PP162JAA 2008/01 ÚÈEL POUŽITÍ

Transkript

1 ÚÈEL POUŽITÍ Kultivaèní lahvièky BACTEC Myco/F Lytic Živná pùda Middlebrook 7H9 s pøídavkem a infúzní živná pùda z mozkové a srdeèní tkánì Pro použití s fluorescenčními přístroji řady BACTEC PP162JAA 2008/01 Cìsky Kultivační medium BACTEC Myco/F Lytic je při použití s fluorescenčními přístroji řady BACTEC neselektivní kultivační médium, které má být používáno jako přídavek do aerobních krevních kultivačních médií pro průkaz mykobakterií, kvasinek a plísní v krvi. Toto médium lze také použít ke kultivaci sterilních tělních tekutin při podezření na výskyt kvasinek nebo plísní. SHRNUTÍ A VYSVĚTLENÍ Od poloviny 80. let, kdy se zvýšil poèet pacientù s imunologickým postižením, vzrostl výskyt septikémie zpùsobené oportunistickými patogeny, jako jsou kvasinky, houby a mykobakterie. Na závažnosti opìt nabyl kmen Mycobacterium tuberculosis (MTB) i další, netuberkulózní kmeny mykobakterií (MOTT), zejména komplex Mycobacterium avium (MAC). Od roku 1985 do roku 1992 vzrostl poèet pøípadù MTB o 18 %. V letech sledování pøípadù AIDS ukázalo, že 5,5 % pacientù s AIDS šíøilo netuberkulózní mykobakteriální infekce, napøíklad MAC. Do roku 1990 pøibylo pøípadù netuberkulózní mykobakteriální infekce a jejich výskyt procentuálnì vzrostl na 7,6 %. 1 Bylo zjištìno, že výskyt fungémie od poèátku 80. let stále vzrùstá. Proto vzrùstá i potøeba klinických laboratoøí, které by mohly fungémii a mykobakterémii výkonnì diagnostikovat. Americká centra pro kontrolu a prevenci nemoci (CDC) doporuèila vynaložit maximální úsilí, aby laboratoøe mohly využívat nejrychlejší metody, které jsou v rámci diagnostického testování mykobakterií dostupné. K tìmto doporuèením patøi používání tekutého média ke kultivaci mykobakterií. 2-4 Fluorescenční přístroje řady BACTEC jsou určeny k rychlému zjištění mikroorganismů v klinických vzorcích. Kultivaèní médium BACTEC Myco/F Lytic je živná pùda Middlebrook 7H9 s pøídavkem a infúzní živná pùda z mozkové a srdeèní tkánì urèená k prokazování mykobakterií v krevních vzorcích a kvasinek a hub v krvi a sterilních tìlních tekutinách. Pro lepší množení a prokazování mykobakterií, kvasinek a hub jsme provedli nìkteré zmìny. Tyto zmìny zahrnují citrát železito-amonný jako zdroj železa pro specifické kmeny mykobakterií a hub, pøídavek saponinu, který hemolyzuje krev, a pøídavek specifických proteinù a cukrù pro lepší výživu. Každá lahvièka obsahuje senzor schopný detekovat pokles koncentrace rozpuštìného kyslíku v lahvièce, zpùsobený metabolickými pochody a množením mikroorganismù. Fluorescenční přístroj řady BACTEC monitoruje senzor zjišťující vzestup fluorescence, která je úměrná snižujícímu se obsahu rozpuštěného kyslíku. Pozitivní odeèet znamená, že se v lahvièce pravdìpodobnì nacházejí životaschopné mikroorganismy. ZÁSADY POSTUPU Kultivaèní lahvièka BACTEC Myco/F Lytic je urèena k rychlé detekci mykobakterií v krvi a kvasinek a hub v krvi a sterilních tìlních tekutinách. Vzorky se inokulují do lahvièky BACTEC Myco/F Lytic buï pomocí støíkaèky, nebo pøímým prùtokem s použitím jehly a trubièky. Lahvička je umístěna do fluorescenčního přístroje řady BACTEC a je kontinuálně protřepávána a inkubována při 35 C, aby byl zajištěn průkaz v maximálním rozsahu. Doba testování trvá dle protokolu 42 dní. Doporuèený testovací protokol trvá pro kvasinky 7 dní, pro houby 30 dní a pro mykobakterie 42 dní. Každá lahvièka obsahuje senzor schopný detekovat pokles koncentrace rozpuštìného kyslíku v lahvièce, zpùsobený metabolickými pochody a množením mikroorganismù. Senzor je každých deset minut monitorován fluorescenčním přístrojem řady BACTEC. Analýza stupnì poklesu koncentrace kyslíku, který je indikován zvýšením flurorescence, umožòuje fluorescenèní sérii systému BACTEC urèit, zda je lahvièka pozitivní. Pozitivní odeèet znamená, že se v lahvièce pravdìpodobnì nacházejí životaschopné mikroorganismy. Urèení je omezeno na mikroorganismy, které se v médiu množí pøi teplotì 35 C. Toto médium není selektivní a umožòuje množení i jiných aerobních organismù vèetnì bakterií, které mohou v pøípadì výskytu ovlivnit prokazování pomaleji rostoucích mykobakterií, kvasinek a hub. Kultivaèní lahvièky, které zùstanou negativní i po dokonèení protokolu a nevykazují žádný viditelný znak pozitivity, z pøístroje odstraòte a pøed vyhozením sterilizujte. REAGENTY Každá kultivaèní lahvièka BACTEC Myco/F Lytic obsahuje pøed zpracováním následující aktivní složky: Seznam složek Destilovaná voda...40 ml qs Základní živná pùda 7H9 Middlebrook bez fosfátových solí...0,12 % hmotnost/obj. Infúze mozkové a srdeèní tkánì...0,5 % hmotnost/obj. Hydrolyzát kaseinu...0,10 % hmotnost/obj. Pøídavek H...0,10 % hmotnost/obj. Inositol...0,05 % hmotnost/obj. Glycerol...0,10 % hmotnost/obj. Polyanetanolsulfanát sodný...0,025 % hmotnost/obj. Polysorbát ,0025 % hmotnost/obj. Pyridoxal HCl...0,0001 % hmotnost/obj. Citrát železito-amonný...0,006 % hmotnost/obj. Fosforeènan draselný...0,024 % hmotnost/obj. Saponin...0,24 % hmotnost/obj. Odpìòovaè...0,01 % hmotnost/obj. Složení mohlo být upraveno tak, aby vyhovovalo urèitým provozním požadavkùm. Toto médium BACTEC je nasyceno CO 2 a O 2. Médium BACTEC Myco/F Lytic nevyžaduje žádné další pøídavky. Každá lahvièka BACTEC Myco/F Lytic s obsahem 40 ml je pøipravena k použití ihned po dodání. Médium by po pøijetí mìlo být na pohled èiré a jeho barva by mìla být svìtle oranžová. Varování a bezpečnostní opatření Pro diagnostiku in vitro. Tento produkt obsahuje suchou přírodní pryž. V klinických vzorcích se mohou nacházet patogenní mikroorganismy včetně virů hepatitidy a virů lidské imunodeficience (HIV). Proto při práci s veškerým materiálem kontaminovaným krví a jinými tělními tekutinami dodržujte Standardní bezpečnostní opatření 5-8 a předpisy své instituce. Pokud hodláte prokazovat mykobakterie, pokyny CDC-NIH dùraznì doporuèují, aby byl testovací pøístroj umístìn v mykobakteriální laboratoøi, kde lze zabránit dalším bezpeènostním rizikùm, jež se mohou pøi prokazování mykobakterií vyskytnout. 9

2 Lahvièky BACTEC Myco/F Lytic pojmou i vìtší než doporuèený maximální objem vzorku (5 ml), objem naplnìní je však poté tøeba sledovat a vyznaèit. Naplnìný objem sledujte a zaznamenávejte. Pro èinnosti související s množením kmenù Mycobacterium tuberculosis a Mycobacterium bovis a manipulací s nimi se doporuèují postupy a vybavení 3. stupnì biologické bezpeènosti. 9 Pøed použitím každou lahvièku prohlédnìte a zjistìte, zda se na ní nevyskytují známky kontaminace, napøíklad zakalení, vypouklá místa èi stlaèená zátka, nebo zda u ní nedochází k prosakování. Lahvièky se známkami kontaminace, prosakování nebo poškození NEPOUŽÍVEJTE. Kontaminace lahvièky nemusí být zøejmá na první pohled. V kontaminované lahvièce mùže být pøetlak. Pokud k pøímému odbìru použijete kontaminovanou lahvièku, mùže dojít ke zpìtnému prùtoku plynu nebo kontaminovaného kultivaèního média do pacientovy žíly. Ve výjimeèných pøípadech mùže pøi snímání zaklápìcího víèka nebo pøi manipulaci dojít k prasknutí sklenìné lahvièky nebo ke zlomení krèku. Ve výjimeèných pøípadech mùže být také lahvièka nedostateènì uzavøena. V obou pøípadech mùže obsah lahvièek vytéci, zejména pokud dojde k pøevrácení lahvièky. Možný únik bìhem inokulace vzorkù do kultivaèních lahvièek lze minimalizovat použitím injekèních støíkaèek s hroty typu Luer-Lok. Inokulaèní technika spoèívající v použití jedné ruky a vhodný držák pro nádobu mohou zabránit náhodnému poranìní jehlou. Pøed likvidací všechny inokulované lahvièky BACTEC Myco/F Lytic sterilizujte v autoklávu. Pozitivní kultivaèní lahvièky urèené k subkultivaci, histologickému barvení atd.: Pøed odebráním vzorkù je nezbytné odstranit plynné metabolity mikroorganismù. Odbìr vzorkù a propichování lahvièek provádìjte v místnosti zabezpeèené proti biologické nákaze. Pøed odbìrem si obleète odpovídající ochranný odìv, rukavice a masku. Další informace o subkultivaci naleznete v èásti POSTUP. Netěsnící nebo rozbité lahvičky UPOZORNÌNÍ: Protože prosakování z inokulované lahvièky nebo její prasknutí mùže vést ke vzniku aerosolu mykobakterií (vèetnì M. tuberculosis a jiných bakterií), manipulujte s nimi náležitým zpùsobem. Pokud zjistíte, že bìhem sbìru nebo pøenosu došlo k netìsnosti lahvièky nebo jejímu náhodnému prasknutí, odstraòte rozlitý materiál s mykobakteriemi postupem zavedeným ve vaší laboratoøi. Za všech okolností dodržujte všeobecná bezpečnostní opatření. Lahvičky likvidujte odpovídajícím způsobem. Pokud obsah lahvièky vyteèe do samotného pøístroje nebo pokud lahvièka praskne, okamžitì pøístroj vypnìte. Dané místo ihned opusťte. Spojte se s pracovníky bezpeènostní èi infekèní služby. Zvažte nutnost vypnutí nebo zmìny nastavení ventilaèních a klimatizaèních jednotek. Do zasažené oblasti se nevracejte, dokud se veškerý potenciální aerosol neusadí nebo dokud nebude odstranìn odpovídající ventilací. Upozorněte prosím příslušného zástupce společnosti BD ve vaší oblasti. Pokyny pro pøípad náhodné mykobakteriální kontaminace v dùsledku rozbití kultivaèních nádob nebo suspenzí živné pùdy vydává CDC. 9 Pokyny ke skladování Skladujte pøi teplotì 2 25 C na suchém místì mimo dosah pøímého sluneèního záøení. NEPOUŽÍVEJTE po uplynutí data expirace. ODBÌR VZORKÙ POZNÁMKA: Doporuèujeme, aby pøed použitím daného média postup pøi odbìru vzorkù zkontrolovala kompetentní osoba, která potvrdí, že se tento postup shoduje s postupem popsaným v této kapitole. Odbìr vzorkù provádìjte sterilními postupy, aby se snížilo riziko kontaminace. Rozsah objemu krve, který lze kultivovat, se pohybuje od 1 ml do 5 ml. Optimální hodnoty pro prokázání jsou v rozsahu 3 ml až 5 ml. Doporuèujeme inokulovat vzorky v blízkosti pacientova lùžka. Vìtšinou se vzorky odebírají injekèní støíkaèkou s hrotem typu Luer-Lok. Podle potøeby lze použít držák na jehly Vacutainer, soupravu pro odbìr krve Vacutainer, soupravu pro odbìr krve Vacutainer Safety-Lok nebo jinou soupravu hadièek s kanylou typu "butterfly". Rozhodnete-li se k pøímému odbìru použít jehlu a hadièky, pozornì pøi zahájení odbìru vzorku sledujte smìr prùtoku krve. Pøed inokulací si na štítku perem nebo fixou poznaète objem, který zaplòuje médium, aby byl indikován zaèátek odbìru vzorkù. Vakuum v lahvièce obvykle pøesáhne hodnotu 5 ml, takže je dùležité sledovat odebraný objem prostøednictvím znaèek v rozestupu 5 ml na štítku lahvièky. Po natažení požadovaných 1 5 ml zastavte prùtok ohnutím hadièky a odstranìním jehly z lahvièky BACTEC. Lahvièka BACTEC pøepravte co nerychleji do laboratoøe a umístìte do pøístroje BACTEC. K odbìru vzorkù z krve pacienta lze také použít zkumavku Vacutainer se žlutým uzávìrem, která obsahuje SPS. Zkumavku co nejrychleji pøepravte do laboratoøe za úèelem pøenosu do kultivaèní lahvièky BACTEC. POSTUP Dodané materiály: Kultivaèní lahvièky BACTEC Myco/F. Potøebný materiál, který není souèástí dodávky: Biologicky zabezpeèená místnost, autokláv, odvzdušòovací jednotka, mykobaktericidní dezinfekèní prostøedek, 70% izopropylalkohol, organismy pro kontrolu jakosti (Mycobacterium intracellulare, ATCC 13950, Candida glabrata, ATCC 15545, Cryptococcus neoformans, ATCC 13690), mikroskop a materiál pro barvení preparátù a subkultivaèní lahvièky. Inokulace kultivaèních lahvièek BACTEC Myco/F Lytic 1. Z lahvièky BACTEC odstraòte uzávìr a zkontrolujte, zda lahvièka není prasklá, neprosakuje, zda není kontaminovaná, pøíliš zakalená èi vypouklá nebo zda u ní není poškozeno víèko. Jestliže si všimnete jakéhokoli defektu, lahvièku NEPOUŽÍVEJTE. 2. Oznaète kultivaèní lahvièku identifikaèním štítkem se druhem vzorku a poznamenejte na nìj hladinu média. 3. Pøed inokulací oèistìte víèko alkoholem. Asepticky vstøíknìte do každé lahvièky 1 5 ml vzorku, nebo proveïte pøímý odbìr s pomocí linií hladiny média na štítku lahvièky (viz èást Omezení postupu). Inokulované lahvičky musí být co nejrychleji vloženy do fluorescenčního přístroje řady BACTEC za účelem inkubace a monitorování. 4. Lahvièky vložené do pøístrojù budou automaticky otestovány po dobu trvání testovacího protokolu. Doba testování trvá dle protokolu 42 dní. Doporuèený testovací protokol trvá pro kvasinky 7 dní, pro houby 30 dní a pro mykobakterie 42 dní. Pro nastavení délky protokolu viz příslušnou Uživatelskou příručku BACTEC. Pokud bude na konci testu negativní lahvièka BACTEC Myco/F Lytic na první pohled pozitivní (známky: vypouklé víèko nebo zakalení), proveïte subkultivaci, barvení AFB a Gramovo a zacházejte s ní jako s pozitivní lahvièkou. 5. Pozitivní lahvičky budou identifikovány fluorescenčním systémem BACTEC. Senzor uvnitř lahvičky se nemusí u pozitivní nebo negativní lahvičky vizuálně změnit; nicméně fluorescenční přístroj řady BACTEC je schopen postihnout změny fluorescence senzoru. Veškerou manipulaci s pozitivními lahvièkami provádìjte v místnosti zabezpeèené proti biologické nákaze. Doporuèujeme dodržovat postupy a vybavení odpovídající 3. stupni biologické bezpeènosti. Pozitivní lahvièky je tøeba subkultivovat a pøipravit na odpovídající barvení. Odbìr z pozitivní lahvièky a) Vyjmìte lahvièku z pøístroje a umístìte ji do místnosti zabezpeèené proti biologické nákaze. b) Obraťte lahvièku, aby se její obsah promíchal. c) Otevøete lahvièku, aby se tlak v lahvièce vyrovnal atmosférickému tlaku. d) Odeberte z lahvièky potøebné množství (asi 1,0 ml) pro histologické barvení (ART nebo Gramovo). e) Prozkoumejte nátìr a pøedbìžné výsledky ohlaste až po jeho zhodnocení. Subkultivace: Subkultivaci provádìjte v místnosti zabezpeèené proti biologické nákaze. Pøed subkultivací si obleète odpovídající ochranný odìv, rukavice a masku. Pøed zahájením subkultivace umístìte lahvièku do svislé polohy a na víèko umístìte krytí napuštìné alkoholem. Aby se uvolnil pøetlak v lahvièce 2

3 zpùsobený rùstem možných kontaminantù, zaveïte pøes krytí napuštìné alkoholem a víèko sterilní jehlu o velikosti 25 gauge (nebo menší) s odpovídajícím filtrem nebo tampónem. Po uvolnìní tlaku a pøed odbìrem vzorku lahvièky za úèelem subkultivace jehlu vyjmìte. Zavedení a vyjmutí jehly provádìjte pøímým pohybem, vyvarujte se pohybù do strany, mohli byste trvale poškodit víèko. Jehlu znovu nezakrývejte. Jehly a støíkaèky vyhoïte do kontejneru na biologický odpad, který je odolný proti propíchnutí. KONTROLA JAKOSTI Požadavky na kontrolu kvality musí být splněny v souladu s platnými místními, státními a federálními předpisy a požadavky na akreditaci, a se standardními postupy kontroly kvality vaší laboratoře. Doporučujeme, aby si uživatel prostudoval informace o správném provádění kontroly jakosti v příslušných směrnicích CLSI (dříve NCCLS) a předpisech CLIA. Každou novou zásilku nebo šarži kultivaèního média BACTEC Myco/F Lytic doporuèujeme otestovat pomocí kontrolních organismù ATCC uvedených v následující tabulce (budou sloužit jako pozitivní kontrola) a neinokulované lahvièky (bude sloužit jako negativní kontrola). Organismus Rozsah doby pro detekci (ve dnech) Mycobacterium intracellulare, ATCC až 16 Candida glabrata, ATCC < 3 Cryptococcus neoformans, ATCC < 3 Pozitivní lahvièky inokulujte øedìním v pomìru 1:100 odpovídajícím McFarlandovì normì è. 1 pro rùst na pevném médiu. Lahvièky inokulujte zøedìnou kulturou o objemu 0,1 ml. Pozitivní lahvièky a neinokulované kontrolní lahvièky vložte do pøístroje a otestujte. V prùbìhu testu by mìl pøístroj urèit inokulovanou lahvièku jako pozitivní. Negativní kontrolní lahvièky musejí zùstat negativní. Pokud nezískáte oèekávané výsledky, dané médium nepoužívejte a pøed dalším postupem se obraťte na místního zástupce firmy BD. Informace o kontrole kvality systému BACTEC naleznete v příslušné Uživatelské příručce BACTEC. Ohlašování VÝSLEDKÙ Pozitivní lahvièku je nutno potvrdit nátìrem na acidorezistenci nebo pomocí Gramova barvením. Pozitivní výsledek bude znamenat pravdìpodobnou pøítomnost životaschopných mikroorganismù v lahvièce. Pokud je barvení na acidorezistenci nebo Gramovo barvení pozitivní, subkultivujte na pevném médiu a ohlaste následující výsledek: v pøístroji pozitivní, barvení na acidorezistenci nebo Gramovo barvení pozitivní, ID probíhá. Pokud na nátìrech nejsou pøítomny žádné mikroorganismy, subkultivujte na pevném médiu, vložte lahvièku opìt do pøístroje jako prozatím negativní, bìhem 3 hodin ji vyjmìte a test dokonèete. Neohlašujte žádné výsledky. Z lahvièky BACTEC Myco/F Lytic proveïte subkultivaci na identifikaci a test citlivosti. OMEZENÍ POSTUPU Lahvièky BACTEC Myco/F Lytic jsou neselektivní a budou podporovat množení i jiných aerobních organismù, než jsou mykobakterie, kvasinky a houby. Pozitivní lahvièky mohou obsahovat jeden nebo více druhù mykobakterií a/nebo i nemykobakteriální druhy. Pokud jsou pøítomny rychle rostoucí organismy, mohou urèení pomaleji rostoucích mykobakterií, kvasinek a hub ztìžovat. Je nutné provést subkultivaci a další postupy. Konzistence mikroskopické morfologie nebyla u lahvièek BACTEC Myco/F Lytic zjištìna. Objem 1 5 ml pro inokulaci krve je pøijatelný, ale optimálního prokázání dosáhnete s objemem 3 5 ml. Bìhem interních studií s objemem krve menším než 3 ml urèení druhù M. intracellulare, M. malmoense, M. haemophilum a M. xenopi pøístrojem BACTEC Myco/F Lytic probìhlo opoždìnì nebo došlo k potlaèení procesu prokázání. Pokud objem pøesáhne hodnotu 5 ml, je pravdìpodobné, že se poèet falešnì pozitivních lahvièek zvýší. Bìhem odbìru a inokulace do lahvièky BACTEC nesmí dojít ke kontaminaci vzorku. Výsledkem kontaminované lahvièky bude pozitivní odeèet, nepùjde však o klinicky významný výsledek. Rozhodnutí musí uèinit uživatel v závislosti na takových faktorech, jako je výsledek barvení, typ prokázaného organismu, pøítomnost stejného organismu ve více kulturách, anamnéza pacienta atd. Acidorezistence mykobakterií se mùže lišit v závislosti na kmeni, stáøí kultury a dalších promìnných. Krev mùže obsahovat antimikrobiální látky nebo jiné inhibitory, které mohou množení mikroorganismù zpomalit nebo mu zcela zabránit. Lahvièky BACTEC Myco/F Lytic se inkubují pøi teplotì 35 C. Tak lze pøedejít prokázání mykobakterií, které vyžadují jiné inkubaèní teploty (napøíklad M. marinum, M. ulcerans, M. haemophilum). Prokázání takových organismù vyžaduje dodateèné kultivaèní metody. S kultivaèním médiem BACTEC Myco/F Lytic nebylo možné detekovat druhy Penicillium purpurescens a Blastomyces dermatitidis. Druhy Hansenula anomala, Exophiala jeamselmei, Actinomyces bovis, Rhodotorula rubra a Mucor ramosissimus vykazovaly pøi studiích týkající se inokulace pøi nízkých koncentracích inokula (<10 CFU na lahvièku) nekonzistentní výsledky. Prokázání takových organismù mùže vyžadovat dodateèné kultivaèní metody. Následující izoláty byly pøístrojem BACTEC 9240 pøi použití lahvièek BACTEC Myco/F Lytic bìhem interních studií týkajících se inokulace a/nebo klinických pokusù oznaèeny jako pozitivní: Mycobacterium terrae Mycobacterium abscessus Cryptococcus neoformans Mycobacterium tuberculosis Mycobacterium xenopi Histoplasma capsulatum Mycobacterium avium Mycobacterium malmoense Aspergillus flavus Mycobacterium kansasii Mycobacterium haemophilum Aspergillus fumigatus Mycobacterium fortuitum Candida albicans Nocardia asteroides Mycobacterium intracellulare Candida glabrata Malasezzia furfur Mycobacterium gordonae Candida parapsilosis Trichophyton rubrum Mycobacterium szulgai Candida krusei Mycobacterium simiae Candida tropicalis Mycobacterium celatum Ajellomyces dermatitidis OÈEKÁVANÉ VÝSLEDKY V systému pro krevní kultury BACTEC Myco/F Lytic bylo hodnoceno 1488 krevních kultur získaných od infikovaných pacientù, u nichž byly pùvodcem nákazy mykobakterie, kvasinky nebo houby. Bylo získáno 315 pozitivních kultur, pøièemž u 243 pøípadù byly prokázány klinicky významné organismy. Z toho se ve 131 pøípadech (53,9 %) jednalo o mykobakterie, ve 35 pøípadech (14,4 %) o kvasinky nebo houby a v 77 pøípadech (31,7 %) o jiné bakterie. Z celkového poètu 1488 vzorkù otestovaných v klinické studii bylo jedenáct lahvièek (0,7 %) BACTEC Myco/F Lytic oznaèeno jako falešnì pozitivní (pøístroj je oznaèil za pozitivní, nátìr a/nebo subkultivace za negativní). Z 315 lahvièek Myco/F Lytic oznaèených pøístrojem jako pozitivní bylo 11 (3,5 %) urèeno jako falešnì pozitivní. Z celkového poètu vzorkù otestovaných v klinické studii byla 1 lahvièka (0,07 %) BACTEC Myco/F Lytic oznaèena za falešnì pozitivní (pøístroj ji oznaèil za pozitivní, nátìr a/nebo subkultivace byly negativní). Z lahvièek BACTEC Myco/F Lytic oznaèených pøístrojem jako pozitivní byla jedna lahvièka (0,08 %) urèena jako falešnì pozitivní. Podíl kontaminovaných vzorkù byl pøi tomto hodnocení urèen na 3,3 %. 3

4 Na obrázku 1 je uvedena frekvence rozložení doby prokázání krevních vzorkù pro mykobakterie, které byly pomocí kultivaèních lahvièek BACTEC Myco/ F Lytic a pomocí systému pro krevní kultury BACTEC 9000 oznaèeny jako pozitivní. Na obrázku 2 je uvedena stejná velièina pro kvasinky a houby. OBRÁZEK 1 Počet izolátů OBRÁZEK 2 TTD (ve dnech) Počet izolátů TTD (ve dnech) ÚÈINNOST Kultivaèní médium BACTEC Myco/F Lytic bylo vyhodnoceno pøístrojem BACTEC 9240 na dvou klinických pracovištích ve velkých fakultních nemocnicích v geograficky rozdílných oblastech. Populace v daných místech zahrnovala pacienty infikované virem HIV, imunokompromitované pacienty, pacienty s transplantáty a pacienty s podezøením na mykobakteriální infekci. Médium BACTEC Myco/F Lytic bylo porovnáno s médiem BACTEC 13A z hlediska detekce a prokazování mykobakterií z krevních vzorkù. Bìhem studie bylo otestováno celkem vzorkù krevních kultur. Celkem bylo prokázáno 111 patogenních, mykobakteriálních pozitivních izolátù (viz TABULKA 1) Z tìchto pozitivních vzorkù bylo deset (9 %) prokázáno pouze médiem BACTEC Myco/F Lytic a tøi (3 %) pouze médiem BACTEC 13A. TABULKA 1: SOURHN IZOLÁTÙ PROKÁZANÝCH KULTIVAÈNÍM MÉDIEM Myco/F Lytic BÌHEM KLINICKÝCH ZKOUŠEK Organismus Celkový poèet Pouze médium Pouze médium Obì média Izoláty Myco/F Lytic 13A Všechny patogenní mykobakterie: Mycobacterium avium Mycobacterium tuberculosis Mycobacterium celatum Celkový poèet Médium BACTEC Myco/F Lytic bylo vyhodnoceno pøístrojem BACTEC 9240 na dvou klinických pracovištích ve velkých fakultních nemocnicích. Populace v daných místech zahrnovala pacienty infikované virem HIV, imunokompromitované pacienty, pacienty s transplantáty a pacienty s podezøením na infekci zpùsobenou houbami. Médium BACTEC Myco/F Lytic bylo porovnáno se systémem ISOLATOR (Wampole Laboratories, Cranbrook, NJ) z hlediska detekce a prokázání kvasinek a hub v krvi. Lahvièky BACTEC Myco/F Lytic byly inokulovány krví o objemu 1 5 ml a zkumavky ISOLATOR byly inokulovány krví o objemu 3 10 ml. Usazená smìs ze zkumavek ISOLATOR byla nanesena na misku s èokoládovým agarem, infúzí u mozkové a srdeèní tkánì s 5% ovèí krví a agarem Sabouraud s pøídavkem dextrózy. Bìhem hodnocení bylo otestováno celkem 748 vzorkù. Celkem bylo prokázáno 32 patogenních pozitivních izolátù s mykobakteriemi, kvasinkami a houbami (viz TABULKA 2). Z tìchto pozitivních vzorkù bylo sedm (22 %) prokázáno pouze médiem BACTEC Myco/F Lytic a šest (19%) pouze systémem ISOLATOR. 4

5 TABULKA 2: SOURHN IZOLÁTÙ PROKÁZANÝCH KULTIVAÈNÍM MÉDIEM Myco/F Lytic BÌHEM KLINICKÝCH ZKOUŠEK Organismus Celkový Pouze s médiem Pouze s Obojí poèet izolátù Myco/F Lytic izolátorem Všechny patogenní houby: Candida albicans Candida glabrata Candida krusei Candida parapsilosis Candida tropicalis Cryptococcus neoformans Fusarium species Histoplasma capsulatum Celkový poèet DOSTUPNOST Kat. číslo Popis BACTEC Myco/F Lytic Culture Vials (kultivační lahvičky), krabice s 25 lahvičkami BACTEC Myco/F Lytic Culture Vials (kultivační lahvičky), krabice s 50 lahvičkami LITERATURA 1. Horsburg Jr., C.R Mycobacterium avium Complex Infection in the acquired immunodefieciency syndrome. New England Journal of Medicine 324: Tenover, F.C., et al, The resurgence of Tuberculosis: Is Your Laboratory Ready? Journal of Clinical Microbiology 31: Isolation and Identification of Mycobacterium tuberculosis: A Guide for the Level II Laboratory. U.S. Department of Health and Human Services, Atlanta, GA, Kent, P.T., and G.P. Kubica Public Health Mycobacteriology: A Guide for the Level III Laboratory. U.S. Department of Health and Human Services, Centers for Disease Control and Prevention, Atlanta, GA. 5. Clinical and Laboratory Standards Institute Approved Guideline M29-A3. Protection of laboratory workers from occupationally acquired infections, 3rd ed. CLSI, Wayne, Pa. 6. Garner, J.S Hospital Infection Control Practices Advisory Committee, U.S. Department of Health and Human Services, Centers for Disease Control and Prevention. Guideline for isolation precautions in hospitals. Infect. Control Hospital Epidemiol. 17: U.S. Department of Health and Human Services Biosafety in microbiological and biomedical laboratories, HHS Publication (CDC), 4th ed. U.S. Government Printing Office, Washington, D.C. 8. Directive 2000/54/EC of the European Parliament and of the Council of 18 September 2000 on the protection of workers from risks related to exposure to biological agents at work (seventh individual directive within the meaning of Article 16(1) of Directive 89/391/EEC). Official Journal L262, 17/10/2000, p Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories. U.S. Department of Health and Human Services Public Health Service/Centers for Disease Control, Atlanta, GA, May 1988 pp

6

7 B m Becton, Dickinson and Company 7 Loveton Circle Sparks, Maryland USA A BENEX Limited Bay K 1a/d, Shannon Industrial Estate Shannon County Clare, Ireland Tel: Fax: ATCC is a trademark of the American Type Culture Collection. BD, BD Logo, BACTEC, Vacutainer, Safety-Lok and Luer-Lok are trademarks of Becton, Dickinson and Company BD.