE a/nebo EC Regulation/1272/2008 (CLP) (a následných předpisů a dodatků). Příprava k použití: Antiséra jsou připravena k použití. Pro rychlou identifikaci typu antiséra a pro snadnou vizualizaci během jejich aplikace do jednotlivých stop jsou jednotlivá antiséra obarvena neškodnými barvivy. Interlab S.r.l. Via Rina Monti N 26 C.A.P RomE ITALY VAT Tel: Fax: E.MAIL: INFO@INTERLAB-SRL.COM Str. 4 z 17

5 Uchovávání a stabilita: Antiséra uchovávejte při 2-8 C. Antiséra jsou stabilní do data expirace. Nepoužívejte antiséra po uplynutí doby expirace. Známky znehodnocení: Antiséra nepoužívejte, pokud dojde k jakékoli změně, například pozorujete-li zákal či přítomnost mikrobiální kontaminace Fixační roztok Složení: Roztok kyseliny a aditiva Tento produkt je klasifikován jako nebezpečný podle direktiv 67/548/CEE a 1999/45/CE a/nebo EC Regulation/1272/2008 (CLP) (a následných předpisů a dodatků). R:20: Nebezpečný při inhalaci R: 36/38: Dráždí oči a pokožku R:42/43: Může způsobit senzitivizaci při inhalaci a styku s pokožkou R 52/53: Nebezpečný pro vodní organizmy, může způsobit dlouhodobý nevratný efekt na vodní prostředí S:9: Kontejner nechte na dobře větraném místě S:23: Nevdechujte S:24: Zabraňte styku s pokožkou S: 37: Noste vhodné rukavice S:45: V případě úniku nebo pokud se necítíte dobře, vyhledejte lékaře S:63: V případě náhodného vdechnutí zajistěte čerstvý vzduch Příprava k použití: Fixační roztok je připraven k použití. Pro rychlou identifikaci a pro snadnou vizualizaci během aplikace do referenční stopy je obarven neškodným barvivem. Skladování a stabilita: Fixační roztok uchovávejte při 2-8 C. Je stabilní do data expirace. Nepoužívejte po uplynutí doby expirace. Známky znehodnocení: Fixační roztok nepoužívejte, pokud dojde k jakékoli změně, například pozorujete-li zákal či přítomnost mikrobiální kontaminace. 11. Odbarvovací roztok (NENÍ V SOUPRAVĚ DODÁN, kat.č. SRE201M) Složení: Koncentrovaný vodný roztok kyseliny citronové. Tento produkt je klasifikován jako nebezpečný podle direktiv EC Regulation 1272/2008 (CLP) (a následných předpisů a dodatků). Výrobek proto vyžaduje bezpečnostní list, který je v souladu s ustanoveními nařízení ES 1907/2006 a následnými změnami. Veškeré dodatečné informace týkající se rizika pro zdraví a / nebo životní prostředí jsou uvedeny v bodech 11 a 12 tohoto listu. H319: Způsobuje vážné podráždění očí. P264: Umyjte si důkladně ruce po manipulaci. P280: Používejte ochranné rukavice / ochranné brýle / obličejový štít. P305 + P351 + P338: PŘI ZASAŽENÍ OČÍ: opatrně promyjte vodou po dobu několika minut. Pokud máte kontaktní čočky a lze s nimi jednoduše manipulovat, vyndejte je. Pokračujte ve vyplachování. P337 + P313: Jsou-li oči podrážděny: Vyhledejte lékařskou pomoc / ošetření. Příprava k použití: 1ml SRE201A zřeďte do 1 l destilované vody. Uchovávání a stabilita: Uchovávejte při pokojové teplotě (15 to 30 C) do data expirace. Zředěný odbarvovací roztok je stabilní 2 týdny při pokojové teplotě. Známky znehodnocení: Přítomnost černé nebo bílé sraženiny. Způsob likvidace a zvláštní rizika K zajištění bezpečné likvidace postupujte podle místních předpisů, berte však v úvahu i všechny informace o bezpečné likvidaci použitého materiálu uvedené v Reagents Safety Sheet (bezpečnostní list), který je k dispozici u servisního technika. Další upozornění na zvláštní rizika ve vztahu k použití a likvidaci prostředku, včetně zvláštních ochranných opatření, poskytuje materiál Reagents Safety Sheet (bezpečnostní list), který je k dispozici u servisního technika. Odběr vzorků, ošetření a uchovávání Vzorky by měly být odebrány za použití laboratorní techniky v souladu se správnou laboratorní praxí (GLP). Pro testování jsou doporučeny čerstvé vzorky séra a moči. Interlab S.r.l. Via Rina Monti N 26 C.A.P RomE ITALY VAT Tel: Fax: E.MAIL: INFO@INTERLAB-SRL.COM Str. 5 z 17

6 Dobře uzavřené vzorky séra mohou být uchovány jeden týden při teplotě 2 až 8 C a jeden měsíc při teplotě 20 C. Příprava vzorku (manuál pro G26 série 33 a G26 nových sérií bez autosampleru): 1. Sérum Sérum nařeďte takto: SPE: 1/3 (20 μl vzorku + 40 μl imunofixačního ředidla) IgG: 1/7 (10 μl vzorku + 60 μl imunofixačního ředidla) IgA, IgM, K a λ: 1/4 (20 μl vzorku + 60 μl imunofixačního ředidla) Dávkování objemu pro každou jamku: 30 μl Ředění výše je pouze vodítko a nemusí být aplikováno na všechny vzorky, každá laboratoř má své vlastní ředění podle koncentrace imunoglobulinů v každém vzorku. U abnormálního proužku s koncentrací více než 15g/l se doporučuje zředit vzorek na finální koncentraci mezi 2,5 5g/l. V případě antiséra IgG zřeďte vzorek imunofixačním ředícím roztokem na finální koncentraci mezi 1 3g/l. Pokud je celková koncentrace imunoglobulinu menší než 5g/l, je doporučeno použít menší zředění vzorků. Příprava/ředění vzorků u Interlab G26 s integrovaným samplerem a u Interlab G26 Easy Fix se provádí automaticky přístrojem. Ředění nastavená softwarem: SPE 1/3; IgG 1/7; IgA 1/4; IgM 1/4; K 1/4; λ 1/4. Defaultní ředění nastavená v softwaru jsou pouze vodítkem, každá laboratoř si může měnit poměr ředění podle koncentrací imunoglobulinů v každém vzorku. POZN.: maximum ředění s integrovaným samplerem: 1/15. Pro ředění vyšší než 1/15 proveďte ruční předředění. 2. Koncentrovaná moč Většina vzorků moči musí být koncentrovaná. Zakoncentrujte moč na finální celkový protein okolo 5g/l nebo na celkovou koncentraci imunoglobulinů okolo 1g/l. pokud není koncentrace celkového proteinu nebo imunoglobulinu k dispozici, koncentrujte vzorek asi 25x 80x. Před použitím vzorky centrifugujte. Pokud je koncentrace solí vysoká, moč dialyzujte. Vzorky, které nelze použít Nepoužívejte hemolyzované vzorky sera. Hemolýza může produkovat abnormální nadbytečný proužek v zóně alfa 2 a/nebo katodový posun zóny alfa 2. Nepoužívejte vzorky plazmy. Fibrinogen je v referenčním paternu detegován jako proužek blízko pozice betaglobulinu, který může být mylně interpretován jako monoklonální komponenta. Antisérum anti-human IgM může reagovat s fibrinogenem, a tak způsobit falešnou pozitivitu v IgM. Nepoužívejte staré vzorky moči, může docházet k degradaci proteinů. Interlab G26 série 33 Jak spustit analýzu: Imunofixační analýza na přístroji Interlab G26 je poloautomatizovaná procedura. Automatizované kroky zahrnují: aplikaci vzorků na agarózovou destičku, elektroforetickou migraci, promytí, sušení, barvení, odbarvení a finální sušení gelu. Některé kroky vyžadují ošetření gelu mimo přístroj po elektroforetické migraci: aplikaci fixačního roztoku a antisér, inkubaci gelu při 20 C, blotování gelu při 40 C a denaturace gelu při 60 C. Pro start analýzy použijte software Elfolab/Interlab G26. Pozorně si přečtěte manuál k přístroji před startem analýzy. I. Nastavení elektroforetické analýzy 1. Naplňte nádoby odpovídajícími roztoky a objemy: Nádoba Roztok Objem (l) Destain Pracovní odbarvovací roztok 5 Washing Promývací roztok pro imunofixaci 1 Interlab S.r.l. Via Rina Monti N 26 C.A.P RomE ITALY VAT Tel: Fax: E.MAIL: INFO@INTERLAB-SRL.COM Str. 6 z 17

7 (25ml SRE160M ml destilované vody) STAIN 2 Roztok barviva Acid violet 0,21 2. Zapněte Interlab G Použijte Elfolab/Interlab G26 software pro zvolení typu elektroforetické analýzy. 4. Zkontrolujte, že všechny aplikátory jsou ve správných pozicích. (Obr.1) 5. Dejte 6ml destilované vody do oddílu DESTILLED WATER (Obr. 2) 6. Dejte 6ml promývacího roztoku na aplikátory (Kat.č. SRE150M) do oddílu WASHING SOLUTION (Obr.2). DŮLEŽITÉ: Před startem nové analýzy vždy naplňte promývací kontejnery čerstvými tekutinami! 7. Umístěte jednorázové zásobníky na vzorky (Kód. SAE605M) do pozice SAMPLE. (Obr.3) 8. Na každý zásobník umístěte kovový rámeček (Obr.3). 9. Přiložte průhledný plastový rámeček pro imunofixaci (Ref. SAE200M). 10. Naneste vzorky takto: Ref. SRE627K: Naneste 30μl vzorku do jamek, buď zředěného séra, nebo koncentrované moči následovně: Vzorek 1 Pozice IFE1 (jamky 1 až 6) Vzorek 2 Pozice IFE2 (jamky 8 až 13) Ref. SRE 628K : Naneste 30μl vzorku do jamek, buď zředěného séra, nebo koncentrované moči následovně: Vzorek 1 Pozice IFE1 (jamky 1 až 6) Vzorek 2 Pozice IFE2 (jamky 8 až 13) Vzorek 3 Pozice IFE3 (jamky 14 až 19) Vzorek 4 Pozice IFE4 (jamky 21 až 26) DŮLEŽITÉ: Nezapomeňte sejmout průhledný plastový rámeček před vložením do držáku do přístroje! II. Příprava migrační komory (Obr. 4) 1. Vyjměte migrační komoru z přístroje. 2. Odstraňte hliníkovou folii z boxu, který obsahuje houbičky nasycené pufrem. DŮLEŽITÉ: S houbičkami manipulujte pomocí čisté pinzety či v čistých rukavicích 3. Vložte dvě houbičky nasycené pufrem do okrajových slotů jedné (pravé či levé) či obou částí migrační komory vzhledem k počtu analyzovaných gelů. DŮLEŽITÉ: Nevkládejte houbičky do centrálních slotů. 4. Vložte migrační komoru do přístroje a zamáčkněte dobře, abyste se ujistili, že je komora kompletně spojena. DŮLEŽITÉ : Po každém běhu přístroje houbičky vždy odstraňte! III. Příprava destičky s agarózovým gelem (Obr. 5) 1. Položte jeden blotter A (Ref.: SCE602A) na destičku s agarózovým gelem pro eliminaci přebytečného roztoku pufru, ujistěte se, že těsně přilnul na povrch gelu a pak ho rychle sundejte. DŮLEŽITÉ: Nenechávejte blotovací papír na gelu příliš dlouho, vyhnete se tak dehydraci! 2. Zasuňte gel(y) do držáku (Obr. 6). 3. Ujistěte se, že jsou gely umístěny správně. 4. Vložte držák gelu do příslušné pozice v parkovací oblasti (Obr. 7). IV. Spuštění elektroforetické analýzy Pro spuštění použijte software Elfolab/Interlab G26, vyberte počet a pozici prováděných držáků gelu a pozici destiček vložených do každého držáku gelu. DŮLEŽITÉ: Před započetím nového cyklu prověřte následující: promývací nádoby byly naplněny čerstvými roztoky tank na barvicí roztok 2 je naplněn mezi MIN a MAX doporučenou hladinou tank na odbarvovací roztok obsahuje nejméně 2l odbarvovacího roztoku Interlab S.r.l. Via Rina Monti N 26 C.A.P RomE ITALY VAT Tel: Fax: E.MAIL: INFO@INTERLAB-SRL.COM Str. 7 z 17

8 tank na promývací roztok na imunofixaci obsahuje nejméně 1l prověřte hladinu tekutin v odpadním tanku. V. Kroky imunofixace Po započetí analýzy provede Interlab G26 následující automatické kroky: aplikaci vzorků na agarózovou desku, elektroforetickou migraci a parkování držáku gelu. Aplikace fixačního roztoku a antiséra, inkubační krok a odstranění nadbytečných proteinů a denaturace se provádí mimo přístroj za použití Easy Mask (viz kapitola Externí ošetření gelu na Easy Mask). Po ukončení kroku je držák gelu vložen zpět do parkovací pozice na automatizované promývání, sušení, barvení, odbarvení a konečné vysušení gelu. Interlab G26 Jak spustit analýzu: Imunofixační analýza na přístroji Interlab G26 je poloautomatizovaná procedura. Automatizované kroky zahrnují: dispenzaci/ředění vzorků, aplikaci vzorků na agarózovou destičku, elektroforetickou migraci, promytí, denaturaci, barvení, odbarvování, finální sušení gelu. Některé kroky vyžadují ošetření gelu mimo přístroj po elektroforetické migraci: aplikaci fixačního roztoku a antisér, inkubaci při 20 C, blotování při 40 C a denaturaci gelu při 60 C. Pro start analýzy použijte software Elfolab/InterlabG26. I. NASTAVENÍ ELEKTROFORETICKÉ ANALÝZY 1. Naplňte nádoby odpovídajícími roztoky a objemy: Nádoba Roztok Objem (l) Destain Pracovní odbarvovací roztok 5 STAIN 2 Roztok barviva Acid violet 0,21 Distilled Water Destilovaná voda 2 Washing Pracovní promývací roztok pro imunofixaci (25ml SRE160M + 975ml destil. vody) 1 2. Zapněte přístroj. 3. Použijte Elfolab/Interlab G26 software pro zvolení typu elektroforetické analýzy. 4. Zkontrolujte, že aplikátory jsou ve správných pozicích. (Obr.1) 5. Umístěte jednorázový zásobník na vzorky (Kód. SAE606M) do pozice SAMPLE. (Obr.3) 6. Na každý zásobník umístěte kovový rámeček (Obr.3) Poznámka: Je doporučeno zařadit kontrolní sérum při každém testu. II. PŘÍPRAVA MIGRAČNÍ KOMORY (OBR. 4) 1. Vyjměte migrační komoru z přístroje. 2. Odstraňte hliníkovou folii z boxu, který obsahuje houbičky nasycené pufrem. DŮLEŽITÉ: S houbičkami manipulujte pomocí čisté pinzety či v čistých rukavicích. 3. Vložte dvě houbičky nasycené pufrem do okrajových slotů DŮLEŽITÉ: Nevkládejte houbičky do centrálních slotů. 4. Vložte migrační komůrku do přístroje a zamáčkněte dobře, abyste se ujistili, že je komůrka kompletně spojena. DŮLEŽITÉ: Po každém běhu houbičky vyhoďte! III. PŘÍPRAVA DESTIČKY S AGARÓZOVÝM GELEM (OBR. 5) 1. Položte jeden blotter A (Ref.: SCE602A) na destičku s agarózovým gelem pro eliminaci přebytečného roztoku pufru, ujistěte se, že těsně přilnul na povrch gelu a pak ho rychle sundejte. DŮLEŽITÉ: Nenechávejte blotovací papír na gelu příliš dlouho, vyhnete se tak dehydrataci! 2. Zasuňte gel do držáku (Obr. 6) 3. Ujistěte se, že je gel umístěn správně. 4. Vložte držák gelu do příslušné pozice v parkovací oblasti (Obr. 7). IV. NANESENÍ VZORKŮ Přístroj s integrovaným samplerem Interlab S.r.l. Via Rina Monti N 26 C.A.P RomE ITALY VAT Tel: Fax: E.MAIL: INFO@INTERLAB-SRL.COM Str. 8 z 17

9 Pro správné nanesení vzorků, které se dispenzují automaticky, dodržte následující postup: 1. Vyjměte držák zkumavek č.1 z přístroje (Obr. 8) 2. Vložte zkumavky se vzorky, začněte od pozice 1 prvního držáku, opatrně zkumavky umisťujte až na dno držáku 3. Vložte držáky do přístroje, v případě používání čárových kódů musí tyto směřovat doprava do výřezů držáku (Obr. 9). Poznámka: Umístěte imunofixační diluent (SRE152M nebo SRE153M) do příslušné pozice, pokud je třeba. DŮLEŽITÉ: Ujistěte se před startem analýzy, že jsou zkumavky zbaveny víček. Přístroj bez integrovaného sampleru Pro předředění se seznamte s kap. Odběr vzorku, ošetření a uchovávání. Naneste vzorky ručně takto: Ref. SRE627K: Naneste 30μl vzorku do jamek následovně: Vzorek 1 Pozice IFE1 (jamky 1 až 6) Vzorek 2 Pozice IFE2 (jamky 8 až 13) Ref. SRE 628K : Naneste 30μl vzorku do jamek následovně: Vzorek 1 Pozice IFE1 (jamky 1 až 6) Vzorek 2 Pozice IFE2 (jamky 8 až 13) Vzorek 3 Pozice IFE3 (jamky 14 až 19) Vzorek 4 Pozice IFE4 (jamky 21 až 26) Ref. SRE 639K : Naneste 30μl vzorku do jamek následovně: Vzorek 1 Pozice IFE1 (jamky 1 až 6) Vzorek 2 Pozice IFE2 (jamky 8 až 13) Vzorek 3 Pozice IFE3 (jamky 14 až 19) Vzorek 4 Pozice IFE4 (jamky 21 až 26) Vzorek 5 Pozice IFE5 (jamky 27 až 32) Vzorek 6 Pozice IFE6 (jamky 34 až 39) V. SPUŠTĚNÍ ELEKTROFORETICKÉ ANALÝZY Pro spuštění použijte software nebo Elfolab/Interlab G26, vyberte pozici prováděných držáků gelu Před započetím nového cyklu prověřte následující: tank na barvicí roztok 2 je naplněn mezi MIN a MAX doporučenou hladinou tank na odbarvovací roztok obsahuje nejméně 2l odbarvovacího roztoku tank na promývací roztok na imunofixaci obsahuje nejméně 1l prověřte hladinu tekutin v odpadním tanku. VI. Kroky imunofixační analýzy Po započetí analýzy provede Interlab G26 následující automatické kroky: ředění/dispenzace vzorku, aplikace vzorků na agarózovou desku, elektroforetická migrace a parkování držáku gelu. Aplikace fixačního roztoku a antiséra, inkubační krok a odstranění nadbytečných proteinů a denaturace se provádí mimo přistroj pomocí Easy Mask (viz kapitola Externí ošetření gelu na Easy Mask). Po ukončení kroku je držák gelu vložen zpět do parkovací pozice na automatizované promývání, sušení, barvení, odbarvení a konečné vysušení gelu. Interlab S.r.l. Via Rina Monti N 26 C.A.P RomE ITALY VAT Tel: Fax: E.MAIL: INFO@INTERLAB-SRL.COM Str. 9 z 17

10 Externí ošetření agarózového gelu na Easy Mask Na konci migrace vás software požádá o vyjmutí držáku gelu. 1. Vložte držák gelu do masky Easy Mask a přiložte rámeček bez zaklapnutí pružin. 2. Vyberte program č. 1 na Easy Mask (stiskněte tlačítko Program). 3. Umístěte Rigid Magnetic Mask do černého rámečku v zařízení tak, aby se těsně přitiskly na gely. DŮLEŽITÉ: Manipulujte s Rigid Magnetic Mask opatrně, abyste zabránili poškození plastu. 4. Naneste fixační roztok a antisérum podle následující tabulky, ujistěte se, že je každá část kompletně a jednolitě překryta příslušným roztokem a pak stiskněte na Easy Mask tlačítko Start/Cont. Stopa Reagencie SRE625K SRE626K (µl) SRE639K (μl) SPE Fixační roztok (žlutý) Anti-Hu-!gG Protilidské IgG antisérum (zelené) Anti-Hu-lgA Protilidské IgA antisérum (červené) Anti-Hu-laM Protilidské IgM antisérum (modré) Anti-Hu-Kappa Protilidské kappa lehké řetězce antisérum (oranžové) Anti-Hu-Lambda Protilidské lambda lehké řetězce antisérum (fialové) Po inkubaci 6 minut vydá Easy Mask zvukový signál opatrně odstraňte Rigid Magnetic Mask. 6. Zdvihněte rámeček masky. 7. Přiložte blotter A na gely, ujistěte se, že úplně přilnuly na povrch gelu a pak je po 10 vteřinách odstraňte. 8. Opakujte krok Na povrch gelu lehce položte bloter N. 10. Nahoru přiložte plastovou destičku. Přitiskněte rámeček tak, aby pružiny zaklaply. Pak stiskněte na Easy Mask tlačítko Start/Cont. DŮLEŽITÉ: V tuto chvíli je třeba omýt magnetickou masku, aby zbylá antiséra v kanálcích nevyschla. Omyjte za pomoci zubního kartáčku, tekutého mýdla a vodovodní vody. Opláchněte destilovanou vodou. 11. Na konci blotování (po 5 minutách při 40 C) se ozve signál, zvedněte rámeček, vyjměte plastovou destičku a odstraňte blotery. Stiskněte Start/Cont na Easy Mask. 12. Na konci denaturace (3min při 60 C) stiskněte Start/Cont na Easy Mask pro návrat do první fáze a vraťte držák gelu do příslušné parkovací pozice v přístroji Interlab G Stiskněte tlačítko Restart a nechte přístroj dokončit analýzu. Interlab G26 Easy Fix Jak spustit analýzu Imunofixační analýza na přístroji Interlab G26 Easy Fix je plně automatizovaná procedura. Automatizované kroky zahrnují: dispenzaci/ředění vzorků, aplikaci vzorků na agarózovou destičku, elektroforetickou migraci, aplikaci fixačního roztoku a antisér, inkubaci gelu, blotování gelu, denaturaci, promytí, barvení, odbarvování, finální sušení gelu. Pro start analýzy použijte software Elfolab/InterlabG26. I. NASTAVENÍ ELEKTROFORETICKÉ ANALÝZY 1. Naplňte nádoby odpovídajícími roztoky a objemy: Nádoba Roztok Objem (l) Destain Pracovní odbarvovací roztok 5 STAIN 2 Roztok barviva Acid violet 0,21 Distilled Water Destilovaná voda 2 Washing Pracovní promývací roztok pro imunofixaci (25ml SRE160M + 975ml destil. vody) 1 Interlab S.r.l. Via Rina Monti N 26 C.A.P RomE ITALY VAT Tel: Fax: E.MAIL: INFO@INTERLAB-SRL.COM Str. 10 z 17

11 2. Zapněte přístroj. 3. Použijte Elfolab/Interlab G26 software pro zvolení typu elektroforetické analýzy. 4. Zkontrolujte, že aplikátory jsou ve správných pozicích. (Obr.1) 5. Umístěte jednorázový zásobník na vzorky (Kód. SAE606M) do pozice SAMPLE. (Obr.3) 6. Na každý zásobník umístěte kovový rámeček (Obr.3) 7. Vložte VZOREK do přístroje (Obr.3). II. PŘÍPRAVA MIGRAČNÍ KOMORY (OBR. 4) 1. Vyjměte migrační komoru z přístroje. 2. Odstraňte hliníkovou folii z boxu, který obsahuje houbičky nasycené pufrem. DŮLEŽITÉ: S houbičkami manipulujte pomocí čisté pinzety či v čistých rukavicích. 3. Vložte dvě houbičky nasycené pufrem do okrajových slotů migrační komory. Nevkládejte houbičky do centrálních slotů. 4. Vložte migrační komoru do přístroje a zamáčkněte dobře, abyste se ujistili, že je komora kompletně spojena. DŮLEŽITÉ: Po každém běhu houbičky vyhoďte! III. PŘÍPRAVA DESTIČKY S AGARÓZOVÝM GELEM (Obr. 5) 1. Položte jeden blotter A (Ref.: SCE602A) na destičku s agarózovým gelem pro eliminaci přebytečného roztoku pufru, ujistěte se, že těsně přilnul na povrch gelu a pak ho rychle sundejte. DŮLEŽITÉ: Nenechávejte blotovací papír na gelu příliš dlouho, vyhnete se tak dehydraci! 2. Zasuňte gel do držáku (Obr. 6) 3. Ujistěte se, že je gel umístěn správně. 4. Vložte držák gelu do příslušné pozice v parkovací oblasti (Obr. 7). DŮLEŽITÉ: po umístění držáku gelu začněte analýzu do 5 minut, ne déle! IV. PŘÍPRAVA VZORKŮ A ANTISÉRA Pro správné nanesení vzorků dodržte následující postup: 1. Vyjměte držák zkumavek č. 1 z přístroje (Obr. 8) 2. Vložte zkumavky se vzorky, začněte od pozice 1 prvního držáku, opatrně zkumavky umisťujte až na dno držáku 3. Vložte držáky do přístroje, v případě používání čárových kódů musí tyto směřovat doprava do výřezů držáku (Obr. 9). 4. Umístěte imunofixační diluent (SRE152M nebo SRE153M) do příslušné pozice, pokud je třeba. Pro nanesení antisér použijte Antisera Rack: 5. Vložte lahvičky s antiséry do Antisera Rack od první pozice. 6. Vsuňte Antisera Rack do přístroje do pozice 3 DŮLEŽITÉ: před spuštěním analýzy ověřte, že byla víčka lahviček odstraněna. V. PŘÍPRAVA PŘÍSLUŠENSTVÍ Easy Fix 1. Vložte Rigid Mask pro dispenzaci antisér do určené parkovací oblasti 2. Vložte blotovací papír N do držáku blotovacího papíru pak do určené parkovací pozice Poznámka: Na konci analýzy opatrně omyjte Rigid Mask. Očistěte ji pomocí zubního kartáčku, tekutého mýdla a tekoucí vody. Omyjte destilovanou vodou. Vysušte papírem a dejte ji do parkovací oblasti. Poznámka: Na konci analýzy odstraňte blotovací papír N z držáku na blotovací papír. Držák dejte do určeného parkovacího místa. Pro novou analýzu vložte nový blotovací papír N. VI. SPUŠTĚNÍ ELEKTROFORETICKÉ ANALÝZY Pro spuštění použijte software nebo Elfolab/Interlab G26, vyberte pozici prováděných držáků gelu Před započetím nového cyklu prověřte následující: tank na barvicí roztok 2 je naplněn mezi MIN a MAX doporučenou hladinou tank na odbarvovací roztok obsahuje nejméně 2l odbarvovacího roztoku Interlab S.r.l. Via Rina Monti N 26 C.A.P RomE ITALY VAT Tel: Fax: E.MAIL: INFO@INTERLAB-SRL.COM Str. 11 z 17

12 tank na promývací roztok na imunofixaci obsahuje nejméně 1l prověřte hladinu tekutin v odpadním tanku. VII. KROKY IMUNOFIXAČNÍ ANALÝZY Po startu analýzy provede Interlab G26 automaticky následující kroky: dispenzaci/ředění vzorků, aplikaci vzorků na agarózovou destičku, elektroforetickou migraci, aplikaci fixačního roztoku a antiséra, inkubaci gelu, blotování gelu, denaturaci, promytí, barvení, odbarvování, finální sušení gelu. Operace po analýze Po dokončení procedury doporučujeme provést tyto procesy: Odstraňte usušený gel z držáku. Odstraňte houbičky nasycené pufrem z migrační komory, vyčistěte každý slot pomocí měkkého papírového ubrousku namočeného v destilované vodě a pak sloty vysušte. Vyjměte jednorázovou destičku na vzorek a vyhoďte ji. Vyndejte Rigid Mask na dispenzaci antiséra a očistěte ji za použití kartáčku na zuby, tekutého mýdla a tekoucí vody. Omyjte destilovanou vodou a vysušte ji absorbčním papírem. Nakonec Rigid Mask dejte na svou pozici. Vyndejte blotovací papír N z držáku blotovacího papíru a dejte držák zpět do své pozice. Poznámka: Přečtěte si kapitolu Denní údržba v manuálu přístroje. Pozn.: Ověřte si správnou adsorpci antiséra na blotovacím papíru N. Přítomnost plně vybarvených stop indikuje správnou dispenzaci antiséra. Absence stopy 1-2 mm nemá vliv na výsledek. UPOZORNĚNÍ: Je doporučeno provádět kompletní cyklus s Cleaning Solution SRE243M. Je vhodné promývat jednou za 15 dní podle návodu dodaného s roztokem Cleaning Solution SRE243M. Interpretace výsledků DŮLEŽITÉ: Na konci analýzy očistěte zadní stranu destičky s gelem za použití měkkého papírového ubrousku namočeného v etylalkoholu! Normální profil: Stopa SPE proteinů: normální profil proteinů Ostatní stopy: difúzní proužky odpovídající polyklonálním imunoglobulinům. Monoklonální profil: Stopa SPE: Přítomnost abnormálních proužků, které jsou obvykle jasně vyprofilovány, a jejichž velikost je možno srovnat s albuminem nebo alfa 1 nebo je střední. Abnormální proužky mohou být pozorovány kdekoliv od gama-zóny po alfa 1. Abnormálně zvýšený výskyt normálních proužků může také znamenat přítomnost nebo podezření na monoklonální komponenty. Stopy G, A, M: Monoklonální proužek je charakterizován přesným dobře definovatelným proužkem ve stopě těžkých řetězců, umístěným na stejném místě jako ty ve stopě SPE nebo u zvýšených normálních proužků. Kappa & Lambda: Přítomnost jasného proužku jedné nebo dvou stop lehkých řetězců, lokalizovaného na stejném místě jako s jedním nalezeným u SPE vzorku nebo jako zvýšené normální proužky nebo jako monoklonální proužky detekované ve stopě IgG, IgA, IgM. Přítomnost dvou monoklonálních proužků je způsobena biklonální gammopathií (přítomnost dvou proužků těžkých řetězců, identických nebo různých, a dvou proužků lehkých řetězců, též identických nebo různých). Přítomnost mnohočetných proužků jednoho nebo více typů těžkých řetězců a jednoho nebo dvou typů lehkých řetězců je způsobena oligoklonalitou. Speciální případy: Vzorky obsahující proužek na stopě SPE naznačující monoklonální protein, ale nereagující se specifickým antisérem, vyžadují komplementární identifikaci (fibrinogen, CRP, atd...) Interlab S.r.l. Via Rina Monti N 26 C.A.P RomE ITALY VAT Tel: Fax: E.MAIL: INFO@INTERLAB-SRL.COM Str. 12 z 17

13 Vzorek s monoklonálním proužkem ve stopě Kappa nebo Lambda a nereagující s antiséry G, A a M, musí být testovány s antiséry IgD a IgE. Proužek CRP může být detekován většinou na katodovém konci paternu jako úzký proužek. Vysoká hladina monoklonálních proteinů (obvykle IgM) může někdy zůstat v matrixu gelu. Tento proužek se bude barvit ve všech stopách specifických antisér na gelu. Jsou dvě cesty identifikace typu tohoto monoklonálního proužku: Proužek reaguje se specifickými antiséry (těžké a lehké řetězce) a dává proužek s o mnoho větší velikostí a intenzitou než jsou ostatní, což umožňuje identifikaci tohoto monoklonálního proužku. Sérum může být ošetřeno 2-merkaptoetanolem a musí být provedena sekundární imunofixace na identifikaci monoklonálního proužku. Koncentrovaná moč Detekce jednoho nebo více proužků pouze ve stopě pro κ a λ vyžaduje další testy na ověření přítomnosti Bence-Jonesových proteinů v moči. Speciální případy: Monoklonální proužek v místě lehkého řetězce, který nemá odpovídající monoklonální proužek u těžkých řetězců, vyžaduje další zkoumání s antiséry proti lidským těžkým řetězcům δ nebo ε, pro zjištění přítomnosti imunoglobulinů třídy D nebo E. Kontrola kvality Laboratoř by si měla pro každou šarži kontrolního materiálu stanovit hodnotící kritéria. Pokud kontroly tato kritéria nesplní, validita výsledků pacientských sér není potvrzena a analýza by měla být opakována. Vnitřní kontrola kvality Před dodáním jsou všechny šarže souprav testovány výrobcem (Interlab), je tak ověřeno, že soupravy vyhovují stanoveným požadavkům kontroly kvality- Interlab QC Procedures. Výsledky kontrolních testů jsou uvedeny v Certificate of Analysis. Řešení potíží Jestliže dodržujete návod na přípravu a skladování reagencií, pracovní postup, a přesto zjistíte změny v analytickém chování souprav, volejte servisního technika. Interference a omezení Viz kapitola o vzorcích, které nelze použít, v tomto návodu. Nesprávně uchovávané vzorky séra a moči mohou obsahovat proteiny, které podléhají degradaci. Viz kapitola o odběru a uchovávání vzorků. Odchylky od tohoto doporučeného návodu na použití mohou mít vliv na výsledek. Charakteristiky provedení Přesnost v rámci analýzy (Intra Run) Pro tuto studii na Interlabu G26 byly hodnoceny tři různé vzorky, jeden normální a dva s potvrzenými monoklonálními proužky. U každého vzorku byly stanoveny čtyři replikáty na stejné agarózové desce, za použití stejné šarže reagencií. Výsledky byly hodnoceny vizuálně. Všechny dráhy ukázaly stejný patern. Přesnost mezi analýzami (Inter Run) Pro tuto studii na Interlabu G26 bylo hodnoceno deset agarózových desek pro analýzu replikátů čtyř vzorků (jeden normální a tři s potvrzenými monoklonálními proužky). Výsledky byly hodnoceny vizuálně. Všechny dráhy ukázaly stejný patern. Přesnost (mezi šaržemi) Pro tuto studii na Interlabu G26 byly hodnoceny tři různé šarže reagencií sériově na třech agarózových gelech, čtyřech vzorcích séra (jeden normální a tři s potvrzenými monoklonálními proužky). Stejný typ studie byl proveden pro analýzu čtyř vzorků koncentrované moče, které obsahují monoklonální κ a λ proužky. Výsledky byly hodnoceny vizuálně. Všechny dráhy ukázaly stejný patern. Interlab S.r.l. Via Rina Monti N 26 C.A.P RomE ITALY VAT Tel: Fax: E.MAIL: INFO@INTERLAB-SRL.COM Str. 13 z 17

14 Správnost provedení Na přístroji Interlab G26 bylo analyzováno 52 vzorků sér (jak normální tak abnormální) a 24 koncentrovaných vzorků moči (jak normální tak abnormální). Stejné vzorky byly analyzovány také soupravou komerčně dostupnou, na agarózovém gelu. Paterny byly hodnoceny vizuálně. Srovnáním mezi výsledky byla zjištěna kompletní shoda dat, bez falešných pozitivit nebo negativit. Citlivost Sériově ředěné 3 patologické vzorky séra, obsahující různé typy potvrzených monoklonálních proužků, byly zkoumány na nejnižší bod detekce. Následující tabulka ukazuje nejnižší bod detekce pro 3 různé analyzované monoklonální proužky. Monoklonální Koncentrace g/l Detekční limit g/l složka IgG lambda 47 0,05 IgA kappa 62 0,03 IgM lambda 7,3 0,06 Literatura: 1. Alper CA, Johnson AM. Immunofixation electrophoresis: A technique for the study of protein polymorphism. Vox Sang 1969; 17: Alper, C.A., Genetic Polymorphism of Complement Components as a Probe of Structure and Function. Progress in Immunology, First International Congress of Immunology. Edited by New York, Academic Press, , Cawley, L.P., et al.immunofixation Electrophoretic Technique Applied to Identification of Proteins in Serum and Cerebrospinal Fluid. Clin Chem 22: , Johnson, A. M. Genetic Typing of Alpha(1)-Antitrypsin in Immunofixation Electrophoresis. Identification of Subtypes of P.M., J Lab Clin Med, 87: , Tietz Fundamentals of Clinical Chemistry, Carl A. Burtis, Edward R. Ashwood, MD, pag 346, Fifth Edition, Aguzzi, F. And Rezzani, A. An advantageous technique for immunofixation monoclonal components on cellulose acetate membranes. Standardization and evaluation.giorn. Ital. Chim. Clin. 22, 1982 (1976) 6. Primer of Immunoelectrophoresis with interpretation of Pathologic Human Serum Patterns, S. Karger, pp Arcquembourg, P.C.; Salvaggio J.E.; Bicker J.N. (1970). 7. Ritchie, R.F. and Smith, R., Immunofixation III, Application to the Study of Monoclonal Proteins, Clin. Chem, 22: ,1976. Interlab S.r.l. Via Rina Monti N 26 C.A.P RomE ITALY VAT Tel: Fax: E.MAIL: INFO@INTERLAB-SRL.COM Str. 14 z 17

15 TESTY INTERLAB PRO IMUNOFIXAČNÍ ELEKTROFORÉZU Kit Přístroj Testy SRE627K Interlab G26 (všechny série) 20 SRE628K Interlab G26 (všechny série) 40 SRE639K Interlab G26 (kromě série 33) 60 Výrobce: Interlab-srl Via Rina Monti, Roma Italy Vaše dotazy a požadavky na servis rádi vyřídíme na adrese distributora: BioVendor Laboratorní medicína a. s. Karásek 1767/1, Brno Tel: Fax: info@biovendor.cz Revize české verze: PK MM Revised edition 04/2016 BEZPEČNOSTNÍ ZÁSADY 1. Před započetím stanovení si pečlivě přečtěte všechny instrukce. Ujistěte se, že všemu rozumíte. 2. Nemíchejte reagencie různých šarží. Nepoužívejte expirované reagencie. 3. Dodržujte zásady správné laboratorní praxe a bezpečnostní předpisy. Noste laboratorní plášť, jednorázové latexové rukavice a ochranné brýle. 4. Reagencie, které mohou dráždit pokožku, mají bezpečnostní štítek. Seznamte se v části OBSAH KITU a POPIS s detaily. Bezpečnostní listy jsou k dispozici u výrobce na písemné vyžádání. 5. Všechny chemikálie a a reagencie, pro přípravu analýzy I použité, musí být považovány za potencionálně nebezpečný materiál, podle zásad místních předpisů o bezpečném nakládání s nimi. ODPOVĚDNOST Reklamace budou uznány, pouze pokud budou obsahovat všechny detaily o provedení testu a výsledky. Jakékoliv úpravy postupu testu nebo změny nebo míchání složek různých kitů může mít negativní dopad na výsledky. V takovém případě nebude uznána žádost o náhradu. Bez ohledu na druh reklamace nahradí výrobce pouze náklady, které nepřesáhnou cenu soupravy. Za jakékoliv poškození kitu způsobené při přepravě nenese výrobce odpovědnost. Interlab S.r.l. Via Rina Monti N 26 C.A.P RomE ITALY VAT Tel: Fax: E.MAIL: INFO@INTERLAB-SRL.COM Str. 15 z 17

16 Obr. 1: Umístění aplikátoru (všechny série) Obr. 2: Držák na promývání aplikátorů (pouze série 33) Obr. 3: Umístění držáku vzorků (všechny série) Obr. 4: Migrační komora (všechny série) Obr. 5:Odstranění přebytku pufru blotačním papírem (všechny série) Obr. 6: Zasunutí gelu (všechny série) Interlab S.r.l. Via Rina Monti N 26 C.A.P RomE ITALY VAT Tel: Fax: E.MAIL: INFO@INTERLAB-SRL.COM Str. 16 z 17

17 Obr. 7: Umístění držáku gelu (všechny série) Obr. 8: Umístění zkumavek vzorků (pouze při integrovaném sampleru) Obr. 9:Vložení držáku na vzorek (pouze s integrovaným samplerem) Pozn. Interlab G26 Easy Fix: držák vzorků musí být na pozici 1 Obr. 10: Umístění příslušenství Easy Fix (pouze G26 Easy Fix) 1. Antisera Rack (slot č.3) 2. Antisera Mask 3. Držák blotovacího papíru Interlab S.r.l. Via Rina Monti N 26 C.A.P RomE ITALY VAT Tel: Fax: E.MAIL: INFO@INTERLAB-SRL.COM Str. 17 z 17