Experimentáln navozená anafylaktická reakce u pokusného zví ete

Transkript

1 Experimentáln navozená anafylaktická reakce u pokusného zví ete

2 Imunitní systém Schopnost rozpoznat cizí ástice od vlastních a reagovat proti nim Základní funkce Obranyschopnost (odpov organismu na ohrožení) Homeostáza ( odstra ování starých a poškozených bun k udržení strukturální a funk ní integrity) Orgány imunitního systému - centrální (kostní d, brzlík) - periferní (lymfatické uzliny, slezina, mimouzlinová lymfatická tká )

3

4 Bu ky imunitního systému

5 Složky imunitního systému B-lymfocyty tvorba protilátek (Ig)- 5 t íd (IgG, IgA, IgE, IgM, IgD) T-lymfocyty p ímá likvidace bun k napadených mikroorganismy regulace funkce ostatních bun k Fagocyty specializované bu ky schopné pohlcovat a ni it cizí ástice - polymorfonukleáry (neutrofilní granulocyty) - monocyty Komplement kaskáda bílkovin vedoucí k rozpadu bu ky p ivolání dalších bun k ozna ení patogen pro fagocytózu aktivace a degranulace mastocyt

6 Reakce imunitního systému Fyziologické - obranná reakce = zán t (soubor reakcí tkání na patogenní podn t s cílem odstranit p inu, poškozené tkán a obnovení p vodního stavu) Akutní zán t Patologické autoagresivní reakce - chronický zán t - alergie, autoimunitní reakce - odhojení transplantované tkán

7 Poruchy imunitního systému Imunodeficity - neschopnost fyziologické imunitní reakce - snížená obranyschopnost - primární (deficit n které ze složek imunitního systému) - sekundární (infekce HIV, chronické infekce, ozá ení, chemoterapie, nádory,..) Reakce p ecitliv losti (hypersenzitivita) - alergie - chronické zán ty - autoimunitní nemoci

8 Základní pojmy k hypersenzitivním reakcím Hypersenzitivita nadm rná,nep im ená aktivace imunitního systému Alergie neadekvátn zvýšená reakce na ur itý antigen (alergen) z prost edí Anafylaxe (Anafylaktický šok) generalizovaná, život ohrožující reakce se sou asným postižením více orgánových systém. Atopie vrozená dispozice k rozvoji hypersenzitivní reakce I.typu

9 Klasifikace hypersenzitivních reakcí (dle Gella a Coombse) Typ I asná/okamžitá reakce, zprost edkovaná protilátkami typu IgE Typ II cytotoxická reakce, primárn zprost edkovaná IgG nebo IgM a komplementem Typ III zprost edkovaná imunokomplexy (IgG/IgM) Typ IV pozdní, bu kami zprost edkovaná Typ V zprost edkovaná antireceptorovými protilátkami

10

11 Hypersenzitivita II. typu Cytotoxická, zprost edkovaná protilátkami typu IgG nebo IgM proti antigen m na povrchu bun né membrány destrukce bu ky 1. Komplementem zprost edkovaná destrukce bun k cytolýza, fagocytóza 2. Imunoglobuliny zprost edkovaná (ADCC) - Antigen p irozená sou ást b.membrány (cizorodá bu ka) x cizorodá bílkovina na povrchu b.membrány (virový protein) - endogenní antigeny i exogenní chemické látky (léky) - reakce po aplikaci n kterých lék (p. hemolytická anemie, trombocytopenie, granulocytopenie)

12 Hypersenzitivita III.typu tvorba imunokomplex (Ag-Ig) IgG n. IgM proti rozpustným antigen m cirkulace v ob hu p irozená fagocytóza (makrofágy) nedostate ná fce imunitního systému perzistence v cévních st nách a tkáních aktivace komplementu lokální zán tlivá reakce glomerulonefritida, vaskulitida Generalizovaná forma akutní sérová nemoc

13 Hypersenzitivní reakce IV.typu Pozdní, zprost edkovaná antigen-specifickými T- bu kami 1. Fáze senzibilizace - penetrace antigenu (haptenu) pokožkou p íjem a zpracování antigenu APC (Langerhansovy bu ky) migrace lymfatickými cévami do regionálních uzlin aktivace T- bun k produkce pam ových T-bun k transport do k že 2. Efektorová fáze (opakovaná expozice antigenu) - zachycení antigenu APC p edložení antigenu senzibilizovaným pam ovým bu kám (T-bu ky) sekrece cytokin z T-bun k (IFN-, IL-17) aktivace a migrace monocyt do poškozené tkán p em na v makrofágy lokální tká ová reakce

14 Charakteristické projevy kontaktní dermatitida kosmetické p ípravky, léky, kov (nikl, chrom) Koch v fenomén reakce na tuberkulinový test po s.c. aplikaci u senzibilizované osoby projevy lokální reakce (z ervenání) farmá ská plíce pneumonitida inhalace org.látek námahová dušnost, kašel, hore ka,..

15 Hypersenzitivita typu I - Imunopatologická reakce I.typu zprost edkovaná IgE Anafylaxe závažná, systémová, potenciáln život ohrožující reakce (parenterální p ístup alergenu) Alergie lokalizovaná reakce (slizni ní kontakt s alergenem) - atopická rýma - bronchiální astma - potravinové alergie - atopická dermatitida

16 Patogeneze alergických reakcí

17

18

19 iny anafylaktické reakce IgE depend.mechanismy - Hmyzí jed - Potraviny, potravní aditiva - Léky - Sezónní alergeny - pyl, prach,.. - Latex - Biologické materiály Idiopatická anafylaxe Anafylaktoidní reakce - Fyzikální faktory (cvi ení, chlad, teplo, UV,..) - Léky (opiáty) - Etanol

20 Klinické projevy Závisí na: Stupni senzibilizace pacienta Míst vstupu alergenu do organismu Typu alergenu a jeho potenci

21 Klinické projevy Celkové - úzkost, neklid, slabost, parestézie, sucho, abnormální chu v ústech K že, sliznice sv ní, zarudnutí, kop ivka, otok okolo o í, jazyka, rt,.. GIT nausea, zvracení, pr jem, ovité bolesti b icha Respira ní trakt otok horních cest dých., bolest na hrudi, dušnost, bronchospasmus, kašel, hypoxemie, centrální cyanóza KVS hypotenze, tachykardie, arytmie, ob hové selhání, bledost, kardiogenní šok, otok plic, zástava srdce UGT inkontinence mo i CNS poruchy zrakového vnímání, bolest hlavy, poruchy v domí

22

23 Terapie Symptomatická - antihistaminika - kortikosteroidy orální, lokální - blokátory cyklooxygenázové dráhy - bronchodilatanty - inhala Celková - epinefrin (adrenalin) (i.v.) Prevence vylou ení alergenu z prost edí - desenzibilizace, specifická imunoterapie - aplikace epinefrinu (self-injected)

24 Praktikum

25 Cíl praktika Opakovaná aplikace antigenu (ko ské sérum) s.c. po 3 dnech Za 3 týdny od za átku senzibilizace Odb r krve v.auricularis (2ml + heparin) na hematologické vyšet ení Aplikace 3 ml ko ského séra i.v. 1. Odb r krve z v.auricularis, p íp. intrakardiáln (2ml + heparin) na hematologické vyšet ení. 2. Zhotovení nát ru periferní krve. 3. Stanovení po tu krevních element (leukocyty, trombocyty, eozinofily).

26 Úkoly a provedení Sledování pr hu anafylaktické reakce (videozáznam) Srovnání po tu krevních element (p ed a po prob hlé reakci) P íprava a zhodnocení nát ru periferní krve (ze vzork ed a po anafylaxi)

27 Stanovení po tu krevních element I. Hematologické automaty II. Mikroskopicky (po ítací kom rky) Leukocyty Trombocyty Eozinofilní granulocyty

28 Zp sob po ítání krevních element

29 Leukocyty Pot eby: Krev Türk v roztok Sklen ná bani ka se zátkou Mikropipety Bürkerova kom rka s krycím sklí kem Mikroskop Postup: Do bani ky p eneseme 475 l Türkova roztoku, p idáme 25 l krve. Uzav eme zátkou, šet n promícháme a necháme 2-3 min.stát. Naplníme Bürkerovu kom rku. Po ítáme 50 tverc a násobíme100x L= 50..x 100 (po et Leu/1 l)

30 Trombocyty Pot eby: Krev Prokain Bani ka se zátkou Mikropipety Bürkerova kom rka mikroskop Postup: Do bani ky s prokainem p idáme 25 l krve, ekáme 20 min. na hemolýzu Ery. Prot epeme, naplníme Bürkerovu kom rku. Po ítáme ve 20 obdélnících. T= 20..x 1000 (po et Trb/ 1 l) lov k tis./ l Králík..cca 130 tis.-1 mil./ l

31 Eozinofily Pot eby: Krev Dunger v roztok Mikropipety Bani ka se zátkou Bürkerova kom rka mikroskop Postup: Do bani ky s 475 l Dungerova roztoku p idáme 25 l krve, 15 min. ekáme na obarvení eozinofil. Promícháme a naplníme Bürkerovu kom rku. Po ítáme na celé ploše kom rky. Eo= 20 x 11,1 (po et x 10 3 / 1 l)

32 íprava krevního nát ru

33 Granulocyty Eosinofilní - Dvojlalo natá jádra - Specifická granula (barví se eosinem)- obsahují enzymy, cytotoxické proteinycytokiny - Vyšší množství ve sliznici st ev, plic a v k ži

34 Granulocyty Basofilní - Lalo naté jádro, p ekryté granuly - Specifická granula obsahují histamin, heparin a další látky

35 Granulocyty Neutrofilní - Jádro -2-5 lalok -spojena filamenty - Cytoplazma sv tlá, specifická i nespecifická granula - Azurofilní granula - Schopnost fagocytózy

36 Funk ní vývoj neutrofilních granulocyt

37 Agranulocyty Lymfocyty - B lymfocyty (15%) - T lymfocyty (80%) - Nulové bu ky (5%) - jádro kulaté/oválné - Cytoplazma tenký proužek

38 Agranulocyty Monocyty - Oválné nebo podkovovité jádro - Cytoplazma modrošedá granula - Nezralá forma makrofág (tkán )

39 Diferenciální rozpo et leukocyt Stanovení procentuálního zastoupení jednotlivých druh bílých krvinek Po et jednotlivých druh se ur uje nejmén na 100 Leu Ur uje se v nát ru obarveném Leuko difem 200 Roložení Leu v nát ru je nerovnom rné prohlížet nát r meandrovit V tší Leu na okrajích (mono, Eo) Menší ve st edu (lymfo)

40 Procentuální zastoupení jednotlivých druh bílých krvinek

41 Diferenciální rozpo et u laboratorního králíka Po et leukocyt cca 6-12 tis.mm -3 - Neutrofilní granulocyty 8-50% - Eosinofilní granulocyty 1-3% - Bazofilní granulocyty 1-8% - Lymfocyty 20-90% - Monocyty 1-4%

42 Záv r Záznam výsledk vyšet ení periferní krve do tabulky Srovnání hodnot p ed a po anafylaxi

43 kuji za pozornost