MagPurix Blood DNA Extraction Kit 200

Podobné dokumenty
MagPurix Viral Nucleic Acid Extraction Kit

MagPurix Viral/Pathogen Nucleic Acids Extraction Kit B

MagPurix Forensic DNA Extraction Kit

MagPurix Bacterial DNA Extraction Kit

List protokolu QIAsymphony SP

PŘÍBALOVÁ INFORMACE. GeneProof PathogenFree DNA Isolation Kit IDNA050 IDNA250. In vitro diagnostický zdravotnický prostředek

Konečná zpráva hodnocení různých způsobů přípravy vzorků pro AMPLICOR HPV test firmy Roche

Column DNA Lego Kit UNIVERZÁLNÍ SOUPRAVY PRO RYCHLOU IZOLACI ČISTÉ DNA (Katalogové číslo D201 + D202)

DYNEX nabízí komplexní řešení v oblasti zpracování a analýzy biologických materiálů pomocí molekulárně biologických metod.

Seminář izolačních technologií

Souprava na extrakci nukleových kyselin. Uživatelská příručka

Tkáňový homogenizátor MagNA Lyser od společnosti Roche

CRP. Axis - Shield. SINGLE TESTS CRP kvantitativní stanovení pomocí přístroje NycoCard Reader II

Uživatelská příručka

Vznešený 2015 QIAsymphony DSP DNA Kits: Charakteristika účinnosti

List protokolu QIAsymphony SP

Izolace RNA. doc. RNDr. Jan Vondráček, PhD..

1. Metodika. Protokol č. F1-4 Metodika: Srovnávací analýza efektivity přípravy rekombinantního proteinu ve fermentoru

IZOLACE DNA (KIT DNeasy Plant Mini)

Sure-MeDIP I. with magnetic beads and MNase.

cdna synthesis kit First-Strand cdna Synthesis System Verze 1.2

Braf V600E StripAssay

Izolace nukleových kyselin

Sure-MeDIP II. with agarose beads and Mse I.

α-globin StripAssay Kat. číslo testů 2-8 C

HbA1c. Axis - Shield. Společnost je zapsána v obchodním rejstříku Městského soudu v Praze, odd. C vložka 1299

QIAsymphony DSP DNA Kits

1. Real time PCR se softwarem a příslušenstvím pro rutinní použití

CVD-T StripAssay. Kat. číslo testů 2-8 C

AdnaTest ProstateCancerSelect

EGFR XL StripAssay. Kat. číslo testů 2-8 C

VÝZNAM NĚKTERÝCH FAKTORŮ PREANALYTICKÉ FÁZE V MOLEKULÁRNÍ BIOLOGII

IZOLACE DNA PRO STANOVENÍ GMO METODOU PCR (KIT NUCLEOSPIN FOOD)

Jednotné pracovní postupy zkoušení krmiv

Braf 600/601 StripAssay

DIAGNOSTICKÝ KIT PRO DETEKCI MINIMÁLNÍ REZIDUÁLNÍ CHOROBY U KOLOREKTÁLNÍHO KARCINOMU

DIAGNOSTICKÝ KIT PRO DETEKCI MINIMÁLNÍ REZIDUÁLNÍ CHOROBY U KARCINOMU PANKREATU

NAT testování dárců krve v ÚVN Praha

Souprava je určená výhradně pro výzkumné účely, nikoliv pro diagnostické postupy.

MOLEKULÁRNĚ BIOLOGICKÉ METODY V ENVIRONMENTÁLNÍ MIKROBIOLOGII. Martina Nováková, VŠCHT Praha

Inovace studia molekulární a buněčné biologie reg. č. CZ.1.07/2.2.00/

Pro použití při přípravě a izolaci purifikovaných lymfocytů z plné krve PŘÍBALOVÁ INFORMACE. Pro diagnostické použití in vitro PI-TT.

Ústav molekulární a translační medicíny LF UP extrakční zařízení pro nukleové kyseliny

Kras XL StripAssay. Kat. číslo testů 2-8 C

Mendelova univerzita v Brně Agronomická fakulta Ústav biologie rostlin

Molekulárně biologické metody v mikrobiologii. Mgr. Martina Sittová Jaro 2014

Real time PCR detekce Borrelia burgdorferi Sensu Lato

NRAS StripAssay. Kat. číslo testů 2-8 C

DIAGNOSTICKÝ KIT PRO DETEKCI MINIMÁLNÍ REZIUDÁLNÍ CHOROBY MRD EGFR

Aplikace molekulárně biologických postupů v časné detekci sepse

Určeno pro obecné laboratorní užití. Není určeno pro použití v diagnostických postupech. POUZE PRO POUŽITÍ IN VITRO.

Výzkumné centrum genomiky a proteomiky. Ústav experimentální medicíny AV ČR, v.v.i.

List protokolu QIAsymphony SP

Nakupte pro dlouhé. zimní vecery. za akcní ceny. Reagencie pro výzkum proteinu protilátky. elektroforézu izolace DNA NGS sluzby Dokumentační systémy

Izolace genomové DNA ze savčích buněk, stanovení koncentrace DNA pomocí absorpční spektrofotometrie

NÁVOD K POUŽITÍ PRO HER2 DNA QUANTIFICATION KIT

Objednací číslo Určení Třída IgG Substrát Formát EI G Parainfluenza viry typu 1. Ag-potažené mikrotitrační jamky

RNA Blue REAGENS PRO RYCHLOU PŘÍPRAVU ČISTÉ A NEDEGRADOVANÉ RNA (katalogové číslo R011, R012, R013)

MagPurix 12 Instrument

IZOLACE DNA PRO STANOVENÍ GMO METODOU PCR (KIT GENELUTE)

2. Srovnání postupů izolace DNA kolonky vs. paramagnetické částice

TECHNICKÁ SPECIFIKACE Vybavení genetické laboratoře pro projekt EXTEMIT-K část B

Real time PCR detekce bakterií Legionella pneumophila+micdadei, Mycoplasma pneumoniae, Chlamydia pneumoniae a Bordetella pertussis

Protilátky proti Helicobacter pylori (IgG) Návod na použití ELISA testu

SD Rapid test TnI/Myo Duo

List protokolu QIAsymphony SP

Objednací číslo Určení Třída IgG Substrát Formát EI G Tetanus toxoid IgG Ag-potažené mikrotitrační jamky

strojů umožň lní vstupní infiltraci Mgr. Silvie Dudová, RNDr. Iva Burešová, Drahomíra Kyjovská

MOLEKULÁRNÍ BIOLOGIE I PŘÍPRAVA TKÁNĚ K IZOLACI DNA

Příručka pro sadu artus EBV RG PCR

Hybridizace nukleových kyselin

Sada artus HBV QS-RGQ

Polymorfismus délky restrikčních fragmentů

Diagnostika infekce Chlamydia trachomatis pomocí molekulárně genetické metody real time PCR nejen u pacientek z gynekologických zařízení

Aplikační list QIAsymphony RGQ

List protokolu QIAsymphony SP

laboratorní technologie

Seznam použitých chemikálií

PAXgene Blood RNA Kit Manuál

Optimalizace metody PCR pro její využití na vzorky KONTAMINOVANÝCH PITNÝCH VOD

Funkční testy: BasoFlowEx Kit FagoFlowEx Kit

ÚLOHA C Klonování PCR produktu do plasmidu

CA15-3 IRMA Souprava CA15-3 IRMA umožňuje přímé in-vitro kvantitativní stanovení s tumorem asociovaného antigenu CA15-3 v lidském séru

PŘÍPRAVA REAGENCIÍ A STABILITA:

Specifická izolace microrna pomocí magnetizovatelných mikročástic

MOLEKULÁRNÍ BIOLOGIE I PŘÍPRAVA TKÁNĚ K IZOLACI DNA

Jednotné pracovní postupy testování odrůd STANOVENÍ OBSAHU TANINŮ V ČIROKU SPEKTROFOTOMETRICKY

DNA TECHNIKY IDENTIFIKACE ŽIVOČIŠNÝCH DRUHŮ V KRMIVU A POTRAVINÁCH. Michaela Nesvadbová

Yi TPMT. Diagnostická souprava. Návod k použití. Haasova 27 Brno Česká republika. tel.:

Rychlá kvalitativní detekce lidského hemoglobinu ve vzorcích stolice. Všeobecné informace použití a vyhodnocení

1. Definice a historie oboru molekulární medicína. 3. Základní laboratorní techniky v molekulární medicíně

Praktický kurz Příprava buněčného lyzátu, izolace celkové RNA pomocí kolonek/tripure reagent, stanovení koncentrace RNA

jako markeru oxidativního

Aspartátaminotransferáza (AST)

IZOLACE DNA POMOCÍ CTAB PRO STANOVENÍ GMO METODOU PCR

LABORATORNÍ PŘÍRUČKA. Laboratoř HLA systému a PCR diagnostiky

Progesteron ELISA test pro kvantitativní stanovení progesteronu v lidském séru nebo plazmě

Real time PCR detekce bakterií Haemophilus influenzae, Neisseria meningitidis, Streptococcus pneumoniae a Listeria monocytogenes

Evropský sociální fond Praha & EU: Investujeme do vaší budoucnosti NUKLEOVÉ KYSELINY

Příručka k soupravám QIAsymphony DSP DNA

Transkript:

MagPurix Blood DNA Extraction Kit 200 Kat. č. ZP02001-48 Doba zpracování: 50-60 minut pro MagPurix 12S 50-70 minut pro MagPurix 24 Použití Souprava MagPurix Blood DNA Extraction Kit 200 je určena pro izolátor MagPurix, pro extrakci DNA z 10-400μl plné krve savců, suspenze savčích krevních buněk Aplikace Nukleové kyseliny extrahované pomocí soupravy MagPurix Blood DNA Extraction lze použít v řadě následných aplikací včetně: PCR, qpcr, Sekvenování (NGS), Microarray, RFLP, Southern Blot Analýza Počet testů 48 extrakcí Složky soupravy Složky soupravy Reagenční kazeta Reakční komora Držák hrotu Špička s filtrem Prorážecí hrot Zkumavka na vzorky Eluční zkumavka Čárové kódy programu Průvodce ZP02001-48 48 ks (6x8) 48 ks (6x8) 48 ks (6x8) 50 ks (50x1) 50 ks (50x1) 50 ks (50x1) 50 ks (50x1) 1 ks 1 ks 1 S t r á n k a

Obsah reakční kazety 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 jamka 1 Roztok proteinázy K 40 l jamka 2 Lyzační pufr 2 1000 l jamka 3 Vazebný pufr 1 600 l jamka 4 Roztok magnetických partikulí 800 l jamka 5 Promývací pufr 1 1000 l jamka 6 Promývací pufr A 1000 l jamka 7 Promývací pufr B 1000 l jamka 8 Eluční puft 1 1000 l jamka 9 Eluční pufr 2 1000 l jamka 10 prázdná Skladování Souprava MagPurix Blood DNA Extraction Kit 200 by měla být skladována při pokojové teplotě (15-25 C). Kazety s reagenciemi nikdy nezamražujte. Za těchto podmínek jsou soupravy stabilní po dobu 18 měsíců. Izolované purifikovanoué nukleové kyseliny skladujte před provedením následné analýzy při 4 C (krátkodobě, méně než 10 dní) nebo ji rozdělte na části a uchovávejte při -70 C (dlouhodobě). 2 S t r á n k a

Startovací materiál Typ vzorku Savčí plná krev, Buffy coat, koncentrát leukocytů * Cílová nukleová kyselina Objem vzorku Celková DNA (genomová DNA, mitochondriální a / nebo virová DNA) ** 100-400 μl plné krve (počet bílých krvinek méně než 2x10 4 buněk/μl); 100-400 μl koncentrátu leukocytů (neobsahují více než 5x10 6 buněk); 100-400μl buffy coat ** POZNÁMKA: * Pro ty vzorky, které mají nízký počet leukocytů (méně než 1x10 3 buněk / μl), zahustěte krevní buňky centrifugací při 3000 ot./min 15 min. 4 C aby koncentrace leukocytů pro DNA izolaci dosáhla doporučené hodnoty ** Pokud je počet bílých krvinek ve vzorku krve vyšší než 2x10 4 buněk/μl použijte soupravu MagPurix Blood DNA Extraction Kit 1200 nebo nařeďte krevní vzorek PBS (např. plná krev pacienta s lymfomem/myelomem nebo jiný vzorek krve/buffy coat bohatý na granulocyty) Kontroly / Volitelná interní kontrola # Přidejte kontroly / interní kontroly do extrakční procedury, pokud je vyžaduje následná analýza (# viz Kontroly / interní kontroly na stránce 14) Eluční objem 50-300 μl Pokud je objem vzorku menší, přidejte odpovídající objem PBS Souprava MagPurix Blood DNA Extraction Kit 200 je určena pro extrakci DNA z čerstvé nebo zmrazené krve odebrané ve zkumavkách obsahujících běžné antikoagulační látky, jako je EDTA, heparin * a citrát (* EDTA se doporučuje používat jako antikoagulační činidlo, zatímco heparin má inhibiční účinky na reakci amplifikace nukleové kyseliny). Je doporučeno použití čerstvého vzorku plné krve (do 1 týdne, uloženo při 4-8 ) pro extrakci, neboť výtěžnost a kvalita nukleových kyselin s časem klesá. Pro delší dobu skladování by měla být celá krev zmrazená a vyhnout se cyklům rozmrazování. Tento protokol byl vytvořen pro izolaci DNA z plné krve zdravého jedince, zatímco vzorky z nezdravých nebo léčených jedinců (např. pacienti s leukemií nebo infekčním onemocněním) mohou vykazovat abnormální kvalitu krve, která následně může ovlivnit extrakci nukleové kyseliny. Pro izolaci NK z koncentrovaného buffy coat (čištěného a bez krevních buněk), je doporučen MagPurix Culture Cell DNA kit (ZP02005) 3 S t r á n k a

Pokud je celý vzorek krve bohatý na granulocyty (počet bílých krvinek je vyšší než 2x10 4 buněk / l), zřeďte vzorek krve nebo extrahujte DNA pomocí MagPurix blood DNA 1200 soupravy (ZP02002). Skladování nukleových kyselin: Pro krátkodobé skladování (až do 10 dní) uložte zkumavky na 2-8 C. Nicméně pro aplikace vyžadující maximální velikost fragmentů, (například southern blotting), uskladněte purifikovanou DNA při teplotě 2-8 C maximálně 3 dny, neboť při delším skladování dochází k degradaci DNA. V případě nutnosti dlouhodobého skladování uložte zkumavky při -70 C. Ve skutečnosti obsahuje extrahovaný produkt celkové nukleové kyseliny (DNA a RNA), přičemž RNA není hlavním produktem této soupravy (asi 10%) a brzy je degradována. Pokud je požadován produkt bez RNA je nutné přidat k eluátu RNázu. Výsledek (1) Očekávaná čistota a výtěžek DNA byla izolovaná pomocí extrakční sady MagPurix Blood DNA 200 a izolátoru MagPurix s použitím pěti různých vzorků lidské plné krve (zkumavka s EDTA-K2). Koncentrace DNA byla měřena s použitím NanoDrop 2000 spektrofotometru. Rozsah výtěžku DNA je 2-18 μg pro MagPurix Blood Extraction Kit 200 (z krevního vzorku bílých krvinek: 2-20x10 3 buněk/ l). Výtěžek DNA z plné krve závisel na konkrétním dárci krve a počtu krevních buněk. Výtěžek z kultivované buněčné kultury závisel na typu buněčné linie v důsledku variabilního stupně aneuploidie. Vzorek Objem Výtěžek DNA Čistota Plná krev (bílé krvinky 1,8x10 3 /ml) 100 l 200 l 300 l 400 l 1-1,2 g 2-2,1 g 2,8-3,1 g 4-4,3 g OD260/OD280 >=1,8 OD260/OD230 >=1,5 Plná krev (bílé krvinky 4x10 3 /ml) Plná krev (bílé krvinky 6,9x10 3 /ml) Plná krev (bílé krvinky 10,9x10 3 /ml) K562 buňky 100 l 200 l 300 l 400 l 100 l 200 l 300 l 400 l 100 l 200 l 300 l 400 l 1,6 2,1 g 3,8 3,9 g 5,1 5,2 g 8,5-8,8 g 2,9 3,1 g 5,8-6,2 g 8,2-8,8 g 11,9 12,5 g 4,3-4,6 g 8,7-9,1 g 11,5-12,2 g 16,6-17,5 g 9-9,6 g 22-25 g 4 S t r á n k a

(2) Integrita DNA byla izolována v 12 duplikátech z 200 μl lidské plné krve. Eluční objem byl nastaven na 100 μl. Integrita DNA byla prokázána u každého vzorku na elektroforéze na TAE agarosovém gelu spolu s markerem Lambda / Hind III (fragmenty o velikosti 0,56, 2,02, 2,32,4,36,6,56,9,42, 23,13 kb). Všechny vzorky prokázaly jednotlivé pásy s molekulovou hmotností větší než 22 kb bez rozmazání (3) Škálovatelnost A. DNA byla izolována z různých vzorků plné krve (počet bílých krvinek byl 1,8-22x10 3 buněk / l). Výtěžek DNA (měřený spektrofotometrem Nanodrop 2000 UV-Vis) vykazuje vynikající škálovatelnost v různých objemech (100, 200, 300 a 400 μl) extrakce a při různém počtu bílých krvinek. 5 S t r á n k a

B. DNA izolovaná z různých množství vzorků plné krve byla amplifikována pomocí qpcr v reálném čase za použití primerů specifických pro gen β-globin. Výsledné vynesené body potvrzují škálovatelnost při extrakci. (4) Reprodukovatelnost DNA byla izolována soupravou MagPurix Blood DNA Extraction kit 200 ze vzorků plné krve. Geny β- globinu byly detekovány qpcr v reálném čase. Tato data ukazují velmi vysokou stabilitu a reprodukovatelnost systému purifikace nukleových kyselin MagPurix 12s. 6 S t r á n k a

(5) Stabilita DNA byla extrahována z plné krve soupravou MagPurix Blood DNA Extraction kit 200. V reálném čase byla zjištěna qpcr analýza β-globinu (A) a kontaminace DNA parvoviru B-19 (A, B). Nebyly prokázány žádné významné vlivy na vzorky s různými antikoagulačními látkami a podmínkami skladování. (6) Citlivost Použití plné krve (v odběrové zkumavce s EDTA) kontaminované sériovým ředěním lidského viru Parvo B19 (v rozmezí 25-2500000 IU / ml). 200 μl vzorku bylo extrahováno a eluováno ve 100 μl. 10 μl eluátu byl použit pro real-time PCR reakci RealStar Parvovirus B19 PCR kit 1.0. Ve vzorku byla detekována i extrémě nízká úroveň kontaminace 5 IU (přibližně 1 IU v PCR reakci), což dokládá vynikající citlivost a linearitu izolačního postupu. 7 S t r á n k a

Kontroly / interní kontrola Použití vhodných kontrol pro následnou analýzu: Typ Popis Umístění Pozitivní kontrola Použití vzorku pozitivního pro cíl Vložte do zkumavky pro vzorek Negativní kontrola Použití vzorku negativního pro cíl nebo vodu (NTC) Vložte do zkumavky pro vzorek Interní kontrola (IC) Použití definovaného množství kontroly Umístěte do zkumavky na vzorky nebo do kulaté jamky reakční komory Kontrola kvality V souladu se systémem řízení kvality společnosti ZINEXTS, který je certifikován podle ISO, každá řada soupravy MagPurix Blood DNA Extraction kit 200 je testována na základě předem stanovených specifikací pro zajištění konzistentní kvality produktu. 8 S t r á n k a