Problematika molekulárněmikrobiologické diagnostiky Jaroslav Hrabák
Téma jednání 1. Nepodkročitelná minima vybavení molekulárněmikrobiologické laboratoře Schválení dokumentu 1. Vzdělávání v molekulární mikrobiologii 1. Nové technologie v mikrobiologické laboratoři MALDI-TOF a jeho perspektivy 3. Indikační podklady mikrobiologická vyšetření pro molekulárně- Vypracování dokumentu doporučení SLM ČLS JEP Rozdělení jednotlivých oblastí
Co se podařilo od minulého zasedání?
Nepodkročitelná minima pro vybavení molekulárně-mikrobiologické laboratoře Podklady pro laboratoří (ČIA) posuzování mikrobiologických Prosinec 2010 první podoba dokumentu Rozesláno členům PSMM TIDE Únor 2011 finální verze dokumentu Personální zabezpečení laboratoře? Nepodkročitelné meze odbornosti 802 Lékařská mikrobiologie (804, 805, 822) Minimální požadavky na personál laboratoře
Nepodkročitelná minima pro vybavení molekulárně-mikrobiologické laboratoře Laboratoře dále analyzující PCR produkty (např. elektroforetické vyhodnocení, hybridizační techniky, sekvenace, atp.): Oddělené prostory s možností dekontaminace UV světlem pro: izolaci nukleových kyselin přípravu reakcí práci s amplifikačními produkty Sady pipet pro: izolaci nukleových kyselin pokud laboratoř nedisponuje automatem přípravu reakcí práci s amplifikačními produkty
Nepodkročitelná minima pro vybavení molekulárně-mikrobiologické laboratoře Laboratoře dále analyzující PCR produkty (např. elektroforetické vyhodnocení, hybridizační techniky, sekvenace, atp.): Termocykler Centrifuga Vortex Termoblok pokud je izolace nukleových kyselin prováděna manuálně Box s laminárním prouděním Box pro přípravu reakcí Lednice + mrazák s monitorovanou teplotou (oddělené prostory pro uskladnění vzorků, reagencií, PCR produktů) Vybavení pro elektroforézu Zařízení pro fotodokumentaci gelů (je-li prováděno elektroforetické vyhodnocení PCR reakce)
Nepodkročitelná minima pro vybavení molekulárně-mikrobiologické laboratoře Laboratoře využívající pouze metody PCR v reálném čase (real-time PCR): Oddělené prostory s možností dekontaminace UV světlem pro: izolaci nukleových kyselin přípravu reakcí Sady pipet pro: izolaci nukleových kyselin pokud laboratoř nedisponuje automatem přípravu reakcí
Nepodkročitelná minima pro vybavení molekulárně-mikrobiologické laboratoře Laboratoře využívající pouze metody PCR v reálném čase (real-time PCR): Termocykler pro PCR v reálném čase Centrifuga Vortex Termoblok pokud je izolace nukleových kyselin prováděna manuálně Box s laminárním prouděním Box pro přípravu reakcí Lednice + mrazák s monitorovanou teplotou (oddělené prostory pro uskladnění vzorků, reagencie)
Vzdělávání v molekulární mikrobiologii Nutnost kurzů IPVZ VŠ odborné pracovníky v mikrobiologii Střední zdravotnický personál Vzdělávání v rámci pravidelných seminářů Praktické kurzy
Nové technologie v mikrobiologické laboratoři MALDI-TOF (Matrix-assisted laser desorption/ionization time-of-flight)
MALDI-TOF (Matrix-assisted laser desorption/ionization time-of-flight)
MALDI-TOF Využití a výhody v klinické mikrobiologii Velmi rychlá identifikace bakterií a hub (10-30 minut) Možnost rychlé identifikace hemokultivačních lahviček z pozitivních Možnost korelace s předchozími mikrobiologickými výsledky Správná a včasná indikace vyšetření citlivosti Nízká cena a dostupnost jednotlivých vyšetření
MALDI-TOF K čemu mů že svádě t? Chybné identifikace Neznáme korektní definici bakteriálního druhu! Pokud je vzorek smě sný nedosáhneme identifikace správné Uvádě ní telefonního seznamu bakteriálních druhů na laboratorní výsledek
MALDI-TOF Výhled do budoucna Detekce rů zných molekul (není omezeno na aplikaci v taxonomii) Detekce toxinů??? Detekce mechanizmů rezistence??? Molekulárně -epidemiologické analýzy???
Indikač ní podklady pro molekulárně mikrobiologická vyšetření Indikace založená na dů kazech Vhodný výbě r materiálu Korelace s klinickým stavem pacienta Interpretovatelnost výsledků Podpořeno klinickými studiemi Diagnostika pro výzkumné úč ely Lze účtovat pojišťovně? Jak interpretovat a sdě lovat výsledky?
Indikač ní podklady pro molekulárně mikrobiologická vyšetření - příklad PCR vyšetření Toxoplasma gondii PCR diagnostika T. gondii: KONGENITÁLNÍ INFEKCE Encefalitida u pacientů s AIDS Infekce očí Murray P. et al., Manual of Clinical Microbiology, 9th edition, 2007
Indikač ní podklady pro molekulárně mikrobiologická vyšetření - příklad PCR vyšetření Toxoplasma gondii KONGENITÁLNÍ INFEKCE Diagnostika kongenitálních infekcí T. gondii: Plodová voda Cca 5% pozitivita u seropozitivních případů Koreluje s klinickými projevy Můžeme vyšetřovat krev těhotné se stejným výsledkem???
Indikač ní podklady pro molekulárně mikrobiologická vyšetření Vyšetření ve výzkumném režimu Jak interpretovat výsledky nepodložených studiemi? u vyšetření Kdo nese forenzní odpově dnost? Jaké výsledky sdě lovat pacientů m?
Indikač ní podklady pro molekulárně mikrobiologická vyšetření Co by mě l dokument obsahovat? V jaké klinické situaci indikovat MM vyšetření? Kdy? Jaké? Jaký materiál je pro vyšetření vhodný? Co? Jak vyšetření interpretovat?