ANALÝZA LÁTEK POMOCÍ HPLC
|
|
- Alexandra Tesařová
- před 8 lety
- Počet zobrazení:
Transkript
1 r Univerzita J. E. Purkyně v Ústí nad Labem Přírodovědecká fakulta ANALÝZA LÁTEK POMOCÍ HPLC KCH/P422 (úloha je součástí předmětu Instrumentální analýza) Vlastimil Dohnal Ivana Kadlečková Ústí nad Labem
2 Obor: Klíčová slova: Anotace: Toxikologie a analýza škodlivin, Chemie (dvouoborové), Aplikované nanotechnologie Kapalinová chromatografie, hmotnostní detekce, kofein Studijní opora je zaměřena na pochopení teoretických znalostí metody kapalinové chromatografie a hmotnostní spektrometrie a jejich praktickou aplikaci při stanovení a identifikaci kofeinu v nápojích. Projekt Mezioborové vazby a podpora praxe v přírodovědných a technických studijních programech UJEP Registrační číslo projektu: CZ.1.07/2.2.00/ Tento projekt byl podpořen z Evropského sociálního fondu a státního rozpočtu České republiky. UJEP v Ústí nad Labem, 2013 Autor: doc. RNDr. Vlastimil Dohnal, Ph.D. et Ph.D. Ing. Ivana Kadlečková 2
3 Obsah Pokyny pro účastníky laboratorního cvičení... 4 Teoretická část... 5 Vysokoúčinná kapalinová chromatografie, HPLC... 5 Princip separace... 5 Stacionární fáze... 5 Mobilní fáze... 7 Schéma kapalinového chromatografu... 7 Hmotnostní spektrometrie... 8 Převedení vzorku do plynné fáze... 8 Ionizace elektrosprejem... 8 Analyzátor... 9 Detekce iontů Kvantita a kvalita Charakteristika testovaných látek Náhradní sladidla Aspartam Acesulfam K Použití náhradních sladidel v potravinách Experimentální část ) Přístrojové vybavení a software ) Materiál ) Vlastní stanovení metodou HPLC ) Návod na spuštění a vypnutí kapalinového chromatografu Zpracování výsledků Metoda kalibrační křivky
4 Pokyny pro účastníky laboratorního cvičení Každý student je povinen se seznámit s laboratorním řádem a se zásadami bezpečnosti práce v laboratoři a první pomoci při případných úrazech. Před zahájením laboratorních cvičení si musí student: zopakovat metodiku kapalinové chromatografie po stránce schematické a částečně fyzikálněchemické a znalosti základních principů hmotnostní spektrometrie. Zopakovat si metodu kalibrační křivky a přípravu kalibračních roztoků. Zopakovat si zásady statistického vyhodnocení naměřených výsledků. 4
5 Teoretická část Vysokoúčinná kapalinová chromatografie, HPLC (angl. high-performance liquid chromatography) Princip separace Vysokoúčinná kapalinová chromatografie se řadí mezi analytické separační metody a využívá k separaci široké škály analytů. Během analýzy dochází k distribuci analytu mezi mobilní a stacionární fázi. Čas strávený v jedné nebo druhé fázi závisí na afinitě analytu k dané fázi 1. Čím delší čas stráví analyt ve stacionární (tedy nepohyblivé) fázi, tím později je eluován. Látky s nulovou afinitou ke stacionární fázi nejsou v chromatografické koloně zadržovány a jsou eluovány v tzv. mrtvém objemu. Naopak látky s vysokou afinitou vůči stacionární fázi jsou v koloně zadržovány dlouho a v některých případech nejsou z kolony eluovány. Hlavním hnacím mechanismem separačního procesu je opakovaná adsorpce analytu na rozhraní obou fází 23. Jsou využitelné všechny možné mechanismy separace- adsorpce, rozdělování na základě různé rozpustnosti, iontová výměna, molekulově sítový efekt nebo specifické interakce v afinitní chromatografii. Stacionární fáze Stacionární fáze bývá velice často zakotvena na pevném nosiči, který se nachází uvnitř chromatografické kolony. Nosičem bývají křemenné kuličky o průměru řádově v mikrometrech. Obrázek: Různé velikosti částic stacionární fáze 1 Klouda P., Moderní analytické metody, Pavel Klouda, Ostrava, Churáček J. a kol., Analytická separace látek, SNTL, Praha,
6 Obrázek: Částice stacionární fáze kolon Kinetex. Jádro nosiče je tvořeno pevným jádrem, které je pokryto tenkou vrstvičkou porézního křemene, modifikovaného stacionární fází 4. Na povrchu nosiče je na volné silanolové skupiny chemicky navázána stacionární fáze. Nejpoužívanější stacionární fází je oktadecylový zbytek (C18) a částečně i oktylový zbytek (C8). Na rozdíl od polárního povrchu křemenného nosiče (mohou zde disociovat silanolové skupiny), získává povrch nosiče modifikací C18 nebo C8 hydrofobní vlastnosti. Proto je také stacionární fáze C18 (i C8) nazývána reverzní a polární fáze zase normální. Kromě fází C18 a C8 se uplatňují i další druhy stacionárních fází jako jsou například s aminoskupinou (pro separaci sacharidů), fenylem (pro separaci aromatických látek), pentafluorfenylem (PFP) apod. Obrázek: Chemicky rozdílné stacionární fáze V některých případech je využito pevné neporézní jádro nosiče. Tím se zamezí k difúzi analytu do nosiče a sníží se rozmývání zóny analytu v průběhu separace
7 K vysoké separační účinnosti přispívá i homogenní distribuce velikosti částic stacionární fáze a jejich pravidelné uspořádání v chromatografické koloně. Dráha, kterou musí urazit jednotlivé molekuly analytu, je pro všechny molekuly téměř shodná. Mobilní fáze Mobilní fází je zde kapalina, která je kolonou protlačována pomocí vysokotlaké pumpy za vysokého tlaku. Mobilní fází může být voda, vodný roztok anorganické či organické soli, kyseliny, pufr či směs vody/vodného roztoku a/nebo organických rozpouštědel. Ve speciálních případech se přidávají do mobilní fáze modifikátory, například pro chirální separace či micelární chromatografii. Schéma kapalinového chromatografu Kapalinový chromatogram se skládá z těchto částí: - zařízení pro uchování a transport mobilní fáze (vysokotlaké čerpadlo) - zařízení pro dávkování vzorku - zařízení pro separaci látek (chromatografická kolona, termostat kolony) - zařízení pro detekci látek popř. sběrač frakcí 7
8 Hmotnostní spektrometrie Hmotnostní spektrometrie je separační technika, která převádí vzorek na ionizovanou plynnou fázi a vzniklé ionty separuje podle hodnoty podílu jejich hmotnosti a náboje (m/z). Základními kroky v hmotnostní spektrometrii jsou: (převedení vzorku do plynné fáze) ionizace akcelerace iontů do hmotnostního analyzátoru separace iontů hmotnostním filtrem detekce iontů Schéma hmotnostního spektrometru: Převedení vzorku do plynné fáze Hmotnostní detektory umožňují separaci iontů v elektrickém a magnetickém poli. Separace iontů probíhá ve vakuu, proto je nutné, aby před vlastní separací byl analyzovaný vzorek převeden do plynné fáze. V případě spojení hmotnostního detektoru s kapalinovou chromatografií je analyt eluován velkým množstvím kapalné mobilní fáze. Ke spojení mezi kapalinovým chromatografem a hmotnostním detektorem bývá použit nejčastěji elektrosprej či chemická ionizace za atmosférického tlaku. Obě rozhraní kromě převedení vzorku do plynné fáze provádějí i ionizaci. Ionizace elektrosprejem 8
9 Obrázek: Ionizace elektrosprejem 5. Mobilní fáze nebo roztok analytu vstupuje do elektrospreje tenkou vyhřívanou kapilárou. Kolem kapiláry proudí předehřátý dusík, který slouží k odpaření kapaliny. Zároveň probíhá i ionizace. Na kapiláru je vloženo vysoké elektrické napětí. Druhý pól tvoří vstup do analyzátoru hmotnostního detektoru. Vložené napětí přitahuje nabitou kapalinu, která tvoří na konci kapiláry tzv. Taylorův konus. Z něj se postupně utrhávaní nabité kapičky a vzniká nabitý aerosol. Náboj je u kapiček soustředěn na povrchu. Odpařováním rozpouštědla se zmenšuje poloměr kapek, vzrůstá povrchový náboj. Při určité velikosti kapek jsou odpudivé síly nábojů již tak velké, že dochází k roztržení kapek. Od původní kapky se oddělí malá kapička o velikosti asi 5 % původní velikosti. Tomuto procesu říkáme coulombická exploze. Postupně se kapičky zmenšují, až nakonec vzniknou suché ionty. Ty potom vstupují do analyzátoru. Při ionizaci je nutné nastavit teplotu vyhřívání kapiláry a sušícího plynu tak, aby byla dostatečná pro odpaření kapaliny a zároveň nedocházelo k degradaci termolabilních analytů. Zpravidla vznikají jednou nabité ionty, není však vyloučena i tvorba vícenabitých iontů. Analyzátor Ionty vstupují do analyzátoru, kde dochází k jejich rozdělení podle poměru hmotnost/náboj. Jako analyzátor se nejčastěji používá kvadrupólový analyzátor a nebo kvadrupólová iontová past. V našem případě budeme pracovat s kvadrupólovou iontovou pastí
10 Kvadrupólová iontová past Má tři elektrody, z nichž jedna je kruhová a dvě vyklenuté do prostoru kruhu. Tento prostor je místem, ve kterém se shromažďuje oblak iontů. Ionty mohou být v iontové pasti zachovány milisekundy i podstatně déle. Je používán kolizní plyn helium o nízkém tlaku desetin Pa. Helium třením brzdí pohyb iontů a napomáhá jejich semknutí do oblaku v iontové pasti. Změnou nastavení frekvence a amplitudy střídavého napětí jsou ionty odváděny k detektoru. Tento hmotnostní analyzátor je malý, citlivý, snadno automatizovatelný. Má nižší rozlišení, v prostoru pasti hrozí více rušivých reakcí a jeho dynamický rozsah je omezený. Obrázek: Iontová past 6. Detekce iontů Ionty, které se v iontové pasti rozseparují podle poměru m/z, jsou z pasti vypuzeny směrem k detektoru. Detektorem může být například elektronový násobič či Faradayova klec. Při dopadu záporně nabité částice do elektronového násobiče dochází k produkci velkého množství elektronů, které je úměrné počtu dopadlých elektronů. Veličina, která je měřena, je proud elektronů, tj. elektrický proud. Princip Faradayovy klece je založen na zachycení elektrického náboje a jeho následné vybití (změření). Pracuje tedy jako elektrický kondenzátor. Velikost náboje je úměrná počtu zachycených iontů. Kvantita a kvalita Intenzita výstupního signálu odpovídá počtu detekovaných iontů o daném m/z. Jedná se o kvantitativní údaj. Poměr m/z je kvalitativním údajem a je charakteristický pro atomární složení konkrétního iontu a jeho náboj
11 Charakteristika testovaných látek Laboratorní úloha, která je předmětem této opory umožňuje analyzovat syntetická sladidla (Aspartam, Acesulfam-K, Sacharin), ale i další látky, jako jsou například kofein, kyselina sorbová aj. Náhradní sladidla V souvislosti s rozšířeným použitím náhradních sladidel je důležité mít možnost tyto látky analyzovat. Náhradní sladidla, včetně sacharinu, aspartamu a cyklamátu, jsou předmětem sporů o svou zdravotní nezávadnost. Dosavadní výsledky dokazují, že povolené dávkování náhradních sladidel není pro lidský organismus škodlivé. Je však důležité mít na paměti některé negativní účinky těchto látek. Aspartam Racionální název: N-L-α-aspartyl-L-fenylalanin 1-methyl ester Compound Name (CAS): (3S)-3-amino-4-[[(1S)-1-benzyl-2-methoxy-2-oxoethyl]amino]-4-oxobutanoic acid Sumární vzorec: C14H18N2O5 CAS Number: CID: Aspartam je dipeptidem, obsahuje fenylalanin, kyselinu asparagovou a methanol. Fenylalanin a kyselina asparagová mají přímý dopad na mozek a centrální nervový systém. Methanol je metabolizován na formaldehyd. V současné době je zdravotní nezávadnost aspartamu hodnocena úřadem EFSA (European Food Safety Authority) a výsledky budou známy pravděpodobně v listopadu Vzhledem k počtu posuzovaných studií je vydání závěrečné zprávy již více jak 1 rok odkládáno. Patří mezi nejznámější umělá náhradní sladidla. Je asi 200 sladší než sacharosa, bez chuťově výrazných vedlejších pachutí. Jeho dopady na zdraví jsou předmětem sporů a spekulací. Na potravinách bývá označován jako Aspartam, APM nebo E951. Aspartam byl objeven ve společnosti Searle v roce 1965 při výzkumu léku proti vředům. 78 Od přelomu 60. a 70. let firma Searle prováděla testy s perspektivou pro komerční využití. Poprvé byl schválen v roce 1983 americkým Úřadem pro kontrolu léčiv (FDA, Food and Drugs Administration)
12 Aspartam se v současné době používá ve většině light nápojů (např. Coca-Cola Zero, Kofola BEZ cukru), potravin, stolních sladidel, nealkoholických nápojů, zubních past a farmaceutických výrobků. Aspartam je dipeptid, který je složen ze dvou aminokyselin (L-asparagové a L-fenylalaninu) jako metylester, které se běžně vyskytují v bílkovinách v přírodě. Je to bílý krystalický prášek, málo termostabilní, a proto se doporučují jeho kombinace s acesulfamem K. Aspartam se totiž při teplotách nad 196 C 9 rozpadne na výchozí složky, a tím ztratí svou sladkou chuť. Z tohoto důvodu se aspartam sype na moučníky až po upečení. Aspartam obsahuje fenylalanin, nesmějí ho tedy požívat lidé trpící fenylketonurií. Při dlouhém skladování se aspartam postupně rozkládá a ztrácí svou sladivost. Tyto látky můžou být i toxické oddělí se methanolová složka, ovšem ta zcela vytěká. 10 Při teplotě 30 C se rozkládá jen pomalu, při vyšších teplotách rychleji. Například cola uchovávaná při teplotě 40 C obsahuje po 8 10 týdnech jen 40 % původního množství aspartamu. Při zpracování je v těle metabolizován jako bílkovina, přičemž vzniká malé množství toxického metanolu. Aspartam byl předmětem polemik a nepravdivých zpráv již od dob svého schválení americkým úřadem pro potraviny a léčiva (FDA) v roce Kumulativní účinky z přijmu vícero potravin, obsahujících Aspartam, nejsou prozkoumány Acesulfam K Compound Name (CAS): potassium 3-methyl-5,5-dioxo-4-oxa-5$l^{6}-thia-6-azanidacyclohex-2-en-1-one Registrační číslo CAS Sumární vzorec: C 4 H 4 KNO 4 S Vzhled: bílý krystalický prášek (Acesulfam K nebo AceK) je syntetické sladidlo. V členských zemích EU je tato látka označována kódem E950. Acesulfam byl přitom původně objeven náhodně v roce 1967 ve firmě Hoechst AG (nyní Nutrinova). Acesulfam K je přibližně asi 200krát sladší než sacharóza a má mírně nahořklou Perry R. H., Green D. W.: Perry s chemical engineers handbook,
13 pachuť 11. Využívá se hlavně jako náhradní sladidlo v potravinářství (výroba např. minerálních ochucených vod). Akceptovatelný denní příjem (ADI) acesulfamu K je 0 15 mg/kg tělesné hmotnosti 12. Při pokojové teplotě je acesulfam draselný bílá krystalická látka. Acesulfam draselný patří mezi tzv. heterocyklické sloučeniny. Chemicky se jedná o draselnou sůl. Acesulfam K je draselná sůl, možnosti vzniku 5-chlor-acesulfamu, pro které nejsou k dispozici žádné toxikologické údaje. Sacharin Compound Name (CAS): 1,1-dioxo-1,2-benzothiazol-3-one CAS Number: V členských zemích EU je tato látka označována kódem E954. Jedná se o neenergetické náhradní sladidlo, které nalezl roku 1878 chemik Constantin Fahlberg 13, vyráběné z kamenouhelného dehtu. Chutí je asi pětsetkrát sladší než cukr, má však nepříjemný hořký chuťový dojezd. Je vhodným sladidlem pro diabetiky V 19. století byl sacharin pro svou cenu a postavení nedostatkového zboží pašován obyvateli horských oblastí českého pohraničí zejména na hranici s Německem. Sacharin je sladidlo na bázi sulfanilamidu, jeho primární složkou je sulfimid kyseliny benzoové. U pacientů s alergií může sacharin způsobit nevolnost, průjem, kožní problémy, alergie nebo jiné související příznaky. Použití náhradních sladidel v potravinách Požívání sladidel v potravinách je v České republice legislativně ošetřeno Předpisem č. 4/2008 Sb. v platném znění - vyhláškou, která stanoví druhy a podmínky použití přídatných látek a extrakčních rozpouštědel při výrobě potravin. Sladidla povolená při výrobě potravin, potraviny a skupiny potravin, v nichž se mohou vyskytovat, a další podmínky použití sladidel stanoví příloha č. 5 k této vyhlášce. Nejvyšší povolené množství upravené v příloze č. 5 k této vyhlášce je vztaženo na potraviny připravené ke spotřebě podle návodu výrobce. Důležitou součástí této vyhlášky jsou také informace týkající se potravin pro počáteční a pokračovací kojeneckou výživu a výživu malých dětí. Sladidla zmíněná v příloze č. 5 nelze pro tuto věkovou skupinu použít. V roce 2009 byl přidán do výčtu sladidel neotam. Toto nově schválené sladidlo je legislativně ošetřeno ve směrnici komise 2009/163/EU ze dne 22. prosince 2009, kterou se mění směrnice Evropského parlamentu a Rady 94/35/ES o náhradních sladidlech pro použití v potravinách, pokud jde o neotam. V roce 2011 byly jako náhradní sladidlo povoleny stevioglykosidy, sladké glykosidy získávané ze stévie Přehmaty vědy: Diabetiky zachránily nemyté ruce 13
14 KOFEIN Compound Name (CAS): 1,3,7-trimethylpurine-2,6-dione CAS Number: , CID: 2519 Sumární vzorec: C 8 H 10 N 4 O 2 Vzhled: bílý krystalický prášek Kofein se vyskytuje v semenech kávovníku arabského (Coffea arabica). Tyto keře jsou pěstovány v Africe, Jiţní Americe a v Arábii. Nachází se také v čaji (Camellia sinensis) a kolových ořeších (Cola acuminata), tyto ořechy se využívají při výrobě nápojů kola. V čisté formě se jedná o bílý krystalický prášek. Hlavní účinky kofeinu spočívají v blokádě receptorů pro přirozenou látku adenosin. Adenosin je součástí mechanismů, kterými tělo řídí aktivitu tkání. Kofein působí inhibicí enzymu fosfodiesterázy, která rozkládá cyklický adenosinmonofosfát, druhého posla mnoha buněčných aktivačních reakcí 14. Ve většině tkání působí adenosin na uvolnění cév, kofein pak tím, ţe blokuje adenosinové receptory vyvolává kontrakce cév a zvyšuje krevní tlak. Kofein v ledvinách uvolňuje cévy a adenosin cévy stahuje. Při relaxaci se zvyšuje průtok krve ledvinami a zvyšuje se tak tvorba moči. Můžeme tedy říci, že kofein působí jako diuretikum a zpomaluje resorpci sodíku v ledvinových tubulech. Kombinací obou těchto účinků dochází ke zvýšené produkci moči, která obvykle následuje po vypití kávy nebo čaje. Do nealkoholických nápojů se přidává hlavně pro své povzbuzující účinky. Stimuluje mozek, zvyšuje bdělost a snižuje únavu. Je součástí i řady potravních doplňků a volně prodejných léků. Kofein se velmi dobře vstřebává ze zažívacího traktu a maximální koncentrace dosahuje za 1hodinu. Na metabolizmu kofeinu se podílí celá řada enzymů. KONZERVAČNÍ PROSTŘEDKY Seznam konzervantů povolených při výrobě potravin je definován přílohou 6 Vyhlášky č. 4/2008 Sb., kterou se stanoví druhy a podmínky použití přídatných látek a extrakčních rozpouštědel při výrobě potravin 14 Stone T., Darlingtonová G., Léky, drogy, jedy, ACADEMIA, Praha,
15 Kyselina benzoová Funkční vzorec C 6 H 5 COOH CAS Number: Vzhled: bezbarvá až bílá krystalická látka ( za normálních podmínek) V členských zemích EU je tato kyselina označována kódem E210, její sodné soli E211, draselné E212 a vápenaté E213). Jedná se o nejjednodušší aromatickou jednosytná karboxylovou kyselinu. Využívá se jako konzervační prostředek, léčivo proti kožním infekcím a je velice důležitým prekurzorem v organické syntéze. Jako konzervační prostředky se přidávají do nápojů, ovocných výrobků, hořčice, chemicky vykynutého těsta a koření s ph pod 4,5. V přírodě se vyskytuje jak volně tak i ve sloučeninách, hlavně v pryskyřici benzoe a v esterech (tzv. balzámech). Kyselina benzoová se v těle odbourává na kyselinu hippurovou, která je koncovou sloučeninou metabolismu některých xenobiotik a je vylučována močí z těla. Lidské tělo vyloučí denně přibližně 0,44 g/l kyseliny hippurové, avšak pokud je organismus vystaven toluenu nebo benzoové kyselině, může tato hodnota být vyšší. WHO (Světová zdravotnická organizace) stanovila maximální tolerovatelný příjem na 5 mg/kg hmotnosti těla na den. Nežádoucí účinky kyseliny benzoové při nadměrné expozici na tělo mohou vyvolat kopřivku, astma, rinitidu nebo anafylaktický šok. Dle bezpečnostního listu kyseliny benzoové je smrtná dávka LD mg/kg (orálně, potkan), smrtná koncentrace LD 50 > mg/kg (dermálně, králík), LD50 nebo LD 50 je v toxikologii označení pro dávku látky podané testovaným jedincům, která způsobí úhyn 50 % testovaných živočichů do 24 hodin od expozice. Udává se v mg/kg živé hmotnosti 15 Kyselina sorbová Compound Name (CAS): (2E,4E)-hexa-2,4-dienoic acid Sumárníí vzorec: C 6 H 8 O 2 CAS Number: Jan Šimůnek. Mykotoxiny: Slovník výrazů [online] 15
16 Kyselina sorbová v lidském těle snadno metabolizuje a považuje se za nejméně škodlivé konzervační aditivum, neboť během pokusů na zvířatech nebyl prokázán žádný negativní účinek této látky na organismy. Totéž platí i pro její soli sorbany. V dávkách 5 % v potravě dokonce kyselina sorbová způsobovala zrychlený růst a prodloužení doby života krysích samců. To se vysvětlovalo především zvýšeným přísunem kalorií, neboť kyselina sorbová dodává tělu energii a aktivně posiluje tělo před infekcemi. Kyselina sorbová a její soli se rovněž používají jako konzervační látky v kosmetice a farmacii. Díky tomu byly testovány účinky těchto látek na pokožku a ukázalo se, že v koncentraci okolo 1 % způsobují podráždění sliznic, u citlivých lidí vyvolávají kopřivku. V potravinách se tyto látky objevují nejčastěji v koncentraci mezi 0,1 %-0,3 %. V roce 1998 našla ČZPI kyselinu sorbovou i v salátech (vlašský, pařížský, a další), v jemném pečivu a chlebech a to i přesto, že její použití je v těchto výrobcích zakázáno. Mimoto se kyselina sorbová nesmí do salátů přidávat, neboť by mohla maskovat přítomnost bakterií, které způsobují otravy jídla. V České republice je použití kyseliny sorbové povoleno jen pro vybrané druhy potravin. Stejně tak je tomu v USA, kde je kyselina sorbová označována jako GRAS látka (Generally recognized as safe, tj. bezpečná látka nepodléhající regulaci). Dle bezpečnostního listu kyseliny sorbové je smrtná dávka LD mg/kg (orálně, potkan), smrtná koncentrace LD 50 >1.000 mg/kg (dermálně, králík), 16
17 Experimentální část 1) Přístrojové vybavení a software Kapalinový chromatograf Thermo Surveyor automatický dávkovač vzorků Surveyor Autosampler Plus kvartérní pumpy s odplyňovací jednotkou Surveryor MS Pump Plus UV-VIS spektrofotometrický detektor s diodovým polem Surveyor PDA Plus a hmotnostním detektorem LCQ FLEET vybaveného iontovou pastí chromatografická kolona Kinetex 2.6 µm C Å, LC Column 150 x 4.6 mm, Ea minishaker mikropipety + špičky odměrné baňky stříkačky + stříkačkové filtry vialky 1,8 ml K vyhodnocování výsledků je použit program Xcalibur v (Thermo Scientific, San Jose, CA, USA) 2) Materiál Chemikálie: Deionizovaná voda (H2O) Mr= 18, 0153 g/mol Kyselina sorbová Kyselina benzoová Kyselina fosforečná Chinin Kyselina askorbová Kofein (C8H10N4O2) Mr= 194,1933 g/mol Methanol (CH3OH) Mr= 32,042 g/mol Vzorky syntetických sladidel zakoupených v maloobchodní síti 17
18 3) Vlastní stanovení metodou HPLC Na základě dostupných zdrojů byly definovány podmínky stanovení: 18
19 4) Návod na spuštění a vypnutí kapalinového chromatografu 1. Zapnout hlavní vypínač detektoru, čerpadla a autosampleru 2. Připravit mobilní fáze pro chromatografické stanovení: mobilní fáze A 0,1% vodný roztok kyseliny fosforečné a mobilní fáze B: 0,1% kyselina fosforečná v acetonitrilu. (Profil gradientové eluce je uveden v kapitole "Vlastní stanovení metodou HPLC") 3. Spustit PC, program Xcalibur. Instrument setup 4. Zvolit: Surveyor LC Pump > Direct >Control > Operation - spustit čerpadlo (pumpu) 5. Zkontrolovat mobilní fázi, nastavit průtok mobilní fáze k čištění pístů čerpadla 1 ml/min. Otevřít vypouštěcí ventil na pumpě a spustit PURGE. Sledujte, zda pumpa skutečně nasává mobilní fázi. Pokud tomu tak není, na vypouštěcí ventil připojte stříkačku a v počátku nasávání vytvořte podtlak. Čas se volí 0,1 až 9,9 minut. Po dokončení čištění, zkontrolovat odplynění fází (zda-li do pumpy vstupuje mobilní fáze bez bublinek plynu). Uzavřít vypouštěcí ventil. 19
20 6. Zkontrolovat, zda je v chromatografu použita kolona Kinetex 2.6 µm C Å, LC Column 150 x 4.6 mm, Ea a zda je správně zapojena (šipky a nápis Flow odpovídá předepsanému směru průtoku), detekce: UV-Vis Absorpční spektrum (PDA) a detekce při 215 nm (22 C). 7. K odplynění dopravní cesty a autosampleru vybrat příkaz v nastavení Autosampleru FLUSH SYRINGE, zvolit FLUSH BOTLE, nastavit objem a rychlost průtoku, spustit (apply). Po ověření odplynění, zavřít dialogové okno. 8. Připravit sérii vialek se zkoumaným vzorkem, vložit do zásobníku a zásobník vložit do přístroje. Pozice v zásobníku jsou číslovány 1-40, zásobník je možné vložit do pozice A-E. Pozice vialek využijete při tvorbě sekvence. 9. S pomocí vedoucího cvičení naprogramovat sekvenci analýz a spustit sekvenci. Dávkovaný objem vzorku bude 0,001 ml. Pro gradientovou eluci je nutné přesné definování gradientového programu v záložce nastavení čerpadla. Případně využijete program, vytvořený vedoucím cvičení. 10. Pumpa pracuje v pracovním režimu PSI, vzrůstající tlak je doprovázen zvukovou signalizací (v případě ucpání se nejprve vymění předkolony a teprve následně se musí vyměnit i kolona). V případě činnosti čerpadla bez mobilní fáze může dojít poškození těsnění pístu. 11. Po proběhnutí analýz identifikovat píky (retenční čas vzorku) a zjistit množství analyzovaného vzorku odečtením plochy píků. Ty budou použity ke konstrukci kalibrační křivky. 12. Na závěr propláchnout vodou, poté acetonitrilem. Při používání pufrů jako mobilní fáze VŽDY propláchněte systém nejprve vodou. Při použití organického rozpouštědla by došlo k vysrážení solí a k poškození kolony a chromatografu. 13. Vypnout hlavní vypínače detektoru, autosampleru a čerpadla, vyjmout zásobník s vialkami k likvidaci vzorků.. Pozor: Před každým měřením je potřeba zkontrolovat množství odpadu v láhvi a mobilní fázi! 20
21 Obrázek: Chromatogram reálného vzorku Coca-cola Zero RT: NL: 1.30E6 Channel A UV softdrinks uau Time (min) 21
22 Obrázek: Absorpční spektra vybraných píků (včetně retenčních časů) softdrinks02 #1329 RT: 4.43 AV: 1 NL: 1.43E5 microau softdrinks02 #920 RT: 3.06 AV: 1 NL: 1.25E6 microau uau wavelength (nm) uau wavelength (nm) softdrinks02 #2410 RT: 8.03 AV: 1 NL: 2.51E5 microau softdrinks02 #2022 RT: 6.74 AV: 1 NL: 2.02E5 microau uau uau wavelength (nm) wavelength (nm) softdrinks02 #1835 RT: 6.11 AV: 1 NL: 2.21E5 microau softdrinks02 #1525 RT: 5.08 AV: 1 NL: 5.88E5 microau uau uau wavelength (nm) wavelength (nm) softdrinks02 #1437 RT: 4.79 AV: 1 NL: 1.40E6 microau softdrinks02 #1378 RT: 4.59 AV: 1 NL: 6.06E4 microau uau uau wavelength (nm) wavelength (nm) 22
23 Obrázek: 3D chromatogram reálného vzorku Coca-Cola Zero. Chromatogram obsahuje UV/VIS absorpční spektra všech píků. softdrinks02 RT: wavelength: NL: 1.51E6 microau nm uau Time (min)
24 Obrázek: Hmotnostní spektrum kofeinu KOFEIN-APCI # RT: AV: 1358 NL: 2.05E4 T: ITMS + p APCI corona Full ms [ ] KOFEIN-APCI # RT: AV: 1358 NL: 2.05E4 T: ITMS + p APCI corona Full ms [ ] Relative Abundance Relative Abundance m/z m/z 24
25 Obrázek: Fragmentace molekuly kofeinu m/z 195 přechází na m/z 138 KOFEIN-APCI # RT: AV: 94 NL: 3.54E2 T: ITMS + p APCI corona Full ms @cid21.00 [ ] Relative Abundance m/z 25
26 Obrázek: Fragmentace molekulového iontu kofeinu MS3 (m/z 195 na m/z 138 a jeho štěpení) KOFEIN-APCI #5594 RT: AV: 1 NL: 1.28E1 T: ITMS + p APCI corona Full ms @cid @cid25.00 [ ] Relative Abundance m/z 26
27 Obrázek: Fragmentační schéma kofeinu při ionizaci elektronovým zásahem 17. V našem případě jsou m/z o jednotku vyšší. Zatímco u pozitivní ionizace elektronovým zásahem dochází ke vzniku iontu vyražením elektronu, u elektrospreje či chemické ionizace za atmosférického tlaku (APCI) vznikají adukty neutrálních částic s protonem [M+H + ]
28 Zpracování výsledků Metoda kalibrační křivky Připraví se série standardních vzorků, které obsahují postupně rostoucí koncentraci stanovované složky. Standardy se proměří a sestrojí se závislost sledované veličiny na obsahu složky, kdy na svislou osu (y) se vynesou hodnoty signálu S a na osu vodorovnou (x) se vynesou koncentrace c, tj. vynášíme závislost signálu na koncentraci. Nalezené body se proloží regresí. Následně se proměří vzorek a z velikosti naměřené veličiny se určí obsah složky ve vzorku. Směrnice kalibrační křivky udává citlivost metody. Výhodný je i lineární tvar závislosti. Je-li kalibrační křivka nelineární, bývá stanovení zatíženo větší chybou. Dbáme na to, aby bod na kalibrační křivce, který patří vzorku, ležel mezi standardy. Rovnice kalibrační přímky y = k x x konstanta k, směrnice přímky Kvantitativní vyhodnocení chromatogramu Vyhodnocuje se pomocí plochy nebo výšky píku: Plocha a výška píku roste s obsahem složky ve vzorku. Výšku můžeme snadněji změřit, ale je mnohem více ovlivnitelná malými změnami podmínek při průběhu stanovení (vyhodnocení tak není přesné). Hmotnostní detekce Úkolem je ověřit tvorbu molekulového iontu m/z 195 a následně jeho fragmentaci. Připravený roztok bude přímo zaváděn do iontového zdroje ze stříkačky a vzniklé ionty budou detekovány v oblasti kladně nabitých iontů. Po detekci iontu o m/z 195 bude vybrán tento ion a za pomoci dodané energie rozštěpen na fragmenty. Ty budou detekovány a při dostatečné intenzitě jejich signálu štěpeny na další fragmenty. 28
29 Vzor protokolu: Jméno a příjmení: ročník: obor: Datum: Protokol z laboratorní úlohy: Využití kapalinové chromatografie s hmotnostní detekcí pro identifikaci a kvantifikaci látek. Laboratorní teplota: Atmosférický tlak: Navážka testované látky: Vzorek: Množství vzorku: Ředění: Do protokolu se popíše použitý vzorek obsahující zkoumanou látku, jeho množství a ředění. Dále se uvede navážka na kalibrační křivku a jednotlivé kalibrační body včetně hodnot ploch píků. Je nutné zpracovat kalibrační křivku, určit regresní rovnici, hodnotu spolehlivosti R a vypočítat obsah analyzované látky v analyzovaném vzorku. Všechny pokusně zjištěné a vypočítané hodnoty se statisticky zpracují (předpokladem je soubor dat s normálním rozdělením a hladinou významnosti α = 0,05). 29
30 Tento výukový materiál vznikl v rámci projektu CZ.1.07/2.2.00/ Mezioborové vazby a podpora praxe v přírodovědných a technických studijních programech UJEP, spolufinancovaného Evropským sociálním fondem a státním rozpočtem České republiky. 30
STANOVENÍ KOFEINU V NÁPOJÍCH METODOU HPLC
ÚLOHA 10: STANOVENÍ KOFEINU V NÁPOJÍCH METODOU HPLC Příprava: 1. Zopakujte si metodiku kapalinové chromatografie po stránce schematické a částečně fyzikálněchemické. 2. Zopakujte si metodu kalibrační křivky
VíceAnalýza kofeinu v kávě pomocí kapalinové chromatografie
Analýza kofeinu v kávě pomocí kapalinové chromatografie Kofein (obr.1) se jako přírodní alkaloid vyskytuje v mnoha rostlinách (např. fazolích, kakaových bobech, černém čaji apod.) avšak nejvíce je spojován
VíceÚSTAV CHEMIE A ANALÝZY POTRAVIN
VYSOKÁ ŠKOLA CHEMICKO-TECHNOLOGICKÁ V PRAZE ÚSTAV CHEMIE A ANALÝZY POTRAVIN Technická 5, 166 28 Praha 6 tel./fax.: + 420 220 443 185; jana.hajslova@vscht.cz LABORATOŘ Z ANALÝZY POTRAVIN A PŘÍRODNÍCH PRODUKTŮ
VíceLABORATOŘ OBORU I ÚSTAV ORGANICKÉ TECHNOLOGIE (111) Použití GC-MS spektrometrie
LABORATOŘ OBORU I ÚSTAV ORGANICKÉ TECHNOLOGIE (111) C Použití GC-MS spektrometrie Vedoucí práce: Doc. Ing. Petr Kačer, Ph.D., Ing. Kamila Syslová Umístění práce: laboratoř 79 Použití GC-MS spektrometrie
VíceJednotné pracovní postupy zkoušení krmiv STANOVENÍ OBSAHU NEPOVOLENÝCH DOPLŇKOVÝCH LÁTEK METODOU LC-MS
Národní referenční laboratoř Strana 1 STANOVENÍ OBSAHU NEPOVOLENÝCH DOPLŇKOVÝCH LÁTEK METODOU LC-MS 1 Účel a rozsah Tato metoda specifikuje podmínky pro stanovení nepovolených doplňkových látek Zn-bacitracinu,
VíceKlinická a farmaceutická analýza. Petr Kozlík Katedra analytické chemie
Klinická a farmaceutická analýza Petr Kozlík Katedra analytické chemie e-mail: kozlik@natur.cuni.cz http://web.natur.cuni.cz/~kozlik/ 1 Spojení separačních technik s hmotnostní spektrometrem Separační
VíceHMOTNOSTNÍ SPEKTROMETRIE - kvalitativní i kvantitativní detekce v GC a LC - pyrolýzní hmotnostní spektrometrie - analýza polutantů v životním
HMOTNOSTNÍ SPEKTROMETRIE - kvalitativní i kvantitativní detekce v GC a LC - pyrolýzní hmotnostní spektrometrie - analýza polutantů v životním prostředí - farmakokinetické studie - kvantifikace proteinů
VíceChromatografie. Petr Breinek
Chromatografie Petr Breinek Chromatografie-I 2012 Společným znakem všech chromatografických metod je kontinuální dělení složek analyzované směsi mezi dvěma fázemi. Pohyblivá fáze (mobilní), eluent Nepohyblivá
VíceSeparační metody v analytické chemii. Plynová chromatografie (GC) - princip
Plynová chromatografie (GC) - princip Plynová chromatografie (Gas chromatography, zkratka GC) je typ separační metody, kdy se od sebe oddělují složky obsažené ve vzorku a které mohou být převedeny do plynné
VíceJednotné pracovní postupy zkoušení krmiv Vydání 1 STANOVENÍ OBSAHU KOKCIDIOSTATIK METODOU LC-MS
Strana 1 STANOVENÍ OBSAHU KOKCIDIOSTATIK METODOU LC-MS 1 Účel a rozsah Postup specifikuje podmínky pro stanovení diclazurilu, halofuginonu, lasalocidu, maduramicinu, monensinu, narasinu, nikarbazinu, robenidinu,
VíceLABORATOŘ ANALÝZY POTRAVIN A PŘÍRODNÍCH PRODUKTŮ. Stanovení těkavých látek
LABORATOŘ ANALÝZY POTRAVIN A PŘÍRODNÍCH PRODUKTŮ Stanovení těkavých látek (metoda: plynová chromatografie s hmotnostně spektrometrickým detektorem) Garant úlohy: doc. Ing. Jana Pulkrabová, Ph.D. 1 OBSAH
VíceHmotnostní spektrometrie
Hmotnostní spektrometrie Princip: 1. Ze vzorku jsou tvořeny ionty na úrovni molekul, nebo jejich zlomků (fragmentů), nebo až volných atomů dodáváním energie, např. uvolnění atomů ze vzorku nebo přímo rozštěpení
VíceAnalytická technika HPLC-MS/MS a možnosti jejího využití v hygieně
Analytická technika HPLC-MS/MS a možnosti jejího využití v hygieně Šárka Dušková 24. září 2015-61. konzultační den Hodnocení expozice chemickým látkám na pracovištích 1 HPLC-MS/MS HPLC high-performance
VíceJednotné pracovní postupy zkoušení krmiv STANOVENÍ OBSAHU DEKOCHINÁTU METODOU HPLC
Národní referenční laboratoř Strana 1 STANOVENÍ OBSAHU DEKOCHINÁTU METODOU HPLC 1 Rozsah a účel Tato metoda specifikuje podmínky pro stanovení dekochinátu metodou vysokoúčinné kapalinové chromatografie
VíceLABORATOŘ ANALÝZY POTRAVIN A PŘÍRODNÍCH PRODUKTŮ
LABORATOŘ ANALÝZY POTRAVIN A PŘÍRODNÍCH PRODUKTŮ STANOVENÍ POTRAVINOVÝCH ADITIV ( ÉČEK ) POMOCÍ VYSOKOÚČINNÉ CHROMATOGRAFIE VE SPOJENÍ S HMOTNOSTNÍ SPEKTROMETRIÍ (LC-MS) Garant úlohy: Ing. Vojtěch Hrbek
VíceSladidla se můžou dělit dle několika kritérií:
SLADIDLA Sladidla, jiná než přírodní, jsou přídatné látky (označené kódem E), které udělují potravině sladkou chuť. Každé sladidlo má svoji hodnotu sladivosti, která se vyjadřuje poměrem k sacharose (má
VíceLABORATOŘ ANALÝZY POTRAVIN A PŘÍRODNÍCH PRODUKTŮ
LABORATOŘ ANALÝZY POTRAVIN A PŘÍRODNÍCH PRODUKTŮ STANOVENÍ BIOLOGICKY AKTIVNÍCH LÁTEK POMOCÍ VYSOKOÚČINNÉ CHROMATOGRAFIE VE SPOJENÍ S HMOTNOSTNÍ SPEKTROMETRIÍ (LC-MS) Garant úlohy: Ing. Vojtěch Hrbek 1
VíceJednotné pracovní postupy zkoušení krmiv Vydání 1 STANOVENÍ OBSAHU KOKCIDIOSTATIK METODOU LC-MS
Národní referenční laboratoř Strana 1 STANOVENÍ OBSAHU KOKCIDIOSTATIK METODOU LC-MS 1 Účel a rozsah Postup specifikuje podmínky pro stanovení diclazurilu, halofuginonu, lasalocidu, maduramicinu, monensinu,
VíceJednotné pracovní postupy zkoušení krmiv STANOVENÍ OBSAHU SEMDURAMICINU METODOU HPLC
Strana 1 STANOVENÍ OBSAHU SEMDURAMICINU METODOU HPLC 1 Rozsah a účel Postup specifikuje podmínky pro stanovení obsahu semduramicinu v krmivech metodou vysokoúčinné kapalinové chromatografie (HPLC) v koncentračním
VíceHMOTNOSTNÍ SPEKTROMETRIE
HMOTNOSTNÍ SPEKTROMETRIE MASS SPECTROMETRY (MS) Alternativní názvy (spojení s GC, LC, CZE, ITP): Hmotnostně spektrometrický (selektivní) detektor Mass spectrometric (selective) detector (MSD) Spektrometrie
VíceMetody separace. přírodních látek
Metody separace přírodních látek (5) Chromatografie; základní definice a klasifikace ruzných metod; kapalinová chromatografie, plynová chromatografie, přístrojová technika. Chromatografie «F(+)d» 1897
VíceJednotné pracovní postupy zkoušení krmiv STANOVENÍ OBSAHU MELAMINU A KYSELINY KYANUROVÉ METODOU LC-MS
Národní referenční laboratoř Strana 1 STANOVENÍ OBSAHU MELAMINU A KYSELINY KYANUROVÉ METODOU LC-MS 1 Rozsah a účel Postup je určen pro stanovení obsahu melaminu a kyseliny kyanurové v krmivech. 2 Princip
VíceJednotné pracovní postupy zkoušení krmiv STANOVENÍ OBSAHU MADURAMICINU A SEMDURAMICINU METODOU HPLC
Národní referenční laboratoř Strana 1 STANOVENÍ OBSAHU MADURAMICINU A SEMDURAMICINU METODOU HPLC 1 Rozsah a účel Metoda specifikuje podmínky pro stanovení maduramicinu a semduramicinu v krmivech a premixech.
VíceJednotné pracovní postupy zkoušení krmiv STANOVENÍ OBSAHU VITAMÍNU D METODOU LC/MS
Národní referenční laboratoř Strana 1 STANOVENÍ OBSAHU VITAMÍNU D METODOU LC/MS 1 Účel a rozsah Tento postup specifikuje podmínky pro stanovení vitamínu D3 v krmivech metodou LC/MS. 2 Princip Zkušební
VíceHmotnostní spektrometrie. Historie MS. Schéma MS
Hmotnostní spektrometrie MS mass spectrometry MS je analytická technika, která se používá k měření poměru hmotnosti ku náboji (m/z) u iontů původně studium izotopového složení dnes dynamicky se vyvíjející
VíceCS Úřední věstník Evropské unie L 54/89
26.2.2009 CS Úřední věstník Evropské unie L 54/89 c) při vlnové délce mezi 230 a 320 nm se nesmí spektrum vzestupné části, vrcholu a sestupné části píku zkoušeného vzorku lišit od ostatních částí spektra
VíceCRH/NPU I - Systém pro ultraúčinnou kapalinovou chromatografii (UHPLC) ve spojení s tandemovým hmotnostním spektrometrem (MS/MS)
ODŮVODNĚNÍ VEŘEJNÉ ZAKÁZKY v souladu s 156 zákona č. 137/2006, Sb., o veřejných zakázkách, ve znění pozdějších předpisů Nadlimitní veřejná zakázka na dodávky zadávaná v otevřeném řízení v souladu s ust.
VíceDETEKTORY pro kapalinovou chromatografii. Izolační a separační metody, 2018
DETEKTORY pro kapalinovou chromatografii Izolační a separační metody, 2018 Detektory v kapalinové chromatografii Typ detektoru Zkratka Měřená veličina Refraktometrický detektor RID index lomu Spektrofotometrický
VíceL 54/116 CS Úřední věstník Evropské unie
L 54/116 CS Úřední věstník Evropské unie 26.2.2009 8. Výsledky kruhových testů V rámci ES byly provedeny kruhové testy, při nichž až 13 laboratoří zkoušelo čtyři vzorky krmiva pro selata, včetně jednoho
VíceCHROMATOGRAFIE ÚVOD Společný rys působením nemísících fází: jedna fáze je nepohyblivá (stacionární), druhá pohyblivá (mobilní).
CHROMATOGRAFIE ÚOD Existují různé chromatografické metody, viz rozdělení metod níže. Společný rys chromatografických dělení: vzorek jako směs látek - složek se dělí na jednotlivé složky působením dvou
VíceVYUŽITÍ BEZKONTAKTNÍ VODIVOSTNÍ DETEKCE PRO HPLC SEPARACI POLYKARBOXYLÁTOVÝCH DERIVÁTŮ CYKLENU. Anna Hamplová
VYUŽITÍ BEZKOTAKTÍ VODIVOSTÍ DETEKCE PRO HPLC SEPARACI POLYKARBOXYLÁTOVÝCH DERIVÁTŮ CYKLEU Anna Hamplová Univerzita Karlova v Praze, Přírodovědecká fakulta, Katedra analytické chemie Albertov 6, 128 43
VíceJednotné pracovní postupy zkoušení krmiv STANOVENÍ OBSAHU MYKOTOXINŮ METODOU LC-MS - FUMONISIN B 1 A B 2
Národní referenční laboratoř Strana 1 STANOVENÍ OBSAHU MYKOTOXINŮ METODOU LC-MS - FUMONISIN B 1 A B 2 1 Rozsah a účel Metoda je vhodná pro stanovení fumonisinů B 1 a B 2 v krmivech. 2 Princip Fumonisiny
VíceHMOTNOSTNÍ SPEKTROMETRIE
HMOTNOSTNÍ SPEKTROMETRIE A MOŽNOSTI JEJÍHO SPOJENÍ SE SEPARAČNÍMI METODAMI SEPARACE chromatografie CGC, GC x GC HPLC, UPLC, UHPLC, CHIP-LC elektromigrační m. CZE, CITP INTERFACE SPOJENÍ x ROZHRANÍ GC vyhřívaná
VíceVysokoúčinná kapalinová chromatografie High-Performance Liquid Chromatography (HPLC) Příprava předmětu byla podpořena projektem OPPA č. CZ.2.17/3.1.00/33253 Kapalinová chromatografie (LC) 1.1. Teorie kapalinové
VíceSuperkritická fluidní extrakce (SFE) Superkritická fluidní extrakce
Superkritická fluidní extrakce (zkráceně SFE, z angl. Supercritical Fluid Extraction) = extrakce, kde extrakčním činidlem je tekutina v superkritickém stavu, tzv. superkritická (nadkritická) tekutina (zkráceně
VícePrincipy chromatografie v analýze potravin
Principy chromatografie v analýze potravin živočišného původu p Ivana Borkovcová Ústav hygieny a technologie mléka FVHE VFU Brno, borkovcovai@vfu.cz Úvod, základní pojmy chromatografické systémy dělení
VícePřímá analýza reálných vzorků hmotnostní spektrometrií s využitím nanodesorpčního elektrospreje (nano-desi-ms)
Přímá analýza reálných vzorků hmotnostní spektrometrií s využitím nanodesorpčního elektrospreje (nano-desi-ms) Teorie: Desorpční elektrosprej (DESI) byl popsán v roce 2004 Zoltánem Takátsem. Jedná se o
VícePříprava materiálu byla podpořena projektem OPPA č. CZ.2.17/3.1.00/33253
Příprava materiálu byla podpořena projektem OPPA č. CZ.2.17/3.1.00/33253 Část 16 Iontová chromatografie Iontová chromatografie je speciální technika vyvinutá pro separaci anorganických iontů a organických
VícePřímá analýza reálných vzorků hmotnostní spektrometrií s využitím nanodesorpčního elektrospreje (nano-desi-ms)
Přímá analýza reálných vzorků hmotnostní spektrometrií s využitím nanodesorpčního elektrospreje (nano-desi-ms) Teorie: Desorpční elektrosprej (DESI) byl popsán v roce 2004 Zoltánem Takátsem. Jedná se o
VíceStanovení sacharidů ve vybraných přírodních matricích pomocí kapalinové chromatografie s odpařovacím detektorem rozptylu světla (HPLC-ELSD)
Stanovení sacharidů ve vybraných přírodních matricích pomocí kapalinové chromatografie s odpařovacím detektorem rozptylu světla (HPLC-ELSD) A) Ultrazvuková extrakce Ultrazvuková extrakce je významnou extrakční
VíceVysokoúčinná kapalinová chromatografie. Petr Kozlík Katedra analytické chemie
Vysokoúčinná kapalinová chromatografie Petr Kozlík Katedra analytické chemie e-mail: kozlik@natur.cuni.cz http://web.natur.cuni.cz/~kozlik/ 1 Vysokoúčinná kapalinová chromatografie Teorie HPLC Praktické
VíceTrendy v moderní HPLC
Trendy v moderní HPLC Josef Cvačka, 5.1.2011 CHROMATOGRAFIE NA ČIPECH Miniaturizace separačních systémů Mikrofluidní čipy Mikrofabrikace Chromatografické mikrofluidní čipy s MS detekcí Praktické využití
VíceProblémy v kapalinové chromatografii. Troubleshooting
Problémy v kapalinové chromatografii Troubleshooting Problémy v HPLC Většinu problémů, které se vyskytují při separaci látek na chromatografické koloně můžeme vyčíst již z pouhého průběhu základní linie,
VíceJednotné pracovní postupy zkoušení krmiv STANOVENÍ OBSAHU MYKOTOXINŮ METODOU HPLC - OCHRATOXIN A
Národní referenční laboratoř Strana 1 STANOVENÍ OBSAHU MYKOTOXINŮ METODOU HPLC - OCHRATOXIN A 1 Rozsah a účel Metoda specifikuje podmínky pro stanovení ochratoxinu A v krmivech. 1 Ochratoxin A patří mezi
VíceVysokoúčinná kapalinová chromatografie
Vysokoúčinná kapalinová chromatografie HPLC High Performance Liquid Chromatography Vysokoúčinná...X... Vysoceúčinná kapalinová chromatografie RRLC Rapid Resolution Liquid Chromatography Rychle rozlišovací
VíceAspartam riziko nežádoucích účinků
Aspartam riziko nežádoucích účinků Přednášky pro VŠCHT Lubomír Kužela Aspartam obecné údaje Sladivost sacharóza 200 x více než sacharóza Toxikokinetika Negativní efekt hydrolyzován ve střevě absorbován
VíceHmotnostní spektrometrie - Mass Spectrometry (MS)
Hmotnostní spektrometrie - Mass Spectrometry (MS) Další pojem: Hmotnostně spektrometrický (selektivní) detektor - Mass spectrometric (selective) detector (MSD) Spektrometrie - metoda založená na interakci
VíceLABORATOŘ ANALÝZY POTRAVIN A PŘÍRODNÍCH PRODUKTŮ
LABORATOŘ ANALÝZY POTRAVIN A PŘÍRODNÍCH PRODUKTŮ STANOVENÍ SACHARIDŮ METODOU VYSOKOÚČINNÉ CHROMATOGRAFIE VE SPOJENÍ S DETEKTOREM EVAPORATIVE LIGHT SCATTERING (HPLC-ELSD) 1 Základní požadované znalosti
VíceINTERPRETACE HMOTNOSTNÍCH SPEKTER
INTERPRETACE HMOTNOSTNÍCH SPEKTER Hmotnostní spektrometrie hmotnostní spektrometrie = fyzikálně chemická metoda založená na rozdělení hmotnosti iontů v plynné fázi podle jejich poměru hmotnosti a náboje
VíceJednotné pracovní postupy zkoušení krmiv Stanovení obsahu celkového a volného tryptofanu metodou HPLC
Strana 1 STANOVENÍ OBSAHU CELKOVÉHO A VOLNÉHO TRYPTOFANU METODOU HPLC 1 Rozsah a účel Metoda specifikuje podmínky pro stanovení obsahu celkového a volného tryptofanu v krmivech metodou vysokoúčinné kapalinové
VíceSTANOVENÍ AZOBARVIV VE SMĚSI METODOU RP-HPLC SE SPEKTROFOTOMETRICKOU DETEKCÍ
STANOVENÍ AZOBARVIV VE SMĚSI METODOU RP-HPLC SE SPEKTROFOTOMETRICKOU DETEKCÍ 1 Úkol Separovat a metodou kalibrační křivky stanovit azobarviva (methyloranž - MO, dimethylová žluť - DMŽ) ve směsi metodou
VíceIng. Jan Pivoňka, Ph.D. Vysoká škola chemicko-technologická v Praze
Ing. Jan Pivoňka, Ph.D. Vysoká škola chemicko-technologická v Praze Větší sladivost Nižší energetická hodnota Samotná konzumace potravin se sladidly však obvykle nevede ke snižování hmotnosti Omezení kazivosti
VíceVýukový materiál v rámci projektu OPVK 1.5 Peníze středním školám
VY_ Y_52_INOVACE_ 2_INOVACE_ZBP1_5464VAL4VAL Výukový materiál v rámci projektu OPVK 1.5 Peníze středním školám Číslo projektu: CZ.1.07/1.5.00/34.0883 Název projektu: Rozvoj vzdělanosti Číslo šablony: V/2
VíceStudijní materiál HMF_1 1. Hydroxymethylfurfural a jeho stanovení v potravinách 2. Kapalinová chromatografie (HPLC, UPLC)
Studijní materiál HMF_1 1. Hydroxymethylfurfural a jeho stanovení v potravinách 2. Kapalinová chromatografie (HPLC, UPLC) V Brně dne 20. 11. 2011 Vypracoval: RNDr. Ivana Borkovcová, Ph.D. 1. Hydroxymethylfurfural
VíceDiagnostika bronchiálního. ho astmatu HPLC/MS analýzou. Kamila Syslová Ústav organické technologie
Diagnostika bronchiálního ho astmatu HPLC/MS analýzou Kamila Syslová Ústav organické technologie Bronchiální astma Civilizační onemocnění rostoucí počet případů snižující se věková hranice prvních projevů
VíceJednotné pracovní postupy zkoušení krmiv STANOVENÍ OBSAHU MYKOTOXINŮ METODOU LC-MS - aflatoxin B1, B2, G1 a G2
Národní referenční laboratoř Strana 1 STANOVENÍ OBSAHU MYKOTOXINŮ METODOU LC-MS - aflatoxin B1, B2, G1 a G2 1 Rozsah a účel Metoda je vhodná pro stanovení aflatoxinů B1, B2, G1 a G2 v krmivech. 2 Princip
VíceLABORATOŘ ANALÝZY POTRAVIN A PŘÍRODNÍCH PRODUKTŮ. Stanovení těkavých látek
LABORATOŘ ANALÝZY POTRAVIN A PŘÍRODNÍCH PRODUKTŮ Stanovení těkavých látek (metoda: plynová chromatografie s hmotnostně spektrometrickým detektorem) Garant úlohy: Ing. Jaromír Hradecký, Ph.D. 1 OBSAH Základní
VíceLABORATOŘ OBORU. Hydrogenace na heterogenizovaných katalyzátorech. Umístění práce:
LABORATOŘ OBORU F Hydrogenace na heterogenizovaných katalyzátorech Vedoucí práce: Umístění práce: Ing. Maria Kotova F07, F08 1 ÚVOD Hydrogenace je uplatňována v nejrůznějších odvětvích chemických výrob.
VíceHmotnostní spektrometrie
Hmotnostní spektrometrie Podstatou hmotnostní spektrometrie je studium iontů v plynném stavu. Tato metoda v sobě zahrnuje tři hlavní části:! generování iontů sledovaných atomů nebo molekul! separace iontů
VícePrůtokové metody (Kontinuální měření v proudu kapaliny)
Průtokové metody (Kontinuální měření v proudu kapaliny) 1. Přímé měření: analyzovaná kapalina většinou odvětvena + vhodný detektor 2. Kapalinová chromatografie (HPLC) Stanovení po předchozí separaci 3.
VíceSKUPINOVÁ ANALÝZA MOTOROVÝCH NAFT
VYSOKÁ ŠKOLA CHEMICKO-TECHNOLOGICKÁ V PRAZE Fakulta technologie ochrany prostředí Ústav technologie ropy a alternativních paliv SKUPINOVÁ ANALÝZA MOTOROVÝCH NAFT Laboratorní cvičení ÚVOD Snižování emisí
VíceMETODY ČIŠTĚNÍ ORGANICKÝCH LÁTEK
METODY ČIŠTĚNÍ ORGANICKÝCH LÁTEK Chemické sloučeniny se připravují z jiných chemických sloučenin. Tento děj se nazývá chemická reakce, kdy z výchozích látek (reaktantů) vznikají nové látky (produkty).
VíceLABORATOŘE OBORU I ÚSTAV ORGANICKÉ TECHNOLOGIE
LABORATOŘE OBORU I ÚSTAV ORGANICKÉ TECHNOLOGIE (111) Z Technologie prekurzorů léčiv onkologických onemocnění Vedoucí práce: Ing. Jan Svoboda Umístění práce: AS58 1 1 ÚVOD Platinová cytostatika tvoří nejvýznamnější
VíceÚvod k biochemickému. mu praktiku. Vladimíra Kvasnicová
Úvod k biochemickému mu praktiku Vladimíra Kvasnicová organizace praktik pravidla bezpečné práce v laboratoři laboratorní vybavení práce s automatickou pipetou návody: viz. aplikace Výuka automatická pipeta
VíceHPLC/MS tělních tekutin nový rozměr v medicinální diagnostice
HPLC/MS tělních tekutin nový rozměr v medicinální diagnostice Lukáš Chytil Ústav organické technologie VŠCHT Praha Medicinální diagnostika a hmotnostní spektrometrie Medicinální diagnostika: - Klasické
VíceVYUŽITÍ TEPELNÉHO ZMLŽOVAČE V AAS
1 VYUŽITÍ TEPELNÉHO ZMLŽOVAČE V AAS JAN KNÁPEK Katedra analytické chemie, Přírodovědecká fakulta MU, Kotlářská 2, Brno 611 37 Obsah 1. Úvod 2. Tepelný zmlžovač 2.1 Princip 2.2 Konstrukce 2.3 Optimalizace
VíceHmotnostní detekce v separačních metodách
Hmotnostní detekce v separačních metodách MC230P83 2/1 Z+Zk 4 kredity doc. RNDr. Josef Cvačka, Ph.D. Mgr. Martin Hubálek, Ph.D. Ústav organické chemie a biochemie AVČR, v.v.i. Flemingovo nám. 2, 166 10
VíceSeparační metody v analytické chemii. Kapalinová chromatografie (LC) - princip
Kapalinová chromatografie (LC) - princip Kapalinová chromatografie (Liquid chromatography, zkratka LC) je typ separační metody, založené na rozdílné distribuci dělených látek ve směsi mezi dvě různé nemísitelné
VíceÚSTAV ORGANICKÉ TECHNOLOGIE
LABORATOŘ OBORU I ÚSTAV ORGANICKÉ TECHNOLOGIE (111) F Imobilizace na alumosilikátové materiály Vedoucí práce: Ing. Eliška Leitmannová, Ph.D. Umístění práce: laboratoř F07, F08 1 Úvod Imobilizace aktivních
VíceVyužití faktorového plánování v oblasti chemických specialit
LABORATOŘ OBORU I T Využití faktorového plánování v oblasti chemických specialit Vedoucí práce: Ing. Eliška Vyskočilová, Ph.D. Umístění práce: FO7 1 ÚVOD Faktorové plánování je optimalizační metoda, hojně
VíceAplikační rozsah chromatografie
Chromatografické metody II. Aplikační rozsah chromatografie Chromatografie Kapalinová chromatografie rozdělení Nízkotlaká (atmosferický tlak) LPC Střednětlaká (4 Mpa) FPLC Vysokotlaká (40 Mpa) HPLC Ultravysokotlaká
VíceDerivační spektrofotometrie a rozklad absorpčního spektra
Derivační spektrofotometrie a rozklad absorpčního spektra Teorie: Derivační spektrofotometrie, využívající derivace absorpční křivky, je obecně používanou metodou pro zvýraznění detailů průběhu záznamu,
VíceVYSOKOÚČINNÁ KAPALINOVÁ CHROMATOGRAFIE ZADÁNÍ ÚLOHY
VYSOKOÚČINNÁ KAPALINOVÁ CHOMATOGAFIE ZADÁNÍ ÚLOHY Metodou vysokoúčinné kapalinové chromatografie separujte směs s-triazinových herbicidů, sledujte vliv složení mobilní fáze na separaci. Proveďte kvalitativní
VíceKurz 1 Úvod k biochemickému praktiku
Kurz 1 Úvod k biochemickému praktiku Pavla Balínová http://vyuka.lf3.cuni.cz/ Důležité informace Kroužkový asistent: RNDr. Pavla Balínová e-mailová adresa: pavla.balinova@lf3.cuni.cz místnost: 410 studijní
VíceJednotné pracovní postupy zkoušení krmiv STANOVENÍ OBSAHU SELENU METODOU ICP-OES
Strana 1 STANOVENÍ OBSAHU SELENU METODOU ICP-OES 1 Rozsah a účel Postup specifikuje podmínky pro stanovení celkového obsahu selenu v minerálních krmivech a premixech metodou optické emisní spektrometrie
VíceSPE je metoda vhodná pro rychlou přípravu vzorků, která užívá
Extrakce na pevné fázi (SPE) Příprava předmětu byla podpořena projektem OPPA č. CZ.2.17/3.1.00/33253 Extrakce na pevné fázi (SPE) (Solid Phase Extraction) SPE je metoda vhodná pro rychlou přípravu vzorků,
VíceÚvod k biochemickému praktiku. Pavel Jirásek
Úvod k biochemickému praktiku Pavel Jirásek Úvodní informace 4 praktika B1 B2 B3 B4 4 týdny 8 pracovních stolů rozdělení kruhu do 8 pracovních skupin (v každé 2-3 studenti) Co s sebou na praktika plášť
VíceStanovení fenolických látek pomocí kapalinové chromatografie
Stanovení fenolických látek pomocí kapalinové chromatografie A) Princip extrakce podle Randalla Extrakci provádíme ve třech krocích: 1. Vaření V první fázi je extrakční prst obsahující vzorek ponořen do
VíceIontové zdroje II. Iontový zdroj. Data. Vzorek. Hmotnostní analyzátor. Zdroj vakua. Iontové zdroje pracující za sníženého tlaku
Iontové zdroje II. Iontové zdroje pracující za sníženého tlaku Elektronová/chemická ionizace Iontové zdroje pro spojení s planárními separacemi Ionizace laserem za účasti matrice Ambientní ionizační techniky
VíceChromatografie. Petr Breinek. Chromatografie_2011 1
Chromatografie Petr Breinek Chromatografie_2011 1 Společným znakem všech chromatografických metod je kontinuální rozdělování složek analyzované směsi vzorku mezi dvěma fázemi. Nepohyblivá fáze (stacionární
VíceStanovení celkové kyselosti nápojů potenciometrickou titrací
Stanovení celkové kyselosti nápojů potenciometrickou titrací Princip metody U acidobazických titrací se využívají dva druhy indikace bodu ekvivalence - vizuální a instrumentální. K vizuální indikaci bodu
VíceHYDROXYLOVÉ SLOUČENINY KYSLÍKATÉ DERIVÁTY UHLOVODÍKŮ
VY_52_INOVACE_08_II.2.2 _HYDROXYLOVÉ SLOUČENINY HYDROXYLOVÉ SLOUČENINY KYSLÍKATÉ DERIVÁTY UHLOVODÍKŮ NOVÉ UČIVO KYSLÍKATÉ DERIVÁTY UHLOVODÍKŮ HYDROXYLOVÉ SLOUČENINY 9. TŘÍDA KYSLÍKATÉ DERIVÁTY UHLOVODÍKŮ
VíceZáklady fotometrie, využití v klinické biochemii
Základy fotometrie, využití v klinické biochemii Základní vztahy ve fotometrii transmitance (propustnost): T = I / I 0 absorbance: A = log (I 0 / I) = log (1 / T) = log T Lambertův-Beerův zákon A l = e
VíceL 54/80 CS Úřední věstník Evropské unie
L 54/80 CS Úřední věstník Evropské unie 26.2.2009 7.1.2 Detektor diodového pole Výsledky jsou posuzovány podle následujících kritérií: a) při vlnové délce maximální absorpce vzorku i standardu musí být
VíceUNIVERZITA KARLOVA V PRAZE FARMACEUTICKÁ FAKULTA V HRADCI KRÁLOVÉ RIGORÓZNÍ PRÁCE
UNIVERZITA KARLOVA V PRAZE FARMACEUTICKÁ FAKULTA V HRADCI KRÁLOVÉ KATEDRA FARMACEUTICKÉ CHEMIE A KONTROLY LÉČIV RIGORÓZNÍ PRÁCE HPLC stanovení obsahu amlodipinu a perindoprilu v kombinovaném léčivém přípravku
VíceKapalinová chromatografie ve spojení s hmotnostní detekcí ( LC-MS )
Úloha do laboratorního cvičení - Speciální metody Kapalinová chromatografie ve spojení s hmotnostní detekcí ( LC-MS ) Analýza bílého vína: stanovení organických kyselin Teoretická část úlohy: Chemické
VíceOrganická chemie 3.ročník studijního oboru - kosmetické služby.
Organická chemie 3.ročník studijního oboru - kosmetické služby. T-7 Funkční a substituční deriváty karboxylových kyselin Zpracováno v rámci projektu Zlepšení podmínek ke vzdělávání Registrační číslo projektu:
Více06. Plynová chromatografie (GC)
06. Plynová chromatografie (GC) Plynová chromatografie je analytická a separační metoda, která má výsadní postavení v analýze těkavých látek. Mezi hlavní výhody této techniky patří jednoduché a rychlé
Více[ A] 7. KAPITOLA CHROMATOGRAFIE K =
7. KAPITOLA CHROMATOGRAFIE Chromatografie je primární separační metoda, při níž se využívá mnohokrát opakované ustanovení rovnováhy mezi dvěma nemísitelnými fázemi. Jedná se o mnohostrannou techniku, která
VíceSpojení hmotové spektrometrie se separačními metodami
Spojení hmotové spektrometrie se separačními metodami RNDr. Radomír Čabala, Dr. Katedra analytické chemie Přírodovědecká fakulta Univerzita Karlova Praha Spojení hmotové spektrometrie se separačními metodami
VíceJednotné pracovní postupy zkoušení krmiv STANOVENÍ OBSAHU VITAMÍNU A A VITAMÍNU E METODOU HPLC
Národní referenční laboratoř Strana 1 STANOVENÍ OBSAHU VITAMÍNU A A VITAMÍNU E METODOU HPLC 1 Účel a rozsah Postup specifikuje podmínky pro stanovení vitamínu A a vitamínu E v krmivech a premixech. 2 Princip
VíceHmotnostní detekce biologicky významných sloučenin pro biotechnologie část 3 - Provedení štěpení proteinů a následné analýzy,
Laboratoř Metalomiky a Nanotechnologií Hmotnostní detekce biologicky významných sloučenin pro biotechnologie část 3 - Provedení štěpení proteinů a následné analýzy, vyhodnocení výsledků, diskuse Anotace
VíceAutomatická potenciometrická titrace Klinická a toxikologická analýza Chemie životního prostředí Geologické obory
Automatická potenciometrická titrace Klinická a toxikologická analýza Chemie životního prostředí Geologické obory Titrace je spolehlivý a celkem nenáročný postup, jak zjistit koncentraci analytu, její
VíceDĚLÍCÍ METODY. Autor: Mgr. Stanislava Bubíková. Datum (období) tvorby: 28. 5. 2012. Ročník: osmý. Vzdělávací oblast: Člověk a příroda / Chemie / Směsi
Autor: Mgr. Stanislava Bubíková DĚLÍCÍ METODY Datum (období) tvorby: 28. 5. 2012 Ročník: osmý Vzdělávací oblast: Člověk a příroda / Chemie / Směsi 1 Anotace: Žáci se seznámí s nejčastěji používanými separačními
VíceDigitální učební materiál
Digitální učební materiál Projekt CZ.1.07/1.5.00/34.0387 Krok za krokem Šablona III/2 Inovace a zkvalitnění výuky prostřednictvím ICT (DUM) Tématická Cukr a ostatní sladidla Společná pro celou sadu oblast
VíceEvropský sociální fond Praha & EU: Investujeme do vaší budoucnosti ELEKTROMIGRAČNÍ METODY
Evropský sociální fond Praha & EU: Investujeme do vaší budoucnosti ELEKTROMIGRAČNÍ METODY ELEKTROFORÉZA K čemu to je? kritérium čistoty preparátu stanovení molekulové hmotnosti makromolekul stanovení izoelektrického
Více