VYSOKÁ ŠKOLA CHEMICKO-TECHNOLOGICKÁ V PRAZE Ústav chemie a analýzy potravin Technická 5, Praha 6 tel./fax: , tel ,

Transkript

1 strana 1/15 VYSOKÁ ŠKOLA CHEMICKO-TECHNOLOGICKÁ V PRAZE Ústav chemie a analýzy potravin Technická 5, Praha 6 tel./fax: , tel , PROTOKOL O ZKOUŠCE č. LN 8212 LN 8217 Zákazník: Biolife s.r.o. Na Čihadle Praha 6 Předmět zkoušky: Komplexní vyšetření aroma a vybraných biologicky aktivních látek ve vzorcích zeleniny ošetřené přípravkem BIONUR Objednávka: ze dne Datum předání: Datum zkoušky: Analýzy provedla: Analýzy koordinovala: Ing. Šárka Přinosilová Ing. Jaromír Hradecký Ing. Hana Novotná doc. Dr. Ing. Kateřina Riddellová doc. Dr. Ing. Věra Schulzová Popis vzorku zákazníkem, obal: Vzorek č. 1 rajčata ošetřená přípravkem BIONUR Vzorek č. 2 rajčata neošetřená (referenční vzorek) Vzorek č. 3 lilky ošetřené přípravkem BIONUR Vzorek č. 4 lilky neošetřené (referenční vzorek) Vzorek č. 5 papriky ošetřené přípravkem BIONUR Vzorek č. 6 papriky neošetřené (referenční vzorek) Vzorky zeleniny byly dodány v plastikových sáčcích s uzavíratelným klipem. Interní číslo přiřazené laboratoří: LN 8212 vzorek č. 1 LN 8213 vzorek č. 2 LN 8214 vzorek č. 3 LN 8215 vzorek č. 4 LN 8216 vzorek č. 5 LN 8217 vzorek č. 6

2 strana 2/15 Popis vzorku: Rozdíly mezi zeleninou ošetřenou přípravkem Bionur a neošetřenou zeleninou zachycuje fotografická dokumentace v Příloze 1. Postupy testování: 1. HS-SPME/GC-TOFMS analýza profilu těkavých látek Pro porovnání profilů těkavých látek testovaného a referenčního vzorku byla vyvinuta metoda založená na technice mikroextrakce tuhou fází ve variantě head-space (HS-SPME). * Množství 2 g homogenizovaného vzorku bylo naváženo do 10 ml SPME vialky, zalito 2 ml deionizované vody a uzavřeno magnetickým víčkem se vzduchotěsným septem. Po ekvilibraci při teplotě 40 C byly sloučeniny extrahovány za následujících podmínek: vlákno PDMS/CX/DVB, tloušťka filmu 50/30 µm inkubace vzorku při 40 C 5 min, head-space sorpce na vlákno 10 min při 40 C Extrahované složky byly tepelně uvolněny z vlákna, rozděleny pomocí plynové chromatografie na koloně INNOWAX (30m x 0,25 mm x 0,25 µm) a detekovány hmotnostním detektorem s analyzátorem měření doby letu. Pro vyhodocení chromatografických záznamů byl použit ChromaTOF TM Software, verze Identifikace analytů byla provedena porovnáním naměřených spekter se záznamy uloženými v knihovně spekter NIST Library 2008 a stanovením retenčních indexů (RI) pro vybrané analyty. 2. HPLC/DAD analýza karotenoidních pigmentů Ke stanovení lykopenu, β-karotenu a luteinu ve vzorcích byla použita vysokoúčinná kapalinová chromatografie ve spojení s detektorem diodového pole (HPLC/DAD). Množství 1 g homogenizovaného vzorku bylo extrahováno směsí ethanol (s přídavkem 0,2 % BHT):hexan (1:1, v/v) s 3 g žíhaného Na 2 SO 4 po dobu 30 minut. Po odstředění byla pasteurkou odebrána horní hexanová vrstva a ethanolický podíl byl reextrahován 8 ml hexanu (celkem 3x). Spojené hexanové extrakty byly odpařeny na vakuové rotační odparce (30 C) a odfoukány pomocí dusíku do sucha. Před analýzou byl odparek rozpuštěn v 1 ml směsi ethanol (s přídavkem 0,2 % BHT):aceton (6:4, v/v). Chromatografická separace analytů probíhala za následujících podmínek: analytická kolona: LiChroCART (125 4,6 mm), LiChrospher 100 RP 18 (5 µm) * V případě head-space (HS) techniky jsou těkavé analyty sorbovány z plynného prostoru nad vzorkem na speciálně povrchově upravené vlákno.

3 strana 3/15 analytická předkolona: LiChroCART (4 4 mm), PurospherSTAR RP 18 (5 µm) teplota kolony: 35 C mobilní fáze: MeOH:THF (95:5, v/v), průtok: 1 ml/min, nástřik: 20 μl UV detektor: λ = 470 nm (lykopen) a 450 nm (β-karoten a lutein) Identifikace analytu ve vzorcích byla provedena porovnáním retenčního času vzorků s retenčním časem standardu a porovnáním absorpčních spekter. Pro kvantifikaci bylo použito přímé porovnání plochy analytu identifikovaného v analyzovaných vzorcích s plochou příslušného standardu. 3. Senzorická analýza Pro posouzení vůně testovaného a referenčního vzorku byla zvolena párová porovnávací zkouška. Čtrnáct hodnotitelů v průběhu testu vybíralo ze dvou předložených variant vzorek, jehož vůni preferují. Hodnocení rajčat a paprik bylo provedeno na kusové zelenině i homogenátu. Hodnocení vůně lilku bylo provedeno pouze na homogenátu.

4 strana 4/15 Výsledky testování: 1. HS-SPME/GC-TOFMS analýza profilu těkavých látek Pro porovnání profilů těkavých látek testovaného a referenčního vzorku bylo pro každou zeleninu vybráno 12 charakteristických sloučenin. Relativní zastoupení těchto látek a jejich absolutních odezvy vyjádřené v procentech jsou uvedeny v Tabulkách I-III. Vybrané látky jsou řazeny podle typického retenčního času (RT) v minutách. Tabulka I: Látky identifikované ve vzorcích rajčat LN 8212 a LN 8213 (referenční vzorek) RT (min) Analyt relativní zastoupení látek [% ] absolutní odezva látek [% ] LN 8212 LN 8213 LN 8212 LN ,10 3-Pentanon 0,8 1, ,21 1-Penten-3-on 2,1 1, ,25 Hexanal 44,1 43, ,74 3-Hexenal 7,4 5, ,80 2-Hexenal 25,6 18, ,51 Furan, 2-pentyl- 2,7 2, ,45 1-Pentanol 0,7 0, ,23 5-Hepten-2-on, 6-methyl- 2,6 1, ,03 1-Hexanol 6,5 13, ,34 3-Hexen-1-ol 6,0 11, ,91 2-Isobutylthiazol 1,3 0, ,34 2-Hexen-1-ol 0,1 1, Tabulka II: Látky identifikované ve vzorcích lilků LN 8214 a LN 8215(referenční vzorek) RT (min) Analyt relativní zastoupení látek [% ] absolutní odezva látek [% ] LN 8214 LN 8215 LN 8214 LN ,68 Acetaldehyd 4,0 1, ,82 Dimethyl sulfid 19,2 7, ,11 Propanal, 2-methyl- 6,8 2, ,22 Octová kyselina, methyl ester 1,3 0, ,01 Butanal, 2-methyl- 20,2 7, ,08 Butanal, 3-methyl- 11,5 3, ,21 1-Penten-3-on 5,1 1, ,56 1-Penten-3-ol 1,5 0, ,77 2-Hexenal 9,0 2, ,53 Furan, 2-pentyl- 10,4 8, ,02 1-Hexanol 10,2 56, ,34 3-Hexen-1-ol 0,7 8,

5 strana 5/15 Tabulka III: Látky identifikované ve vzorcích paprik LN 8216 a LN 8217 (referenční vzorek) RT (min) Analyt relativní zastoupení látek [% ] absolutní odezva látek [% ] LN 8216 LN 8217 LN 8216 LN ,82 Dimethyl sulfid 5,6 0, ,23 Octová kyselina, methyl ester 1,6 0, ,67 Furan, 2-ethyl- 0,1 1, ,56 Sabinen * 0,9 0, ,65 α-limonen * 1,1 36, ,69 á-ocimen, (Z)- * 3,9 0, ,84 p-mentha-1,4-dien * 78,9 2, ,42 á-ocimen, (E)- * 2,7 21, ,02 1-Hexanol 0,4 9, ,33 3-Hexen-1-ol 1,4 19, ,47 Octová kyselina 1,4 3, ,27 2-Isobutyl-3-methoxypyrazin 1,9 4, * triviální název Chromatografické záznamy vzorků LN 8212 LN 8217 získané pomocí HS-SPME/GC-TOFMS analýzy jsou zobrazeny v Příloze 2. Souhrnné informace o látkách identifikovaných ve vzorcích LN 8212 LN 8217 jsou uvedeny v Příloze HPLC/DAD analýza karotenoidních pigmentů Zjištěné koncentrace karotenoidů ve vzorcích LN 8212 LN 8217 jsou uvedeny v Tabulce IV, výsledky porovnány na Obrázcích 1-3. Tabulka IV: Koncentrace karotenoidů ve vzorcích LN 8212 LN 8217 (mg/kg čerstvého vzorku) Analyt Rajčata Lilek Paprika LN 8212 LN 8213 LN 8214 LN 8215 LN 8216 LN 8217 β-karoten 7,69±0,34 6,17±0,27 0,92±0,04 0,54±0,02 5,18±0,23 4,99±0,22 lykopen 37,39±1,24 24,48±0,81 n.d. * n.d. n.d. n.d. lutein 0,17±0,01 0,12±0,01 0,49±0,04 0,36±0,03 2,65±0,19 2,73±0,20 SUMA 45,25 30,77 1,41 0,9 7,83 7,72 * nebylo detekováno

6 strana 6/15 Obrázek 1: Srovnání obsahu karotenoidů ve vzorcích rajčat Obrázek 2: Srovnání obsahu karotenoidů ve vzorcích lilků Obázek. 3: Srovnání obsahu karotenoidů ve vzorcích papriky

7 strana 7/15 3. Senzorická analýza Výsledky hodnocení preference vůně metodou párové porovnávací zkoušky jsou zachyceny na Obrázku 4. Obrázek 4: Hodnocení preference vůně metodou párové porovnávací zkoušky

8 strana 8/15 Závěr: Ve vzorcích LN byla identifikována řada látek, které jsou nositeli typického aroma čerstvých rajčat (2-isobutylthiazol, hexanal, hex-2-enal a hex-3-enal), zelených paprik (2-isobutyl-3-methoxypyrazin) a lilků. Získané výsledky jednoznačně indikují rozdíly v absolutní intenzitě a relativním zastoupení těkavých látek identifikovaných v ošetřené a neošetřené zelenině. Rovněž analýza karotenoidů ukázala v případě rajčat a lilků mírně vyšší koncentrace u vzorků ošetřovaných přípravkem Bionur, u paprik tyto rozdíly průkazné nebyly. Pro zobecnění pozorovaných rozdílů ve sledovaných parametrech mezi vzorky ošetřenými Bionurem a neošetřenými by bylo třeba vyšetřit větší soubor vzorků. prof. Ing. Jana Hajšlová, CSc. vedoucí laboratoře Protokol vystaven: V Praze Bez písemného souhlasu zkušební laboratoře nelze Protokol o zkoušce kopírovat jinak než celý. Výsledky zkoušky se týkají pouze uvedeného zkušebního vzorku a nejsou ovlivněny podmínkami prostředí. Protokol o zkoušce nenahrazuje jiné právní dokumenty.

9 strana 9/15 Příloha 1: Fotografická dokumentace vzorků LN 8212 LN 8217 Rozdíly mezi zeleninou ošetřenou přípravkem Bionur a neošetřenou zeleninou jsou zachyceny na Obrázcích 4 a 5. Obrázek 4: Fotografická dokumentace vzorků ošetřených přípravkem Bionur. Obrázek 5: Fotografická dokumentace referenčních vzorků.

10 strana 10/15 Příloha 2: Chromatografické záznamy vzorků LN LN 8217 získané pomocí HS-SPME/GC-TOFMS analýzy Chromatografické záznamy vzorků LN 8212 LN 8213 získané pomocí HS-SPME/GC-TOFMS analýzy jsou uvedeny na Obrázcích e+007 1e+007 8e+006 6e+006 LN 8212 rajčata 4e+006 2e Time (minutes) TIC 1.2e+007 1e+007 8e+006 LN 8213 rajčata - referenční vzorek 6e+006 4e+006 2e Time (minutes) TIC Obrázek 7: Chromatografický záznam vzorků rajčat LN 8212 a LN 8213 (referenční vzorek) získaný pomocí HS-SPME/GC-TOFMS analýzy, celkový iontový tok (Total Ion Current, TIC).

11 strana 11/15 7e+006 6e+006 5e+006 4e+006 LN 8214 lilky 3e+006 2e+006 1e Time (minutes) TIC 7e+006 6e+006 5e+006 4e+006 LN 8215 lilky - referenční vzorek 3e+006 2e+006 1e Time (minutes) TIC Obrázek 8: Chromatografický záznam vzorků lilků LN 8214 a LN 8215 (referenční vzorek) získaný pomocí HS-SPME/GC-TOFMS analýzy, celkový iontový tok (Total Ion Current, TIC).

12 strana 12/15 1.2e+007 1e+007 8e+006 6e+006 4e+006 LN 8216 papriky 2e Time (minutes) TIC 1.2e+007 1e+007 8e+006 6e+006 LN 8217 papriky - referenční vzorek 4e+006 2e Time (minutes) TIC Obrázek 9 : Chromatografický záznam vzorků paprik LN 8216 a LN 8217 (referenční vzorek) získaný pomocí HS-SPME/GC-TOFMS analýzy, celkový iontový tok (Total Ion Current, TIC).

13 strana 13/15 Příloha 3: Látky identifikované ve vzorcích LN 8212 LN 8217 Tabulka V: Látky identifikované ve vzorcích rajčat LN 8212 a LN 8213 (referenční vzorek). RT (min) Analyt LN 8212 LN 8213 RI RI lit. 1,68 Acetaldehyd ,82 Dimethyl sulfid ,22 Octová kyselina, methyl ester ,56 Furan, 2-methyl ,84 Octová kyselina, 1-methylethyl ester ,67 Furan, 2-ethyl ,10 3-Pentanon ,15 Pentanal ,02 Octová kyselina, 2-methylpropyl ester ,04 3-Thujen * ,21 1-Penten-3-on ,17 Hexanal ,59 2-Caren * ,01 2-Pentenal ,74 3-Hexenal ,58 1-Penten-3-ol ,38 Heptanal ,60 α-limonen * ,96 2-Thujen * ,54 1-Butanol, 2-methyl ,56 1-Butanol, 3-methyl ,80 2-Hexenal ,51 Furan, 2-pentyl ,45 1-Pentanol ,80 2-Butanon, 3-hydroxy ,03 Oktanal ,45 2-Heptenal ,62 2-Penten-1-ol ,03 Pentan, 2-nitro ,23 5-Hepten-2-on, 6-methyl ,03 1-Hexanol ,34 3-Hexen-1-ol ,91 2-Isobutylthiazol ,96 2,4-Hexadienal ,34 2-Hexen-1-ol ,04 2-Oktenal ,56 cis-4-decenal ,61 β-cyclocitral * ,77 Citral * ,01 4-Hexen-3-on, 4-methyl ,04 2,4-Dekadienal ,67 Geranylaceton *

14 strana 14/15 Tabulka VI: Látky identifikované ve vzorcích lilků LN 8214 a LN 8215(referenční vzorek). RT (min) Analyt LN 8214 LN 8215 RI RI lit. 1,68 Acetaldehyd ,82 Dimethyl sulfid ,01 Propanal ,11 Propanal, 2-methyl ,22 Octová kyselina, methyl ester ,86 2-Butanon ,01 Butanal, 2-methyl ,08 Butanal, 3-methyl ,67 Furan, 2-ethyl ,82 Octová kyselina, [(1,1-dimethylethyl)thio] ,11 3-Pentanon ,15 2-Propanamin ,21 1-Penten-3-on ,76 1-Propanol ,17 Hexanal ,58 1-Penten-3-ol ,56 Hexanová kyselina, methyl ester ,54 1-Butanol, 2-methyl ,56 1-Butanol, 3-methyl ,77 2-Hexenal ,53 Furan, 2-pentyl ,45 1-Pentanol ,62 2-Penten-1-ol ,02 1-Hexanol ,34 3-Hexen-1-ol ,35 2-Hexen-1-ol ,64 2,6-Dimethylanisol ,05 2-Oktenal ,42 2-Nonenal ,94 Benzeneacetaldehyd ,86 Naftalen ,59 Pentanová kyselina ,81 Propanová kyselina, 2-methyl, anhydrid ,35 2-Hexenová kyselina

15 strana 15/15 Tabulka VII: Látky identifikované ve vzorcích paprik LN 8216 a LN 8217 (referenční vzorek). RT (min) Analyt LN 8216 LN 8217 RI RI lit. 1,68 Acetaldehyd ,82 Dimethyl sulfid ,23 Octová kyselina, methyl ester ,67 Furan, 2-ethyl ,11 3-Pentanon ,63 3-Thujen * ,56 Sabinen * ,71 Ethylbenzen ,29 p-xylen ,56 1,5-Hexadien-3-ol ,14 o-xylen ,65 α-limonen * ,01 á-felandren ,53 1-Butanol, 2-methyl ,54 1-Butanol, 3-methyl ,53 Furan, 2-pentyl ,69 á-ocimen, (Z)- * ,84 p-mentha-1,4-dien * ,42 á-ocimen, (E)- * ,44 1-Pentanol ,00 Benzen, 1-methyl-2-(1-methylethyl) ,02 1-Hexanol ,19 Tridekan, 2-methyl ,33 3-Hexen-1-ol ,47 Octová kyselina ,61 Butanová kyselina, 3-hexenyl ester ,27 2-Isobutyl-3-methoxypyrazin ,24 Cyklohexan, 1-ethenyl-1-methyl-2,4-bis(1-methylethenyl) ,83 α-himachalen * ,46 à-murolen ,55 β-himachalen * ,86 Naftalen * triviální název