UNIVERZITA KARLOVA V PRAZE FARMACEUTICKÁ FAKULTA V HRADCI KRÁLOVÉ KATEDRA ANALYTICKÉ CHEMIE DIPLOMOVÁ PRÁCE

Rozměr: px
Začít zobrazení ze stránky:

Download "UNIVERZITA KARLOVA V PRAZE FARMACEUTICKÁ FAKULTA V HRADCI KRÁLOVÉ KATEDRA ANALYTICKÉ CHEMIE DIPLOMOVÁ PRÁCE"

Transkript

1 UNIVERZITA KARLOVA V PRAZE FARMACEUTICKÁ FAKULTA V HRADCI KRÁLOVÉ KATEDRA ANALYTICKÉ CHEMIE DIPLOMOVÁ PRÁCE Stanovení vitamínů A, D, E metodou sekvenční injekční chromatografie Vedoucí diplomové práce: PharmDr. Hana Sklenářová, Ph.D. Hradec Králové 2009 Kateřina Trefilová 1

2 Místopřísežně prohlašuji, že jsem celou diplomovou práci vypracovala samostatně. Zdroje, z nichž jsem čerpala při zpracování, jsou uvedeny v seznamu použité literatury a v práci řádně citovány. Hradec Králové Kateřina Trefilová 2

3 Touto cestou bych chtěla poděkovat vedoucí diplomové práce PharmDr. Haně Sklenářové, Ph.D. za trpělivost a čas, kterou mě věnovala, a za cenné rady a připomínky, které mě pomohly vyřešit problémy související s touto diplomovou prací. V neposlední řadě chci poděkovat za pomoc rovněž Doc. RNDr. Daliborovi Šatínskému, Ph.D. za pomoc při sestrojení celého přístroje. 3

4 Abstrakt Byl vypracován postup separace vitamínů A, D a E pomocí monolitických kolon zapojených v systému sekvenční injekční analýzy. Po provedené optimalizaci byly vybrány následující podmínky separace: analýza na: monolitické koloně 25 mm dlouhé Chromolith Flash RP-18e kolony, 4,6 mm I.D. (Merck, Germany), při rychlosti (10 µl/s) za použití mobilní fáze acetonitril metanol (1:1, v/v). Monolitická kolona byla v SIA systému zapojena mezi vícecestný ventil a průtokovou Z celu. Spektrofotometrická detekce byla provedena při vlnových délkách absorpčních maxim pro vitamín A 324 nm, D nm, E 285. Celková délka SIA analýzy byla 400 s (z toho 230 s trvala vlastní separace). Ze základních chromatografických validačních parametrů byly vyhodnoceny faktor symetrie A S, rozlišení R S, počet teoretických pater a opakovatelnost. Faktor symetrie pro vitamín A - 1,309, pro vitamín D 2-1,302, pro D 3-1,286, pro vitamín E - 1,158. Rozlišení píků pro vitamíny A-D 2 je 3,607, D 2 -D 3 4,232, D-E 1,532. Počet teoretických pater pro vitamín A 998, pro vitamín D , pro vitamín D a vitamín E Opakovatelnost byla vypočítána z 6 nástřiků, kdy z výšky píků jednotlivých látek byla vypočítaná relativní směrodatná odchylka. Opakovatelnost je pro vitamín A - 0,53 %, pro vitamín D 2-0,35 %, pro vitamín D 3-0,81 % a vitamín E 0,71 %. Všechny parametry vyhovují požadavkům validačních autorit. Z výsledků stability roztoků jsme zjistily postupné snižování koncentrace vitamínů, proto je vhodné je připravovat každý den čerstvě. 4

5 Abstract The working isntruction was created for separation vitamins A, D and E by means of monolithic column engaged in system sequentional injectional analysis. Following conditions of separation were chosen after performance of optimalization: Analysis at monolithic column 25 mm long Chromolith Flash RP-18e column, 4,6 mm I.D. (Merck, Germany), with speed (10 µl/s) with applied mobile phase acetonitril metanol (1:1, v/v). Monolithic column was in SIA system and was engaged between moreway valve and flow Z cell. Spectrophotometric detection was performed at wave length for absorbing maximum for vitamins A 324 nm, D nm, E 285. Total SIA analysis time was 400 s (from that 230 s lasted separation process). From basic chromatographic validation parameters were evaluated the following symetric factor As, resolution Rs, amount theoretical trays and repeatability. Symetric factor for vitamin A 1.309; vitamin D ; vitamin D ; vitamin E Peak resolution for vitamins A-D 2 je 3.607; D2-D ; D-E Amount theoretical stages for vitamin A 998, vitamin D , vitamin D and vitamin E Repeatability was worked out from 6 sprays, and relative standard deviation of particular substances was calculated from the highest point of the graph peak. Repeatability was for vitamin A 0.53 %, vitamin D %, vitamin D % and vitamin E 0.71 %. All parameters are in compliance with the requirements validation authority. From result of stabilization solutions we found out a gradual decrease in concentration of vitamins. Therefore is suitable to prepare them fresch on a daily basis. 5

6 Obsah 1. Úvod a cíl práce Úvod práce Cíl práce Teoretická část Stanovované látky Vitamin A (axeroftol) Vitamin D 2 (Ergokalciferol) Vitamin D 3 (cholekalciferol) Vitamin E (tokoferol) Metody stanovení Retinol-A Ergokalciferol-D Cholekalciferol-D Tokoferol-E Sekvenční injekční analýza Úvod do sekvenční injekční analýzy (SIA) Srovnání, odlišnosti, přednosti SIA a FIA Jednotky SIA systému Čerpadlo Pístová pumpa Selekční ventil Mísící cívky Detektory Sekvenční injekční chromatografie SIC Postup měření v SIC Přehled aplikací SIC metody Monolitické kolony Charakteristika Monolitických kolon Anorganické monolity Makroporézní polymerní monolity Stlačitelné monolity (komprimované gely) 28 6

7 Reprodukovatelnost měření na monolitických kolonách Technologie přípravy monolitických kolon Monolitická vs. částicová struktura Experimentální část Použité přístroje, chemikálie a příprava roztoků Použité přístroje Použité chemikálie Příprava roztoků Vývoj a optimalizace separačního procesu Výběr vlnové délky pomocí spektrofotometrie Orientační zjištění retenčních časů na HPLC Výběr mobilní fáze Hodnocení separace pomocí vybraných validačních parametrů Stabilita roztoků Vytvoření SIA programu Vývoj separačního procesu v SIA systému Test vhodnosti chromatografického systému Opakovatelnost - retenční čas a plocha pod píkem Rozlišení píku Faktor symetrie píku Počet teoretických pater Stabilita roztoků Výsledky a diskuse Výběr vlnové délky pro detekci Výběr mobilní fáze Metanol Acetonitril Metanol-acetonitril 1: Vyhodnocení vybraných validačních parametrů Vyhodnocení opakovatelnosti Vyhodnocení stability Souhrn 59 7

8 6. Závěr Seznam literatury 61 8

9 Seznam zkratek A - vitamín A D 2 - vitamín D 2 D 3 - vitamín D 3 E tokoferol-acetát FIA - průtoková injekční analýza SIA - sekvenční injekční analýza SIC - sekvenční injekční chromatografie LOV Lab on Valve HPLC - vysokoúčinná kapalinová chromatografie GC - plynová chromatografie CE - kapilární elektroforéza A - absorbance C - koncentrace 9

10 1. ÚVOD A CÍL PRÁCE 1.1. Úvod práce Metoda sekvenční injekční analýzy SIA se vyvinula z průtokové injekční analýzy FIA. Jedná se o metodu počítačem řízeného zpracování vzorků, které nahradilo manuální činnost. Je to velice efektivní, účinná, rychlá, přesná metoda. Z toho vyplývá minimalizace chyb, které dříve vznikaly při manuálním používání FIA. Vzhledem k menší spotřebě vzorku a nosného proudu v SIA se snížilo množství odpadu a tím i dopad na naše životní prostředí [1]. Výhodou metody je její schopnost spojení s jinými analytickými technikami. SIA s využitím monolitických kolon dostala možnost kvalitnějšího separačního kroku srovnatelného s HPLC metodou, kde se využívají hlavně částicové kolony, jejichž nevýhodou je vysoký zpětný tlak při průtoku mobilní fáze. Monolitické kolony naopak poskytují separace v rychlejším čase než separace na klasických částicových kolonách a jejich výhodou je, že nejsou limitovány vysokým tlakem, vykazují nízký odpor a mohou být tedy použity při vyšších průtokových rychlostech v nízkotlakých průtokových systémech [1]. Vzhledem k výše popsaným výhodám monolitických kolon je sekvenční injekční chromatografie SIC alternativním řešením k HPLC separaci směsi menšího počtu látek. 10

11 1.2. Cíl práce Podstatou zadání této diplomové práce bylo stanovit vhodné podmínky pro optimální separaci a stanovení vitamínů A, D a E pomocí metody sekvenční injekční analýzy se zapojenou monolitickou kolonou. Po optimalizaci stanovení vitamínů A, D a E byla zvolena částečná validace pomocí vybraných validačních parametrů: opakovatelnost, asymetrie, rozlišení, počet teoretických pater a stabilita roztoků. 11

12 2. TEORETICKÁ ČÁST 2.1. Stanovované látky Vitamín A (axeroftol) Obr. č. 1: Vzorec Vitamínu A Vitamín A (axeroftol) je v tucích rozpustný vitamín. Existuje ve dvou přirozených formách vitamín A 1 (retinol) a vitamín A 2 (3-dehydroretinol). Vitamín A je nutný pro tvorbu rodopsinu, zrakového pigmentu používaného za nízkého osvětlení. Nedostatek vitamínu proto vede k šerosleposti. Vitamín A je také důležitý antioxidant. Fyzikálně chemické vlastnosti vitamínu A viz. tabulka č. 1 [2,3]. Tabulka č. 1: Fyzikálně chemické vlastnosti vitamínu A Sumární vzorec Molární hmotnost C 20 H 30 O 286,456 g/mol Teplota tání C Teplota varu C Doporučená denní dávka 900 μg (dospělý muž) 700 μg (dospělá žena) Maximální denní dávka 3000 μg Hypovitaminóza: poruchy vidění počínaje šeroslepostí, vysychání rohovky a spojivky a poškození epitelu, atrofie potních žláz, porucha tvorby růstu kostí Hypervitaminóza: poškození jater, závratě, bolesti hlavy Indikace: substituce v případě nedostatku, např. atrofické změny rohovky, akné či rohovatění kůže Kontraindikace: těhotné ženy Aplikace: perorální, intramuskulární [4] 12

13 Vitamín D 2 (Ergokalciferol) Obr. č. 2: Vzorec vitamínu D 2 Vitamín D 2 (Ergokalciferol) je v tucích rozpustný vitamín. Vzniká ze steroidních vitamínů. Spolu s parathormonem a kalcitoninem se účastní regulace vápníkové homeostázi. Fyzikálně chemické vlastnosti provitamínu D 2 a vitamínu D 2 viz. tabulka č. 2 [2,3]. Tabulka č. 2: Fyzikálně chemické vlastnosti provitamínu D 2 a vitamínu D 2. Ergosterol (provitamín D 2 ) Ergokalciferol (vitamín D 2 ) Sumární vzorec C 28 H 44 O C 28 H 44 O Molekulová hmotnost (g/mol) 396,63 396,63 Teplota tání ( o C) Spektrální charakteristika ( max - nm) 262; 271; 282; 293 (ethanol) 264,5 (hexan) Hypovitaminóza: u dětí se projevuje křivicí, u dospělých osteomalácií Hypervitaminóza: vyšší dávky D 2 mobilizují vápník z kostí a ten se pak ukládá v orgánech (ledvinách, plicích atd.) Indikace: rachitida u dětí, terapie hypovitaminózy, chronická renální onemocnění Kontraindikace: hyperkalcémie Aplikace: perorálně, intramuskulárně NÚ: zvracení [5] 13

14 Vitamín D 3 (cholekalciferol) Obr. č. 3: Vzorec vitamínu D 3 Vitamín D 3 (cholekalciferol) je v tucích rozpustný vitamín. Vzniká ze steroidních vitamínů. Spolu s parathormonem a kalcitoninem se účastní regulace vápníkové homeostázi. Fyzikálně chemické vlastnosti provitamínu D 3 a vitamínu D 3 viz. tabulka č. 3 [2,3]. Tabulka č. 3: Fyzikálně chemické vlastnosti provitamínu D 3 a vitamínu D 3 7-Dehydrocholesterol (provitamín D 3 ) Cholekalciferol (vitamín D 3 ) Sumární vzorec C 27 H 44 O C 27 H 44 O Molekulová hmotnost (g/mol) 384,62 384,62 Teplota tání ( o C) Spektrální charakteristika ( max - nm) 260; 270; 281; ,5 (hexan) Hypovitaminóza: u dětí se projevuje křivicí, u dospělých osteomalácií Hypervitaminóza: vyšší dávky D mobilizují vápník z kostí a ten se pak ukládá v orgánech (ledvinách, plicích atd.) Indikace: rachitida u dětí, terapie hypovitaminózy, chronická renální onemocnění Kontraindikace: digitálisové přípravky Aplikace: perorálně, intramuskulárně NÚ: zvracení, zácpa [6] 14

15 Vitamín E (tokoferol) Obr. č. 4: Vzorec vitamínu E Vitamín E (tokoferol) je v tucích rozpustný vitamín, výborný antioxidant. Velký obsah vitamínu E je obsažen v játrech. Nachází se v mase, mléce, vejcích. Vylučuje se játry a močí. Působí synergicky se selenem. Typy vitamínu E viz. tabulka č. 4 [2,3]. Tabulka č. 4: Typy vitamínu E Tokoferol α-tokoferol β-tokoferol γ-tokoferol δ-tokoferol Chemický název 5,7,8-trimethyltokol 5,8-dimethyltokol 7,8-dimethyltokol 8-methyltokol Hypovitaminóza: slabost, únava, poruchy plodnosti Indikace: hrozící potraty a svalová dystrofie, poruchy KVS, vzácnější typ anémie Kontraindikace: přecitlivost na složky přípravku Aplikace: perorálně NÚ: bolest hlavy, únava [7] 15

16 2.2. Metody stanovení Retinol-A Vlastnosti: žlutá olejovitá kapalina, všechny estery retinolu jsou nerozpustné ve vodě, rozpustné v ethanolu. Lékopisné stanovení obsahu dle ČL 2005 Dopl Stanovení aktivity: 25 až 100 mg se naváží s přesností 0,1 % a rozpustí v 5 ml pentanu R a zředí se propan-2-olem R1 na předpokládanou koncentraci 10 m.j. až 15 m.j. v mililitru. Změří se absorbance v maximu při 226 nm. Aktivita vitamínu A v gramech se vypočítá podle vzorce: A 326 V 1900 /100 m A326 absorbance při 326 nm V celkový objem, na který byla zkoušená látka naředěna, aby byla koncentrace 10 m.j. až 15 m.j. v mililitru 1900 faktor k převedení absorbance esterů retinolu na mezinárodní jednotky v gramu m hmotnost zkoušené látky v gramech [3] Ergokalciferol-D 2 Vlastnosti: slabě žluté nebo bílé krystalky. Nerozpustné ve vodě, rozpustné v lihu a mastných kyselinách. Vzduchem, teplem a světlem se rozkládá. Lékopisné stanovení dle ČL Provede se kapalinovou chromatografií. Zkoušený roztok: 10,0 mg ergokalciferolu se rozpustí v 10,0 ml toluenu R a zředí mobilní fází na 100,0 ml. Porovnávací roztok (a): 10,0 mg ergokalciferolu CRL se rozpustí v 10,0 ml toluenu R a zředí mobilní fází na 100,0 ml. Porovnávací roztok (b): 1,0 ml cholekalciferolu pro test způsobilosti CRL se zředí mobilní fází na 5 ml. Zahřívá se 45 minut pod zpětným chladičem a poté se ochladí. Provede se kapalinová chromatografie, ze které se následně vypočítá obsah. Mobilní fáze: směs objemových dílů pentan-1-olu R a hexanu R (3+997), průtoková rychlost je 2 ml/min, spektrofotometrická detekce při 254 nm. 16

17 Obsah ergokalciferolu v procentech se vypočítá podle vzorce: m /m x S D /S D x 100 m m S D navážku zkoušené látky ve zkoušeném roztoku v miligramech navážku ergokalciferolu CRL v porovnávacím roztoku(a) v miligramech plochu píku ergokalciferolu na chromatogramu zk. roztoku S D plochu píku ergokalciferolu na chromatogramu porovnávacího roztoku(a) [3] Cholekalciferol-D 3 Vlastnosti: bílé nebo téměř bílé krystaly. Nerozpustný ve vodě, rozpustný v lihu a mastných olejích. Vzduchem, teplem a světlem se rozkládá. Lékopisné stanovení dle ČL Provede se kapalinovou chromatografií Zkoušený roztok: 10,0 mg se rozpustí bez zahřívání v 10,0 ml toluenu R a zředí se mobilní fází na 100,0 ml. Porovnávací roztok (a): 10,0 mg cholekalciferolu CRL se bez zahřívání rozpustí v 10,0 ml toluenu R a zředí se mobilní fází na 100,0 ml Porovnávací roztok (b): 1,0 ml cholekalciferolu pro test způsobilosti CRL se zředí mobilní fází na 5,0 ml. Roztok se zahřívá 45 minut ve vodní lázni při 90 pod zpětným chladičem a ochladí se. Mobilní fáze: směs objemových dílů pentanolu R a hexanu R (3+997), průtoková rychlost je 2 ml/min, spektrofotometrická detekce při 254 nm. Obsah cholekalciferolu v procentech se vypočítá podle vzorce: m /m x S D /S D x 100 m m S D navážku zkoušené látky ve zkoušeném roztoku v miligramech navážku cholekalciferolu CRL v porovnávacím roztoku(a) v miligramech plochu píku cholekalciferolu na chromatogramu zk. roztoku S D plochu píku cholekalciferolu na chromatogramu porovnávacího roztoku(a) [3] 17

18 Tokoferol-E Vlastnosti: čirá bezbarvá nebo žlutohnědá viskózní olejovitá kapalina. Prakticky nerozpustný ve vodě, snadno rozpustný v acetonu, v ethanolu bezvodém, dichlormethanu, a v mastných olejích. Lékopisné stanovení obsahu dle ČL Stanovení pomocí plynové chromatografie. Vnitřní standard: 1,0 g skvalanu R se rozpustí v cyklohexanu R a zředí se jim na 100,0 ml. Zkoušený roztok (a): 0,100 g se rozpustí v 10,0 ml vnitřního standardu. Porovnávací roztok (a): 0,100 g tokoferol-alfa CRL se rozpustí v 10,0 ml roztoku vnitřního standardu. Průtoková rychlost 1 ml/min. Detekce: plamenoionizační detektor. Obsah v procentech se vypočítá z deklarovaného obsahu v tokoferolu-alfa CRL [3]. 18

19 2.3. SIA - sekvenční injekční analýza Úvod do sekvenční injekční analýzy (SIA) SIA neboli sekvenční injekční analýza, patří do skupiny průtokových analytických metod. Poprvé byla popsána roku 1990 Růžičkou a Marshalem na University of Washington v Seattle [1]. Vyvinula se z průtokové injekční analýzy. Z důvodu přesné synchronizace a opakovatelnosti kroků je řízena vždy počítačem, který kontroluje, ovládá a provádí vlastní měření. Principem je disperze vzorku v nosném proudu. Jeho pohyb je řízen pístovou pumpu a to v obou směrech s možností zastavení v určitém místě. Nosným proudem bývá často destilovaná voda, do které je aspirováno určité množství vzorku a činidel, měnících analyt na stanovitelný produkt. Aspirace probíhá v selekčním ventilu o různém množství portů. Mechanismem je aspirace vzorku a činidel pomocí pístové pumpy do mísící cívky. Po této fázi je nosným proudem posílána do detektoru, kde dojde k zaznamenání signálů a přenosu dat do počítače pro vyhodnocení a uchování výsledků analýzy. Výsledný signál je zaznamenáván ve formě píku [1]. V řídícím programu firmy FIAlab existuje ovládací a vyhodnocovací program, díky kterému lze provést automatickou manipulaci s analyzovaným vzorkem. Aspirovaný objem lze jednoduše zadat a také dle požadavků změnit. Rychlost, kterou aspirace, mísení a další pohyb v SIA systému probíhá, se nazývá průtoková. Je velice variabilní a umožňuje rychlou a účelnou analýzu. Objem, jak spotřebovaných vzorků, tak i použité mobilní fáze je menší, což vede k redukci množství odpadu. Je toho docíleno tím, že nosný proud není přiváděn kontinuálně, ale jen v určitých intervalech. Navíc jsou vzorky i činidla aspirovány pomocí příkazů v ovládacím programu a není tudíž nutný zásah do systému pro změnu jejich objemu. Objevují se vyšší hodnoty průtokových rychlostí, které jsou dány možností pístové pumpy. SIA metoda je principem hodně podobná FIA systému, přesto se liší a má určité výhody [1]. 19

20 Srovnání, odlišnosti, přednosti SIA a FIA Obě popsané techniky mají základní princip stejný, přesto se liší v mnoha detailech, což je předurčuje pro různé aplikace. Hlavními odlišnostmi jsou: U FIA systému se pohybuje nosný proud pouze jedním směrem a je čerpán neustále. Zatímco SIA má schopnost změny směru toku proudu a k aspiraci dochází jen při dávkování vzorku a činidel. Díky tomu je spotřeba roztoků v SIA nižší. Dalším rozdílem je dávkování vzorku. U FIA probíhá propláchnutím určitého objemu dávkovací smyčky injekčního ventilu nosným proudem. Tento objem lze bohužel změnit jen výměnou smyčky. U SIA se tyto děje uskutečňují pomocí selekčního ventilu a objem vzorku je řízen ovládacím programem. Průtokové rychlosti se volí podle účelu jednotlivých kroků měření a podle aplikací různých detekčních technik. U SIA se mohou použít i větší rychlostí, zatímco u FIA je vyšší zase frekvence dávkování. Detekční techniky jsou stejné. U SIA systému se navíc objevují detekční cely, které u FIA nemůžou být použity z důvodu nemožnosti obousměrného toku. Porovnání metody FIA a SIA viz. tabulka č. 5 [1]. Tabulka č. 5: Porovnání metody FIA a SIA Parametr FIA SIA Geometrie nosného proudu Kontinuální jednosměrný Diskontinuální obousměrný Typ čerpadla Peristaltická pumpa Pístová pumpa Typ dávkovacího ventilu Dvoupolohový injekční ventil Selekční ventil Počet kanálů v systému Jeden a více Jeden Objem vzorku Desítky-stovky Desítky Průtoková rychlost Do 2 ml/min Až 6 ml/min Objem odpadu Stovky ml Desítky ml Frekvence analýz Až 300 vzorků za hodinu Do 120 vzorků za hodinu Řízení systému Manuální i automatizované Automatizované 20

21 Jednotky SIA systému SIA systém je tvořen z několika základních jednotek: Čerpadlo Selekční ventil Mísící cívka Detektor Čerpadlo Čerpadlo poskytuje hnací sílu, pomocí které jsou aspirovány vzorky, činidla nebo mobilní fáze do systému [1] Pístová pumpa Pístová pumpa zajišťuje jednoduchou změnu směru toku nosného proudu při plnění pístu či jeho vyprazdňovaní. Součástí pístové pumpy je dvojcestný ventil, který je ovládán počítačem. Tok nosného proudu může poskytovat i peristaltická pumpa. Její přesnost je však nižší a generovaný tok není konstantní (vykazuje pulzování) [1] Selekční ventil Selekční ventil zajišťuje propojení jednotek systému a řídí pohyb nosného proudu svojí polohou. Na centrální port je většinou připojena mísící cívka a přes ni je připojena pístová pumpa. Na zbytek portů jsou připojeny vzorky, činidla, pomocný odpad a kanál vedoucí k detektoru. Dávkování roztoků selekčním ventilem je možné pouze při zastaveném toku nosného proudu. Ventil se přetočí do požadované polohy a následuje aspirace příslušného roztoku [1] Mísící cívky Mísící cívky slouží k dostatečnému promíchání vzorků s činidlem nebo několika činidly najednou. Hlavní cívka umístěná mezi selekčním ventilem a pístovou pumpou má navíc zabraňovat vstupu roztoků vzorku a činidel do pístu pístové pumpy. V tomto prostoru se vyskytuje pouze nosný proud [1]. 21

22 Detektory Způsob detekce záleží na charakteru měřeného vzorku. Nejčastěji používané typy detekce: Optická detekce: nejpoužívanější detekční systémy jsou spektrofotometry pracující v UV a viditelné oblasti. Důvodem je možnost detekce velkého počtu látek, které absorbují v UV oblasti. Nevýhodou je však nežádoucí přítomnost bublin, kterých je třeba se při použití této detekce vyvarovat (např. odplyněním používaných roztoků ultrazvukem). Dále se k optickým detektorům řadí detektory založené na principu fluorimetrie, atomové absorpční spektroskopie, chemiluminiscence a IR spektroskopie [1]. Elektrochemická detekce: je výhodná pro své vlastnosti, jako jsou vysoká selektivita, citlivost a lineární odpověď v širokém rozsahu koncentrací. Mezi tyto metody patří amperometrie, potenciometre, konduktometrie. Elektrochemické senzory v průtokových systémech můžeme rozdělit podle jejich geometrie na následující tři základní typy: anulární, vláknový a tzv. wall-jet typ. Anulární detektor představuje trubice vložená do průtokového kanálu. Vláknový detektor je kovová elektroda, jejíž povrch je rovnoběžný se směrem toku nosného proudu. Wall-jet typ tok přichází kolmo nebo pod určitým úhlem na aktivní povrch elektrody, který může být planární nebo sférický [1]. 22

23 2.4. Sekvenční injekční chromatografie SIC U většiny současných analytických metod je potřeba před vlastním stanovením provést krok oddělení jednotlivých složek vzorku. Doposud byly k tomuto účelu používané analytické metody např.: Plynová chromatografie GC, Kapilární elektroforéza CE a samozřejmě nejčastěji používaná metoda HPLC, která si doposud drží první místo mezi separačními technikami [8-11]. Uvedení monolitických kolon do běžné chromatografické praxe vedlo k jejich zapojení do SIA systému a tím byl umožněn separační krok i v této průtokové metodě. Jedná se o začlenění monolitické kolony mezi selekční ventil a průtokovou Z celu. Tato metoda byla poprvé prakticky vyzkoušena v Laboratoři průtokových metod Katedry analytické chemie Farmaceutické fakulty v Hradci Králové. Selekční ventil umožňuje mísení mobilní fáze on-line v SIA systému a díky pístové pumpě je umožněna změna průtokové rychlosti a směru toku. Sekvenční injekční chromatografie (SIC) je založena na aspiraci vzorků, jejich on-line zpracování (např. naředění, extrakční krok apod.) s následnou separací stanovovaných složek při průchodu vzorku kolonou. SIC zaplňuje mezeru mezi HPLC a FIA nebo SIA, které se zaměřují ve většině případů na stanovení pouze jediného analytu [8-11]. Přestože je ještě příliš brzy říci, zdali tato nově vyvinutá technika splní požadované očekávání, je snaha ukázat možnost jejího využití pro praktické aplikace. Je reálné předpokládat, že SIC metoda bude využívaná ve výzkumné oblasti, protože poskytuje řadu možností manipulace se vzorkem a také podmínky v systému i při samotné separaci je možné pružně a rychle měnit v ovládacím programu. Sekvenční injekční chromatografie (SIC), která byla vytvořena týmem pracovníků Katedry analytické chemie Doc. RNDr. D. Šatínský, Ph.D., Prof. RNDr. P. Solich, CSc, PharmDr. P. Chocholouš, Ph.D. a Prof. RNDr. R. Karlíček, DrSc., byla demonstrována na separaci účinných látek v kompozitním léčivém přípravku s využitím monolitní kolony v SIA systému [8-11]. Na rozdíl od konvenčních chromatografických technik, SIC je založena na programovatelném průtoku mobilní fáze, který je provázen zjednodušeným přístrojovým vybavením a sníženou spotřebou mobilní fáze i produkovaného odpadu. SIC technika byla dále zdokonalena prostřednictvím integrace do systému LOV a tím umožněné miniaturizace [1,8-11]. Schéma SIA systému viz obr. č

24 Obr. č. 5: Schéma SIA systému [1] Postup měření v SIC SIC protokol se skládá z pěti kroků: 1. Aspirace vzorku 2. Manipulace se vzorkem 3. Příprava mobilní fáze 4. Vlastní separace složek vzorku 5. Detekce analytů V rámci jednotného systému čerpadlo nasává vzorek přes selekční ventil do mísící cívky a obráceným tokem nosného proudu (mobilní fáze) ho posílá na monolitní kolonu, kde dochází k vlastní separaci. Odtud pokračuje do detektoru, kde je vyhodnocen signál a zaznamenány píky jednotlivých analytů. Na rozdíl od HPLC, která používá hlavně kolony plněné velmi jemnými částicemi a vysokotlaké čerpadlo k toku mobilní fáze kolonou, SIC používá pórovité monolitické kolony. Monolitické kolony, které jsou tvořeny sol-gel procesem, vykazují nízký 24

25 průtokový odpor a dostatečný počet teoretických pater poskytující efektivní separace vhodné i pro oddělení strukturně blízkých sloučenin [1,8-11] Přehled aplikací SIC metody Tabulka č. 6: Přehled SIC metody Látka Ambroxol, methyl paraben, benzoová kyselina Naphazolin nitrát, methylparaben Triamciolon, salicylová kyselina Betametason, chloramfenikol Triamciolon, methylparaben, propylparaben Salicylová kyselina, metylasalicylát Diklofenak sodný, methylparaben, propylparaben Ambroxol, hydrochlorid, doxyciklin Paracetamol, kofein, acetylsalicylová kyselina Kolona (mm) Průtoková rychlost (ml/min) Mobilní fáze 50 0,48 Acetonitril:tetrahydroforan: voda (10:10:90, v/v/v) s triethylaminem a kyselinou octovou 25 0,9 Methanol:voda (40:65, v/v) s triethylaminem a kyselinou octovou 50 0,9 Acetonitril:voda (35:65, v/v) s kyselinou octovou Detekce (nm) Čas analýzy (min) 245 < ; 256 < < ,48 Acetonitril:voda (30:80, v/v) 241; 271 < ,6 Acetonitril:methanol:voda 243 <6 19 (35:5:65, v/v/v) s 0,05% nonylaminem a H 3 PO ,6 Acetonitril:voda (35:60, v/v) 240 <7 20 s 98% H 3 PO ,48; 0,9; 1,2 Acetonitril:voda (40:70, v/v) s 0,05% trietylaminem a H 3 PO ,48 Acetonitril:voda (20:90, v/v) s 98% H 3 PO ,6 Acetonitril:voda (10:90, v/v) s 98% H 3 PO 4 Lidokain, prokain 25 0,6 Acetonitril:voda (40:80, v/v) s 0,01% trietylaminem a H 3 PO < < < <7 24 Citace Uvedené údaje se týkají separace farmaceuticky aktivních látek, doba analýz je zkrácená ve srovnání se separacemi na částicových kolonách. Je jen otázkou času, kdy se tato metoda dostane do popředí zájmu širší analytické obce a začnou se projevovat její výhody, které vybízejí k většímu rozšíření používání uvedené techniky. Vzhledem k jejím vlastnostem jako je nízký tlak v systému, vyšší průtoková rychlost, automatizace, rychlá analýza, menší spotřeba vzorků, menší odpad 25

26 a tím ochrana životního prostředí, tak i menší finanční náklady, mluví jen pro zavedení této metody do praxe [1,8-11] Monolitické kolony Účinnost kolony závisí na použité stacionární fázi, na délce kolony a na jejím průměru, na materiálu kolony, na úpravě vnitřního povrchu kolony a na množství spojovacích částí. Chromatografické kolony se zhotovují z nerezové oceli nebo ze skla. Nejvýhodnější jsou kovové kolony, jejichž vnitřní povrch je potažen vrstvou skla. V současnosti se obvykle používají kolony o délce 10 až 25 cm. Průměr analytických kolon bývá v řádu jednotek milimetrů. V současnosti se jako velice nadějné jeví tzv. sub-2 mikronové kolony, které poskytují velice kvalitní separaci při užití menšího objemu vzorku i mobilní fáze, ale objevuje se u nich vyšší zpětný tlak, takže jejich užití v nízkotlakých systémech by bylo příliš problematické [9,10] Charakteristika kolon Klasické částicové kolony o velikosti 3-5 µm mají výbornou separační účinnost, ale se snižující se velikostí sorbentu stoupá zpětný tlak, tudíž maximální rychlost průtoku je omezená. Monolitické kolony se od běžných stacionárních fází, které jsou plněny částicemi sorbentu o definované velikosti, liší tím, že jsou tvořeny jedním kusem pórovitého materiálu, který zcela vyplňuje vnitřek separační kolony. Největší výhodou monolitických kolon ve srovnání s klasickými částicemi plněnými kolonami jsou jejich hydrodynamické vlastnosti [9,10]. Monolitické kolony mají dva typy pórů: Velké póry (makropóry) zajišťují rychlý konvektivní tok mobilní fáze monolitem a významně zrychlují přenos hmoty mezi mobilní a stacionární fází. Středně velké póry (mesopóry) poskytují monolitu dostatečně veliký povrch, a tím vysokou separační kapacitu. Struktura umožňuje používání monolitů při značně vysokých rychlostech mobilních fází bez přílišného zvýšení tlaku a 26

27 zároveň bez ztráty separační účinnosti, a to i pro separované makromolekuly (bílkoviny, syntetické polymery) [9,10]. Podle kritérií jako jsou chemická podstata a způsob přípravy se mohou monolitické stacionární fáze rozdělit na: Anorganické monolity Makroporézní polymerní monolity Stlačitelné monolity (komprimované gely) Anorganické monolity Jsou to stacionarní fáze na bázi silikagelu. V současné době jsou komerčně dostupné pod značkou Chromolith od firmy Merck nebo v licenci od firmy Phenomenex kolony Onyx TM. Připravují se hydrolytickou polymerací tetramethoxysilanu nebo tetraethoxysilanu ve vodném roztoku kyseliny octové v přítomnosti polyethylenglykolu. Výroba umožňuje přípravu monolitů s přesně definovanou strukturou, kdy vznikají výhradně mesopóry a makropóry vhodných a nastavitelných rozměrů [9,10]. Nevýhodou těchto kolon je objemová kontrakce, ke které při zrání monolitu dochází, což vyžaduje zatěsnění monolitu do pláště kolony před jeho aplikací v HPLC. Připravené monolitické silikagelové kolony mohou být snadno modifikovány například zavedením oktadecylových funkčních skupin na jejich povrch pro použití v chromatografii s reverzními fázemi. Monolitické kolony poskytují srovnatelnou účinnost jako kolony konvenční s velikostí sorbentu 5 µm. Výhodou monolitu je ovšem skutečnost, že se mohou aplikovat podstatně vyšší průtoky mobilní fáze, např. při použití monolitické kolony o vnitřním průměru 4,6 mm a délce 10 cm, může rychlost mobilní fáze nabývat až 5 ml/min bez překročení tlakového limitu čerpadla a kolony. Silikagelové monolity se osvědčily na rozdíl od organických monolitů i při separaci malých molekul [9,10] Makroporézní polymerní monolity Tyto monolity jsou připravovány přímo v prázdné koloně, která se naplní polymerační směsí, tedy směsí monomerů, porogenů a iniciátorem, pak se uzavře a za tepla je 27

28 provedena polymerace. Monolit se následně promyje vhodným solventem pro odstranění nezpolymerizovaných látek a může být rovnou užit pro HPLC separace. K těmto typům organických polymerů se především řadí polymerní gely na bázi hydroxyethyl-methakrylátu, glycidyl-methakrylátu a polystyrenu [9,10] Stlačitelné monolity (komprimované gely) Koncem 80-tých let prováděl prof. Hjertén experimenty s částicemi neporézní agarózy a zjistil, že při stlačení sloupce sorbentu hydrostatickým tlakem proudící kapaliny překvapivě došlo ke zvýšení permeability stacionární fáze a současně i ke zlepšení separace. Na základě těchto experimentů připravil monolit polymerací vodného roztoku N,N -methylenbis-akrylamidu a kyseliny akrylové v přítomnosti anorganické soli (síran amonný), který následně v koloně silně stlačil (až na 10 % původního objemu) a s tímto materiálem získal velmi dobré separace bílkovin [9,10] Reprodukovatelnost měření na monolitických kolonách Přestože každá připravená monolitická kolona je vlastně prototypem, je jejich příprava většinou poměrně dobře reprodukovatelná. Například, reprodukovatelnost relativních retenčních časů dosahovaná na komerčních monolitech Chromolith vyjádřená jako RSD se pohybuje do 4 % [9,10] Technologie přípravy monolitických kolon Použití tradičních kolon založených na 3 a 5 µm částicích silikagelu je "věčným soubojem" účinnosti dělení a protitlaku, 3-mikronové sorbenty nabízejí vyšší účinnost spolu s negativním působením protitlaku, naopak 5-mikronové sorbenty protitlakem tolik netrpí, mají ale naopak nižší účinnost. Při vývoji silikagelu pro monolitické kolony byl brán zřetel právě na výše uvedená fakta a výsledkem je sorbent kombinující výhody silikagelu s částicemi obou velikostí. Technologickým řešením je bimodální struktura pórů obsahující velké póry zvané makropóry a póry s velkým povrchem nazývané mesopóry. Ačkoliv je fyzikální struktura silikagelu monolitických kolon diametrálně 28

29 odlišná od silikagelu tradičního, jsou chemické vlastnosti sorbentu velmi podobné a tak zde většinou odpadá problém s přenosem metod [9,10]. Monolitická silikagelová HPLC kolona je tvořena touto "tyčinkou" velmi čistého polymerního silikagelu zapouzdřenou v PEEK trubici opatřené příslušným šroubením [9,10]. Makropóry umožňují vysoký průtok kolonou (až do 9 ml/min) za nízkého protitlaku. Makropóry o průměru přibližně 2 µm tvoří prostorovou síť, kterou může mobilní fáze za nízkého tlaku rychle protékat a podstatně tak snížit dobu separace. Mezopóry s velkým povrchem vytvářejí naopak jemnou porézní strukturu vnitřní části kolony. Na vnitřním povrchu makropórů, dochází díky odlišným fyzikálně-chemickým vlastnostem analytů k jejich separaci viz obr. č. 6. Obr. č. 6: Složení monolitických kolon Unikátní kombinace makropórů a mezopórů v monolitických HPLC kolonách je klíčem k vynikající separaci analytů, dosažitelné navíc ve zlomku doby nutné ke stejné separaci na kolonách se standardními částicovými nosiči [9,10] Monolitická vs. částicová struktura Doposud byly náplně HPLC kolon vyráběny především ze sorbentů ve formě drobných, většinou sférických, částic. Malé částice již vlastní podstatou vytvářejí jako náplň kolon 29

30 výrazný odpor průtoku směsi mobilní fáze i vzorku. Navíc mají však také mnohá další omezení. Částicová fáze, A vysoký odpor průtoku mobilní fáze vysoký protitlak (zkracuje životnost HPLC zařízení) snížený výkon (dlouhá doba analýzy) trhání sloupce (zkracuje životnost, horší opakovatelnost) Monolitická fáze, B vysoký průtok (díky velké porozitě) nízký protitlak (menší namáhání HPLC zařízení) zvýšený výkon (zkracuje dobu analýzy) stabilita sloupce (delší životnost, lepší opakovatelnost) Obr. č. 7: Porovnání složení kolon (A částicová kolona; B monolitická kolona) 30

31 Tabulka č. 7: Specifikace monolitických kolon Typ silikagelu Vysoce čistý silikagel Struktura Monolitická Velikost pórů 130 Å mezopóry a 2 µm makropóry Objem pórů 1 ml/g Porozita > 80% Měrný povrch 300 sqm/g ph stabilita 2,0 7,5 Teplotní limit 45 C Tlakový limit 20 MPa (200 bar / 3000 psi) Výhody a přínosy monolitických kolon Účinnost separace je jedním z nejdůležitějších parametrů HPLC analýzy a monolitické kolony nabízí účinnost srovnatelnou s klasickými 3 µm nosiči. Účinnost lze navíc díky nízkému odporu fáze modifikovat zvýšením počtu teoretických pater HPLC systému zapojením několika kolon do série [9,10]. 31

32 3. EXPERIMENTÁLNÍ ČÁST 3.1. Použité přístroje, chemikálie a příprava roztoků Použité přístroje a) SIA FIAlab 3000, automatický SIA systém (FIAlab Inc., Seattle, USA) Software FIAlab for Windows 5.0 Pístové čerpadlo s objemem 5 ml Šesticestný selekční ventil (Valco Instruments Co., USA) Z průtoková optická 10 mm cela Monolitické kolony: 25 and 50 mm dlouhé Chromolith Flash RP-18e kolony, 4.6 mm I.D. (Merck, Germany). Monolitická kolona byla vždy zapojena mezi 6- cestný selekční ventil and 10 mm Z průtokovou detekční celu. UV světelný zdroj D-2000 CE USB 2000 UV-VIS CCD, detektor pracující s optickými vlákny (OceanOptics, USA) Solarizací rezistentní optická vlákna (Avantes, USA) Detekce - vlnové délky: 265 nm pro Vitamin D, 290 nm Vitamin E a 325 nm Vitamin A, vlnová délka 700 nm byla použita pro korekci základní linie Spojovací materiál: teflonové hadičky s vnitřním průměrem 0,50 mm b) HPLC systém HPLC LC 2010 C, Shimadzu Corp. (Kyoto, Japonsko) c) spektrofotometr Jednopaprskový UV-VIS diode array spektrofotometr Hewlett Packard 8453 (Agilent Technologies, Německo) d) Analytické váhy A&D HR

33 Použité chemikálie retinol (all-trans vitamin A), Sigma-Aldrich (Praha, Česká republika) ergocalciferol (D 2 ), Sigma-Aldrich (Praha, Česká republika) cholecalciferol crystalline (D 3 ) Sigma-Aldrich (Praha, Česká republika) tocoferol-acetate, Sigma-Aldrich (Praha, Česká republika) methanol, Sigma-Aldrich (Praha, Česká republika) n-hexane, Sigma-Aldrich (Praha, Česká republika) acetonitril, Sigma-Aldrich (Praha, Česká republika) deionisovaná purifikovaná voda upravená Milli-Q systémem (Millipore, Bedford, MA, USA) 33

34 Příprava roztoků Roztok vitamínu A: vznikl navážením 0,00286 g vitamínu A a rozpuštěním ve 100 ml 100 % metanolu. Výsledná koncentrace roztoku byla 100 µm. Roztok vitamínu D 2 : vznikl navážením 0,00397 g vitamínu D 2 a jeho rozpuštěním ve 100 ml 100 % metanolu. Výsledná koncentrace roztoku byla 100 µm. Roztok vitamínu D 3 : vznikl navážením 0, g do 20 ml 100 % metanolu. Výsledná koncentrace roztoku byla 100 µm. Roztok vitamínu E: vznikl navážením 0,5 g a rozpuštěním v 50 ml heptanu; 100 µl vzniklého roztoku bylo rozpuštěno v 10 ml 100% metanolu. Získaná koncentrace byla 2000 µm. Druhá koncentrace vznikla rozpuštěním 0,005 g v 50 ml heptanu a 100 µl vzniklého roztoku bylo rozpuštěno v 50 ml metanolu. Výsledná koncentrace byla 40 µm. 34

35 Standardní roztoky: Standardní roztok směsi vitamínů A a D 2 : vznikl smísením 5 ml 100 µm vitamínu A s 5 ml 100 µm vitamínu D 2 a jejich převedením do 50 ml baňky a doplněním 100 % metanolem. Standardní roztok směsi vitamínů A, E a D 2 c: vznikl smísením 5 ml 100 µm vitamínu A s 5 ml 100 µm vitamínu D 2 a 5 ml 40 µm vitamínu E. Standardní roztok směsi vitamínů A, E a D 2 c: vznikl smísením 10 ml 100 µm vitamínu A s 10 ml 100 µm vitamínu D 2 a 5 ml 40 µm vitamínu E. Standardní roztok směsi vitamínů A, E a D 3 c: vznikl smísením 5 ml 100 µm vitamínu A s 5 ml 100 µm vitamínu D 3 a 5 ml 40 µm vitamínu E. Standardní roztok směsi vitamínů A, E a D 3 c: vznikl smísením 10 ml 100 µm vitamínu A s 10 ml 100 µm vitamínu D 3 a 5 ml 40 µm vitamínu E. Všechny standardy byly skladovány při teplotě 4 C. 35

36 AU vit D vit A Vývoj a optimalizace separačního procesu Výběr vlnové délky pomocí spektrofotometrie Vhodná vlnová délka detekce, která byla následně použita v SIA systému pro detekci po separaci uvedených vitamínů, byla zjištěna proměřením jejich absorbčních spekter v UV oblasti pomocí diode array spektrofotometru. Měření spekter se provádělo pro roztoky vitamínů v methanolu. Z měření byly zjištěny vlnové délky absorbčních maxim jednotlivých vitamínů, tedy vlnové délky, při kterých je měření jejich absorbance nejcitlivější Orientační zjištění retenčních časů na HPLC Prvotní studie na HPLC Prvotní studie optimalizace separačního procesu byly prováděny na HPLC systému, z důvodu zjištění parametrů separace a přibližných hodnot retenčních časů, podle kterých pak byla navržena separační metoda v SIA systémů. Měření proběhla za použití monolitické kolony 25 mm dlouhé a metanolu jako mobilní fáze při průtokové rychlosti 1 ml/min Minutes Obr. č. 8: Separace vitamínů A a D pomocí HPLC, za použití 25 mm monolitické kolony a mobilní fáze metanolu při průtokové rychlosti 1 ml/min 36

37 Výběr mobilní fáze Odplyněná mobilní fáze byla vždy aspirována přes fritu do pístu pístové pumpy a použita v SIA systému místo nosného proudu. Nejdříve byl vybrán jako mobilní fáze metanol. Testoval se na monolitických kolonách o délce 25 a 50 mm (Chromolith Flash RP-18e) průměr 4,6 mm. Zkoušeným vzorkem byl standardní roztok vitamínů A a D 2. Byla testována různá průtoková rychlost mobilní fáze. Druhou mobilní fázi byl zvolen acetonitril. Použité podmínky byly stejné. Opět jsme zkoušely mobilní fázi na separaci standardního roztoku vitamínů A a D 2 na obou typech kolon. Třetí mobilní fází byla směs methanolu a acetonitrilu 1:1. Opět jsme použily obě kolony, na kterých byly testovány různé průtokové rychlosti mobilní fáze. V tomto případě 5 cm kolona nevyhovovala, protože retenční čas vitamínu D 2 byl 650 s, což by příliš prodlužovalo analýzu Hodnocení separace pomocí vybraných validačních parametrů Účinnost systému navržené SIC metody byla zjišťována pomocí vybraných validačních parametrů. Ze základních chromatografických parametrů byla vypočítaná data jako faktor symetrie As, rozlišení Rs, počet teoretických pater N a opakovatelnost výšky píků jednotlivých látek hodnocených jako měřená absorbance. Symetrie, rozlišení a počet teoretických pater byly vypočítány ze třech nástřiků roztoků standardů, opakovatelnost byla vyhodnocena ze šesti nástřiků Stabilita roztoků Byly změřeny roztoky vitamínů A-100 µm, D 2 c -100 µm, D 3 c100 µm, a E 40 µm, které byly nastřikovány po 4 dny, a to 1., 2., 4. a 7. den, vždy 6x za sebou. Připravené roztoky byly po celou dobu hodnocení stability uchovávány v tmavých odměrných baňkách při teplotě 4 C. Měření probíhalo při nalezených optimálních podmínkách separace (viz. Souhrn). Z výsledků absorbancí píků a retenčních časů byli pak vypočítány hodnoty RSD v % pro retenční čas i absorbancí určitého píku každého dne. 37

38 Údaje z prvního den byl vzat jako 100 % a další dny byly dopočítány vzhledem ke dni prvnímu Vytvoření SIA programu Celý SIA systém je řízen softwarem počítače, takže bylo nutné sestavit jednoduchý ovládací program, který krok po kroku ovládal jednotlivé části přístroje. Analýza probíhala za dříve uvedených podmínek. Celý SIA program, podle něhož probíhala analýza je uveden v tabulce č. 8. Tabulka č. 8: Sestavený SIA program Jednotka Příkaz Dvoucestný ventil Poloha IN Pístová pumpa Aspirace mobilní fáze 2000 µl, při rychlosti 100 µl/s Dvoucestný ventil Poloha OUT Vícecestný ventil Port 2 Pístová pumpa Nasávání vzorku 20 µl, při rychlosti toku Vícecestný ventil Pístová pumpa Spektrofotometr Port 6 DETEKTOR Analýza vzorku Transport vzorku na kolonu a do detektoru rychlostí 10 µl/s Měření absorbance Pík na chromatogramu Ukončení jednoho cyklu (3 cykly pro každý vzorek) 3.4. Vývoj separačního procesu v SIA systému Výsledky prvních experimentů na SIA systému. Monolitická kolona 25 mm dlouhá (Chromolith Flash RP-18e) průměr 4,6 mm. byla zapojena mezi vícecestný selekční 38

39 ventil a průtokovou Z celu. Separace provedena za těchto podmínek je znázorněna na SIC chromatogramu, viz obr. č. 24., kapitola Výsledky a hodnocení Test vhodnosti chromatografického systému Účinnost systému navržené SIC metody byla zjišťována pomocí vybraných validačních parametrů, jako jsou opakovatelnost, asymetrie, rozlišení píků a počet teoretických pater [14]. Ze základních chromatografických parametrů byla vypočítána data jako faktor symetrie A S, Rozlišení R S, počet teoretických pater a opakovatelnost. Hodnoty dosažených parametrů jsou přehledně znázorněny v tabulce č Retenční čas a retenční objem V R = t R. v Je to interval od nástřiku vzorku do okamžiku detekce odpovídající průchodu maximální koncentrace látky detektorem V R retenční objem t R retenční čas v průtoková rychlost mobilní fáze Rozlišení píku R S = 1,18.( t R2 t R1 ) / (W h1 + W h2 ) t R1, t R2 retenční časy dvou sousedních píků W h1, W h2 šířky píků v poloviční výšce - hodnota rozlišení umožňuje číselně vyjádřit úroveň separace - látky považujeme za zcela oddělené, jestliže R 1,5 - v případě symetrických píků mnohdy postačí rozlišení R = 1, Faktor symetrie píku W 0,05 2d A S = W 0,05 / 2d šířka píku v jedné dvacetině jeho výšky vzdálenost mezi kolmicí spuštěnou z vrcholu píku a vzestupnou částí píku v jedné dvacetině jeho výšky 39

40 Počet teoretických pater Vychází z hypotetického předpokladu, že kolona může být rozdělena na sled elementárních jednotek pater. V rámci jednoho patra se uskuteční kompletní elementární separační krok. Tato teorie (odvozená z diskontinuálních procesů vícestupňové extrakce a kolonové destilace) nemůže být přijata bez výhrad. Pro praxi však přináší výhodné vyjadřování účinnosti chromatografických kolon počtem teoretických pater a výškou teoretického patra, popřípadě pro srovnání separační účinnosti kolon různých délek se používá parametr výškový ekvivalent teoretického patra. t R W h N = 5,54. ( t R /W h ) 2 retenční čas šířka píku v polovině jeho výšky N počet teoretických pater [14] Opakovatelnost Jeden roztok standardu analyzované látky se x nastříkne na kolonu a změří se odpovídající plochy píku (Ai) v našem případě výšky píků (sledované jako absorbance procházející složky) - a retenční časy t R1. Získané hodnoty se hodnotí pomocí relativní směrodatné odchylky RSD. RSD-relativní směrodatná odchylka v %.100 s /ø s směrodatná odchylka = ( (xi- ø) 2 /(n-1)) n počet měření ø průměr hodnot požadavek SR 1 % 40

41 Absorbance (AU) Absorbance (AU) VÝSLEDKY A DISKUZE 4.1. Výběr vlnové délky pro detekci Na spektrofotometru byly zjištěny absorpční maxima pro vitamín A nm, D nm, E nm. Použitý SIA systém umožňuje detekci při čtyřech vlnových délkách najednou, takže na základě zjištěných výsledků a konkrétních měření v SIA systému byly zvoleny měřící vlnové délky detektoru A 325 nm, D 265 nm, E 290 nm a vlnová délka pro korekci základní linie byla zvolena při 700 nm. Spektra jednotlivých vitamínů jsou uvedeny na Obr. č Obr. č. 9: UV spektrum vitamínu A Wavelength (nm) Obr. č. 10: UV spektrum vitamínu D

42 Absorbance (AU) Absorbance (AU) Obr. č. 11: UV spektrum vitamínu D Wavelength (nm) Obr. č. 12: UV spektrum tokoferol acetátu Wavelength (nm) 42

43 Abs orbance 4.2. Výběr mobilní fáze Metanol Pro kolonu o délce 25 mm bylo možno použít rychlosti až do 40 µl/s, zatímco u kolony o délce 50 mm došlo většinou k zastavení pumpy u rychlosti 15 µl/s a vyšší rychlosti nebylo možné využít kvůli vyššímu zpětnému tlaku. Vitamíny A a D 2 se při zvýšené průtokové rychlosti vymývaly z kolony blízko sebe, takže rozdíly retenčních časů byly nepatrné. Pro úspěšné stanovení obou vitamínů však bylo potřeba, aby se vyhodnocované píky dokonale separovaly, abychom zajistili opakovatelnou a robustní separaci obou vitamínů. V některých záznamech nebyl separován pík vitamínu A od mrtvého objemu. Konkrétní výsledky jsou uvedeny v tabulkách č a v grafech na obrázcích č ,16 0,14 0,12 0,10 0,08 0,06 0,04 0,02 0,00-0,02 A D R etenč ní č a s (s) Obr. č. 13: Chromatogram separace vitamínů A a D 2 (délka kolony 25 mm, mobilní fáze metanol, průtoková rychlost - 40 µl/s) 43

44 Průtoková rychlost (µl/s) Separace vitamínů A a D 2, délka kolony 25 mm, mobilní fáze metanol Tabulka č. 9: Vitamín A, mobilní fáze - metanol Měření Průtoková rychlost (µl/s) Retenční čas (s) Tabulka č. 10: Vitamín D 2, mobilní fáze - metanol Měření Průtoková rychlost (µl/s) Retenční čas (s) Čas (s) Vitamin A Vitamin D2 Obr. č. 14: Závislost průtokové rychlosti na retenčních časech vitamínů A, D 2 ; délka kolony 25 mm; mobilní fáze metanol 44

45 Průtoková rychlost ( µl/s) Separace vitamínů A a D 2, délka kolony 50 mm, mobilní fáze metanol Tabulka č. 11: Vitamín A, mobilní fáze - metanol Měření Průtoková rychlost (µl/s) Retenční čas (s) Tabulka č. 12: Vitamín D 2, mobilní fáze - metanol Měření Průtoková rychlost (µl/s) Retenční čas (s) Čas (s) Vitamin A Vitamin D2 Obr. č. 15: Závislost průtokové rychlosti na retenčních časech A, D 2 ; délka kolony 50 mm; mobilní fáze - metanol 45

46 Separace vitamínů A, D 2 (D 3 ) a E, délka kolony 25 mm, mobilní fáze metanol Tabulka č. 13: Vitamín A, mobilní fáze - metanol Měření Průtoková rychlost (µl/s) Retenční čas (s) Tabulka č. 14: Vitamín D 2, mobilní fáze - metanol Měření Průtoková rychlost (µl/s) Retenční čas (s) Tabulka č. 15: Vitamín D 3, mobilní fáze - metanol Měření Průtoková rychlost (µl/s) Retenční čas (s) Tabulka č. 16: Vitamín E, mobilní fáze - metanol Měření Průtoková rychlost (µl/s) Retenční čas (s)

47 Absorbance Průtoková rychlost (µl/s) Čas (s) Vitamin A Vitamin D3 Vitamin D2 Vitamin E Obr. č. 16: Závislost průtokové rychlosti na retenčních časech A, D 2, D 3, E; délka kolony 25 mm; mobilní fáze - metanol Acetonitril Při experimentech s různými průtokovými rychlostmi, jako v předchozím případě i zde, se ukázalo, že při použití kratší kolony můžeme použít vyšší rychlosti průtoku než u delší kolony. V tomto případě se opět mrtvý objem překrýval s vitamínem A. Výsledky experimentů jsou shrnuty v tabulkách č a v grafech na obr. č ,30 0,25 0,20 A 0,15 0,10 0,05 D 2 D 0,00-0,05-0, Retenční čas (s) Obr. č. 17: Chromatogram separace vitamínů A a D 2 (délka kolony 25 mm, mobilní fáze acetonitril, průtoková rychlost - 40 µl/s) 47

L 54/116 CS Úřední věstník Evropské unie

L 54/116 CS Úřední věstník Evropské unie L 54/116 CS Úřední věstník Evropské unie 26.2.2009 8. Výsledky kruhových testů V rámci ES byly provedeny kruhové testy, při nichž až 13 laboratoří zkoušelo čtyři vzorky krmiva pro selata, včetně jednoho

Více

Průtokové metody (Kontinuální měření v proudu kapaliny)

Průtokové metody (Kontinuální měření v proudu kapaliny) Průtokové metody (Kontinuální měření v proudu kapaliny) 1. Přímé měření: analyzovaná kapalina většinou odvětvena + vhodný detektor 2. Kapalinová chromatografie (HPLC) Stanovení po předchozí separaci 3.

Více

CS Úřední věstník Evropské unie L 54/89

CS Úřední věstník Evropské unie L 54/89 26.2.2009 CS Úřední věstník Evropské unie L 54/89 c) při vlnové délce mezi 230 a 320 nm se nesmí spektrum vzestupné části, vrcholu a sestupné části píku zkoušeného vzorku lišit od ostatních částí spektra

Více

Jednotné pracovní postupy zkoušení krmiv STANOVENÍ OBSAHU DEKOCHINÁTU METODOU HPLC

Jednotné pracovní postupy zkoušení krmiv STANOVENÍ OBSAHU DEKOCHINÁTU METODOU HPLC Národní referenční laboratoř Strana 1 STANOVENÍ OBSAHU DEKOCHINÁTU METODOU HPLC 1 Rozsah a účel Tato metoda specifikuje podmínky pro stanovení dekochinátu metodou vysokoúčinné kapalinové chromatografie

Více

ERYTHROMYCINI ETHYLSUCCINAS. Erythromycin-ethylsukcinát

ERYTHROMYCINI ETHYLSUCCINAS. Erythromycin-ethylsukcinát ERYTRMYCII ETYLSUCCIAS Erythromycin-ethylsukcinát RZ 1 :0274 3 C 3 C R 1 3 C 3 C R 2 Ethylsukcinát Sumární vzorec M r R 1 R 2 erythromycinu A C 43 75 16 862,06 erythromycinu B C 43 75 15 846,06 erythromycinu

Více

Analýza kofeinu v kávě pomocí kapalinové chromatografie

Analýza kofeinu v kávě pomocí kapalinové chromatografie Analýza kofeinu v kávě pomocí kapalinové chromatografie Kofein (obr.1) se jako přírodní alkaloid vyskytuje v mnoha rostlinách (např. fazolích, kakaových bobech, černém čaji apod.) avšak nejvíce je spojován

Více

Vysokoúčinná kapalinová chromatografie High-Performance Liquid Chromatography (HPLC) Příprava předmětu byla podpořena projektem OPPA č. CZ.2.17/3.1.00/33253 Kapalinová chromatografie (LC) 1.1. Teorie kapalinové

Více

Jednotné pracovní postupy zkoušení krmiv STANOVENÍ OBSAHU SEMDURAMICINU METODOU HPLC

Jednotné pracovní postupy zkoušení krmiv STANOVENÍ OBSAHU SEMDURAMICINU METODOU HPLC Strana 1 STANOVENÍ OBSAHU SEMDURAMICINU METODOU HPLC 1 Rozsah a účel Postup specifikuje podmínky pro stanovení obsahu semduramicinu v krmivech metodou vysokoúčinné kapalinové chromatografie (HPLC) v koncentračním

Více

Jednotné pracovní postupy zkoušení krmiv STANOVENÍ OBSAHU VITAMÍNU A A VITAMÍNU E METODOU HPLC

Jednotné pracovní postupy zkoušení krmiv STANOVENÍ OBSAHU VITAMÍNU A A VITAMÍNU E METODOU HPLC Národní referenční laboratoř Strana 1 STANOVENÍ OBSAHU VITAMÍNU A A VITAMÍNU E METODOU HPLC 1 Účel a rozsah Postup specifikuje podmínky pro stanovení vitamínu A a vitamínu E v krmivech a premixech. 2 Princip

Více

Aplikační rozsah chromatografie

Aplikační rozsah chromatografie Chromatografické metody II. Aplikační rozsah chromatografie Chromatografie Kapalinová chromatografie rozdělení Nízkotlaká (atmosferický tlak) LPC Střednětlaká (4 Mpa) FPLC Vysokotlaká (40 Mpa) HPLC Ultravysokotlaká

Více

Jednotné pracovní postupy zkoušení krmiv STANOVENÍ OBSAHU MADURAMICINU A SEMDURAMICINU METODOU HPLC

Jednotné pracovní postupy zkoušení krmiv STANOVENÍ OBSAHU MADURAMICINU A SEMDURAMICINU METODOU HPLC Národní referenční laboratoř Strana 1 STANOVENÍ OBSAHU MADURAMICINU A SEMDURAMICINU METODOU HPLC 1 Rozsah a účel Metoda specifikuje podmínky pro stanovení maduramicinu a semduramicinu v krmivech a premixech.

Více

Konfirmace HPLC systému

Konfirmace HPLC systému Mgr. Michal Douša, Ph.D. Obsah 1. Měření modulové... 2 1.1 Těsnost pístů tlakový test... 2 1.2 Teplota autosampleru (správnost a přesnost)... 2 1.3 Teplota kolonového termostatu... 2 1.3.1 Absolutní hodnota...

Více

SPE je metoda vhodná pro rychlou přípravu vzorků, která užívá

SPE je metoda vhodná pro rychlou přípravu vzorků, která užívá Extrakce na pevné fázi (SPE) Příprava předmětu byla podpořena projektem OPPA č. CZ.2.17/3.1.00/33253 Extrakce na pevné fázi (SPE) (Solid Phase Extraction) SPE je metoda vhodná pro rychlou přípravu vzorků,

Více

Trendy v moderní HPLC

Trendy v moderní HPLC Trendy v moderní HPLC Josef Cvačka, 5.1.2011 CHROMATOGRAFIE NA ČIPECH Miniaturizace separačních systémů Mikrofluidní čipy Mikrofabrikace Chromatografické mikrofluidní čipy s MS detekcí Praktické využití

Více

Jednotné pracovní postupy zkoušení krmiv STANOVENÍ OBSAHU VITAMÍNU D METODOU LC/MS

Jednotné pracovní postupy zkoušení krmiv STANOVENÍ OBSAHU VITAMÍNU D METODOU LC/MS Národní referenční laboratoř Strana 1 STANOVENÍ OBSAHU VITAMÍNU D METODOU LC/MS 1 Účel a rozsah Tento postup specifikuje podmínky pro stanovení vitamínu D3 v krmivech metodou LC/MS. 2 Princip Zkušební

Více

CS Úřední věstník Evropské unie L 54/85

CS Úřední věstník Evropské unie L 54/85 26.2.2009 CS Úřední věstník Evropské unie L 54/85 F. STANOVENÍ DICLAZURILU 2,6-dichlor-alfa-(4-chlorofenyl)-4-(4,5-dihydro-3,5-dioxo-1,2,4-triazin-2-(3-H)yl)benzenacetonitril 1. Účel a rozsah Tato metoda

Více

Jednotné pracovní postupy zkoušení krmiv STANOVENÍ OBSAHU 5-VINYL - 2-THIOOXAZOLIDONU (GOITRINU) METODOU GC

Jednotné pracovní postupy zkoušení krmiv STANOVENÍ OBSAHU 5-VINYL - 2-THIOOXAZOLIDONU (GOITRINU) METODOU GC Národní referenční laboratoř Strana 1 STANOVENÍ OBSAHU 5-VINYL - 2-THIOOXAZOLIDONU (GOITRINU) METODOU GC 1 Rozsah a účel Metoda specifikuje podmínky pro stanovení vinylthiooxazolidonu (dále VOT) v krmivech.

Více

Příprava materiálu byla podpořena projektem OPPA č. CZ.2.17/3.1.00/33253

Příprava materiálu byla podpořena projektem OPPA č. CZ.2.17/3.1.00/33253 Příprava materiálu byla podpořena projektem OPPA č. CZ.2.17/3.1.00/33253 Část 16 Iontová chromatografie Iontová chromatografie je speciální technika vyvinutá pro separaci anorganických iontů a organických

Více

Vysokoúčinná kapalinová chromatografie

Vysokoúčinná kapalinová chromatografie Vysokoúčinná kapalinová chromatografie HPLC High Performance Liquid Chromatography Vysokoúčinná...X... Vysoceúčinná kapalinová chromatografie RRLC Rapid Resolution Liquid Chromatography Rychle rozlišovací

Více

L 54/80 CS Úřední věstník Evropské unie

L 54/80 CS Úřední věstník Evropské unie L 54/80 CS Úřední věstník Evropské unie 26.2.2009 7.1.2 Detektor diodového pole Výsledky jsou posuzovány podle následujících kritérií: a) při vlnové délce maximální absorpce vzorku i standardu musí být

Více

Mikrofluidní systémy a možnosti jejich automatizovaného a vzdáleného řízení

Mikrofluidní systémy a možnosti jejich automatizovaného a vzdáleného řízení SPOLEČNĚ PRO VÝZKUM, ROZVOJ A INOVACE CZ/FMP.17A/0436 Mikrofluidní systémy a možnosti jejich automatizovaného a vzdáleného řízení Ondřej Zítka 09. 04. 2015, 13:00 13:20 h Laboratoř metalomiky a nanotechnologií,

Více

Aplikace AAS ACH/APAS. David MILDE, Úvod

Aplikace AAS ACH/APAS. David MILDE, Úvod Aplikace AAS ACH/APAS David MILDE, 2017 Úvod AAS: v podstatě 4atomizační techniky: plamenová atomizace (FA), elektrotermická atomizace (ETA), generování těkavých hydridů (HG), určené pro stanovení As,

Více

Metody separace. přírodních látek

Metody separace. přírodních látek Metody separace přírodních látek (5) Chromatografie; základní definice a klasifikace ruzných metod; kapalinová chromatografie, plynová chromatografie, přístrojová technika. Chromatografie «F(+)d» 1897

Více

UNIVERZITA PARDUBICE Fakulta chemicko-technologická Katedra analytické chemie. Nám. Čs. Legií 565, Pardubice.

UNIVERZITA PARDUBICE Fakulta chemicko-technologická Katedra analytické chemie. Nám. Čs. Legií 565, Pardubice. UNIVERZITA PARDUBICE Fakulta chemicko-technologická Katedra analytické chemie Nám. Čs. Legií 565, 532 10 Pardubice 15. licenční studium INTERAKTIVNÍ STATISTICKÁ ANALÝZA DAT Semestrální práce VYUŽITÍ TABULKOVÉHO

Více

Sekvenční injekční analýza (Stanovení obsahu dusitanů rivanolovou metodou)

Sekvenční injekční analýza (Stanovení obsahu dusitanů rivanolovou metodou) Sekvenční injekční analýza (Stanovení obsahu dusitanů rivanolovou metodou) Teorie: Sekvenční injekční analýza (SIA) je průtoková analytická metoda, řešící některé nedostatky průtokové injekční analýzy

Více

Jednotné pracovní postupy zkoušení krmiv STANOVENÍ OBSAHU MYKOTOXINŮ METODOU LC-MS - aflatoxin B1, B2, G1 a G2

Jednotné pracovní postupy zkoušení krmiv STANOVENÍ OBSAHU MYKOTOXINŮ METODOU LC-MS - aflatoxin B1, B2, G1 a G2 Národní referenční laboratoř Strana 1 STANOVENÍ OBSAHU MYKOTOXINŮ METODOU LC-MS - aflatoxin B1, B2, G1 a G2 1 Rozsah a účel Metoda je vhodná pro stanovení aflatoxinů B1, B2, G1 a G2 v krmivech. 2 Princip

Více

Studijní materiál HMF_1 1. Hydroxymethylfurfural a jeho stanovení v potravinách 2. Kapalinová chromatografie (HPLC, UPLC)

Studijní materiál HMF_1 1. Hydroxymethylfurfural a jeho stanovení v potravinách 2. Kapalinová chromatografie (HPLC, UPLC) Studijní materiál HMF_1 1. Hydroxymethylfurfural a jeho stanovení v potravinách 2. Kapalinová chromatografie (HPLC, UPLC) V Brně dne 20. 11. 2011 Vypracoval: RNDr. Ivana Borkovcová, Ph.D. 1. Hydroxymethylfurfural

Více

ÚSTAV CHEMIE A ANALÝZY POTRAVIN

ÚSTAV CHEMIE A ANALÝZY POTRAVIN VYSOKÁ ŠKOLA CHEMICKO-TECHNOLOGICKÁ V PRAZE ÚSTAV CHEMIE A ANALÝZY POTRAVIN Technická 5, 166 28 Praha 6 tel./fax.: + 420 220 443 185; jana.hajslova@vscht.cz LABORATOŘ Z ANALÝZY POTRAVIN A PŘÍRODNÍCH PRODUKTŮ

Více

CHROMATOGRAFIE ÚVOD Společný rys působením nemísících fází: jedna fáze je nepohyblivá (stacionární), druhá pohyblivá (mobilní).

CHROMATOGRAFIE ÚVOD Společný rys působením nemísících fází: jedna fáze je nepohyblivá (stacionární), druhá pohyblivá (mobilní). CHROMATOGRAFIE ÚOD Existují různé chromatografické metody, viz rozdělení metod níže. Společný rys chromatografických dělení: vzorek jako směs látek - složek se dělí na jednotlivé složky působením dvou

Více

Jednotné pracovní postupy zkoušení krmiv STANOVENÍ OBSAHU NEPOVOLENÝCH DOPLŇKOVÝCH LÁTEK METODOU LC-MS

Jednotné pracovní postupy zkoušení krmiv STANOVENÍ OBSAHU NEPOVOLENÝCH DOPLŇKOVÝCH LÁTEK METODOU LC-MS Národní referenční laboratoř Strana 1 STANOVENÍ OBSAHU NEPOVOLENÝCH DOPLŇKOVÝCH LÁTEK METODOU LC-MS 1 Účel a rozsah Tato metoda specifikuje podmínky pro stanovení nepovolených doplňkových látek Zn-bacitracinu,

Více

VYUŽITÍ TEPELNÉHO ZMLŽOVAČE V AAS

VYUŽITÍ TEPELNÉHO ZMLŽOVAČE V AAS 1 VYUŽITÍ TEPELNÉHO ZMLŽOVAČE V AAS JAN KNÁPEK Katedra analytické chemie, Přírodovědecká fakulta MU, Kotlářská 2, Brno 611 37 Obsah 1. Úvod 2. Tepelný zmlžovač 2.1 Princip 2.2 Konstrukce 2.3 Optimalizace

Více

VITAMÍNY ROZPUSTNÉ V TUCÍCH. Retinoidy (vitamin A) A, E a D v nezmýdelnitelném podílu, K se rozkládá

VITAMÍNY ROZPUSTNÉ V TUCÍCH. Retinoidy (vitamin A) A, E a D v nezmýdelnitelném podílu, K se rozkládá VITAMÍNY ZPUSTNÉ V TUCÍCH A, E a D v nezmýdelnitelném podílu, K se rozkládá etinoidy (vitamin A) Účinná forma vitaminu A: retinol (all trans-), neoretinal ( 13-cis, trans-), retinal H 3 C = CH2 H = HCH

Více

Sekvenční injekční analýza laboratoř na ventilu (SIA-LOV) (Stanovení obsahu heparinu v injekčním roztoku)

Sekvenční injekční analýza laboratoř na ventilu (SIA-LOV) (Stanovení obsahu heparinu v injekčním roztoku) Sekvenční injekční analýza laboratoř na ventilu (SIA-LOV) (Stanovení obsahu heparinu v injekčním roztoku) Teorie: Sekvenční injekční analýza (SIA) je další technikou průtokové analýzy, která umožňuje snadnou

Více

MINIATURIZACE PRŮTOKOVÝCH ELEKTROCHEMICKÝCH CEL PRO GENEROVÁNÍ TĚKAVÝCH SLOUČENIN. Jakub Hraníček

MINIATURIZACE PRŮTOKOVÝCH ELEKTROCHEMICKÝCH CEL PRO GENEROVÁNÍ TĚKAVÝCH SLOUČENIN. Jakub Hraníček MINIATURIZACE PRŮTOKOVÝCH ELEKTROCHEMICKÝCH CEL PRO GENEROVÁNÍ TĚKAVÝCH SLOUČENIN Jakub Hraníček Katedra analytické chemie, Přírodovědecká fakulta, Univerzita Karlova, Albertov 6, 128 43 Praha 2 E-mail:

Více

Jednotné pracovní postupy zkoušení krmiv STANOVENÍ OBSAHU MYKOTOXINŮ METODOU LC-MS - FUMONISIN B 1 A B 2

Jednotné pracovní postupy zkoušení krmiv STANOVENÍ OBSAHU MYKOTOXINŮ METODOU LC-MS - FUMONISIN B 1 A B 2 Národní referenční laboratoř Strana 1 STANOVENÍ OBSAHU MYKOTOXINŮ METODOU LC-MS - FUMONISIN B 1 A B 2 1 Rozsah a účel Metoda je vhodná pro stanovení fumonisinů B 1 a B 2 v krmivech. 2 Princip Fumonisiny

Více

Jednotné pracovní postupy zkoušení krmiv Vydání 1 STANOVENÍ OBSAHU KOKCIDIOSTATIK METODOU LC-MS

Jednotné pracovní postupy zkoušení krmiv Vydání 1 STANOVENÍ OBSAHU KOKCIDIOSTATIK METODOU LC-MS Strana 1 STANOVENÍ OBSAHU KOKCIDIOSTATIK METODOU LC-MS 1 Účel a rozsah Postup specifikuje podmínky pro stanovení diclazurilu, halofuginonu, lasalocidu, maduramicinu, monensinu, narasinu, nikarbazinu, robenidinu,

Více

Derivační spektrofotometrie a rozklad absorpčního spektra

Derivační spektrofotometrie a rozklad absorpčního spektra Derivační spektrofotometrie a rozklad absorpčního spektra Teorie: Derivační spektrofotometrie, využívající derivace absorpční křivky, je obecně používanou metodou pro zvýraznění detailů průběhu záznamu,

Více

Problémy v kapalinové chromatografii. Troubleshooting

Problémy v kapalinové chromatografii. Troubleshooting Problémy v kapalinové chromatografii Troubleshooting Problémy v HPLC Většinu problémů, které se vyskytují při separaci látek na chromatografické koloně můžeme vyčíst již z pouhého průběhu základní linie,

Více

L 54/76 CS Úřední věstník Evropské unie 26.2.2009

L 54/76 CS Úřední věstník Evropské unie 26.2.2009 L 54/76 CS Úřední věstník Evropské unie 26.2.2009 7. Opakovatelnost Rozdíl mezi výsledky dvou paralelních stanovení provedených na stejném vzorku týmž laborantem nesmí překročit: 5 mg/kg v absolutní hodnotě

Více

Vysokoúčinná kapalinová chromatografie. Petr Kozlík Katedra analytické chemie

Vysokoúčinná kapalinová chromatografie. Petr Kozlík Katedra analytické chemie Vysokoúčinná kapalinová chromatografie Petr Kozlík Katedra analytické chemie e-mail: kozlik@natur.cuni.cz http://web.natur.cuni.cz/~kozlik/ 1 Vysokoúčinná kapalinová chromatografie Teorie HPLC Praktické

Více

Separační metody v analytické chemii. Plynová chromatografie (GC) - princip

Separační metody v analytické chemii. Plynová chromatografie (GC) - princip Plynová chromatografie (GC) - princip Plynová chromatografie (Gas chromatography, zkratka GC) je typ separační metody, kdy se od sebe oddělují složky obsažené ve vzorku a které mohou být převedeny do plynné

Více

Příloha 2. Návod pro laboratorní úlohu

Příloha 2. Návod pro laboratorní úlohu Příloha 2. Návod pro laboratorní úlohu VYSOKÁ ŠKOLA CHEMICKO-TECHNOLOGICKÁ V PRAZE ÚSTAV CHEMIE A ANALÝZY POTRAVIN Technická 5, 166 28 Praha 6 tel./fax.: + 42 224 353 185; jana.hajslova@vscht.cz Analýza

Více

Vysokoúčinná kapalinová chromatografie. Petr Kozlík Katedra analytické chemie

Vysokoúčinná kapalinová chromatografie. Petr Kozlík Katedra analytické chemie Vysokoúčinná kapalinová chromatografie Petr Kozlík Katedra analytické chemie e-mail: kozlik@natur.cuni.cz 1 Sylabus přednášky: Praxe v HPLC Mobilní fáze Chromatografická kolona Spoje v HPLC Vývoj chromatografické

Více

Jednotné pracovní postupy zkoušení krmiv Vydání 1 STANOVENÍ OBSAHU MADURAMICINU METODOU HPLC

Jednotné pracovní postupy zkoušení krmiv Vydání 1 STANOVENÍ OBSAHU MADURAMICINU METODOU HPLC Strana 1 STANOVENÍ OBSAHU MADURAMICINU METODOU HPLC 1 Rozsah a účel Metoda specifikuje podmínky pro stanovení maduramicinu v krmivech metodou vysokoúčinné kapalinové chromatografie (HPLC). 1 Pro účely

Více

Jednotné pracovní postupy zkoušení krmiv STANOVENÍ OBSAHU MELAMINU A KYSELINY KYANUROVÉ METODOU LC-MS

Jednotné pracovní postupy zkoušení krmiv STANOVENÍ OBSAHU MELAMINU A KYSELINY KYANUROVÉ METODOU LC-MS Národní referenční laboratoř Strana 1 STANOVENÍ OBSAHU MELAMINU A KYSELINY KYANUROVÉ METODOU LC-MS 1 Rozsah a účel Postup je určen pro stanovení obsahu melaminu a kyseliny kyanurové v krmivech. 2 Princip

Více

Jednotné pracovní postupy zkoušení krmiv Stanovení obsahu celkového a volného tryptofanu metodou HPLC

Jednotné pracovní postupy zkoušení krmiv Stanovení obsahu celkového a volného tryptofanu metodou HPLC Strana 1 STANOVENÍ OBSAHU CELKOVÉHO A VOLNÉHO TRYPTOFANU METODOU HPLC 1 Rozsah a účel Metoda specifikuje podmínky pro stanovení obsahu celkového a volného tryptofanu v krmivech metodou vysokoúčinné kapalinové

Více

Jednotné pracovní postupy zkoušení krmiv STANOVENÍ OBSAHU MYKOTOXINŮ METODOU HPLC - OCHRATOXIN A

Jednotné pracovní postupy zkoušení krmiv STANOVENÍ OBSAHU MYKOTOXINŮ METODOU HPLC - OCHRATOXIN A Národní referenční laboratoř Strana 1 STANOVENÍ OBSAHU MYKOTOXINŮ METODOU HPLC - OCHRATOXIN A 1 Rozsah a účel Metoda specifikuje podmínky pro stanovení ochratoxinu A v krmivech. 1 Ochratoxin A patří mezi

Více

Jednotné pracovní postupy zkoušení krmiv

Jednotné pracovní postupy zkoušení krmiv Národní referenční laboratoř Strana 1 STANOVENÍ OBSAHU -KAROTENU METODOU HPLC 1 Účel a rozsah Postup specifikuje podmínky pro stanovení celkového -karotenu v krmivech a premixech metodou vysokoúčinné kapalinové

Více

Jednotné pracovní postupy zkoušení krmiv Vydání 1 STANOVENÍ OBSAHU KOKCIDIOSTATIK METODOU LC-MS

Jednotné pracovní postupy zkoušení krmiv Vydání 1 STANOVENÍ OBSAHU KOKCIDIOSTATIK METODOU LC-MS Národní referenční laboratoř Strana 1 STANOVENÍ OBSAHU KOKCIDIOSTATIK METODOU LC-MS 1 Účel a rozsah Postup specifikuje podmínky pro stanovení diclazurilu, halofuginonu, lasalocidu, maduramicinu, monensinu,

Více

VYUŽITÍ A VALIDACE AUTOMATICKÉHO FOTOMETRU V ANALÝZE VOD

VYUŽITÍ A VALIDACE AUTOMATICKÉHO FOTOMETRU V ANALÝZE VOD Citace Kantorová J., Kohutová J., Chmelová M., Němcová V.: Využití a validace automatického fotometru v analýze vod. Sborník konference Pitná voda 2008, s. 349-352. W&ET Team, Č. Budějovice 2008. ISBN

Více

Stanovení složení mastných kyselin

Stanovení složení mastných kyselin LABORATOŘ ANALÝZY POTRAVIN A PŘÍRODNÍCH PRODUKTŮ Stanovení složení mastných kyselin (metoda: plynová chromatografie s plamenovým ionizačním detektorem) Garant úlohy: Ing. Jana Kohoutková, Ph.D. 1 Obsah

Více

Jednotné pracovní postupy zkoušení krmiv STANOVENÍ OBSAHU VITAMÍNU D METODOU HPLC

Jednotné pracovní postupy zkoušení krmiv STANOVENÍ OBSAHU VITAMÍNU D METODOU HPLC Národní referenční laboratoř Strana 1 STANOVENÍ OBSAHU VITAMÍNU D METODOU HPLC 1 Rozsah a účel Tato metoda specifikuje podmínky pro stanovení vitamínu D v premixech pro výrobu krmných směsí metodou HPLC.

Více

STANOVENÍ AZOBARVIV VE SMĚSI METODOU RP-HPLC SE SPEKTROFOTOMETRICKOU DETEKCÍ

STANOVENÍ AZOBARVIV VE SMĚSI METODOU RP-HPLC SE SPEKTROFOTOMETRICKOU DETEKCÍ STANOVENÍ AZOBARVIV VE SMĚSI METODOU RP-HPLC SE SPEKTROFOTOMETRICKOU DETEKCÍ 1 Úkol Separovat a metodou kalibrační křivky stanovit azobarviva (methyloranž - MO, dimethylová žluť - DMŽ) ve směsi metodou

Více

METODY ČIŠTĚNÍ ORGANICKÝCH LÁTEK

METODY ČIŠTĚNÍ ORGANICKÝCH LÁTEK METODY ČIŠTĚNÍ ORGANICKÝCH LÁTEK Chemické sloučeniny se připravují z jiných chemických sloučenin. Tento děj se nazývá chemická reakce, kdy z výchozích látek (reaktantů) vznikají nové látky (produkty).

Více

LABORATORNÍ PŘÍSTROJE A POSTUPY

LABORATORNÍ PŘÍSTROJE A POSTUPY LABORATORNÍ PŘÍSTROJE A POSTUPY HPLC STANOVENÍ NORADRENALINU V INFUZNÍCH ROZTOCÍCH IVANA BRABCOVÁ, DALIBOR ŠATÍNSKÝ a PETR SOLICH Katedra analytické chemie, Univerzita Karlova v Praze, Farmaceutická fakulta

Více

LABORATOŘ OBORU I ÚSTAV ORGANICKÉ TECHNOLOGIE (111) Použití GC-MS spektrometrie

LABORATOŘ OBORU I ÚSTAV ORGANICKÉ TECHNOLOGIE (111) Použití GC-MS spektrometrie LABORATOŘ OBORU I ÚSTAV ORGANICKÉ TECHNOLOGIE (111) C Použití GC-MS spektrometrie Vedoucí práce: Doc. Ing. Petr Kačer, Ph.D., Ing. Kamila Syslová Umístění práce: laboratoř 79 Použití GC-MS spektrometrie

Více

HPLC - Detektory A.Braithwaite and F.J.Smith; Chromatographic Methods, Fifth edition, Blackie Academic & Professional 1996 Colin F. Poole and Salwa K.

HPLC - Detektory A.Braithwaite and F.J.Smith; Chromatographic Methods, Fifth edition, Blackie Academic & Professional 1996 Colin F. Poole and Salwa K. Vysokoúčinná kapalinová chromatografie - Detektory - I Příprava předmětu byla podpořena projektem OPPA č. CZ.2.17/3.1.00/33253 HPLC - Detektory A.Braithwaite and F.J.Smith; Chromatographic Methods, Fifth

Více

Gelová permeační chromatografie

Gelová permeační chromatografie Gelová permeační chromatografie (Gel Permeation Chromatography - GPC) - separační a čisticí metoda - umožňuje separaci skupin sloučenin s podobnou molekulovou hmotností (frakcionace) - analyty jsou po

Více

ÚSTAV ORGANICKÉ TECHNOLOGIE

ÚSTAV ORGANICKÉ TECHNOLOGIE LABORATOŘ OBORU I ÚSTAV ORGANICKÉ TECHNOLOGIE (111) F Imobilizace na alumosilikátové materiály Vedoucí práce: Ing. Eliška Leitmannová, Ph.D. Umístění práce: laboratoř F07, F08 1 Úvod Imobilizace aktivních

Více

ZÁKLADNÍ MODELY TOKU PORÉZNÍ MEMBRÁNOU

ZÁKLADNÍ MODELY TOKU PORÉZNÍ MEMBRÁNOU ZÁKLADNÍ MODELY TOKU PORÉZNÍ MEMBRÁNOU Znázornění odporů způsobujících snižování průtoku permeátu nástřik porézní membrána Druhy odporů R p blokování pórů R p R a R m R a R m R g R cp adsorbce membrána

Více

Zajištění správnosti výsledků analýzy kotininu a kreatininu

Zajištění správnosti výsledků analýzy kotininu a kreatininu Zajištění správnosti výsledků analýzy kotininu a kreatininu Š.Dušková, I.Šperlingová, L. Dabrowská, M. Tvrdíková, M. Šubrtová duskova@szu.cz sperling@szu.cz Oddělení pro hodnocení expozice chemickým látkám

Více

VYUŽITÍ BEZKONTAKTNÍ VODIVOSTNÍ DETEKCE PRO HPLC SEPARACI POLYKARBOXYLÁTOVÝCH DERIVÁTŮ CYKLENU. Anna Hamplová

VYUŽITÍ BEZKONTAKTNÍ VODIVOSTNÍ DETEKCE PRO HPLC SEPARACI POLYKARBOXYLÁTOVÝCH DERIVÁTŮ CYKLENU. Anna Hamplová VYUŽITÍ BEZKOTAKTÍ VODIVOSTÍ DETEKCE PRO HPLC SEPARACI POLYKARBOXYLÁTOVÝCH DERIVÁTŮ CYKLEU Anna Hamplová Univerzita Karlova v Praze, Přírodovědecká fakulta, Katedra analytické chemie Albertov 6, 128 43

Více

Hmotnostní spektrometrie

Hmotnostní spektrometrie Hmotnostní spektrometrie Princip: 1. Ze vzorku jsou tvořeny ionty na úrovni molekul, nebo jejich zlomků (fragmentů), nebo až volných atomů dodáváním energie, např. uvolnění atomů ze vzorku nebo přímo rozštěpení

Více

215.1.10 SKUPINOVÁ ANALÝZA MOTOROVÝCH NAFT

215.1.10 SKUPINOVÁ ANALÝZA MOTOROVÝCH NAFT 215.1.10 SKUPINOVÁ ANALÝZA MOTOROVÝCH NAFT ÚVOD Snižování emisí výfukových plynů a jejich škodlivosti je hlavní hnací silou legislativního procesu v oblasti motorových paliv. Po úspěšném snížení obsahu

Více

Kurz 1 Úvod k biochemickému praktiku

Kurz 1 Úvod k biochemickému praktiku Kurz 1 Úvod k biochemickému praktiku Pavla Balínová http://vyuka.lf3.cuni.cz/ Důležité informace Kroužkový asistent: RNDr. Pavla Balínová e-mailová adresa: pavla.balinova@lf3.cuni.cz místnost: 410 studijní

Více

Stanovení sacharidů ve vybraných přírodních matricích pomocí kapalinové chromatografie s odpařovacím detektorem rozptylu světla (HPLC-ELSD)

Stanovení sacharidů ve vybraných přírodních matricích pomocí kapalinové chromatografie s odpařovacím detektorem rozptylu světla (HPLC-ELSD) Stanovení sacharidů ve vybraných přírodních matricích pomocí kapalinové chromatografie s odpařovacím detektorem rozptylu světla (HPLC-ELSD) A) Ultrazvuková extrakce Ultrazvuková extrakce je významnou extrakční

Více

Superkritická fluidní extrakce (SFE) Superkritická fluidní extrakce

Superkritická fluidní extrakce (SFE) Superkritická fluidní extrakce Superkritická fluidní extrakce (zkráceně SFE, z angl. Supercritical Fluid Extraction) = extrakce, kde extrakčním činidlem je tekutina v superkritickém stavu, tzv. superkritická (nadkritická) tekutina (zkráceně

Více

LABORATOŘ ANALÝZY POTRAVIN A PŘÍRODNÍCH PRODUKTŮ

LABORATOŘ ANALÝZY POTRAVIN A PŘÍRODNÍCH PRODUKTŮ LABORATOŘ ANALÝZY POTRAVIN A PŘÍRODNÍCH PRODUKTŮ Stanovení tuku a hodnocení kvality tuků a olejů (Soxhletova metoda pro extrakci tuku a titrační stanovení čísla kyselosti) Garant úlohy: doc. Ing. Zuzana

Více

STANOVENÍ KOFEINU V NÁPOJÍCH METODOU HPLC

STANOVENÍ KOFEINU V NÁPOJÍCH METODOU HPLC ÚLOHA 10: STANOVENÍ KOFEINU V NÁPOJÍCH METODOU HPLC Příprava: 1. Zopakujte si metodiku kapalinové chromatografie po stránce schematické a částečně fyzikálněchemické. 2. Zopakujte si metodu kalibrační křivky

Více

13/sv. 6 CS (80/891/EHS)

13/sv. 6 CS (80/891/EHS) 65 31980L0891 27.9.1980 ÚŘEDNÍ VĚSTNÍK EVROPSKÝCH SPOLEČENSTVÍ L 254/35 SMĚRNICE KOMISE ze dne 25. července 1980 o analytické metodě Společenství pro stanovení obsahu kyseliny erukové v olejích a tucích

Více

DĚLÍCÍ METODY. Autor: Mgr. Stanislava Bubíková. Datum (období) tvorby: 28. 5. 2012. Ročník: osmý. Vzdělávací oblast: Člověk a příroda / Chemie / Směsi

DĚLÍCÍ METODY. Autor: Mgr. Stanislava Bubíková. Datum (období) tvorby: 28. 5. 2012. Ročník: osmý. Vzdělávací oblast: Člověk a příroda / Chemie / Směsi Autor: Mgr. Stanislava Bubíková DĚLÍCÍ METODY Datum (období) tvorby: 28. 5. 2012 Ročník: osmý Vzdělávací oblast: Člověk a příroda / Chemie / Směsi 1 Anotace: Žáci se seznámí s nejčastěji používanými separačními

Více

Při reálném chromatografickém ději nikdy nedojde k ustavení rovnováhy mezi oběma fázemi První ucelená teorie respektující uvedenou skutečnost byla

Při reálném chromatografickém ději nikdy nedojde k ustavení rovnováhy mezi oběma fázemi První ucelená teorie respektující uvedenou skutečnost byla Teorie chromatografie - III Příprava předmětu byla podpořena projektem OPPA č. CZ.2.17/3.1.00/33253 4.3.3 Teorie dynamická Při reálném chromatografickém ději nikdy nedojde k ustavení rovnováhy mezi oběma

Více

Příloha 1. Návod pro laboratorní úlohu

Příloha 1. Návod pro laboratorní úlohu Příloha 1. Návod pro laboratorní úlohu VYSOKÁ ŠKOLA CHEMICKO-TECHNOLOGICKÁ V PRAZE ÚSTAV CHEMIE A ANALÝZY POTRAVIN Technická 5, 166 28 Praha 6 tel./fax.: + 420 224 353 185; jana.hajslova@vscht.cz Analýza

Více

Separační metody Historie: Rozvoj separačních metod od minulého století Postavení separačních metod v rámci analytické chemie Význam chromatografie a

Separační metody Historie: Rozvoj separačních metod od minulého století Postavení separačních metod v rámci analytické chemie Význam chromatografie a Úvod do separačních metod pro analýzu léčiv Příprava předmětu byla podpořena projektem OPP č. CZ..7/3..00/3353 Separační metody Historie: Rozvoj separačních metod od minulého století Postavení separačních

Více

Využití faktorového plánování v oblasti chemických specialit

Využití faktorového plánování v oblasti chemických specialit LABORATOŘ OBORU I T Využití faktorového plánování v oblasti chemických specialit Vedoucí práce: Ing. Eliška Vyskočilová, Ph.D. Umístění práce: FO7 1 ÚVOD Faktorové plánování je optimalizační metoda, hojně

Více

UNIVERZITA KARLOVA V PRAZE FARMACEUTICKÁ FAKULTA V HRADCI KRÁLOVÉ

UNIVERZITA KARLOVA V PRAZE FARMACEUTICKÁ FAKULTA V HRADCI KRÁLOVÉ UNIVERZITA KARLOVA V PRAZE FARMACEUTICKÁ FAKULTA V HRADCI KRÁLOVÉ Katedra analytické chemie Sekvenční injekční chromatografie Disertační práce 2006 Mgr. Petr Chocholouš 1 Poděkování V prvé řadě bych rád

Více

EXTRAKČNÍ METODY. Studijní materiál. 1. Obecná charakteristika extrakce. 2. Extrakce kapalina/kapalina LLE. 3. Alkalická hydrolýza

EXTRAKČNÍ METODY. Studijní materiál. 1. Obecná charakteristika extrakce. 2. Extrakce kapalina/kapalina LLE. 3. Alkalická hydrolýza Studijní materiál EXTRAKČNÍ METODY 1. Obecná charakteristika extrakce 2. Extrakce kapalina/kapalina LLE 3. Alkalická hydrolýza 4. Soxhletova extrakce 5. Extrakce za zvýšené teploty a tlaku PLE, ASE, PSE

Více

Příprava materiálu byla podpořena projektem OPPA č. CZ.2.17/3.1.00/33253

Příprava materiálu byla podpořena projektem OPPA č. CZ.2.17/3.1.00/33253 Příprava materiálu byla podpořena projektem OPPA č. CZ.2.17/3.1.00/33253 Část 4 - Nástřik vzorku Dávkovače vzorků/injektory Dávkování vzorků je jednou z klíčových záležitostí v HPLC. Ani nejlepší kolona

Více

UNIVERZITA KARLOVA V PRAZE FARMACEUTICKÁ FAKULTA V HRADCI KRÁLOVÉ

UNIVERZITA KARLOVA V PRAZE FARMACEUTICKÁ FAKULTA V HRADCI KRÁLOVÉ UNIVERZITA KARLOVA V PRAZE FARMACEUTICKÁ FAKULTA V HRADCI KRÁLOVÉ KATEDRA ANALYTICKÉ CHEMIE Vývoj extrakce a HPLC stanovení vitamínů A a D v léčivém přípravku Infadolan DIPLOMOVÁ PRÁCE Vedoucí práce :

Více

SPEKTROSKOPICKÉ VLASTNOSTI LÁTEK (ZÁKLADY SPEKTROSKOPIE)

SPEKTROSKOPICKÉ VLASTNOSTI LÁTEK (ZÁKLADY SPEKTROSKOPIE) SPEKTROSKOPICKÉ VLASTNOSTI LÁTEK (ZÁKLADY SPEKTROSKOPIE) Elektromagnetické vlnění SVĚTLO Charakterizace záření Vlnová délka - (λ) : jednotky: m (obvykle nm) λ Souvisí s povahou fotonu Charakterizace záření

Více

ULTRA PERFORMANCE LIQUID CHROMATOGRAPHY (UPLC) ULTRA-HIGH PERFORMANCE LIQUID CHROMATOGRAPHY (UHPC)

ULTRA PERFORMANCE LIQUID CHROMATOGRAPHY (UPLC) ULTRA-HIGH PERFORMANCE LIQUID CHROMATOGRAPHY (UHPC) ULTRA PERFORMANCE LIQUID CHROMATOGRAPHY (UPLC) ULTRA-HIGH PERFORMANCE LIQUID CHROMATOGRAPHY (UHPC) Pokroky v moderních separačních metodách, 2012 Eva Háková CHARAKTERISTIKA UPLC Nová, velmi účinná separační

Více

Odměrná analýza, volumetrie

Odměrná analýza, volumetrie Odměrná analýza, volumetrie metoda založená na měření objemu metoda absolutní: stanovení analytu ze změřeného objemu roztoku činidla o přesně známé koncentraci, který je zapotřebí k úplné a stechiometricky

Více

Jednotné pracovní postupy zkoušení krmiv STANOVENÍ OBSAHU SELENU METODOU ICP-OES

Jednotné pracovní postupy zkoušení krmiv STANOVENÍ OBSAHU SELENU METODOU ICP-OES Strana 1 STANOVENÍ OBSAHU SELENU METODOU ICP-OES 1 Rozsah a účel Postup specifikuje podmínky pro stanovení celkového obsahu selenu v minerálních krmivech a premixech metodou optické emisní spektrometrie

Více

Příprava materiálu byla podpořena projektem OPPA č. CZ.2.17/3.1.00/33253

Příprava materiálu byla podpořena projektem OPPA č. CZ.2.17/3.1.00/33253 Příprava materiálu byla podpořena projektem OPPA č. CZ.2.17/3.1.00/33253 Část 9 Adsorpční chromatografie: Chromatografie v normálním módu Tento chromatografický mód je vysvětlen na silikagelu jako nejdůležitějším

Více

LABORATOŘ ANALÝZY POTRAVIN A PŘÍRODNÍCH PRODUKTŮ. Stanovení těkavých látek

LABORATOŘ ANALÝZY POTRAVIN A PŘÍRODNÍCH PRODUKTŮ. Stanovení těkavých látek LABORATOŘ ANALÝZY POTRAVIN A PŘÍRODNÍCH PRODUKTŮ Stanovení těkavých látek (metoda: plynová chromatografie s hmotnostně spektrometrickým detektorem) Garant úlohy: doc. Ing. Jana Pulkrabová, Ph.D. 1 OBSAH

Více

PLYNOVÁ CHROMATOGRAFIE (GC)

PLYNOVÁ CHROMATOGRAFIE (GC) PLYNOVÁ CHROMATOGRAFIE (GC) Dělení látek mezi stacionární a mobilní fázi na základě rozdílů v těkavosti a struktuře (separované látky vykazují rozdílnou chromatografickou afinitu) Metoda vhodná pro látky:

Více

Dovednosti/Schopnosti. - orientuje se v ČL, který vychází z Evropského lékopisu;

Dovednosti/Schopnosti. - orientuje se v ČL, který vychází z Evropského lékopisu; Jednotka učení 4a: Stanovení obsahu Ibuprofenu 1. diferencování pracovního úkolu Handlungswissen Charakteristika pracovní činnosti Pracovní postup 2. HINTERFRAGEN 3. PŘIŘAZENÍ... Sachwissen Charakteristika

Více

Významné skupiny organických sloučenin Vitamíny

Významné skupiny organických sloučenin Vitamíny Významné skupiny organických sloučenin Vitamíny Předmět Chemie Ročník a obor 1.ZA, 1.SC, 1.OS, 2.ZA Kód sady CHEM/ZA+SC+OS/02 Kód DUM CHEM/ZA+SC+OS/01+02/02/10-20 Autor Mgr. Alena Jirčáková Datum vzniku

Více

P. Martinková, D. Pospíchalová, R. Jobánek, M. Jokešová. Stanovení perfluorovaných organických látek v elektroodpadech

P. Martinková, D. Pospíchalová, R. Jobánek, M. Jokešová. Stanovení perfluorovaných organických látek v elektroodpadech P. Martinková, D. Pospíchalová, R. Jobánek, M. Jokešová Stanovení perfluorovaných organických látek v elektroodpadech Perfluorované a polyfluorované uhlovodíky (PFC,PFAS) Perfluorované - všechny vodíky

Více

Extrakce na tuhou fázi a její miniaturizace metodou Lab-On-Valve pro stanovení farmaceuticky významných látek

Extrakce na tuhou fázi a její miniaturizace metodou Lab-On-Valve pro stanovení farmaceuticky významných látek UNIVERZITA KARLOVA V PRAZE Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra analytické chemie Extrakce na tuhou fázi a její miniaturizace metodou Lab-On-Valve pro stanovení farmaceuticky významných látek

Více

Úvod k biochemickému. mu praktiku. Vladimíra Kvasnicová

Úvod k biochemickému. mu praktiku. Vladimíra Kvasnicová Úvod k biochemickému mu praktiku Vladimíra Kvasnicová organizace praktik pravidla bezpečné práce v laboratoři laboratorní vybavení práce s automatickou pipetou návody: viz. aplikace Výuka automatická pipeta

Více

UNIVERZITA PARDUBICE

UNIVERZITA PARDUBICE UNIVERZITA PARDUBICE Fakulta chemicko technologická Katedra analytické chemie Licenční studium chemometrie na téma Využití tabulkového procesoru jako laboratorního deníku Vedoucí licenčního studia Prof.

Více

215.1.19 ČÍSLO KYSELOSTI

215.1.19 ČÍSLO KYSELOSTI 215.1.19 ČÍSLO KYSELOSTI ÚVOD Stanovení čísla kyselosti patří k základním normovaným metodám hodnocení ropných produktů. Tento návod je vytvořen podle norem IP 177/96 a ASTM D66489. Tyto normy specifikují

Více

mobilní fáze pohyblivá - obsahuje dělené látky, které mají různou afinitu ke stacionární fázi.

mobilní fáze pohyblivá - obsahuje dělené látky, které mají různou afinitu ke stacionární fázi. separační metody Chromatografické metody Distribuce látky mezi dvě fáze: stacionární fáze nepohyblivá - ukotvený materiál mobilní fáze pohyblivá - obsahuje dělené látky, které mají různou afinitu ke stacionární

Více

Příprava materiálu byla podpořena projektem OPPA č. CZ.2.17/3.1.00/33253

Příprava materiálu byla podpořena projektem OPPA č. CZ.2.17/3.1.00/33253 Příprava materiálu byla podpořena projektem OPPA č. CZ.2.17/3.1.00/33253 Část 23 Preparativní chromatografie je používána pro separaci látek, které jsou určeny pro další zpracování. Množství získávané

Více

POROVNÁNÍ ÚČINNOSTI SRÁŽENÍ REAKTIVNÍCH AZOBARVIV POUŽITÍM IONTOVÉ KAPALINY A NÁSLEDNÁ FLOKULACE AZOBARVIV S Al 2 (SO 4 ) 3.18H 2 O S ÚPRAVOU ph

POROVNÁNÍ ÚČINNOSTI SRÁŽENÍ REAKTIVNÍCH AZOBARVIV POUŽITÍM IONTOVÉ KAPALINY A NÁSLEDNÁ FLOKULACE AZOBARVIV S Al 2 (SO 4 ) 3.18H 2 O S ÚPRAVOU ph POROVNÁNÍ ÚČINNOSTI SRÁŽENÍ REAKTIVNÍCH AZOBARVIV POUŽITÍM IONTOVÉ KAPALINY A NÁSLEDNÁ FLOKULACE AZOBARVIV S Al 2 (SO 4 ) 3.18H 2 O S ÚPRAVOU ph Ing. Jana Martinková Ing. Tomáš Weidlich, Ph.D. prof. Ing.

Více

Část 3, Čerpadla pro HPLC

Část 3, Čerpadla pro HPLC Část 3, Čerpadla pro HPLC Celý HPLC systém sestává ze zásobníku mobilní fáze, vysokotlakého čerpadla, injektoru, kolony (obvykle v termostatu), detektoru a datastanice (Schema níže). Vysokotlaké čerpadlo

Více