eská zemdlská univerzita v Praze Vysoká škola chemicko-technologická v Praze OSEVA vývoj a výzkum s.r.o. Redakn upravená zpráva za rok 2009

1. Titulní list eská zemdlská univerzita v Praze Vysoká škola chemicko-technologická v Praze OSEVA vývoj a výzkum s.r.o. Redakn upravená zpráva za rok 2009 íslo projektu: QH 92106 Název projektu: PSTITELSKÉ SYSTÉMY U MÁKU SE ZAMENÍM NA KVALITU A BEZPENOST EKOLOGICKÉ A INTEGROVANÉ PRODUKCE. Program: PP2 Ochranné a šetrné postupy hospodaení Téma: Pírod blízké hospodaení - welfare a permakultura Priorita Doba ešení: 1. 1. 2009-31. 12. 2011 ešitel: Ing. Miroslava Hájková Odpovdný ešitel: Ing. Perla Kuchtová, Ph.D. ešitel: Prof. Ing. Jana Hajšlová, CSc. Statutární zástupce píjemce koordinátora:. Prof. Ing. Jan Hron, DrSc., dr.h.c., rektor Praha, leden, 2009 1

Osnova zprávy a její souásti 1. Titulní list... 1 2. Osnova zprávy a její souásti... 2 3. Organizace úastnící se projektu... 2 4. ešitelský tým... 2 5. Náklady na projekt celkem... 2 6. Zhodnocení prbhu ešení... 3 6.1. Shrnutí... 4 6.1.1. VŠCHT... 4 6.1.2. ZU + OSEVA VaV... 5 7. Pílohy... 7 7.1. Píloha I. AKTIVITY SCHVÁLENÉ... 7 7.2. Píloha II. Charakteristiky pokusných stanoviš... 8 7.2.1. ZU - Charakteristiky lokalit... 8 7.3. Píloha II. Pehled pokusných variant... 15 7.3.1. Pokusná agrotechnika... 16 7.3.2. Plánky pokus... 17 7.4. Píloha III. VŠCHT... 18 7.4.1. Materiál a metody... 18 8. Dosažené výsledky... 26 8.1. ZU v Praze... 26 8.1.1. Vzcházení... 26 8.1.2. Zdravotní stav... 29 8.1.3. Výnosy... 35 8.2. OSEVA VaV Opava... 44 8.3. VŠCHT v Praze... 47 9. Popis uplatnní... 49 2. Organizace úastnící se projektu eská zemdlská univerzita v Praze píjemce koordinátor Vysoká škola technologická v Praze píjemce OSEVA vývoj a výzkum s.r.o. - píjemce 3. ešitelský tým V 1. roce ešení se na innostech souvisejících s ešením projektu podílely všechny ti zapojené instituce - ZU v Praze, VŠCHT v Praze i OSEVA vývoj a výzkum s.r.o. V prbhu roku došlo k úpravám složení ešitelského týmu na ZU v Praze. 4. Náklady na projekt celkem Pehled náklad na ešení projektu je souástí odevzdané elektronické zprávy. 2

5. Zhodnocení prbhu ešení 2009 první rok ešení Roku 2009 byly na pozemcích dvou PS FAPPZ, OSEVA VaV v Opav a ekologické farm v Budyni nad Ohí, založeny pokusy s mákem s cílem ovit vliv vybraných pípravk a jejich kombinací na zdravotní stav rostlin, parametry porostu, výnos semen, výnosové charakteristiky a zdravotní stav osiva. Zkoušeny byly vybrané zpsoby úpravy osiva samostatn i v kombinacích, vetn variant s osivem ošeteným elektronovým záením. V pokusech s integrovanou ochranou rostlin byly zkoušeny pípravky s insekticidními i fungicidními úinky, vetn pípravk povolených pro použití v ekologickém zemdlství. Na pozemcích s certifikací pro ekologické zemdlství (PS Uhínves, Farma Tachecí, Budyn) byly založeny pokusy s pípravky ochrany rostlin povolenými pro ekologické zemdlství. Celkový poet variant integrované pstitelské technologie ovované v Uhínvsi a Opav inil 30, v erveném, Újezd pak 18 variant. V Budyni nad Ohí bylo ovováno 12 variant ekologické pstitelské technologie, v Uhínvsi 4. Pehled variant je uveden v píloze. Maloparcelkové pokusy se 4, respektive 3 opakováními (Uhínves) byly vysety pesným secím strojem Oyjord a Wintersteiger. Šíka parcely inila 1,25 m, meziádková vzdálenost 0,25 m a skliz ová velikost 10 m 2. Dvodem nižšího potu opakování (3 místo bžných 4 opakování) na PS v Uhínvsi byl nedostatek místa na pokusné ploše, kterou stanice disponuje. Porosty byly ošetovány v souladu se zásadami ekologického (Budyn nad Ohí), nebo integrovaného zpsobu hospodaení. Na ekologické ploše nebyla použita minerální rychle rozpustná hnojiva a regulace plevel byla pouze mechanická, plekováním. Záznamy bhem vegetace byly vedeny, umož ovala-li to povaha sledované charakteristiky, ve form metrických dat. Nkteré parametry byly (úinnost pípravk, polehnutí, mezerovitost) hodnoceny s využitím 9 bodové stupnice. Pi hodnocení zdravotního stavu a úinnosti použitých pípravk jsou používány modifikované EPPO metodiky. Draz byl kladen na limitující faktory významné pro volbu možnosti uplatnní šetrných technologických postup v ekologickém i integrovaném systému pstování zdravotní stav rostlin, výskyt škdc. V pokroilých fázích vegetace, pi sklizni a bezprostedn po sklizni, byly hodnoceny významné produkní charakteristiky, jakými jsou poty rostlin, poty makovic na jednotku plochy, odhad výnosu, HTS apod. 3

Ped zahájením sklizn byly odebrány vzorky makovic k analýze výnosových prvk. Ke sklizni byla využita maloparcelková sklízecí mlátika. Vzorky pro poskliz ové hodnocení byly sklizeny run, olámáním makovic. U sklizených semen byla stanovena vlhkost, hrubá a istá hmotnost a vzorky semen máku pipraveny k pedání VŠCHT ke stanovení obsahu vybraných mykotoxin a ovení zvolených metod a postup. Poskliz ové rozbory byly realizovány v podzimním a zimním období roku 2009. Zjišován byl zdravotní stav odebraných makovic (napadení houbovými chorobami, škdci) a hmotnost semen a makoviny jednotlivých makovic ve vzorcích odebraných z rzných zpsob ošetení ekologického i integrovaného. Experimentální mení provedená na pilotních vzorcích poskytnutých eskou zemdlskou univerzitou v Praze (ZU v Praze) ukázala, že ani jeden vzorek ze tí neobsahoval detekovatelná množství vybraných fusariových mykotoxin. Z vybraných alternáriových mykotoxin byly detekovány v kvantifikovatelném množství pouze dva toxiny, a to alternariol (AOH) a alternariolmethylether (AME). Altenuene (ALT) nebyl detekován v žádném vzorku. Nejvyšší hladiny obsahovala semena máku pocházející z lokality Budyn a to 91 µg/kg AOH a 104 µg/kg AME. Semena máku pocházející z Uhínvsi obsahovala 35 µg/kg AOH a 30 µg/kg AME. Nejnižší nálezy vykazoval vzorek semen máku odrdy Major a to 10 µg/kg AOH. Aktivita 510: K hodnocení obsahu morfinu ve vzorcích makoviny byly vybrány reprezentaní varianty ze všech pokusných míst. Vzorky makoviny byly homogenizovány a analyzovány metodou HPLC na obsah jednotlivých alkaloid (morfin, thebain, kodein). Obsah morfinu se v jednotlivých vzorcích pohyboval v rozmezí 0,6-0,9 %. V souasné dob probíhá zpracování získaných výsledk. 5.1. Shrnutí 5.1.1. VŠCHT V rámci aktivity A507 byla nov vyvinuta a validována multidetekní metoda pracující na principu UHPLC-TOF MS urená pro stanovení fusariových a alternáriových mykotoxin v semeni máku. Uvedená metoda byla úspšn použita pi pilotní studii vzork máku ze sklizn 2008 a 2009. V prbhu následujícího roku ešení projektu budou analyzovány vybrané vzorky semen máku ze sklizn 2009 a 2010 a na základ výsledk mení budou do metody pidány další analyty, které pispjí ke komplexnímu zhodnocení mykologické kvality máku pstovaného na území R 4

5.1.2. ZU + OSEVA VaV 5.1.2.1. Ekologické pstování máku Z hlediska zdravotního stavu rostlin, vetn napadení makovic a následn výnosu, se pro ekologickou pstitelskou technologii se po 1. roce ešení grantu zdají být významná ošetení osiva elektronickou metodou E_ventus v kombinaci s nkterým z povolených biofungicid (Supresivit, Polyversum). Supresivit se zdá být vhodnjší déle drží rostliny. Dležité je rovnž ošetení biofungicidy v prbhu vegetace, rostliny neošetené kontroly vykazují v prbhu vegetace vyšší napadení. Pro limitování chorob je významné i ošetení pípravkem Spruzit (Pyretrum) s cílem snížit výskyt škdc, nicmén zde je nutno brát v úvahu jeho vysokou cenu v kombinaci s omezenou dobou úinnosti. Dalším, pro ekologickou produkci ne nevýznamným faktorem je skutenost, že Pyretrum nepsobí selektivn a psobí na veškerý hmyz. V místech s vysokým tlakem makovicových škdc, jakým je nap. Budyn, je produkce máku neefektivní. Zajímavá, s výhradou, z pokusnického hlediska pi hledání a zkoušení dalších ekologicky pijatelnjších postup limitace škodlivého organismu. Silný tlak škdc v Budyni nad Ohí (krytonosec koenový a v dob tvorby makovic makovicoví škdci) snížil mimoádn poet rostlin a posléze množství sklizených semen maku na ekologické ploše, pestože tato byla sklízena a vyklepávána run, prakticky beze ztrát. Píštím rokem budou založeny poloprovozní pokusy s mákem (krom farmy v Budyni) i na další ekologické farm, hospodaící v píhodnjších pírodních podmínkách. V Uhínvsi se v 1. roce pokus s ekologickým mákem obecn projevil nižší tlak škdc a chorob, než na ostatních lokalitách význam lokality! Z alternáriových mykotoxin byly detekovány v kvantifikovatelném množství Alternariol (AOH) a alternariolmethylether (AME). Altenuene (ALT) nebyl detekován v žádném vzorku. Nejvyšší hladiny obsahovala semena máku pocházející z lokality Budyn (91 µg/kg AOH a 104 µg/kg AME). Semena máku pocházející z Uhínvsi (integrovaná technologie) obsahovala 35 µg/kg AOH a 30 µg/kg AME. Nejnižší nálezy vykazoval vzorek semen (uznané osivo) máku odrdy Major a to 10 µg/kg AOH. 5.1.2.2. Integrované pstování máku Pro integrované pstování je vtší výbr možných kombinací omezujících vliv škodlivých initel bhem vegetace. Pokud jde o výnos semen a zdravotní stav rostlin, nejvíce se 5

osvdily kombinace: Cyperkillu a Talstaru s Prosarem., Cyperkill + Biscaya, Cyperkill + Caramba. Vždy je spíše nezbytné než vhodné ošetení osiva. Z hlediska ekologitjšího pístupu E-ventus v kombinaci s biofungicidem. Z chemických pípravk se nejlépe osvdil Chinook v kombinaci s E-ventus, pípadn samostatn. Použití látek s regulaním úinkem (Hergit, Hergit + Zn) v kombinaci s vhodn zvoleným fungicidem v našich pokusech po prvním roce ešení prokazateln zvýšilo výnos. Pi plánování pokus pro 2. rok ešení pedpokládáme snížení potu variant. Budou vybrány a upraveny nejvýhodnjší osvdené kombinace, s cílem dosáhnout vyšší efektivnost produkce, ovit vybrané postupy. V druhém roce ešení bude rozšíen poet lokalit, vybrané postupy budou ovovány v rámci další ekologické farmy hospodaící v píhodnjších pírodních podmínkách (vyšší nadmoská výška, chladnjší oblast). Spolupráce je dohodnuta i s konvenní farmou, kde budou zkoušeny postupy integrované pstitelské technologie. Pozemky konvenní farmy se nacházejí vzdušnou arou 2-3 km od ekologické farmy v Budyni nad Ohí. Pro místa s vysokým tlakem škodlivých initel (Budyn) bude hledán scéná možných postup (rané výsevy, podzimní výsev ozimého máku) s cílem vyhnout se i asov limitovat nejsilnjší tlaky škdc, kteí se významn podílejí na následných škodách a ztrát na výnosu zpsobených chorobami rostlin. Pozornost bude vnována výbru a naasování použití pípravk s biofungicidním úinkem v porostech ekologického máku s cílem omezit výskyt houbových chorob v dob dozrávání. Vzhledem k velkému rozsahu prací si ešitelé dovolují podkovat a vyjádit svou vdnost všem spolupracovníkm, zamstnancm i studentm ešitelských organizací, kteí svou prací v prbhu 1. roku ešení pispli. 6

6. Pílohy 6.1. Píloha I. AKTIVITY SCHVÁLENÉ A501 A502 A503 A504 A505 A506 A507 A508 A509 A510 Název (cíl)aktivity Založení a vedení množitelských porost jarního máku pomocí rzných pstitelských technologií s cílem porovnání kvality osiva z tchto porost na konvenních pstitelských plochách Realizace rzných zpsob ošetení osiva proti patogenm semen a vzcházejících rostlin jarního máku s následným hodnocením vlivu zpsobu moení na zdravotní stav rostlin, produktivitu porostu a semenáskou jakost sklizených semen Založení a vedení pokus s osivem máku ošeteného biofungicidy na plochách konvenních i certifikovaných pro EZ Založení a vedení pokusu s vybranými parametry množitelského porostu s rzným ošetením chemickými i biologickými pípravky (herbicidy, insekticidy, fungicidy) bhem vegetace Založení a vedení pokusu s biologickými pípravky bhem vegetace v pokusném porostu. Mechanická regulace plevel. Založení a vedení pokusu s aplikací biofungicid bhem vegetace v pokusném porostu na pokusné ploše certifikované v EZ Výbr mykotoxin, jejichž výskyt je pro sledovanou komoditu kritický. Validace a optimalizace LC-MS/MS metody pro stanovení vybraných mykotoxin. Sledování výskytu škdc v porostech založených rznými pstitelskými technologiemi. Sledování výskytu chorob v porostech založených rznými pstitelskými technologiemi. Sledování obsahu morfinu v makovin s cílem zjistit vliv pstitelské technologie na kvalitu suroviny pro farmaceutický prmysl. Prostedky ovení (dílích výsledk) Semináe u píležitosti polních dn, publikace v odborném tisku, vystoupení na semináích a konferencích, dizertaní práce Pokusné záznamy, záznamy o kontrole poveným pracovníkem poskytovatele finanních prostedk, polní den na pokusné stanici, seminá u píležitosti polního dne, publikace v odborném tisku, vystoupení na semináích a konferencích, diplomová práce Pokusné záznamy, záznamy o kontrole poveným pracovníkem poskytovatele finanních prostedk, polní den na pokusné stanici, seminá u píležitosti polního dne, publikace v odborném tisku, vystoupení na semináích a konferencích, dizertaní práce Pokusné záznamy, záznamy o kontrole poveným pracovníkem poskytovatele finanních prostedk, polní den na pokusné stanici, seminá u píležitosti polního dne, publikace v odborném tisku, vystoupení na semináích a konferencích, dizertaní práce Pokusné záznamy, záznamy o kontrole poveným pracovníkem poskytovatele finanních prostedk, polní den na pokusné stanici, seminá u píležitosti polního dne, publikace v odborném tisku, vystoupení na semináích a konferencích, dizertaní práce Pokusné záznamy, záznamy o kontrole poveným pracovníkem poskytovatele finanních prostedk, polní den na pokusné stanici, seminá u píležitosti polního dne, publikace v odborném tisku, vystoupení na semináích a konferencích, dizertaní práce Laboratorní záznamy a protokoly Polní záznamy, výroní zpráva Polní záznamy, výroní zpráva Laboratorní záznamy a protokoly

6.2. Píloha II. Charakteristiky pokusných stanoviš 6.2.1. ZU - Charakteristiky lokalit 6.2.1.1. Pokusná stanice v Uhínvsi Rajonizace: Pozemky v okolí stanice jsou azeny do epaského výrobního typu a epasko pšeniného subtypu. Prmrná nadmoská výška je 295 metr. Pedologie a geologie Území patí do oblasti starých zvrásnných sediment eského masivu. Na sprašových pdotvorných substrátech se vyvíjejí hndozemní pdní typy s dobrým obsahem živin, které se pro vegetaci uvol ují v pístupných formách. Komplexní przkum pd zaadil naše plochy, z hlediska geneticko-agronomické charakteristiky, k pdním typm hndozemí. Jedná se o pdy s hlubokou ornicí (do 32 cm) a s humusovým horizontem do hloubky 70 cm. Ornice je mírn až stedn humózní (1,74 2,12 %), s neutrální reakcí v celém svém profilu. Sorpní komplex je nasycený. Podle klasifikaní stupnice Kopeckého patí tyto pdy do skupiny jílovitých hlín. Naše pdy poskytují uritou výnosovou jistotu, a to zejména v sušších letech. Vyžadují však dodržování základních agrotechnických opatení, nebo pi intenzivních srážkách a následných písušcích mají sklon ke kornatní. Produkní schopnost pd dosahuje 84 bod. Klima Prmrná denní teplota vzduchu je 8,3 C, prmrná teplota ve vegetaním období iní 14,6 C. Nejteplejším msícem je ervenec s prmrnou teplotou vzduchu 18,2 C. Zimy jsou relativn dlouhé se silnjšími mrazy, které se ojedinle objevují jako pozdní jarní mrazy, ješt koncem dubna a také mohou pedasn nastupovat již v íjnu. Prmrné roní srážky dosahují 575 mm, z toho v období duben až záí 380 mm. Nejbohatší srážky jsou v msíci ervnu a ervenci, nejchudší v únoru. Pokusné místo podle Langova dešového faktoru patí do semihumidní oblasti. Sušší ráz podnebí je umínn pevládajícími západními a severozápadními vtry, které snižují výpar. Hladina spodní vody se nachází v hloubce 1 metr a má trvalý charakter. Píznivý vodní režim je podmínn vyvinutými iluviálními horizonty s pomrn dobrou vododržností, která má vliv na stabilní obsah vláhy využitelné rostlinami. 8

Píloha: Tab. 1. Meteorologické údaje na PS Uhínves vegetace: I. VIII. 09 Msíc Leden Únor Bezen Duben Kvten erven ervenec Srpen Prmrná msíní teplota C -3,18 0,32 4,81 13,59 14,74 16,12 19,50 20,00 Dlouhodobý normál C -2,1-0,8 3,4 8,2 13,4 16,3 18,2 17,5 Rozdíl 2009 - normál -1,08 1,12 1,41 5,39 1,34-0,18 1,30 2,50 Úhrn msíních srážek mm 16,0 28,1 45,8 15,6 95,3 72,2 121,9 31,8 Dlouhodobý úhrn mm 28 27 31 46 65 74 74 72 Rozdíl 2009 - úhrn -12,00 1,10 14,80-30,40 30,30-1,80 47,90-40,20 Píloha: Graf 1. Odchylky od prmru. Uhínves 2009 6.2.1.2. Pokusné stanovišt ervený Újezd Pesné polní maloparcelkové pokusy byly založeny na Výzkumné stanici Agronomické fakulty ZU v Praze v erveném Újezd. Stanice se nalézá na rozhraní okres Kladno a Praha-západ, cca 25 km od Prahy. Zempisné údaje: 50 04 zempisné šíky a 14 10 zempisné délky. Pdní charakteristika Rovinatý charakter terénu s mlkými mikrodepresemi podmi uje dobrý zásak srážkových vod a tím i uplatnní illimerizaního procesu. Jeho vlivem se na území obvodu vytvoily pdy hndozemního typu, u kterých dochází k vyluhování svrchních pdních horizont a posunu koloidních ástic do spodiny. 9

Pdotvorným substrátem (80-120 cm) je spraš a sprašový pokryv s velmi dobrou vododržností, dobrou vnitní drenáží. Na opukách v dsledku vtší štrkovitosti a tím rychlého zásaku se projevuje vyšší vysýchavost v pdním profilu. Zájmové území je tvoeno opukami kídového stáí, pekryto sprašemi a sprašovitými pokryvy pleistocenními. Opuky jsou vápnité se štrkovitým rozpadem. Spraše a nevápnité sprašové pokryvy jsou pevažujícím pdním substrátem tvoícím hndozem, mén hndozem luvickou, ernozem hndozemní (pi slabší illimerizaci) pop. ernozem luvickou (pi silnjší illimerizaci) a hndozem pseudoglejové. Ornice je šedohndá, hlinitá, s drobtovitou strukturou. Její hloubka je od 28 do 35 cm a má stední až silné prokoenní a biologickou innost. Podorniní horizont (50-70 cm) je hndý až rezavý, hlinitý s pímsí opuky. Prokoenní a biologická aktivita je stední. Na pokusných plochách pevažuje BPEJ 4.10.00. Po stránce zrnitostního složení se jedná o pdy stedn tžké. Objemová hmotnost iní pibližn 1,4 t/m 3, 7% skeletu. Pda má stední až vysokou sorpní kapacitu, sorpní komplex je pln nasycen. Pdní reakce je neutrální, obsah humusu stední. Obsah P a K je stední až dobrý. Prmrné obsahy N min v pedjaí iní 15,7-29,1 ppm. Hydrologické a geomorfologické pomry Daná lokalita se nachází v povodí dolní Vltavy. Hydrologická sí je tvoena pouze potokem Ryma ským, který pramení západn od obce. Protéká od východu a tvoí nivu. Voda není odvádna žádným jiným vodním tokem. Potok má velmi malý spád a minimální prtok. Pouze poblíž lokality kláštera Hájek je umlá bezodtoková vodní nádrž. Nejbližší rybník je vzdálen cca 6 km. Území je rovinaté s minimálním odtokem vody. Substráty mají dobrou vododržnost, dobrou vnitní drenáž. Rovinný terén umož uje velmi dobré vsakování srážkových vod. Povtrnostní podmínky Klimaticky pokusné stanovišt spadá do oblasti mírn teplé, klimatického okrsku mírn suchého, pevážn s mírnou zimou. Prmrná roní teplota vzduchu iní 6,9 C (za roky 1901-1950 po zohlednní interpolace stanice Lány a Karlov - 7,7 C). Prmrný roní úhrn srážek iní 549 mm (za roky 1901-1950 iní 493 mm). Prmrná teplota ve vegetaním období (1.4. - 30.9.) je 12,9 C (resp. 13,8 C), prmrný vegetaní úhrn srážek iní 361 mm (resp. 333 mm). Prmrná teplota ve vegetaním klidu (1.12. - 28.2.) iní -2,2 C a úhrn srážek za toto období 53,0 mm. Slunení svit v období 1926-1950 (Praha-Karlov) je 1902 10

hodin. Délka vegetaního období iní 150-160 dní. První mrazivý den se dostavuje v prmru 11. íjna. Na jae se vyskytují mrazíky ojedinle koncem dubna. Údaje o teplotách a srážkách uvádí tabulka 2. Píloha: Tab. 2. Meteorologické údaje na PS ervený Újezd vegetace 08-09 Msíc IX 08X 08 XI 08XII 08I 09 II 09 III 09IV 09 V 09 VI 09VII 09 VIII 09IX 09 1. 10. ºC 18,36 10,15 7,49 1,59-7,7 0,16 3,87 12,12 12,8813,37 18,93 19,61 16,23 mm 5,6 3,4 6,1 2,4 3,9 3,7 18,2 0 3,8 5 20,9 40,4 9,2 11. 20. 21. 31. ºC 9,78 10,46 4,29 1,85-4,48-3,55 3,98 11,9712,5015,75 18,39 19,79 15,57 mm 5,6 9,6 10,2 25 2,9 9,2 15,4 16,6 27,4 19,6 52,5 6,6 3,1 ºC 10,07 5,96 0,18-1,3-0,66 0,14 3,63 12,4214,9916,25 19,05 18,55 14,69 mm 8,1 28,4 6,4 4,5 9,0 16,3 7,7 8,4 64,5 39,5 8,4 2,2 7,1 Msíc celkem ºC 12,74 8,76 3,99 0,64-4,16-0,85 3,82 12,1713,7915,12 18,80 19,29 15,49 mm 19,3 41,4 22,7 31,9 15,8 29,2 41,3 25,0 95,7 64,1 81,8 49,2 19,4 Poet dešových dn 1-5 mm 5 2 4 5 7 9 9 2 4 9 3 5 3 Poet dešových dn 5-10 mm 0 2 1 1 0 1 3 1 3 2 2 0 1 Poet dešových dn > 10 mm 0 1 0 1 0 0 0 1 3* 1 3 1 0 Normál ºC 13,1 7,7 2,5-0,9-2,1-1,0 3,0 7,4 12,6 15,6 16,6 17,4 13,1 mm 42 35 29 26 22 22 26 41 54 63 64 69 42 * 22. kvtna kroupy 6.2.1.3. Pokusné stanovišt: Ekologická farma Karel Tachecí, Budyn nad Ohí Statek hospodaí na cca 80 ha v Dolnooharské tabuli v nadmoské výšce 165 m, ve srážkovém stínu Krušných hor. K statku náleží široká kvalita pd od lehkých písitých po tžké jílovité pdy. Vtšinu výmry tvoí orná pda. Cca 6 ha tvoí kvtnaté lužní louky, zdroj sena a píce pro chov krav BTPM. Vyrovnanou bilanci živin zajišuje pravidelné pihnojování polí zkompostovaným kravským hnojem. Na orné pd se pstují ozimé a jarní obiloviny a jeteloviny pro skot. Jako zelené hnojení slouží svazenka a hoice bílá. Na zlomku výmry se pstuje mák, nároný na runí práci. Od jara do podzimu se pstuje rznorodá polní zelenina (www.tacheci.cz, Tachecí 2008). Budyn n/o patí do mikroregionu Podipsko. Geomorfologické pomry Podipsko je souástí geomorfologické oblasti ipská tabule, která sousedí s Hazmburskou tabulí (dlicí árou je eka Ohe) a Terezínskou kotlinou. Všechny ti uvedené oblasti tvoí pak podskupinu nazývanou Dolnooharská tabule. Dolnooharská tabule je souástí Stedoeské tabule, která je souástí eské tabule a ta zasahuje od Prahy až do Krkonoš. 11

Západn sousedí Dolnooharská tabule s dalším geologicko-morfologickým celkem eským Stedohoím, které je naopak hornaté. Nejvyšší horou Dolnooharské tabule je hora íp (456 m n.m). Píloha: Tab. 3. Charakteristika mikroregionu Podipsko Klimatická oblast teplá, mírn suchá Prmrné roní teploty 8 9 C Roní úhrn srážek 500-600 mm Sklonitost úplná rovina bez projev vodní eroze, mírný svah Expozice rovina, všesmrná Pda stedn hluboká až hluboká Typy pd ernozem, ernozem s ástí nivních pd, hndozem, rendziny, nivní pdy glejové Klimatické pomry Zájmové území patí do teplé až mírn suché oblasti, která je charakterizována více jak 50 ti letními dny (maximální denní teplota = 25 C). Léto je dlouhé, suché, teplé, s velmi krátkým pechodným obdobím. Jaro a podzim jsou teplé až mírn teplé. Zima je krátká, mírn teplá, suchá až velmi suchá, s velmi krátkým trváním snhové pokrývky. Píloha: Graf 2: Msíní úhrny srážek Píloha: Graf 2: Msíní teplota vzduchu Prmrná roní teplota je 8,5 C. Nejvyšší prmrná teplota je v ervenci (14,8 C) a nejnižší je v lednu (-2,-3 C). Prmrný roní úhrn srážek iní 555 mm. Nejvíce jich spadne ve vegetaním období (340 mm) (HMÚ Doksany). 12

Zatímco leden a únor 2008 byl teplotn výrazn nadprmrný, leden 2009 byl teplotn podprmrný (-3,2 C, o 1,1 C nižší než dl.prmr), únor byl již teplotn nadprmrný (1,2 C, o 1,4 C vyšší než dl.prmr). Msíní úhrn srážek za leden 2009 byl jen 13 mm (normál 20 mm), za únor 15 mm (normál 19 mm) (viz. graf. 2 a 3), (www.podripsko.cz). Hydrologické pomry Hlavním tokem v ešeném území je eka Ohe (asi 1 km od centra msta) a Malá Ohe (protéká okrajovými ástmi msta). Dále se zde ješt nachází 4 vodní plochy. Vtší rybník (2 ha) je vybudován v míst staré tn a jeho zdrojem je voda z Mlýnského potoka, tak jako u rybníku Kepelka. Rybníky Nádržka a U Matky boží (2,3 ha) jsou napájeny vodou ze Mšenského potoka. Ostatní vodní plochy mají podobu malých návesních rybník i hasiských nádrží. Souástí hydrografické sít jsou odvod ovací píkopy, sloužící pro odvádní jarních a pívalových vod (MÚ Budyn n/o). Pedologické pomry Okres Litomice leží v eském Stedohoí (spolu s dalšími šesti okresy), jehož povrch je výsledkem tektonických pohyb a vulkanizmu v tetihorách, v poslední dob negativn ovliv ován lovkem (tžební aktivity). Pevažují zde ediové horniny, zbytek tvoí trachytické a v malé míe andezitické horniny (Šolcová, 2000). Patí do epaské a obilnáské výrobní oblasti s rovinatým, mírn zvlnným až svažitým terénem. Nadmoská výška se pohybuje v rozmezí 250 600 m. Jsou zde zastoupeny ernozem, hndozem, hndé pdy kyselé, hndé pdy eutrofní, hndé pdy s podzoly na terasovitých uloženinách, arenosoly s hndými pdami a podzoly, nivní pdy, rendziny a pelosoly. Zrnitostní složení pd: hlinitopísité, písité, hlinité, jílovité až jíly. Stupe zornní je vtší než 80%. 6.2.1.4. Charakteristika lokality Opava v roce 2009 Hon. 45, na kterém byly vysety pokusné parcely, se nachází v katastru Opavy Kylešovic. V jeho tsné blízkosti meandruje eka Moravice. Pozemek leží v nadmoské výšce 295 m, svahovitost pozemnku je 0 %. Patí do teplé oblasti s prmrnou roní teplotou 8,23 C, výrobního typu epaského. Dlouhodobý normál roního úhrnu srážek zde iní 640 mm. Pda je hlinitá, podíl jednotlivých frakcí: jílovité 26 %, hlinité 69 %, písité 5 %. Podíl humusu iní 2,1 %, ph 5,98 s hloubkou ornice 30 cm. Pdní analýza byla provedena v dubnu 13

2009 s tmito výsledky: Ca 0,341 %, P 167 mg, K 99 mg, Mg 243 mg. Zastoupení obilnin v osevním sledu je 50 %. Píloha: Tab. 4. Lokalita Opava v roce 2009: meteorologická data Msíc Dekáda Prmr t ( C) srážek (mm) Msíní prmr t / normál srážek / normál I. -5,60 1,9 Leden II. -1,43 0,8-2,06 / -1,9 19,2 / 19,1 III. 0,59 16,5 I. 1,52 13,7 Únor II. -2,61 6,8-0,27 / -0,5 25,9 / 22,4 III. 0,41 5,4 I. 4,61 28,6 Bezen II. 2,35 22,1 3,73/3,1 73,00/29,4 III. 4,18 22,3 I. 10,96 0 Duben II. 10,80 2,8 11,37/8,0 10,2/43,6 III. 12,34 7,4 I. 12,52 2,4 Kvten II. 12,96 27,3 13,20/13,2 84,5/73,8 III. 14,05 54,8 I. 13,51 26 erven II. 15,65 23,7 15,35/16,3 124,1/86,3 III. 16,89 74,4 I. 19,07 25,2 ervenec II. 19,27 40,3 19,20/17,9 105,2/90,1 III. 19,25 39,7 I. 19,16 3,5 Srpen II. 18,54 15,5 18,44/17,4 41,1/71,2 III. 17,70 22,1 I. 15,25 7,3 Záí II. 14,63 1,4 14,49/13,4 14,8/54,6 III. 13,59 6,1 I. 12,43 12,4 íjen II. 4,72 38,8 7,95/8,7 58,6/37,2 III. 6,81 7,4 I. 3,80 17,9 Listopad II. 8,41 11,5 6,95/3,6 29,6/39,6 III. 8,65 0,2 Prosinec* *V dob psaní výroní zprávy nebyly údaje k dispozici. 14

6.3. Píloha II. Pehled pokusných variant Píloha:Tab. 5. Uhínves, ervený Újezd, Opava 2009. Integrovaná pstitelská technologie. Var. Osivo choroby Osivo škdci Krytonosec koenový 20 cm Poup 7-10 dní po 1. aplikaci 1 E-ventus ne Nurelle Caramba 2 ne Cruiser Cyperkill Caramba Biscaya Prosaro 3 ne Cruiser Cyperkill Caramba Mospilan Prosaro 4 E-ventus Chinook ne Caramba Biscaya Prosaro 5 E-ventus Chinook ne ne Agua Vitrin Aqua Vitrin 6 ne Chinook ne Prosaro Biscaya Prosaro+Hergit 7 ne Cruiser ne ne vodní sklo Pila 8 Supresivit ne Biscaya ne Azadirachtin + Greemax 9 Supresivit ne Talstar Supresivit Biscaya Prosaro Prosaro + Hergit + Zn vodní sklo Pila 10 Polyversum ne Biscaya ne olej olej 11 Polyversum ne Talstar Polyversum Biscaya Polyversum Polyversum 12 ne ne Talstar ne Biscaya ne 13 ne ne Talstar Prosaro Elitic Prosaro 14 ne ne Talstar Polyversum Pyretrum Polyversum 15 ne ne Talstar Supresivit Biscaya Prosaro 16 ne Cruiser Cyperkill Caramba Atonik Cyperkill Prosaro 17 ne Cruiser Biscaya Caramba Atonik Elitic 18 ne ne ne ne ne ne ne Píloha: Tab. 6. Uhínves, Opava 2009. Integrovaná pstitelská technologie. Var. Osivo Osivo Krytonosec choroby škdci koenový 20 cm Poup 20 ne Cruiser Cyperkill Caramba Cyperkill + Atonik Prosaro 21 ne ne Cyperkill Cyperkill Prosaro 22 ne Cruiser Cyperkill Caramba 23 ne Cruiser Cyperkill Caramba 24 ne Cruiser Cyperkill Caramba 25 Chinook Biscaya Prosaro N- fenol mix Biscay a Cyperkill N- fenol mix Elitic ne Prosaro vodní sklo + ToSi Prosaro 26 ne Cruiser Biscaya Caramba Hergit Cyperkill Prosaro 27 ne Cruiser Biscaya Caramba Hergit + Zn Cyperkill Prosaro 28 ne ne Mospilan Caramba Mospilan Prosaro 29 ne ne Mospilan Mospilan Prosaro Caramba + Cyperkill +Cyperkill + Spartan 7-10 dní po 1. aplikaci vodní sklo + ToSi 15

Píloha: Tab. 6. Budyn nad Ohí 2009. Ekologická pstitelská technologie. Var. Osivo choroby Osivo choroby Krytonosec koenový 2-4 pravé listy 20 cm Poup 7 dní 2x po 1.a 2. aplikaci Odkvt 1 Eventus Azadirachtin 1 Pyretrum Polyversum Polyversum Pyretrum 2 Eventus Azadirachtin 1 Pyretrum Polyversum Vodní sklo Polyversum Pyretrum 3 Eventus Azadirachtin 1 Pyretrum Polyversum Polyversum Pyretrum 4 Eventus Azadirachtin 1 Pyretrum Polyversum Pyretrum Polyversum Pyretrum 5 Eventus Azadirachtin 1 Pyretrum Polyversum Pyretrum Polyversum Pyretrum Pyretrum 6 Eventus Azadirachtin 1 Pyretrum Polyversum Polyversum Pyretrum Polyversum 7 Eventus Azadirachtin 1 Pyretrum Polyversum Olej Polyversum Pyretrum Olej 8 Eventus Supresivit Azadirachtin 1 Pyretrum Polyversum Polyversum Pyretrum 9 Eventus Polyversum Azadirachtin 1 Pyretrum Polyversum Polyversum Pyretrum 10 ne ne ne ne ne ne ne ne ne 11 Eventus Pyretrum Supresivit Pyretrum 12 Eventus Pyretrum ne Supresivit Pyretrum 1 granulovaný azadirachtin vysetý souasn s osivem Pedplodinou 2007 byla ozimá pšenice, po které následoval oves setý (2008) s podsevem jetele plazivého, jehož porost však byl siln poznamenán suchem v prbhu vegetace. Píprava 7. 4. 2009 (smyk, brány) ped setím máku (9. 4.). Okolní plocha byla oseta jemenem jarním (1. 4. 2009). 6.3.1. Pokusná agrotechnika Píloha: Tab. 7. Agrotechnika integrované pstitelské technologie Uhínves ervený Újezd Opava Pedplodina: hrách + bob, zelené jemen jarní pšenice ozimá hnojení Podmítka 18. 9. 2008, talíový podmíta srpen, talíový podmíta Orba: 19. 11. 2008 27. 10. 2008, pluh s pchem konec 10/2008, stední s urovnáním Píprava 28.3.2009, smyk, následn 1. 4. 4. 4. 2009 1. 4. 2009, smyk + brány, 1 pejezd pdy: kompaktor Výsev 1 5. 4. 2009, 1,8 kg 3. 4. 2009 setí. 1,8 kg osiva/ha, mák + 8.4.2009, 1,3 kg osiva/ha : osiva/ha hnojení, 40 kg N / ha Odrda: Orfeus Orfeus Orfeus Herbicid: 10.4.2009 Merlin 80 g/ha 6. 4. 2009 Merlin 750 4. 4. 2009 Callisto 480 SC 0,25 l / ha 15.5.2009 Callisto 0,2 l/ha WG 5. 5. 2009 Targa Super 5 EC 1,5 l / + Starane 0,3 l/ha 8. 5. 2009 Lontrel ha 5.6.2009 Trophy 2 l/ha Hnojení: 14. 5. 2009, Entec 26, 40 kg N / ha 11. 5. 2009, 30 kg N / ha 5.6.2009 LAV 60 kg N/ha 30 kg N / ha Sklize : 18. 8. 2009 19. 20. 8. 2009 19.8.2009 16

Píloha: Tab. 8. Uhínves chmelnice 2009. Ekologická pstitelská technologie. Var. Odrda Osivo choroby Osivo choroby Pedplodina brambory 1 Orfeus Eventus Supresivit Orba 28. 11. 2008 2 Orfeus Eventus Polyversum Píprava pdy 2. 4., 15. 4. 2009 3 Orfeus Eventus Výsev 16. 4. 2009 (2 kg osiva / ha) 4 Orfeus Ochrana 15.5. Spruzit (3 l/ha) 5 Orfeus Okraj Plekování 14. 5. 6.3.2. Plánky pokus PS Uhínves integrovaná pstitelská technologie, randomizace pokusu C 30 36 38 31 37 32 24 33 35 25 34 26 21 27 29 22 28 23 39 46 50 47 51 42 48 43 49 40 44 41 45 B 47 43 46 42 51 41 50 40 49 45 48 44 39 32 26 31 25 30 24 38 23 37 22 36 21 35 29 34 28 33 27 A 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 Pokusná stanice ervený Újezd integrovaná pstitelská technologie 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 1 2 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 1 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 Oseva PRO VaV, Opava Kylešovice int. pstitelská technologie, randomizace pokusu 0 13 18 15 3 14 12 2 16 1 17 7 10 6 11 9 5 8 4 23 19 21 28 25 22 27 21 26 20 30 29 0 0 11 4 10 13 3 9 5 12 8 2 16 18 1 6 14 7 17 15 27 22 25 21 19 23 26 20 28 24 29 30 0 0 7 12 1 11 15 2 10 13 3 6 18 16 4 9 17 8 5 14 28 26 19 25 27 20 22 24 21 23 30 29 0 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 0 Budyn nad Ohí 2009: randomizace pokusu D 01D 7D 10D 5D 8D 2D 4D 9D 6D 3D 1D 02D C 01C 3C 9C 4C 7C 10C 8C 1C 5C 2C 6C 02C B 01B 5B 8B 6B 1B 9B 2B 10B 3B 7B 4B 02B A 01A 1A 2A 3A 4A 5A 6A 7A 8A 9A 10A 02A 17

6.4. Píloha III. VŠCHT Aktivita A507 Cíl: vyvinout, optimalizovat a validovat multireziduální metodu kapalinové chromatografie ve spojení s hmotnostn-spektrometrickou detekcí (LC-MS) pro stanovení mykotoxin v semeni máku. 6.4.1. Materiál a metody 6.4.1.1. Píprava vzork Pi vývoji metody byla semena máku ped vlastní extrakcí: i) nepomleta (varianta 1) a ii) homogenizována mlýnkem ureným na mletí máku (varianta 2). Izolace analyt z matrice semen máku byla provedena sedmi rznými postupy: 1. 12,5 g vzorku bylo extrahováno 50 ml smsí acetonitril:voda (84:16, v/v ) na tepace pi 220 ot/min. po dobu 60 min. Následovala filtrace surového extraktu pes skládaný filtr do odmrné ba ky a doplnní extraktu na objem 50 ml. Alikvotní podíl surového extraktu 4 ml byl odpaen na rotaní vakuové odparce (RVO) do sucha. Odparek byl rozpuštn v 1 ml smsi metanol : voda (50:50, v/v). 1 ml finálního vzorku ve vialce pipraveného tímto zpsobem obsahoval 1 g pvodní matrice. 2. 12,5 g vzorku bylo extrahováno 50 ml smsí acetonitril:voda (84:16, v/v ) na tepace pi 220 ot./min. po dobu 60 min. Následovala filtrace surového extraktu pes skládaný filtr do odmrné ba ky a doplnní extraktu na objem 50 ml. 1 ml finálního vzorku pipravený tímto zpsobem obsahoval 0,25 g matrice. 3. 12,5 g vzorku bylo extrahováno 50 ml smsí acetonitril:voda (84:16, v/v ) na tepace pi 220 ot./min. po dobu 60 min. Poté byla provedena filtrace surového extraktu pes skládaný filtr do odmrné ba ky a doplnní extraktu na objem 50 ml. Alikvotní podíl 10 ml extraktu byl tepán s 5 ml hexanu v kyvet po dobu 1 minuty. Následovalo oddlení organických fází na centrifuze po dobu 5 minut pi 10 000 ot./min. a odebrání alikvotního podílu 1 ml organické fázeacetonitril:voda do vialky. 1 ml finálního vzorku pipravený tímto zpsobem obsahoval 0,25 g pvodní matrice. 4. 12,5 g vzorku bylo extrahováno 50 ml smsí acetonitril:voda (84:16, v/v ) a 16 ml hexanu na tepace pi 220 ot./min. po dobu 30 min. Následovalo oddlení organických fází na centrifuze. Následn byl odebrán alikvotní podíl 1 ml spodní organické fáze-acetonitril:voda do vialky. 1 ml finálního vzorku pipravený tímto zpsobem obsahoval 0,25 g pvodní matrice. 5. 12,5 g vzorku bylo extrahováno 50 ml smsí acetonitril : voda (84:16, v/v ) a 16 ml hexanu na tepace pi 220 ot./min. po dobu 30 min. Následovalo oddlení organických fází na centrifuze. Následn byl odebrán alikvotní podíl 4 ml spodní organické fáze- acetonitril:voda a odpaen na RVO do sucha. Odparek byl rozpuštn v 1 ml smsi metanol:voda (50:50, v/v). 1 ml finálního vzorku pipravený tímto zpsobem obsahoval 1 g pvodní matrice. 18

6. 4 g vzorku byly extrahovány v kyvet smsí 7,5 ml vody a 10 ml acetonitrilu po dobu 3 minut. Následn byl pidán 1 g chloridu sodného a 4 g bezvodého síranu hoenatého. Tato sms byla opt tepána 3 min a poté centrifugována po dobu 10 min pi 10 000 ot./min., díky emuž došlo k oddlení jednotlivých fází. K alikvotnímu podílu 0,5 ml organické fáze acetonitrilu byl ve vialce pidán 0,5 ml vody. 1 ml finálního vzorku pipravený tímto zpsobem obsahoval 0,2 g pvodní matrice. 7. 4 g vzorku byly extrahovány v kyvet 20 ml hexanu po dobu 1 minuty, následn bylo pidáno 7,5 ml vody a 10 ml acetonitrilu a opt tepáno po dobu 3 minut. Tato sms byla centrifugována po dobu 5 minut pi 10 000 ot./min. 10 ml spodní (polární) fáze bylo odebráno do nové kyvety a pidán 1 g chloridu sodného a 4 g bezvodého síranu hoenatého. Tato sms byla tepána 3 min a poté centrifugována po dobu 10 min pi 10 000 ot./min, díky emuž došlo k oddlení jednotlivých fází. K alikvotnímu podílu 0,5 ml acetonitrilové fáze byl ve vialce pidán 0,5 ml vody. 1 ml finálního vzorku pipravený tímto zpsobem obsahoval 0,2 g pvodní matrice. Na základ zhodnocení matriních efekt (tedy dosažení co nejnižších limit detekce) pi analýze smsných matriních standard mykotoxin byl vybrán pro izolaci mykotoxin ze semen máku jako nejvhodnjší postup íslo 6 (viz výše), který vykazoval nejnižší supresi signálu pi hmotnostní detekci ze všech navržených extrakních postup.. EXTRAKCE 4 g vzorku se extrahují smsí 7,5 ml vody a 10 ml acetonitrilu tepáním 3 minuty VYSOLENÍ Pidání 1g NaCl a 4g MgSO 4 tepání po dobu 3 minut ODDLENÍ FÁZÍ Oddlení 10 min pi 10 000 ot./min. ODBR EXTRAKTU Z organické fáze-acetonitril UPLC-TOF MS Obr. 1 Schéma vybrané LC-MS metody pro mák 19

6.4.1.2. Identifikace a kvantifikace Identifikace a kvantifikace byla provedena pomocí ultra-vysokoúinné kapalinové chromatografie ve spojení s hmotnostním spektrometrem s analyzátorem s mením doby letu (UHPLC-TOF MS). Sledované analyty byly detekovány na základ pesné hmoty dané látky a retenního asu píslušných certifikovaných standard. Ionizace byla provedena elektrosprejem (ESI) v pozitivním i negativním módu. 6.4.1.3. Pracovní podmínky UPLC-TOF MS Chromatografické podmínky: Pístroj: Waters Acquity UPLC, USA Kolona: HSS T3 (10 mm x 21 mm; 1,8 µm, Waters, USA) Teplota kolony: 40 C Teplota autosampleru: 10 C Prtok: 0,3 ml/min Mobilní fáze: 5 mm mravenan amonný, methanol Objem nástiku: 5 µl Píloha VŠCHT: Tab. I Gradient mobilní fáze složení mobilní fáze as (min.) % 5 mm mravenan amonný % methanol 0 90 10 0-6 90 10 6-10 50 50 10-15 0 100 15-18 90 10 Podmínky hmotnostní spektrometrie: Pístroj: LCT Premier XE, Waters, USA, hmotnostní spektrometr s analyzátorem s mením doby letu Typ zdroje: ESI Polarita: +/- Desolvataní plyn: N 2, prtok 740 l/h Plyn na kón: N 2, prtok 10 l/h Naptí na kapiláe: 3500 V Naptí na kón: 90 V Teplota zdroje: 120 C Vypaovací teplota: 350 C Mód: W 20

Píloha VŠCHT: Tab. II Sledované mateské ionty pi TOF MS detekci ESI + molekulová hmotnost sumární vzorec [M+H]+ [M+NH4]+ HT-2 424,2097 C22H32O8 425,2175 442,2435 T-2 466,2202 C24H34O9 467,2281 484,2541 ZEA 318,1467 C18H22O5 319,1545 336,1811 ESI - molekulová hmotnost sumární vzorec [M-H]- [M+HCOO]- AOH 258,0528 C14H10O5 257,045 303,0505 AME 272,0685 C15H12O5 271,0607 317,0662 ALT 292,0947 C15H16O6 291,0869 337,0924 NIV 312,1209 C15H20O7 311,1131 357,1186 D3G 458,1788 C21H30O11 457,171 503,1765 DON 296,126 C15H20O6 295,1182 341,1237 FUS-X 354,1315 C17H22O8 353,1237 399,1292 3-ADON 338,1366 C17H22O7 337,1288 383,1343 15-ADON 338,1366 C17H22O7 337,1288 383,1343 6.4.1.4. Pracovní charakteristiky metody Výsledkem validace metody pro jednotlivé extrakní postupy byly následující pracovní charakteristiky metody: Výtžnost metody (recovery) vyjaduje pravdivost metody, udává pomr množství (koncentrací) analytu získaného danou analytickou metodou (nii) k pijaté referenní hodnot (ni). R = nii/ni*100 [%] Opakovatelnost metody - je charakterizována relativní smrodatnou odchylkou (RSD) z opakované analýzy matriních smsných standard o píslušných koncentracích. Orientaní hodnoty pro shodnost, respektive opakovatelnost, ve stopové analýze dle Codex Alimentarius (SN ISO 5725-6) jsou: c < 1 ng/ml RSD 35 % c v rozmezí 1-10 ng/ml RSD < 35 % c > 10 100 ng/ml - RSD < 20 % c > 100 ng/ml RSD < 15 % Stanovení meze stanovitelnosti (LOQ, limit of quantification) jedná se o nejnižší koncentraci analytu, která mže být stanovena s definovaným stupnm pesnosti (nap: S/N 3 LOD) nebo jde o nejnižší bod kalibraní závislosti. 21

Linearita metody vyjaduje rozmezí koncentrací, ve kterém se mní definovatelným zpsobem odezva se zmnou koncentrace. Validace metody pro matrici mák Metoda byla validována pomocí ady matriních kalibraních standard v rozsahu 2,5 1000 ng/ml. Linearita, která byla vyjádena korelaním koeficientem R 2, se u všech kalibraních kivek pohybovala v rozmezí 0,998-0,9999. Hodnoty byly pro vtšinu analyt lineární v rozmezí koncentrací 2,5 1000 ng/g matrice (Obr. 2-4). Mez kvantifikace (LOQ), výtžnost a opakovatelnost pro sledované analyty jsou uvedeny v Tab.. III a IV pro nemletá semena máku a v Tab.. V a VI pro mletá semena máku. Ke zjištní výtžnosti metody pro semena máku byly použity vzorky blankových semen máku (semena máku s velmi nízkým, pípadn žádným pirozeným obsahem mykotoxin) s pídavkem standardu na hladin 80 ng/g a 250 ng/g. Prmrná výtžnost byla urena z pti opakování. Výtžnosti analyt v metod pro nemletá semena máku byly vtšinou vyšší než v metod pro mletá semena máku. Mletá semena máku ovšem vykazují lepší homogenitu, a proto bude v metod preferována tato varianta úpravy vzorku. Hodnoty relativních smrodatných odchylek (RSD) vtšiny analyt na obou testovaných hladinách vyhovují legislativnímu doporuení uvedenému v Codex Alimentarius. Alternariol 1200 1000 800 y = 0,9739x + 6,8057 R 2 = 0,9994 A 600 400 200 0 0 200 400 600 800 1000 1200 c [ng/g] Obr. 2 Kalibraní kivka pro alternariol, mletá varianta 22

Alternariolmonomethylether 2500 2000 1500 y = 1,9744x + 26,655 R 2 = 0,9992 A 1000 500 0 0 200 400 600 800 1000 1200 c[ng/g] Obr. 3 Kalibraní kivka pro alternariolmonomethylether, mletá varianta Altenuen 3000 2500 2000 A 1500 1000 y = 2,626x + 11,586 R 2 = 0,9997 500 0 0 200 400 600 800 1000 1200 c [ng/g] Obr.4 Kalibraní kivka pro altenuen, mletá varianta 23

Píloha VŠCHT: Tab. III Parametry metody pro nemletá semena máku u vybraných mykotoxin na koncentraní hladin 80 ng/g parametr AOH AME ALT NIV DON D3G Fus-X ADONs HT-2 T-2 ZEA LOQ (ng/ml) 2,5 2,5 2,5 10 5 5 5 2,5 10 2,5 2,5 Výtžnost (%) * 122 136 155 47 106 25 121 151 88 131 102 RSD (%), n = 5 12,2 10,7 3,5 14,0 7,9 12,7 7,4 4,4 9,8 2,8 1,1 Píloha VŠCHT: Tab. IV Parametry metody pro nemletá semena máku u vybraných mykotoxin na koncentraní hladin 250 ng/g parametr AOH AME ALT NIV DON D3G Fus-X ADONs HT-2 T-2 ZEA LOQ (ng/ml) 2,5 2,5 2,5 10 5 5 5 2,5 10 2,5 2,5 Výtžnost (%) * 110 114 151 65 108 25 121 142 84 125 99 RSD (%), n = 5 10,3 10,6 5,7 2,3 7,2 6,9 3,9 5,8 12,8 6,9 7,1 Píloha VŠCHT: Tab. V Parametry metody pro mletá semena máku u vybraných mykotoxin na koncentraní hladin 80 ng/g parametr AOH AME ALT NIV DON D3G Fus-X ADONs HT-2 T-2 ZEA LOQ (ng/ml) 2,5 2,5 2,5 10 10 10 10 2,5 25 2,5 2,5 Výtžnost (%) * 90 69 99 76 112 25 82 125 91 77 72 RSD (%), n = 5 13,6 15,0 1,8 7,3 5,1 29,0 9,8 5,1 12,4 3,0 7,8 Píloha VŠCHT: Tab. VI Parametry metody pro mletá semena máku u vybraných mykotoxin na koncentraní hladin 250 ng/g parametr AOH AME ALT NIV DON D3G Fus-X ADONs HT-2 T-2 ZEA LOQ (ng/ml) 2,5 2,5 2,5 10 10 10 10 2,5 25 2,5 2,5 Výtžnost (%) * 70 79 106 77 111 20 73 88 95 79 74 RSD (%), n = 5 8,0 9,1 2,8 1,7 4,4 28,0 3,2 4,6 15,5 2,8 5,4 24

6.4.1.5. Sledované mykotoxiny v semenech máku Nov vyvinutá a validovaná multireziduální analytická metoda pro stanovení mykotoxin byla využita k analýze tí pilotních vzork máku a dále bude využívána pro stanovení mykotoxin v máku po celou dobu prbhu projektu. 6.4.1.6. Pilotní vzorky urené pro experimenty 1. Budyn - ekologický mák: jde o sms všech vzork z ekologické plochy v Budyni nad Ohí, makovice byly vizuáln siln infikovány mikroskopickými vláknitými houbami - rok sklizn 2009 2. Uhínves sms máku z integrované plochy, ve srovnání s Budyní nad Ohí byly použity chemické prostedky ochrany rostlin, vetn fungicid, mák byl mnohem istší - rok sklizn 2009 3. Major - neošetené osivo z neznámé konvenní plochy rok sklizn 2008 Experimentální mení provedená na pilotních vzorcích poskytnutých eskou zemdlskou univerzitou v Praze (ZÚ Praha) ukázala, že ani jeden vzorek ze tí neobsahoval detekovatelná množství vybraných fusariových mykotoxin. Z vybraných alternáriových mykotoxin byly detekovány v kvantifikovatelném množství pouze dva toxiny, a to alternariol (AOH) a alternariolmethylether (AME). Altenuene (ALT) nebyl detekován v žádném vzorku. Nejvyšší hladiny obsahovala semena máku pocházející z lokality Budyn a to 91 µg/kg AOH a 104 µg/kg AME. Semena máku pocházející z Uhínvsi obsahovala 35 µg/kg AOH a 30 µg/kg AME. Nejnižší nálezy vykazoval vzorek semen máku odrdy Major a to 10 µg/kg AOH.

7. Dosažené výsledky 7.1. ZU v Praze Na pokusné stanici v Uhínvsi se projevil vláhov i teplotn nadnormální bezen, kdy byla pda dostaten prohátá a souasn byl dostatek vláhy, nicmén promnlivé poasí se znanými srážkami a stídáním teplot bránilo píprav pdy a založení porostu 7.1.1. Vzcházení Souvisí s aktivitami: A501, A502 ( porosty založené z ošetených semen), A503, Maloparcelkový pokus byl založen 5. dubna. Duben roku byl extrémn suchý a souasn teplý. První srážky po zasetí v Uhínvsi dne 7. 4. inily pouze 0,3 mm a nemohly postait pro rovnomrné vzejití zasetých semen. Další, již vydatnjší srážky, pišly až po deseti dnech 17. 4. (10.2 mm), poté 22. 4. (2 mm) a 23. 4. (1,3 mm). Nco málo pršelo i 29. a 30. 4. (1,2 a 0,6 mm). Celkem napršelo za duben pouhých 15,6 mm. Prmrná teplota inila 13,59 C. Tento prbh poasí ovlivnil i psobeni herbicidu Merlin, jehož úinek se projevuje zejména po srážkách 15 mm a více. Toto se posléze negativn projevilo na zvýšeném výskytu plevel. Srážkov bohatý a teplý kvten umožnil opoždné, ale rovnomrné vzejití máku. Na pokusných parcelách v Uhínvsi a erveném Újezd nebyl zaznamenán škodlivý výskyt krytonosce koenového. Teplý kvten a ervenec se projevily mírným zvýšením výskytu chorob, které však celkov neznamenaly velké ohrožení pro budoucí úrodu. Sklize probhla 18. srpna. Graf 1: Úinek ošetení osiv. ervený Újezd. Uhínves. Aktivita A501, A502, A503 Vzcházení porostu bylo na stanicích hodnoceno 28. 4. 30. 4. 2009 Z grafu 1 je zejmý vliv ošetení osiva na poet rostlin, i když se na jednotlivých lokalitách podstatn liší. Pro 26

integrované pstování se v Uhínvsi co do potu rostlin osvdila nejlépe varianta elektromagnetického ošetení osiva v kombinaci s ošetením pípravkem Chinook, ošetení pípravkem Cruiser bylo druhé nejúspšnjší. Na 3. míst pak bylo ošetení samotným Chinookem. Vliv pípravku Polyversum byl o nco vyšší než pípravku Supresivit, nicmén rozdíl v potu vzešlých rostlin na jednotku plochy byl minimální (167 : 165). He než kontrola dopadla varianta s osivem ošeteným elektronovým záením. V erveném Újezd se jako nejlepší projevila varianta ošetená Chinookem následovaná Cruiserem, kombinace E- ventus Chinook byl až na 3. míst. Nejhe se, shodn s Uhínvsí, umístilo ošetení E-ventus. Toto ošetení, spoívající v oištní osiv od všech patogen velmi pravdpodobn ovliv uje životaschopnost semen a z ní vyplývající vzcházivost rostlin v souvislosti s psobením pdních patogen a proto je vhodné kombinovat jeho úinky s dalším ošetením, pípravkem, který pekryje negativní úinek ošetení. Pro integrované pstování by jím mohl být práv Chinook. Graf 2: Úinek ošetení osiv. Poet rostlin / m 2.Budyn nad Ohí 2009. Aktivita A501, A502, A503 Pi sledování potu rostlin v Budyni nad Ohí, stejn jako v Uhínvsi a erveném Újezd se projevil význam ošetení osiva v kombinaci E-ventus - moením osiva. V pípad ekologické pstitelské technologie povolenými biofungicidy. Ošetení Supresivitem v kombinaci s elektronovým ošetením zaznamenalo nejvyšší poet vzešlých rostlin, Polyversum v kombinaci s E-ventus se umístilo na 2. míst. Tetí byla kontrola. Nejhorší výsledek byl dosažen v kombinaci E-ventus a granulovaný Azadirachtin, který byl vyséván souasn s osivem. Poty rostlin byly hodnoceny v dob, kdy se již zaínal projevovat žír dosplc krytonosce koenové na vzcházejících rostlinkách maku. Poškození bylo hodnoceno 3 27

bodovou stupnicí od nejnižšího (P1) k nejvyššímu stupni (P3). Ke stanovení indexu poškození byl použit vzorec: (P1*1+P2*2+P3*3)/poet rostlin (na m 2 ). kde Pr1: poet rostlin s poškozením 0-30%, Pr2: poet rostlin s poškozením 31-60 % a Pr3 poet rostlin poškozených 61-100 % žírem Graf 2: Úinek ošetení osiv. Index napadení rostlin krytonoscem koenovým. Budyn. Ke stanovení indexu poškození byl použit vzorec: (Pr1*1+Pr2*2+Pr3*3)/ Pr / na m 2, kde Pr1: poet rostlin s poškozením 0-30%, Pr2: poet rostlin s poškozením 31-60 % a Pr3 poet rostlin poškozených 61-100 % žírem Aktivita A501, A502, A503 Pi odpotech rostlin 4. 5. 2009 jsme zjistili negativní vliv granulovaného azadirachtinu na pdní edafon. Žír dosplc krytonosce koenového však tento rostlinný jed neovlivnil, proto jsme zvolili ošetení pípravkem Spruzit (pímo ke koenovým krkm mladých rostlin, ve snaze limitovat poškození spojené s dalšími aktivitami brouka. Nejvyšší index poškození rostlin žírem byl zaznamenán u rostlin neošetené kontroly, nejnižší pak u varianty ošetené E- ventus v kombinaci se Supresivitem, u níž byl použit granulovaný Azadirachtin. Vcelku však nejsou rozdíly mezi úinkem použitých pípravk na škodlivost krytonosce koenového v prmru 4 opakování a shodných variant zvláš výrazné. V Uhínvsi z ekologického porostu nejlépe vzešel okraj pokusu (155 rostlin/m 2 ), nejlepší kombinací byl E-ventus s Polyversem (114 rostlin), následován kontrolou (94). Jako poslední se umístila kobinace E-ventus Supresivit (62), která ovšem ve sklizni zaznamenala poet rostlin nejvyšší - 32. 28

7.1.2. Zdravotní stav Souvisí s aktivitami: A501, A502 ( porosty založené z ošetených semen), A503, A504, A505, A506, A508, A509 Nejvyšší míru napadení rostlin vykázala varianta 2 (až na vodní sklo, použité proti škdcm v hákování), co do ošetení shodná s variantami 1,3,6 a 7. Nejvyšší poet napadených rostlin byl zaznamenán rovnž u této varianty pi prvním sledování (15.5.). V prmru potu všech napadených rostlin bhem vegetace si vedla nejlépe varianta 9 2 x ošetená pípravkem Polyversum bhem vegetace, osivo v kombinaci E-ventus +Polyversum. 2. nejlepší pak byla varianta 8. ošetená 2 x Polyversum ve vegetaci s osivem v kombinaci Supresivit + E-ventus. Podle výsledk se zdá, že Supresivit použitý k ošetení osiva ovlivnil zdravotní stav rostlin až do doby, než bylo použito Polyversum (celkem 2 x ve vegetaci). Velmi dobré výsledky vykázala rovnž 6. varianta (3 x Pyretrum, 3 x Polyversum, Tab. 1), 5. (6 x Pyretrum, 2 x Polyversum) a 4. varianta (5 x Pyretrum, 2 x Polyversum). Graf 3: Napadení rostlin(ks/10 m 2 ) chorobami v prbhu vegetace (NAPR1-3) a prmr (NAPR) napadení za variantu. Budyn nad Ohí 2009. (1_3_7 shoda v ošetení variant) 6,0 5,0 4,0 3,0 2,0 1,0 0,0 1_3_7 2 4 5 6 8 9 Kontrola Okraje NAPR1 NAPR2 NAPR3 NAPR Aktivita A505, A506, 509 Z grafu 4 je jasn patrný nárst potu makovic poškozených škdci mezi 1. 7. a 3. 8. 2009 v Budyni nad Ohí. Nejvtší poškození nebylo zaznamenáno na kontrole, ani na okrajích, paradoxn se jednalo o porost ošetený celkem 5 x pípravkem Pyretrum. Druhou nejhorší byla 8. varianta 3 x Pyretrum ve vegetaci. Z obtížn reprodukovatelných výsledk je zejmé, že v ekologickém pstitelském systému nelze spoléhat na jednotlivé zásahy. 29

Graf 4: Napadení makovic (ks/10 m 2 ) škdci v prbhu vegetace (KM1-2) a prmr (KM) napadení za variantu. Budyn nad Ohí 2009. (1_3_7 shoda v ošetení variant) 30,0 25,0 20,0 15,0 10,0 5,0 0,0 1_3_7 2 4 5 6 8 9 Kontrola Okraje KM1 KM2 KM Aktivita A505, A506, 508 Graf 5: Napadení povrchu makovic chorobami (0-30, 30-60, 60-100%)) posklizový rozbor. Budyn nad Ohí 2009. (1_3_7 shoda v ošetení variant) 100% 90% 80% 70% 60% 50% 40% 30% 20% 10% 0% 1_3_7 2 4 5 6 8 9 Kontrola Okraje 0-30 30-60 60-100 Aktivita A505, A506 30