laboratorní diagnostika a očkování

Transkript

1 Bordetella pertussis laboratorní diagnostika a očkování Olga Štěpáníková Imunologické oddělení laboratoří IFCOR-99, Brno XI. Den laboratorní diagnostiky - nejen lymeské boreliózy, Brno,

2 Kdo jednou záchvat černého kašle viděl a slyšel, tomu tato nemoc tak utkví v paměti, že ji podruhé ihned pozná. Eiselt, 1879 Havlík, J.: Pertuse; IV. Hradecké vakcinologické dny, 2008

3 Definice pertuse Pertuse je respirační nákaza, vyvolaná gramnegativní bakterií Bordetella pertussis, pro kterou je typický záchvatovitý, dráždivý, zajíkavý kašel s kokrhavým inspiriem, rudnutím a modráním v obličeji. Na konci záchvatu pak lze pozorovat i apnoickou pauzu nebo zvracení. Onemocnění mohou provázet vážné komplikace s vysokou úmrtností. Holčíková, A.: Pertuse, parapertuse, Dětské infekční nemoci, 2003

4 Epidemiologie pertusse každý rok je hlášeno přibližně milionů nových případů onemocnění na celém světě a úmrtí (85% děti do 2 let, rozvojové země) od 90. let minulého století nemocnost narůstá ve vyspělých zemích s vysokou proočkovanostípopulace a posouvá se do věkových skupin adolescentů a dospělých (netypický průběh a riziko infekce pro neočkované děti do 1 roku) 3 případy úmrtí v ČR (r novorozený chlapec, r dvouměsíční dívka, r čtyřměsíční dívka)

5 Epidemiologie pertuse vysoká nakažlivost pro vnímavé osoby (80-90 %) zejména v počátečním stádiu infekce rychlé šíření kontaktem s nemocným a vzdušnou cestou v kolektivních zařízeních (jesle, školy, školky, koleje, ubytovny, vojenské útvary atd.) pravidelně se opakující 2-4 letéepidemické cykly hlášené případy jsou pouze vrcholem ledovce

6 Výskyt pertuse v ČR , EPIDAT Pertuse A37.0 Parapertuse A37.1 Zdroj:

7 Bordetella pertussis diagnóza A Dávivý kašel inkubační doba 4-21 dní (průměr 7-14 dní) 3 klinická stádia onemocnění: katarální(1 až 2 týdny)-netypické příznaky: rýma, únava, lehce zvýšená teplota paroxyzmální(2 až 5 týdnů i déle)-typické záchvaty kašle s různou četností, nejčastěji v noci rekonvalescence(týdny až měsíce)-ústup příznaků, opakování záchvatů kašle při dalším respiračním infektu léčba: makrolidy(klacid), chloramfenikol

8 Patogeneze pertuse přilnutíbakterií na povrch řasinkového epitelu sliznice nosohltanu, hltanu, průdušnice a průdušek vlivem adhezinů(filamentárníhemaglutinin, fimbrie, pertaktin) destrukcesliznice dýchacích cest a oslabení imunitních mechanismů působením toxinů (pertusovýtoxin, adenylátcykláza, tracheální cytotoxin) - katarální zánět až nekróza sliznice možná příčina vzniku a rozvoje astmatu

9 EU case definice pertuse Rozhodnutí Komise ze dne , kterým se stanoví definice případů pro hlášení přenosných nemocí do sítě Společenství podle rozhodnutí Evropského parlamentu a Rady č. 2119/98/ES. K (2008) (vyhláška Ministerstva zdravotnictví ČR č. 275/2010 Sb.) klinické projevy + průkaz minimálně jednou ze tří laboratorních metod: izolace Bordetella pertussis z klinického materiálu detekce nukleové kyseliny (PCR) průkaz specifické protilátkovéodpovědiu párových vzorků (akutní a rekonvalescentní sérum)

10 Imunita proti pertusi imunita po proběhlémonemocnění ani po očkování není celoživotní (4-20 let) hladina protilátek po očkování postupně klesá s věkem (3-12 let) - vyvanutí imunity imunita po očkování acelulární vakcínou je kratší než po očkování celobuněčnou vakcínou Fabiánová, K.: Odborná konference: Problematika pertuse, 2011

11 Protilátky proti pertusi přenesené od matky (transplacentárně) během 4-8 týdnů po narození mizí (u 95 % dětí) vysoké hladiny mateřských protilátek nemají vliv na délku jejich přetrvávání a u dětí negativně ovlivňují tvorbu vlastních protilátek po očkování Burianová - Vysoká, B., Burian, V., Flašarová, M., Gostoff, R., Janíček, B., Mazel, J., Skaličková, J., Zimola, J.: Dynamika transplacentárně přenesených protilátek proti pertusi a parapertusi. Československá epidemiologie, mikrobiologie, imunologie. 1960; 9(4):

12 Očkování dětí proti pertusi zavedení celoplošného očkování v ČR (celobuněčná vakcína, kombinace s difterickou a tetanickou složkou - DTwP) zavedení hexavalentní vakcíny (DTaP, HiB, HBV, IPV) očkovací schéma (od 9. týdne věku dítěte): 1., 2. a 3. dávka během 1. roku 4. dávka do 18. měsíce věku 5. dávka DTaP v 5-6 letech zavedení 6. dávky DTaP v letech

13 Národní strategie očkování proti pertusi (pro dospělé) Národní imunizační komise (NIKO) doporučuje v podmínkách ČR minimálně jednou v dospělosti aplikaci posilující dávky vakcíny proti pertusi všem obyvatelům do 65 let pokud od posledního očkování proti pertusi uplynulo více než 10 let, je vhodné aplikovat co nejdříve jednu dávku vakcíny zejména: ženám plánujícím těhotenství (před početím nebo po porodu) blízkým rodinným kontaktům novorozence (rodiče, sourozenci, prarodiče), nejpozději 4 týdny před narozením dítěte osobám pečujícím o děti mladší 12 měsíců věku (chůvy, personál kojeneckých ústavů) zdravotnickému personálu ošetřujícímu novorozence a nedonošené děti (novorozenecká, neonatologická a dětská oddělení, ambulance praktických lékařů)

14 Národní strategie očkování proti pertusi (pro dospělé) osobám, které nebyly v minulosti očkovány proti pertusi (ročník narození 1958 a starší) osobám s chronickým onemocněním respiračního traktu (CHOPN, astma bronchiale, chronická bronchitida) očkování v dospělosti je možné provést nejdříve 1 rok od posledního očkování proti tetanu a difterii (stoupá riziko postvakcinačních reakcí) možnost záměny prvního přeočkování proti T za DTaP (ve věku let) proběhláinfekce pertuse není kontraindikací pro očkování Zdroj:

15 Cocoonstrategy" Snaha blízkých kontaktů omezit riziko pertuse u dětí do 1 roku dobrovolným očkováním Rodiče Zdravotnický personál Sourozenci Chůvy a ošetřující personál Prarodiče

16 Registrované očkovací látky proti pertusi v ČR Název vakcíny Složení vakcíny Poznámka ADACEL toxoid DTP, FHA, pertaktin, fimbrie typ 2,3 Dospělí a děti >4 roky ADACEL POLIO toxoid DTP, FHA, pertaktin, fimbrie 2,3, PV 1,2,3 >3 roky BOOSTRIX toxoid DTP, FHA, pertaktin >4 roky BOOSTRIX POLIO toxoid DTP, FHA, pertaktin, PV 1,2,3 >4 roky INFANRIX INFANRIX HEXA INFANRIX HIB INFANRIX PENTA INFANRIX POLIO toxoid DTP, FHA, pertaktin toxoid DTP, FHA, pertaktin, Hib, VHB, PV toxoid DTP, FHA, pertaktin, Hib toxoid DTP, FHA, pertaktin, VHB, PV toxoid DTP, FHA, pertaktin, PV INFANRIX IPV + HIB toxoid DTP, FHA, pertaktin, Hib, PV Zdroj:

17 Laboratorní diagnostika pertuse Doporučení EU Pertstrain group z roku 2010 (Finsko, Německo, Francie, Švédsko, Nizozemí, Polsko, Dánsko, Velká Británie, Itálie, Norsko) používat komerční ELISA soupravy pro stanovení IgG protilátek proti PT Bordetella pertussis (kvantitativní výsledek v IU/ml) postinfekční a postvakcinační protilátky je možné spolehlivě odlišit po 1 roce od posledního očkování proti pertusi stanovení IgA protilátek proti PT Bordetella pertussispouze při nejasném výsledku IgG protilátek a pokud není možné odebrat druhý vzorek Guiso, N. et all.: What to do and what not to do in serological diagnosis of pertussis: recommendations from EU reference laboratories, Eur J. Clin. Microbiol. Infect. Dis. (2011) 30:

18 Laboratorní diagnostika pertuse Doporučení EU Pertstrain group z roku 2010 (Finsko, Německo, Francie, Švédsko, Nizozemí, Polsko, Dánsko, Velká Británie, Itálie, Norsko) Pro rutinní laboratorní diagnostiku není doporučeno používat: komerční ELISA soupravy se směsnými antigeny (FHA, PRN, FIM a ACT) - nízká specifita a zkřížená reaktivita s Bordetella parapertussis, Haemophillus sp., Mycoplasma pneumoniae a Escherichia coli aglutinační testy -vhodné pouze pro sledování promořenosti populace antigeny Bordetella pertussis(hladina protilátek je individuální) imunoblot-nelze kvantifikovat (možná zkřížená reaktivita protilátek proti některým antigenům) Guiso, N. et all.: What to do and what not to do in serological diagnosis of pertussis: recommendations from EU reference laboratories, Eur J. Clin. Microbiol. Infect. Dis. (2011) 30:

19 Laboratorní diagnostika pertuse Inkubační doba Katarální stádium Paroxysmální stadium Rekonvalescence 4-21 dní 1-2 týdny 2-5 týdnů i déle týdny, měsíce Kultivace PCR Sérologie Klinické příznaky (kašel) <2 týdny kulyvace + PCR Klinické příznaky (kašel) >2 týdny PCR + sérologie Zavadilová, J.: Odborná konference: Pertuse - laboratorní diagnostika, 2011

20 Laboratorní diagnostika pertuse IFCOR-99 Kultivace standardní, levná a 100% specifická metoda na počátku onemocnění, před zahájením ATB léčby, nalačno výtěr z nosohltanu aspirát z nosohltanu okamžitý transport do laboratoře při pokojové teplotě

21 Laboratorní diagnostika pertuse rychlá metoda IFCOR-99 PCR DNA Bordetella pertussisje možné detekovat i několik dní po zahájení ATB léčby detekce IS 481 (citlivá, ale méně specifická sekvence, vyskytuje se také u Bordetella holmesii a Bordetella bronchiseptica) detekce promotoru pro PT (méně citlivá, ale specifická sekvence pro Bordetella pertussis)

22 Laboratorní diagnostika pertuse IFCOR-99 Sérologie - doporučená kombinace testů: Aglutinace-průkaz akutního onemocnění (IgMprotilátky) a přetrvávání protilátek po očkování celobuněčnouvakcínou proti pertusi (wp), ne po očkování acelulární vakcínou (ap) ELISA (PT) -průkaz IgGa IgAprotilátek po onemocnění a po očkování (wp, ap) (Imunoblot) -průkaz IgGa IgAprotilátek po onemocnění a po očkování (wp, ap), pro doplnění u sporných a nejasných případů % osob po proběhlémonemocnění nemá protilátky proti PT Pertussis vaccines: WHO position paper, 2010

23 Laboratorní diagnostika pertuse Aglutinace(TEST-LINE, s.r.o.) IFCOR-99 IgM protilátky proti povrchovým antigenům B. pertussis a B. parapertussis (FIM, PRN, lipooligosacharid) nutno vyšetřovat párové vzorky sér současně v jedné laboratoři (první vzorek ihned při vyslovení podezření na onemocnění, druhý vzorek s určitým časovým odstupem podle hladiny protilátek v prvním vzorku -2 až 3 týdny, 3 až 6 měsíců) potvrzením probíhajícího nebo proběhlého onemocnění je prokázaný čtyřnásobný vzestup titru protilátek a nebo sérokonverze z negativity do pozitivity

24 Laboratorní diagnostika pertuse IFCOR-99 ELISA(Genzyme Virotech) IgA, IgG, IgM protilátky proti PT IgG 125 U/ml (18 VE) a/nebo IgA>11 VE Očkování před >12 měsíci Infekce

25 Laboratorní diagnostika pertuse IFCOR-99 Imunoblot(Genzyme Virotech) IgA, IgG protilátky proti PT, FHA a CatACT PT(pertusový toxin) -po infekci i po očkování FHA (filamentární hemaglutinin) - zkřížené reakce CatACT(katalytická oblast adenylát cyklázového toxinu, není v ap vakcíně) -po infekci, možné zkřížené reakce

26 Laboratorní diagnostika pertuse IFCOR-99 ELISA(Euroimmun) -od března 2012 IgG protilátky proti PT Ss <40 IU/ml IU/ml >100 IU/ml Nepravděpodobná akutní infekce B. pertussis Nejasný výsledek Akutní infekce B. pertussis Stanovení IgAa IgGprotilátek proti PT (věk, údaje o vakcinaci) a doporučení odběru dalšího vzorku

27 Laboratorní diagnostika pertuse IFCOR-99 IgA protilátky proti PT (ELISA Euroimmun) Pozitivní hodnocení pro očkované (>1 rok po vakcinaci) a neočkované <1 rok >2 IU/ml 1-4 roky >2 IU/ml 5-10 let >6 IU/ml od 11 let >12 IU/ml IgG protilátky proti PT (ELISA Euroimmun) Pozitivní hodnocení pro očkované (>1 rok po vakcinaci) a neočkované <1 rok >38 IU/ml 1-4 roky >26 IU/ml 5-10 let >22 IU/ml od 11 let >38 IU/ml

28 Laboratorní diagnostika pertuse IFCOR-99 k ověření problematických výsledků IgA a IgM protilátek proti PT -ELISA (Euroimmun): 44 vzorků sér IgA Euroimmun+ Euroimmun- IgG Euroimmun+ Euroimmun- Virotech Virotech Virotech Virotech % shoda IgG protilátek eliminace falešně pozitivních IgA protilátek IgM??? (neprokázána sérokonverze do IgA a IgG)

29 Příklad laboratorního výsledku 1 žena, nar (21 let), dg. Akutní bronchitida Ambulance TRN - alergologie 1. vzorek ( ) 2. vzorek ( ) aglutinace Bp --- aglutinace Bp 1:64 aglutinace Bpp 1:512 aglutinace Bpp 1:128 ELISA ELISA IgA: 36,59 VE IgA: 2,79 VE IgG: 75,26 VE IgG: 18,46 VE IgM: 5,70 VE IgM: 2,13 VE

30 Příklad laboratorního výsledku 2 žena, nar (28 let), dg. Kašel Ambulance praktického lékaře 1. vzorek ( ) aglutinace Bp 1:1024 aglutinace Bpp 1:512 ELISA (V) IgA: 53,04 VE IgG: 69,39 VE IgM: 4,17 VE ELISA (E) IgA: >50 IU/ml IgG: >200 IU/ml

31 Příklad laboratorního výsledku 3 žena, nar (4 roky), dg. Akutní bronchitida Ambulance dětského oddělení 1. vzorek ( ) aglutinace Bp negativní aglutinace Bpp negativní ELISA (V) IgA: 2,72 VE IgG: 1,12 VE IgM: 18,27 VE Mycoplasma pneumoniae ELISA IgA: 3,40 VE IgG: 14,12 VE IgM: 20,41 VE aglutinace 1:320 ELISA (E) IgA: <2 IU/ml IgG: <5 IU/ml

32 Příklad laboratorního výsledku 4 žena, nar (37 let), dg. Dávivý kašel Ambulance praktického lékaře 1. vzorek ( ) 2. vzorek ( ) aglutinace Bp 1:16 (1:64) aglutinace Bp 1:8 aglutinace Bpp 1:8 aglutinace Bpp 1:16 ELISA (V) ELISA (V) IgA: 12,32 VE IgA: 10,59 VE IgG: 20,54 VE IgG: 17,53 VE IgM: 6,57 VE IgM: 5,78 VE ELISA (E) ELISA (E) IgA: 2,3 IU/ml IgG: 64,8 IU/ml IgA: 3,5 IU/ml IgG: 72,6 IU/ml

33 Příklad laboratorního výsledku 5 muž, nar (54 let), dg. Astma Alergologie 1. vzorek ( ) 2. vzorek ( ) aglutinace Bp---(1:32) aglutinace Bp 1:128 aglutinace Bpp --- aglutinace Bpp --- ELISA (V) ELISA (V) IgA: 20,93 VE IgA: 17,45 VE IgG: 15,21 VE IgG: 22,43 VE IgM: 3,76 VE IgM: 4,01 VE ELISA (E) IgA: 17,9 IU/ml IgG: 90,8 IU/ml

34 Závěr snížit cirkulaci Bordetella pertussisv populaci, nemocnost a úmrtnost nejmenších dětí pečlivou surveillance očkování proti pertusi děti (3 dávky do 1 roku + booster ve 2, 6 a v 11 letech) dospělí (1 dávka v letech + booster vždy po 10 letech) doporučení EU PertstrainGrouppro laboratorní diagnostiku pertuse kultivace + PCR PCR + sérologie (párové vzorky)

35 Děkuji za pozornost