Metabolismus aminokyselin SOUHRN. Vladimíra Kvasnicová

Transkript

1 Metabolismus aminokyselin SOUHRN Vladimíra Kvasnicová

2 Aminokyseliny aminokyseliny přijímáme v potravě ve formě proteinů: důležitá forma organicky vázaného dusíku, který tak může být v těle využit k syntéze dalších organických dusíkatých sloučenin (proteinů tělu vlastních, nukleotidů, hemu, signálních molekul,...); celková konc. v krvi: kolem 2,5 mm 10 z 21 proteinogenních L-α-aminokys. je pro člověka esenciálních: lidské buňky je nedokáží syntetizovat, musí být dodávány potravou syntéza neesenciálních AMK vychází hlavně z α-ketokyselin (převážně meziprodukty metabolismu: pyruvát, oxalacetát, α-ketoglutarát) nadbytek aminokyselin lze využít jako zdroj energie přímo (oxidace v Krebsově cyklu) nebo po přeměně na glukózu a mastné kyseliny, tj. do zásoby se ukládají ve formě glykogenu nebo TAG AMK uvolněné ze svalových proteinů jsou při hladovění důležitým zdrojem krevní glukózy před využitím AMK v Krebsově cyklu, přeměnou na glukózu nebo mastné kyseliny musí být z molekuly odstraněn aminodusík: významné reakce jsou transaminace a oxidační deaminace nadbytečný aminodusík je z těla odstraněn močí hlavně ve formě močoviny (= urea) nebo jako NH 4 +

3 Proteinogenní aminokyseliny

4

5 Další významné aminokyseliny ornithin citrulin L-dihydroxyfenylalanin selenocystein (L-DOPA) β-alanin γ-aminomáselná kyselina (GABA) taurin Obrázek převzat z knihy: J.Koolman, K.H.Röhm / Color Atlas of Biochemistry, 2 nd edition, Thieme 2005

6 Klasifikace proteinogenních AMK z hlediska jejich metabolismu 1) z hlediska biosyntézy v lidském těle neesenciální (syntetizují se) esenciální (musíme je přijímat potravou) 2) z hlediska degradačních produktů glukogenní (z jejich uhlíkaté kostry může vznikat Glc) ketogenní (degradačním produktem je acetyl-coa)

7 Esenciální aminokyseliny 10 1) rozvětvené: Val, Leu, Ile 2) aromatické: Phe ( Tyr), Trp 3) bazické: His, Arg, Lys 4) obsahující síru: Met ( Cys) 5) zvláštní : Thr

8 Esenciální aminokyseliny PVT TIM HALL (= private Tim hall) 1) rozvětvené: Val, Leu, Ile 2) aromatické: Phe ( Tyr), Trp 3) bazické: His, Arg, Lys 4) obsahující síru: Met ( Cys) 5) zvláštní : Thr

9 U řady nemocí vzniká deficit některých AMK, proto se klasifikace někdy rozšiřuje na esenciální/podmíněně esenciální a neesenciální: 1. esenciální a) totálně esenciální: Lys, Thr b) esenciální uhlíkový skelet: Val, Leu, Ile, Phe, Trp, His, Arg, Met (tj. z příslušných α-ketokyselin mohou v těle vznikat - toho se využívá při léčbě chronické renální insuficience: dodávají se ketokyseliny) 2. podmíněně esenciální a) vznikající z esenciálních AMK: Cys, Tyr, taurin, ornitin b) deficit u některých zátěžových stavů: a) + Gln, citrulin (příčina: snížená syntéza nebo nadměrná utilizace) 3. neesenciální Gly, Ala, Glu, Asp, Ser, Pro Výživa: většina živočišných proteinů (maso, mléko, vejce) obsahuje všechny esenciální AMK v dostatečném množství, v rostlinných proteinech často chybí Lys, Met a Trp (výjimkou je sója - obsahuje všechny esenciál. AMK) převzato z knihy: Milan Holeček - Regulace metabolismu cukrů, tuků, bílkovin a aminokyselin (Grada Publishing, 2006, ISBN )

10 Esenciální / podmíněně esenciální / neesenciální aminokyseliny esenciální: Val, Leu, Ile, Thr, Phe, Trp, His, Arg, Lys, Met neesenc.: Gly, Ala, Pro, Ser, Tyr, Asn, Gln, Asp, Glu, Cys AMK ~ organicky vázaný dusík proteiny z potravy proteosyntéza proteiny těla pool AMK syntéza N-sloučenin biosyntéza de novo degradace (E, glc, tuk)

11 glutamin (Gln) nejčetnější AMK přítomná v krvi (570 µmol/l), koncentrace klesá při stresových onemocněních (sepse, polytraumata) do krve je uvolňován hlavně z kosterního svalstva významný substrát pro buňky střevní sliznice a imunitní systém (rychle se dělící buňky - energetický substrát i syntéza nukleotidů) slouží jako transportní forma dvou aminodusíků hlavně z kosterního svalstva do jater (tvorba močoviny) a ledvin (vyloučení NH 4+ ) v metabolismu slouží Gln jako zdroj N (z postranní amidové skupiny) při syntéze dusíkatých látek (např. purinových a pyrimidinových nukleotidů nebo tvorbě Asn z Asp) významné enzymy: glutaminsyntetáza (Glu + NH 3 + ATP Gln + ADP + P i ) a glutamináza (Gln Glu + NH 3 ) při acidóze je v játrech inhibována syntéza močoviny - játra pak Gln hlavně syntetizují, je uvolňován do krve a ve zvýšené míře je následně využíván v ledvinách k tvorbě NH 4+, který se vylučuje močí; glutamináza v ledvinách je při acidóze aktivována

12 alanin (Ala) hned po Gln druhá nejčetnější AMK v krvi (390 µmol/l) stejně jako Gln se do krve uvolňuje hlavně ze svalů - primárním dárcem aminoskupiny při syntéze Ala z pyruvátu jsou větvené AMK (jejich transaminací vzniká Glu, který slouží k transaminaci pyruvátu) vznik pyruvátu z glukózy v glykolýze a jeho transaminace na Ala ve svalu je součástí glukózo-alaninového cyklu, kdy je Ala z krve vychytán v játrech a glukoneogenezí opět přeměněn na glukózu Ala je také produktem utilizace Gln ve střevě hlavním místem katabolismu Ala jsou játra důležitý enzym: alaninaminotransferáza = ALT = GPT (Ala + α-ketoglutarát pyruvát + Glu); stanovuje se v krvi jako marker poškození jater - zvýšená aktivita ukazuje na poškození hepatocytů glutamát (Glu) a aspartát (Asp) - také slouží jako neurotransmitery dikarboxylové AMK, tj. mají kyselý charakter postranního řetězce jejich amidy jsou glutamin a asparagin (bez náboje v postr.řetězci) důležitý enzym: aspartátaminotransferáza = AST = GOT (Asp + α-ketoglutarát oxalacetát + Glu), marker poškození jater a svalů

13 valin (Val), leucin (Leu), izoleucin (Ile) - mají proteoanabolické účinky větvené AMK = BCAA (branched chain amino acids) koncentrace v krvi: nejvíce Val (270 µmol/l, 3. nejčetnější po Gln a Ala) (pokles BCAA krvi: při těžkém poškození jater (cirhóza) a chronické renální insuficienci) esenciální v potravě, jejich transaminací ve svalech (+ α-ketoglutarát) vznikají rozvětvené α-ketokyseliny (BCKA = branched chain keto acids), z nichž mohou transaminací v játrech opět vznikat BCAA aminotransferáza BCAA je aktivní hlavně ve svalech, tj. svaly vychytávají z krve BCAA více než játra druhým krokem odbourávání BCAA je oxidační dekarboxylace dehydrogenázou BCAA, která je přítomna v játrech: při jejím defektu vzniká tzv. leucinóza (nemoc javorového syrupu) - v krvi se hromadí BCKA - toxický účinek na mozek, přítomny v moči poměr koncentrací BCAA/(Tyr + Phe) se označuje jako Fischerův index (hodnota F-indexu je kolem 3) BCAA a aromatické AMK mají stejný transportní systém přes hematoencefalickou bariéru změna F-indexu se projeví na změně poměru AMK transportovaných do mozku degradací Leu vzniká HMG-CoA ketolátky

14 fenylalanin (Phe), tyrozin (Tyr), tryptofan (Trp), histidin (His) aromatické AMK, kromě Tyr jsou esenciální (Tyr vzniká v těle z Phe) metabolizovány hlavně v játrech - při těžkém poškození jater se hromadí v krvi (současně klesají BCAA), klesá Fischerův index více aromatických AMK se dostává do mozku tzv. jaterní encefalopatie slouží jako substráty pro syntézu signálních molekul ze skupiny biogenních aminů: hydroxyláza aromatických AMK vyžaduje jako kofaktor tetrahydrobiopterin, dekarboxyláza pyridoxalfosfát (synt. katecholaminů z Tyr, serotoninu z Trp, histaminu z His) z Tyr vzniká také pigment melanin, z Trp hormon melatonin 90% Trp je v krvi přenášeno na albuminu (hydrofóbní charakter) His se často vyskytuje v aktivních centrech enzymů, je bohatě zastoupen v hemoglobinu (nedostatek His pokles koncentrace hemoglobinu anemie); vyšší potřeba His je u dětí významný enzym: fenylalaninhydroxyláza (Phe Tyr) - při defektu se hromadí Phe (hyperfenylalaninemie, fenylketonurie) při degradaci Tyr vzniká kys. homogentisová - při defektu jejího odbourávání se hromadí a vylučuje močí (alkaptonurie) při degradaci His vzniká kys. urokanová - v kůži a potu absorbuje UV zář.

15 metionin (Met), cystein (Cys), homocystein, taurin aminokyseliny obsahující síru, Met je esenciální v potravě homocystein se nevyskytuje v proteinech, taurin je aminosulfonová kyselina (nikoli aminokarboxylová kys.) Met slouží v aktivní formě (jako S-adenosylMet = SAM) k přenosu metylu při metabolických reakcích (např. při syntéze adrenalinu, kreatinu, karnitinu) Cys vzniká ze serinu (Ser) - donorem síry je Met (transsulfurační cesta přes cystationin); ze Ser vzniká i vzácná 21. kódovaná AMK selenocystein (obsahuje Se místo S, vzniká kotranslační modifikací Ser) homocystein (v krvi do 12 µmol/l) vzniká po předání metylu z Met v reakcích využívajících SAM, jeho zvýšená koncentrace v krvi koreluje s vážností kardiovaskulárních onemocnění; příčinou zvýšení může být i nedostatek vitaminů B 6, B 12 nebo folátu taurin vzniká oxidací -SH skupiny cysteinu a jeho dekarboxylací, slouží jako konjugační činidlo v játrech (konjugace žluč. kyselin, xenobiotik) a v nervovém systému působí jako neurotransmiter cystin a homocystin jsou disulfidy vzniklé spojením 2 Cys nebo 2 homocysteinů přes -S-S- vazbu (vznikají oxidací - dehydrogenací -SH sk.) z Cys vzniká tripeptid glutation (Glu-Cys-Gly) - významný buněčný antioxidant

16 treonin (Thr), serin (Ser), glycin (Gly) Thr a Ser patří (spolu s Tyr) k AMK obsahujícím -OH skupinu, tj. mohou být fosforylovány (viz. regulace aktivity enzymů různými proteinkinázami), Thr a Ser v proteinech bývají také glykosylovány Thr je esenciální, Gly a Ser z něj mohou vznikat (kromě vzniku z 3- fosfoglycerátu - meziprodukt glykolýzy) Gly je nejmenší AMK, není opticky aktivní (není ani L- ani D- AMK), je bohatě zastoupen v kolagenu (každá 3. AMK polypept. řetězce), využívá se při syntéze hemu, purinových nukleotidů a kreatinu, slouží jako konjugační činidlo v játrech, je inhibičním neurotransmiterem významným zdrojem Ser jsou ledviny, ze Ser vzniká Cys, etanolamin, cholin (pro fosfolipidy) a acetylcholin (neurotransmiter), při přeměně na Gly je donorem metylenové skupiny (C1-fragment) pro tetrahydrofolát (metylen-thf) prolin (Pro), hydroxyprolin (HyPro) obsaženy v kolagenu, HyPro vzniká posttranslační modifikací Pro, po hydrolýze proteinu je vylučován močí (marker degradace kolagenu) Pro vzniká cyklizací a redukcí z Glu

17 lyzin (Lys), arginin (Arg), ornitin, citrulin bazické AMK, Lys a Arg jsou esenciální, ornitin a citrulin se nevyskytují v proteinech (k bazickým AMK patří i His) Arg, ornitin a citrulin patří k meziproduktům močovinového (ornitinového) cyklu, tj. cyklu syntetizujícího močovinu v játrech Lys a hydroxlyzin se vyskytují v kolagenu, podílí se na tvorbě příčných vazeb v kolagenních vláknech, přes Lys se na proteiny váže neenzymaticky glukóza (glykace proteinů); Lys je substrátem pro syntézu karnitinu Arg je v močovinovém cyklu (v játrech) štěpen arginázou na močovinu a ornitin; je substrátem syntázy oxidu dusnatého (NOS): Arg + O 2 NO + citrulin, jeho koncentrace v krvi klesá při stresových onemocněních (sepse, polytraumata), nezbytný je při vývoji a pro spermatogenezi (i když je meziproduktem mtb a vzniká v těle, patří mezi esenciální AMK); Arg se využívá k syntéze kreatinu (spolu s Gly a Met) a prolinu; je významným allosterickým aktivátorem syntézy močoviny hlavním zdrojem citrulinu přítomného v krvi je tenké střevo, kde vzniká z Gln; vzniká také z Arg při syntéze NO (endotel, fagocyty, NS); většina citrulinu se v ledvinách využívá pro syntézu Arg

18 Zabudování anorganického dusíku do org. molekul v metabolismu člověka Obrázek je převzat z (leden 2007)

19 Významné reakce AMK 1) ionizace funkčních skupin (-COO -, -NH 3+ ) 2) transaminace α-ketokyseliny 3) deaminace α-ketokyseliny 4) dekarboxylace biogenní aminy 5) tvorba peptidové vazby peptidy a proteiny

20 Syntéza AMK v lidském těle - 5 substrátů - 1. oxalacetát Asp, Asn 2. α-ketoglutarát Glu, Gln, Pro, (Arg) 3. pyruvát Ala 4. 3-fosfoglycerát Ser, Cys, Gly 5. Phe Tyr

21 1. transaminace Syntéza AMK v lidském těle - typické reakce - Pyr Ala OA Asp α-ketoglt Glu 2. amidace Asp Asn Glu Gln 3. z jiných AMK Phe Tyr Ser Gly Glu Pro Met + Ser Cys

22 Transaminační reakce je vratná enzymy: aminotransferázy koenzym: pyridoxalfosfát (derivát vitaminu B6) Obrázek je převzat z (leden 2007)

23 Aminotransferázy významné v klinice ( transaminázy ) alaninaminotransferáza (ALT = GPT) aspartátaminotransferáza (AST = GOT) Obrázek je převzat z učebnice: Devlin, T. M. (editor): Textbook of Biochemistry with Clinical Correlations, 4th ed. Wiley-Liss, Inc., New York, ISBN

24 amidace glutamátu = postranní karboxylová skupina Glu se mění na amidovou skupinu glutaminsyntetáza GLUTAMIN je nejvýznamnější transportní formou aminodusíku v krvi Obrázek je převzat z učebnice: Devlin, T. M. (editor): Textbook of Biochemistry with Clinical Correlations, 4th ed. Wiley-Liss, Inc., New York, ISBN

25 Při syntéze ASPARAGINu je donorem NH 2 glutamin (nikoli amoniak jako při syntéze Gln) Obrázek je převzat z učebnice: Devlin, T. M. (editor): Textbook of Biochemistry with Clinical Correlations, 4th ed. Wiley-Liss, Inc., New York, ISBN

26 Poruchy metabolismu aminokyselin fenylketonurie (PKU, v ČR 1:6 500) - Phe glutarová acidurie typ I (GA I, 1:40 000) Lys, Trp izovalerová acidurie (IVA, 1: ) - Leu leucinóza (MSUD, nemoc javorového syrupu, 1: ) -Val,leu,Ile homocystinurie (1: :80 000) cystinurie (1:6 500) histidinemie defekt histidázy - odbourávání His cystationinurie defekt cystathionázy, bez klinických příznaků alkaptonurie defekt homogentisát dioxygenázy odb. Tyr albinismus defekt tvorby melaninu z Tyr defekt methylmalonylcoa mutázy (MUT) ( hodina života) více viz.:

27 Syntéza Tyr z Phe Obrázek je převzat z (leden 2007)

28 Tvorba aktivovaného metioninu = S-adenosylmetionin (SAM) SAM je donorem CH 3 skupiny v metylačních reakcích Obrázek je převzat z (leden 2007)

29 Syntéza Cys z Met a Ser Obrázek je převzat z (leden 2007)

30 Regenerace Met (vitaminy: folát + B12) B12 (vit. B 6 ) Obrázek je převzat z (leden 2007)

31 Obrázek je převzat z (leden 2007)

32 glykolýza Syntéza serinu a glycinu Obrázek je převzat z (leden 2007)

33 Z některých aminokyselin vznikají další důležité látky: 1) Gln, Asp, Gly puriny, pyrimidiny 2) Gly porfyriny, kreatin (s Arg a Met) 3) Arg NO 4) Cys taurin Obrázek je převzat z učebnice: Devlin, T. M. (editor): Textbook of Biochemistry with Clinical Correlations, 4th ed. Wiley-Liss, Inc., New York, ISBN

34 Syntéza purinových nukleotidů C Y T O P L A Z M A Obrázek převzat z (leden 2007)

35 Syntéza pyrimidinových nukleotidů C Y T O P L A Z M A mitochondrie Obrázek převzat z (leden 2007)

36 Dekarboxylací AMK vznikají monoaminy (= biogenní aminy) 1) Tyr katecholaminy (adrenalin, noradrenalin, dopamin) 2) Trp serotonin (= 5-hydroxytryptamin) 3) His histamin 4) Ser etanolamin cholin acetylcholin 5) Cys cysteamin Asp β-alanin koenzym A Glu γ-aminobutyrát (GABA) (červeně: aminokyseliny - nikoli aminy)

37 TEST: Rozhodněte se o pravdivosti tvrzení a) valin patří mezi větvené aminokyseliny b) serin obsahuje v postranním řetězci thiolovou skupinu c) glutamát patří mezi esenciální aminokyseliny d) tryptofan je prekurzor katecholaminů

38 Rozhodněte se o pravdivosti tvrzení a) valin patří mezi větvené aminokyseliny b) serin obsahuje v postranním řetězci thiolovou skupinu c) glutamát patří mezi esenciální aminokyseliny d) tryptofan je prekurzor katecholaminů

39 Odbourávání AMK 1) odstranění aminodusíku z molekuly AMK 2) detoxikace uvolněné aminoskupiny 3) metabolismus uhlíkaté kostry AMK 7 produktů

40 7 degradačních produktů AMK 1. pyruvát Gly, Ala, Ser, Thr, Cys, Trp 2. oxalacetát Asp, Asn 3. α-ketoglutarát Glu, Gln, Pro, Arg, His 4. sukcinyl-coa Val, Ile, Met, Thr 5. fumarát Phe, Tyr 6. acetyl-coa Ile glukogenní AMK ketogenní AMK 7. acetoacetyl-coa Lys, Leu, Phe, Tyr, Trp

41 Vstup uhlíkaté kostry AMK do citrátového cyklu Obrázek je převzat z (leden 2007)

42 Příklad odbourávání AMK na meziprodukty CC Obrázek je převzat z (leden 2007)

43 Odbourávání větvených AMK SVAL JÁTRA

44 Osud aminodusíku aminokyselin a) extrahepatálně transaminace (vzniká hlavně Ala a Glu + 2-oxokyseliny) deaminace (reaguje málo AMK: Ser,Thr,His; uvolní se NH 3 ) amidace Glu + NH 3 Gln (spotřeba ATP) b) v játrech viz. a) oxidační deaminace Glu (vzniká α-ketoglt + NH 3 ) enzym: glutamátdehydrogenáza (GMD)

45 Glutamin je hlavní transportní formou aminodusíku Obrázek je převzat z (prosinec 2006)

46 Transport aminodusíku při odbourávání svalových proteinů vylučované produkty Obrázek je převzat z učebnice: Devlin, T. M. (editor): Textbook of Biochemistry with Clinical Correlations, 4th ed. Wiley-Liss, Inc., New York, ISBN

47 Glukózo-alaninový cyklus játra svaly Obrázek je převzat z učebnice: Devlin, T. M. (editor): Textbook of Biochemistry with Clinical Correlations, 4th ed. Wiley-Liss, Inc., New York, ISBN

48 Metabolismus aminodusíku většina tkání játra svaly Obrázek je převzat z (leden 2007)

49 GLUTAMÁTDEHYDROGENÁZA odstraňuje v játrech aminoskupinu z uhlíkaté kostry Glu 1. NH 2 sk. byla z AMK přenesena transaminací glutamát 2. oxidační deaminací glutamátu se NH 2 uvolní jako amoniak Obrázek je převzat z (leden 2007)

50 Transport a detoxikace aminodusíku - SOUHRN - aminotransferázy glutamát nebo alanin glutaminsyntetáza glutamin glutamináza glutamát + NH 4 + glutamátdehydrogenáza 2-oxoglutarát + NH 4 + játra: močovinový cyklus močovina ledviny: glutamináza glutamát + NH 4 + moč

51 Cyklus Gln v játrech Obrázek převzat z knihy Devlin, T. M. (editor): Textbook of Biochemistry with Clinical Correlations, 4th ed. Wiley-Liss, Inc., New York, ISBN

52 TEST: Z uhlíkaté kostry těchto aminokyselin mohou vznikat následující produkty: a) aspartát oxalacetát b) lyzin glukóza c) alanin zásobní tuk d) glutamin α-ketoglutarát

53 Z uhlíkaté kostry těchto aminokyselin mohou vznikat následující produkty: a) aspartát oxalacetát b) lyzin glukóza c) alanin zásobní tuk d) glutamin α-ketoglutarát

54 TEST: Aminodusík, uvolněný z uhlíkaté kostry AMK, je transportován krví jako a) NH + 4 b) alanin c) glutamin d) urea

55 Aminodusík, uvolněný z uhlíkaté kostry AMK, je transportován krví jako a) NH + 4 b) alanin c) glutamin d) urea

56 Aminodusík uvolněný z uhlíkaté kostry AMK je transportován krví jako a) NH 4 + fyziologicky do 35 µmol/l (NH 3 + H + NH 4+ ) b) alanin vzniká transaminační reakcí z pyruvátu c) glutamin nejvýznamnější transportní forma NH 2 v krvi d) urea je odpadním produktem aminodusíku (játra ledviny moč)

57 Močovinový (ornitinový) cyklus detoxikační mtb dráha (NH 3 je toxický pro mozek) probíhá pouze v játrech lokalizován v mitochondrii /cytoplazmě karbamoylfosfát syntetáza I (= mitochondriální) okyseluje organismus (spotřeba HCO 3- ) energeticky náročný (spotřeba ATP) propojen s citrátovým cyklem přes fumarát močovina je odpadní produkt ( moč)

58 Detoxikace amoniaku v játrech Obrázek je převzat z (leden 2007)

59 Propojení močovinového a citrátového cyklu Obrázek je převzat z (leden 2007)

60 Metabolismus amoniaku: význam glutaminu detoxikace aminodusíku (transport -NH 2 ) syntéza nukleotidů ( nukleové kyseliny) syntéza citrulinu (propojení s močovinovým cyklem): příjem proteinů potravou (za sytosti) nebo degradace proteinů tělu vlastních (hladovění) koncentrace glutaminu

61 enterocyt: ledviny: játra: Gln citrulin krev ledviny citrulin Arg krev játra Arg urea + ornitin ornitin zvýšená rychlost SYNTÉZY MOČOVINY = detoxikace NH 3 pocházejícího z proteinů

62 Regulace močovinového cyklu alosterická regulace + indukce enzymů vlivem vysokoproteinové diety nebo metabolických změn při hladovění regulační enzym karbamoylfosfát syntetáza I (= mitochondriální) aktivace N-acetylglutamát inhibice N-acetylglutamát syntetáza arginin Syntéza močoviny je inhibována při acidóze šetří se HCO 3 -

63 TEST: Při detoxikaci amoniaku v lidském těle se uplatňuje a) močovinový cyklus probíhající pouze v játrech b) štěpení glutaminu v játrech a ledvinách c) ATP jako zdroj energie d) vznik ornithinu z citrulinu a karbamoylfosfátu

64 Při detoxikaci amoniaku v lidském těle se uplatňuje a) močovinový cyklus probíhající pouze v játrech b) štěpení glutaminu v játrech a ledvinách c) ATP jako zdroj energie d) vznik ornithinu z citrulinu a karbamoylfosfátu